Padronização de três ELISAs polivalentes com lipopolissacarídeos de cadeia longa dos sorotipos 1 e 5, 2, 3 e 7 ou 10 e 12 de Actinobacillus pleuropneumoniae / Standardization of three polyvalent ELISA based on long chain lipopolysaccharides of serotypes 1 and 5, 2, 3 and 7, or 10 and 12 of Actinobacillus pleuropneumoniae

Três ELISAs polivalentes baseados em lipopolissacarídeos de cadeia longa (LPS-CL) foram estabelecidos para detectar anticorpos para todos os sorotipos prevalentes de Actinobacillus pleuropneumoniae. Foram testadas amostras provenientes do banco de soros de suínos experimentalmente inoculados com todos os sorotipos de A. pleuropneumoniae. Os ELISAs foram sensíveis à detecção de anticorpos contra todos os LPS-CL. Foram observadas reações cruzadas no ELISA polivalente produzido com os sorotipos 1 e 5, com anti-soros específicos para os sorotipos 9 e 11, pois os sorotipos 1, 9 e 11 apresentaram antígenos somáticos comuns. No polivalente com os sorotipos 2, 3 e 7, observaram-se reações com anti-soros dos sorotipos 4, 6 e 8, devido à presença de antígenos somáticos entre os sorotipos 3, 6 e 8 e entre os sorotipos 4 e 7. Amostras de soros de animais infectados com Mycoplasma hyopneumoniae, Mycoplasma flocculare e Haemophilus parasuis, agentes que acometem o sistema respiratório dos suínos, não apresentaram reações cruzadas com os antígenos baseados em LPS-CL.(AU)

Three polyvalent ELISA based on long chain lipopolysaccharides (LC-LPS) were established to detect all prevalent serotypes of Actinobacillus pleuropneumoniae. Samples from a serum bank of experimentally inoculated animals with all serotypes of A. pleuropneumoniae were tested. Antibodies specific to LC-LPS of each serotype were detected. Cross-reactions were observed in the polyvalent ELISA produced with serotypes 1 and 5, with specific antisera to serotypes 9 and 11 due to common somatic antigens presence in serotypes 1, 9, and 11. In the polyvalent with serotypes 2, 3 and 7 reactions were observed with antisera of serotypes 4, 6, and 8, due to the presence of somatic antigens in serotypes 3, 6, and 8 and serotypes 4 and 7. Experimentally infected animals with respiratory agents of swine Mycoplasma hyopneumoniae, Mycoplasma flocculare, and Haemophilus parasuis did not present cross-reactions with the antigens based on LC-LPS.(AU)

Avaliação de testes de ELISA para o diagnóstico sorológico de infecções pelos sorotipos 3, 5 e 7 de Actinobacillus pleuropneumoniae em suínos

This paper describes the use of two antigens in ELISAs for the diagnosis of A. pleuropneumoniae (serotypes 3, 5 and 7) infections in Brazil. One antigen comprised the aqueous fraction obtained by phenol extraction from bacterial cultures (FAF) and the other was composed of long lipopolysaccharide chains (LPS-CL). Mono and polyvalent ELISA systems were standardized with the prevalent serotypes. Discriminating equations were developed with the ELISAs results obtained with two sets of serum samples. One set of sera had been collected from piglets free from A. pleuropneumoniae infections (known negative sera) and the other set collected from inoculated piglets after seroconversion (known positive sera). The results were compared using the generalized distance of Mahalanobis, the coefficient of determination, the F test, the global coefficient, the sensitivity, and the specificity. The results obtained with the FAF antigen were superior regarding all the evaluated parameters. However, the FAF-ELISA resulted in unexpected positive reactions with serum samples collected from animals that had been inoculated with heterologous serotypes (2 and 9). The sensitivity and the specificity of both tests ranged from 91.5 to 95.7, indicating that these two antigens are appropriate for use in A. pleuropneumoniae screening tests, as they can detect serotypes 3, 4, 5, 6, 7 and 8.

Compararam-se dois antígenos no teste de ELISA para o diagnóstico sorológico dos sorotipos 3, 5 e 7 de A. pleuropneumoniae prevalentes no Brasil. Um compunha-se da fase aquosa da extração fenólica de suspensão bacteriana (FAF) e o outro de lipopolissacarídeos de cadeia longa (LPS-CL). Com esses antígenos foram padronizados ELISAs monovalente e polivalente para os sorotipos prevalentes no Brasil. Com os resultados dos testes de um conjunto de amostras de soro de suínos livres de infecção para A. pleuropneumoniae e um conjunto de amostras de soro obtidas de leitões inoculados com os sorotipos citados e que apresentaram soroconversão, determinaram-se as equações discriminantes para os conjuntos de soros e compararam-se os testes quanto à distância generalizada de Mahalanobis, ao coeficiente de determinação, ao teste F, ao coeficiente global, à sensibilidade e à especificidade. Na análise desses parâmetros observou-se que o antígeno FAF foi superior. Com o ELISA PFAF reações positivas não esperadas foram observadas com animais inoculados com os sorotipos heterólogos 2 e 9, não observadas com o PLPS-CL. A sensibilidade dos testes polivalentes ficou entre 91,5 e 95,7% com especificidade similar, indicando que ambos os testes são adequados para triagem sorológica uma vez que detectam os sorotipos 3, 4, 5, 6, 7 e 8.

Utilização de um teste de ELISA polivalente para detecção de anticorpos contra Actinobacillus pleuropneumoniae (App)

Sera from piglets and sows from 10 positive and 10 negative herds to Actinobacillus pleuropneumoniae (App) were submitted to a polyvalent ELISA test based on long chain lipopolysaccharides (LC-LPS) against sorotypes 3, 5 and 7. Positive herds were those in which a strain of serotype 3, 5 or 7 was isolated and negative those ones in which there were neither notification of clinical symptoms, nor lesions of swine pleuropneumoniae, nor App isolation and all the herds were under veterinary control. All positive herds contained animals that seroconverted and the frequency of sows serologically positive was significantly higher than that of positive piglets. Four negative herds were serologically negative, but five herds had sows considered positive with high positive predictive values (96 to 99%) and one herd had a positive predictive value of 56%. The polyvalent ELISA LC-LPS to App serotypes 3, 5 and 7 had 100 % of sensibility but apparently low specificity. The sensibility of the polyvalent test and its capability of detecting the prevalent Brazilian serotypes and those with shared LPS antigens (3, 4, 5, 6, 7 e 8) indicates that this test might be used only as a screening test.

Um teste de ELISA polivalente baseado em lipopolissacarídeos de cadeia longa (LPS - CL) de Actinobacillus pleuropneumoniae (App) sorotipos 3, 5 e 7 foi avaliado testando-se amostras do soro de leitões e matrizes provenientes de 10 rebanhos positivos e de 10 rebanhos negativos. Foram classificados como positivos aqueles rebanhos com isolamento prévio do App sorotipos 3, 5 ou 7 e rebanhos negativos aqueles submetidos ao controle veterinário, sem notificação de sintomas clínicos, sem lesões de pleuropneumonia suína e sem isolamento do agente. Todos os rebanhos positivos apresentaram sorologia positiva e as matrizes apresentaram maior número de soroconversores (P 0,05) do que os leitões. Entre os rebanhos negativos quatro apresentaram sorologia negativa, cinco sorologia positiva com valores preditivos altos (96 a 99%) e um com valor preditivo considerado baixo (56%). O teste apresentou 100% de sensibilidade e aparentemente baixa especificidade, porém, como detectou os sorotipos prevalentes no Brasil e sorotipos que possuem LPS - CL homólogos (3, 4, 5, 6, 7 e 8), ele é aplicável somente como teste de triagem.

Estimativa dos índices de pneumonia, pela tosse, e de rinite atrófica, por espirros, em suínos

A study in 64 swine herds was carried out in order to estimate the pneumonia index (PI) and the atrophic rhinitis index (ARI) through the quantification of coughing and sneezing in growing-finishing pigs. In each herd, 60 pigs were evaluated from lodging in the growing-finishing phase up to slaughter. The amount of coughing and sneezing episodes was counted in four opportunities (30, 50 and 80 days after lodging, and three days before slaughter). In each opportunity three counts of two minutes each were made and the percentage of coughing and sneezing was calculated by the average of the three counts in relation to the batch size. At slaughter, for all pig-batches the frequency and severity of lung consolidation and atrophic rinithis were determined and scored. All data were submitted to the Pearson correlation and to the simple regression analyses of the PIe in relationship to the percentage of coughing and ARIe in relationship to the percentage of sneezing. The resulting equation were: PI estimated = 0.35 + (0.11 × % of coughing) with R² = 0.45, and ARI estimated = 0.36 + (0.065 × % of sneezing) with R² = 0.36. It is concluded that the quantification of coughing and sneezing can be used to estimate ARI and PI indexes in growing-finishing pigs.

Realizou-se um estudo em 64 granjas de suínos na região sul do Brasil entre julho de 1995 e março de 1997 com o objetivo de estimar o índice de pneumonia (IP) e o índice de rinite atrófica (IRA), por meio da contagem dos sinais clínicos de tosse e espirro, respectivamente, em suínos em crescimento-terminação. Em cada granja, um lote com cerca de 60 suínos foi acompanhado desde o alojamento na fase de crescimento até o abate. Tosse e espirro foram contados em quatro oportunidades (30, 50 e 80 dias após o alojamento e 1 a 3 dias antes do abate). Em cada oportunidade foram feitas três contagens de dois minutos cada e o percentual de tosse e espirro para cada lote foi calculado pela média das três contagens em relação ao tamanho do lote. No abate, os suínos foram avaliados quanto à freqüência e severidade de lesões de hepatização pulmonar e de rinite atrófica nos cornetos nasais para cálculo do IP e do IRA, respectivamente. Os dados foram submetidos às análises de correlação de Pearson e de regressão simples para ajuste da equação de predição do IP em relação à porcentagem de tosse e do IRA em relação à porcentagem de espirro. As equações obtidas foram: IPe = 0,35 + (0,11 × % de tosse) com R² = 0,45 e IRAe = 0,36 +( 0,065 × % de espirro) com R² = 0,36. Conclui-se que é possível utilizar o método de contagem de tosse e espirro na fase de crescimento-terminação para estimar, respectivamente, o IP e o IRA.

Comparação de métodos de isolamento de bactérias NAD-dependentes do trato respiratório superior de suínos sadios

Nasal and tonsil secretions and tonsil tissue were collected from 67 piglets (9-to-15 weeks old) from three positive herds and from 50 piglets from two negative herds. Positive herds were those in which an Actinobacillus pleuropneumoniae (App) strain of serotype 3, 5 or 7 was isolated and negative ones those in which there was no notification of clinical symptoms or lesions of swine pleuropneumoniae, no App isolation and the herd was under veterinarian control. The collected material was submitted to three different bacterial culture methods: 1- direct streak on solid selective medium, 2- dilution in selective broth followed by subculture in solid selective medium, and 3- dilution in selective broth medium followed by subculture in blood agar. Among the NAD-dependent strains recovered 86 were App, 13 belonged to the minor group and 21 to the Taxon group (C, D, E e F). From the positive herds four serotyped strains of App (sorotypes 3, 7 and 12) and 51 nonsorotipable strains were recovered. From the negative herds 31 nonsorotipable strains of App were recovered, indicating that App is a resident in the upper respiratory tract of pigs. The best method for recovering NAD-dependent strains from carrier piglets was achieved by direct culturing of tonsil tissue in solid selective medium (PPLO agar containing 2mu g of crystal violet, 10mu g of NAD, 1mu g of lincomycin, 1,4mu g of bacitracin per ml).

Secreções nasais, tonsilares e tecido tonsilar foram coletados de 67 leitões de 9 a 15 semanas de idade, provenientes de três rebanhos positivos para Actinobacillus pleuropneumoniae (App), e de 50 leitões provenientes de dois rebanhos negativos. Foram classificados como positivos aqueles rebanhos com isolamento prévio de sorotipos 3, 5 e 7 e rebanhos negativos aqueles submetidos a controle veterinário, sem notificação de sintomas clínicos, lesões de pleuropneumonia suína e sem isolamento do agente. O material coletado foi submetido a três diferentes métodos de cultivo: 1- semeadura direta em meio de cultivo sólido seletivo; 2- diluição em caldo seletivo seguido de subsemeadura em meio de cultivo sólido seletivo; 3- diluição em caldo seletivo seguido de subsemeadura em ágar sangue. Entre as amostras NAD-dependentes recuperadas 86 foram classificadas como App, 13 como grupo minor e 21 como grupo taxon (C, D, E e F). Dos rebanhos positivos foram recuperadas quatro amostras de App (sorotipos 3, 7 e 12) e 51 não sorotipificáveis. Dos rebanhos negativos foram recuperadas 31 amostras de App não sorotipificáveis, indicando que o App faz parte da flora normal do trato respiratório superior dos suínos. O melhor método de isolamento de amostras NAD-dependentes de leitões portadores foi da biópsia de tecido tonsilar semeado diretamente em meio sólido seletivo (PPLO ágar adicionado de 2mi g de cristal violeta, 10mi g NAD, 1mi g de lincomicina, 1,4mi g de bacitracina por ml).