Enterotoxigenic methicillin resistant Staphylococcus aureus contamination in salted fish from Gwadar Balochistan / Contaminação de Staphylococcus aureus resistente à meticilina enterotoxigênica em peixes salgados de Gwadar Balochistan

Staphylococcus aureus is an important foodborne pathogen associated to food intoxication and other multiple infections in human being. Its presence in salted food is a serious issue due to its salt tolerance potential. A study was conducted to analyze the presence of enterotoxins producing drug resistance S. aureus in salted sea fish from Gwadar. Freshly persevered samples (n=50) of salted fish were subjected to analyze the presence of S. aureus using 16S rRNA and Nuc genes primers. The isolates were then evaluated for drug resistance and enterotoxins producing potential using specific primers for MecA (methicillin resistance gene), (SEA) staphylococcal enterotoxin A and (SEB) staphylococcal enterotoxin B genes. Total 13/50 (26%) of the samples were found positive for the presence of S. aureus, preliminary confirmed with biochemical profiling and finally with the help of target genes presence. The isolates were found showing 100% resistant to methicillin, which were molecularly confirmed by the presence of MecA gene present in genome. The isolates 5/13 (38%) were positive for SEA and 3/13 (23%) for SEB genes, whereas 2/13 (15%) were confirmed having both SEA and SEB genes in its genome. It was also confirmed that all the isolates were capable to form biofilm over the glass surfaces. It was concluded that the study confirmed the presence of enterotoxigenic methicillin resistance Staphylococcus aurous (MRSA) in salted fish product, that poses gross food safety concern. Preventive and control measures are necessary to handle this serious food safety concern.

Staphylococcus aureus é um importante patógeno de origem alimentar associado à intoxicação alimentar e outras infecções múltiplas em seres humanos. Sua presença em alimentos salgados é um problema sério devido ao seu potencial de tolerância ao sal. Um estudo foi realizado para analisar a presença de enterotoxinas produtoras de resistência a drogas S. aureus em peixes salgados do mar de Gwadar. Amostras recém-perseveradas (n = 50) de peixes salgados foram submetidas à análise da presença de S. aureus usando os primers dos genes 16S rRNA e Nuc. Os isolados foram então avaliados quanto à resistência a drogas e potencial de produção de enterotoxinas usando primers específicos para os genes MecA (gene de resistência à meticilina), (SEA) enterotoxina A estafilocócica e (SEB) enterotoxina B estafilocócica genes. Um total de 13/50 (26%) das amostras foi considerado positivas para a presença de S. aureus, confirmadas preliminarmente com perfis bioquímicos e finalmente com a ajuda da presença de genes-alvo. Os isolados foram encontrados com 100% de resistência à meticilina, os quais foram confirmados molecularmente pela presença do gene MecA no genoma. Os isolados 5/13 (38%) foram positivos para SEA e 3/13 (23%) para genes SEB, enquanto 2/13 (15%) foram confirmados tendo os genes SEA e SEB em seu genoma. Também foi verificado que todos os isolados foram capazes de formar biofilme sobre as superfícies de vidro. Concluiu-se que o estudo confirmou a presença de Staphylococcus aurous resistente à meticilina enterotoxigênica (MRSA) em produtos de peixe salgado, o que representa uma grande preocupação para a segurança alimentar. Medidas preventivas e de controle são necessárias para lidar com essa grave preocupação com a segurança alimentar.

Enterotoxigenic methicillin resistant Staphylococcus aureus contamination in salted fish from Gwadar Balochistan

Abstract Staphylococcus aureus is an important foodborne pathogen associated to food intoxication and other multiple infections in human being. Its presence in salted food is a serious issue due to its salt tolerance potential. A study was conducted to analyze the presence of enterotoxins producing drug resistance S. aureus in salted sea fish from Gwadar. Freshly persevered samples (n=50) of salted fish were subjected to analyze the presence of S. aureus using 16S rRNA and Nuc genes primers. The isolates were then evaluated for drug resistance and enterotoxins producing potential using specific primers for MecA (methicillin resistance gene), (SEA) staphylococcal enterotoxin A and (SEB) staphylococcal enterotoxin B genes. Total 13/50 (26%) of the samples were found positive for the presence of S. aureus, preliminary confirmed with biochemical profiling and finally with the help of target genes presence. The isolates were found showing 100% resistant to methicillin, which were molecularly confirmed by the presence of MecA gene present in genome. The isolates 5/13 (38%) were positive for SEA and 3/13 (23%) for SEB genes, whereas 2/13 (15%) were confirmed having both SEA and SEB genes in its genome. It was also confirmed that all the isolates were capable to form biofilm over the glass surfaces. It was concluded that the study confirmed the presence of enterotoxigenic methicillin resistance Staphylococcus aurous (MRSA) in salted fish product, that poses gross food safety concern. Preventive and control measures are necessary to handle this serious food safety concern.

Resumo Staphylococcus aureus é um importante patógeno de origem alimentar associado à intoxicação alimentar e outras infecções múltiplas em seres humanos. Sua presença em alimentos salgados é um problema sério devido ao seu potencial de tolerância ao sal. Um estudo foi realizado para analisar a presença de enterotoxinas produtoras de resistência a drogas S. aureus em peixes salgados do mar de Gwadar. Amostras recém-perseveradas (n = 50) de peixes salgados foram submetidas à análise da presença de S. aureus usando os primers dos genes 16S rRNA e Nuc. Os isolados foram então avaliados quanto à resistência a drogas e potencial de produção de enterotoxinas usando primers específicos para os genes MecA (gene de resistência à meticilina), (SEA) enterotoxina A estafilocócica e (SEB) enterotoxina B estafilocócica genes. Um total de 13/50 (26%) das amostras foi considerado positivas para a presença de S. aureus, confirmadas preliminarmente com perfis bioquímicos e finalmente com a ajuda da presença de genes-alvo. Os isolados foram encontrados com 100% de resistência à meticilina, os quais foram confirmados molecularmente pela presença do gene MecA no genoma. Os isolados 5/13 (38%) foram positivos para SEA e 3/13 (23%) para genes SEB, enquanto 2/13 (15%) foram confirmados tendo os genes SEA e SEB em seu genoma. Também foi verificado que todos os isolados foram capazes de formar biofilme sobre as superfícies de vidro. Concluiu-se que o estudo confirmou a presença de Staphylococcus aurous resistente à meticilina enterotoxigênica (MRSA) em produtos de peixe salgado, o que representa uma grande preocupação para a segurança alimentar. Medidas preventivas e de controle são necessárias para lidar com essa grave preocupação com a segurança alimentar.

Enterotoxigenic methicillin resistant Staphylococcus aureus contamination in salted fish from Gwadar Balochistan / Contaminação de Staphylococcus aureus resistente à meticilina enterotoxigênica em peixes salgados de Gwadar Balochistan

Staphylococcus aureus is an important foodborne pathogen associated to food intoxication and other multiple infections in human being. Its presence in salted food is a serious issue due to its salt tolerance potential. A study was conducted to analyze the presence of enterotoxins producing drug resistance S. aureus in salted sea fish from Gwadar. Freshly persevered samples (n=50) of salted fish were subjected to analyze the presence of S. aureus using 16S rRNA and Nuc genes primers. The isolates were then evaluated for drug resistance and enterotoxins producing potential using specific primers for MecA (methicillin resistance gene), (SEA) staphylococcal enterotoxin A and (SEB) staphylococcal enterotoxin B genes. Total 13/50 (26%) of the samples were found positive for the presence of S. aureus, preliminary confirmed with biochemical profiling and finally with the help of target genes presence. The isolates were found showing 100% resistant to methicillin, which were molecularly confirmed by the presence of MecA gene present in genome. The isolates 5/13 (38%) were positive for SEA and 3/13 (23%) for SEB genes, whereas 2/13 (15%) were confirmed having both SEA and SEB genes in its genome. It was also confirmed that all the isolates were capable to form biofilm over the glass surfaces. It was concluded that the study confirmed the presence of enterotoxigenic methicillin resistance Staphylococcus aurous (MRSA) in salted fish product, that poses gross food safety concern. Preventive and control measures are necessary to handle this serious food safety concern.(AU)

Staphylococcus aureus é um importante patógeno de origem alimentar associado à intoxicação alimentar e outras infecções múltiplas em seres humanos. Sua presença em alimentos salgados é um problema sério devido ao seu potencial de tolerância ao sal. Um estudo foi realizado para analisar a presença de enterotoxinas produtoras de resistência a drogas S. aureus em peixes salgados do mar de Gwadar. Amostras recém-perseveradas (n = 50) de peixes salgados foram submetidas à análise da presença de S. aureus usando os primers dos genes 16S rRNA e Nuc. Os isolados foram então avaliados quanto à resistência a drogas e potencial de produção de enterotoxinas usando primers específicos para os genes MecA (gene de resistência à meticilina), (SEA) enterotoxina A estafilocócica e (SEB) enterotoxina B estafilocócica genes. Um total de 13/50 (26%) das amostras foi considerado positivas para a presença de S. aureus, confirmadas preliminarmente com perfis bioquímicos e finalmente com a ajuda da presença de genes-alvo. Os isolados foram encontrados com 100% de resistência à meticilina, os quais foram confirmados molecularmente pela presença do gene MecA no genoma. Os isolados 5/13 (38%) foram positivos para SEA e 3/13 (23%) para genes SEB, enquanto 2/13 (15%) foram confirmados tendo os genes SEA e SEB em seu genoma. Também foi verificado que todos os isolados foram capazes de formar biofilme sobre as superfícies de vidro. Concluiu-se que o estudo confirmou a presença de Staphylococcus aurous resistente à meticilina enterotoxigênica (MRSA) em produtos de peixe salgado, o que representa uma grande preocupação para a segurança alimentar. Medidas preventivas e de controle são necessárias para lidar com essa grave preocupação com a segurança alimentar.(AU)

GCMS characterization and biological potential of the seeds and aerial part of Galium tricorne Stokes / Caracterização GCMS e potencial biológico das sementes e parte aérea de Galium tricorne Stokes

Natural products have long been proven very effective against various challenging diseases including cancer and bacterial infections. Galium tricorne is one of the important source of natural products, which has not been explored till date in spite of its profound ethnomedicinal prominence. The current study has been designed to explore the biological potential of G. tricorne and to extract and isolate chemical constituents from its aerial part and seeds respectively along with identification of their chemical constituents. Phytochemical screening was performed to figure out the presence of secondary metabolite in G. tricorne. Crude Methanolic extract (Gt.Crd), which was obtained from the aerial part while the fatty acids were extracted from the seeds, which were later on analyzed by GCMS. Similarly, Well Diffusion and MTT method were used for antibacterial activity and cancer cell line assay respectively. To evaluate the cytotoxic potential, brine shrimps were used. Likewise, in Gas Chromatography-Mass Spectroscopy (GC-MS) analysis a total number of 23 compounds were identified in Gt.Crd extract out of which 7 compounds were sorted out to have some sort of toxicity profile. In the same fashion, 5 fatty acids were identified in the seeds of G. tricorne. Moreover, among the fractions, chloroform fraction (Gt.Chf) exhibited greater zone of inhibition (ZOI) 20.37 mm followed by Gt.Crd 18.40 mm against S. aureus and S. pyogenes respectively. In cytotoxicity Gt.Chf was more active followed by ethyl acetate fraction (Gt.Eta) by exhibiting 88.32±0.62% (LC50=60 µg/mL) and 73.95±2.25% (LC50=80 µg/mL) respectively at 1000 µg/mL concentration of the tested sample. Gt.Chf exhibited greater cell line inhibitory activity (IC50=61 µg/mL) against HeLa cell line. Similarly, Gt.Crd displayed IC50 values of 167.84 µg/mL and 175.46 µg/mL against HeLa and NIH/3T3 cell line respectively. Based on the literature review and screenings, it may be concluded that the aerial part and seeds of G. tricorne are the rich sources of bioactive compounds. The results of the current study also authenticate the scientific background for the ethnomedicinal uses of G. tricorne.

Os produtos naturais têm se mostrado muito eficazes contra várias doenças desafiadoras, incluindo câncer e infecções bacterianas. O gálio tricorne é uma importante fonte de produtos naturais, ainda pouco explorada, apesar de sua profunda proeminência etnomedicinal. O presente estudo foi desenvolvido para explorar o potencial biológico de G. tricorne e extrair e isolar constituintes químicos de sua parte aérea e sementes, respectivamente, juntamente com a identificação de seus constituintes químicos. A triagem fitoquímica foi realizada para descobrir a presença de metabólito secundário em G. tricorne, extrato metanólico bruto (Gt.Crd) que foi obtido da parte aérea enquanto os ácidos graxos foram extraídos das sementes, que posteriormente foram analisadas por GCMS. Da mesma forma, os métodos Well Diffusion e MTT foram usados ​​para atividade antibacteriana e ensaio de linha de células cancerígenas, respectivamente. Para avaliar o potencial citotóxico, foram utilizadas artémias. Da mesma forma, na análise de cromatografia gasosa-espectroscopia de massa (GC-MS) um número total de 23 compostos foi identificado no extrato de Gt.Crd, dos quais 7 compostos foram selecionados para ter algum tipo de perfil de toxicidade. Da mesma forma, 5 ácidos graxos foram identificados nas sementes de G. tricorne. Além disso, entre as frações, a fração clorofórmio (Gt.Chf) apresentou maior zona de inibição (ZOI), 20,37 mm, seguida de Gt.Crd 18,40 mm contra S. aureus e S. pyogenes, respectivamente. Na citotoxicidade Gt.Chf foi mais ativo seguido pela fração acetato de etila (Gt.Eta), exibindo 88,32±0,62% (LC50=60 µg/mL) e 73,95±2,25% (LC50=80 µg/mL) respectivamente a 1000 µg/ concentração de mL da amostra testada. Gt.Chf exibiu maior atividade inibitória da linha celular (IC50 = 61 µg/mL) contra a linha celular HeLa. Da mesma forma, Gt.Crd apresentou valores de IC50 de 167,84 µg/mL e 175,46 µg/mL contra linha celular HeLa e NIH/3T3, respectivamente. Com base na revisão de literatura e triagens, pode-se concluir que a parte aérea e as sementes de G. tricorne são as ricas fontes de compostos bioativos. Os resultados do presente estudo também autenticam a base científica para os usos etnomedicinais de G. tricorne.