Serological study of feline leishmaniasis and molecular detection of Leishmania infantum and Leishmania braziliensis in cats (Felis catus) / Pesquisa sorológica da leishmaniose felina e detecção molecular de Leishmania infantum e Leishmania braziliensis em gatos (Felis catus)

Blood samples and swabs from ocular conjunctiva and mouth were obtained from 64 cats. Of 64 serum samples, 19 were positive for Leishmania antibodies by ELISA (29.80%). Eight cats were positive by PCR (12.5%) in swab samples from mouth and/or ocular mucosa. Poor kappa agreement between serological and molecular results (k = 0.16) was obtained. From five positive PCR samples one was L. braziliensis and four were L. infantum. Phylogenetic analysis performed with the five isolates of Leishmania, showed that samples of L. infantum isolated from the cats were phylogenetically close to those isolated from domestic dogs in Brazil, while the L. braziliensis is very similar to the one described in humans in Venezuela. The study demonstrated that, despite high seropositivity for Leishmania in cats living in the study region, poor agreement between serological and molecular results indicate that positive serology is not indicative of Leishmania infection in cats. Parasite DNA can be detected in ocular conjunctiva and oral swabs from cats, indicating that such samples could be used for diagnosis. Results of phylogenetic analyzes show that L. infantum circulating in Brazil is capable of infecting different hosts, demonstrating the parasite's ability to overcome the interspecies barrier.(AU)

Amostras de sangue e swabs da conjuntiva ocular e oral foram obtidas de 64 gatos. Das 64 amostras de soro, 19 foram positivas para anticorpos contra Leishmania por ELISA (29,80%). Oito gatos foram positivos por PCR (12,5%) em amostras de swab da boca e / ou mucosa ocular. Demonstrou-se baixa concordância kappa entre os resultados sorológicos e moleculares (k = 0,16). Das cinco amostras positivas para PCR, uma era L. braziliensis e quatro eram L infantum. A análise filogenética realizada com os cinco isolados de Leishmania, mostrou que amostras de L. infantum, isoladas dos gatos, eram filogeneticamente próximas às isoladas de cães domésticos do Brasil enquanto L. braziliensis era muito semelhante ao descrito em humanos na Venezuela. O estudo demonstrou que, apesar da alta soropositividade para Leishmania, em gatos que vivem na região do estudo, pouca concordância entre os resultados sorológicos e moleculares indica que a sorologia positiva não é indicativa de infecção por Leishmania em gatos. O DNA do parasita pode ser detectado na conjuntiva ocular e nas zaragatoas orais de gatos, indicando que essas amostras podem ser usadas para o diagnóstico. . Resultados de análises filogenéticas mostram que L. infantum, circulando no Brasil, é capaz de infectar diferentes hospedeiros, demonstrando a capacidade do parasita de superar a barreira interespécies.(AU)

Comparative study of Mycobacterium bovis primary isolation methods

For the definitive diagnosis of bovine tuberculosis, isolation of the etiologic agent is required. However, there is no consensus on the best methodology for isolation of Mycobacterium bovis in Brazil. This study evaluated the most used decontaminants and culture media in the country, in order to identify the best combination for the Brazilian samples. Three decontaminants - 2% sodium hydroxide (w/v), 0.75% hexadecylpiridinium chloride (w/v) and 5% sulphuric acid (v/v) and four culture media - 7H11 Middlebrook with additives and OADC supplement A (7H11 A), the same media with another supplement trademark (7H11 B), tuberculosis blood agar (B83) and Stonebrink's medium were compared. Regarding the isolation, there were no significant differences between the decontaminants and media combinations, except 7H11A combined to any decontaminant. However, the mean colonies score was significantly greater when the samples were decontaminated with 5% sulphuric acid and inoculated in 7H11 B or SB, without significant difference between them, although colonies appeared earlier on 7H11B than on SB. The trademark of OADC supplement influenced the isolation rate and the number of isolated colonies in Middlebrook 7H11. An incubation time of four weeks was required to detect all positive samples in 7H11 B after decontamination with 5% sulphuric acid but there was an increase in the number of colonies until the sixth week of incubation. Overall, the best strategy for the primary isolation of M. bovis from Brazilian samples was the decontamination with 5% sulphuric acid (final concentration) and inoculation in Middlebrook 7H11 medium formulated with OADC supplement "B".(AU)

Molecular detection of Bluetongue Virus (BTV) and Bovine Leukemia Virus (BLV) in uterine biopsies of dairy cows with or without reproductive problems / Detecção molecular do Vírus da Língua Azul (BTV) e do Vírus da Leucemia bovina (BLV) em amostras de biópsia uterina de vacas leiteiras com e sem problemas reprodutivos

Reproductive performance of dairy cows has a direct impact on herd productivity. Infectious agents, such as Bluetongue Virus (BTV) and Bovine Leukemia Virus (BLV), are associated with reproductive failure. However, it remains unknown if these viruses are present in the uterus and cause gestational loss. This study used molecular methods to assess if BTV and BLV can be detected in the uterus of serologically positive dairy cows with a record of abortions, stillbirths and repeat breeding (n=23) and without a record of reproductive problems (n =23). The cows came from three dairy herds of the state of Minas Gerais, Brazil. BTV was not detected in any of the uterine biopsies. Proviral DNA of BLV was detected in 54.5 % of the seropositive cows, but positivity for BLV in the uterus was not associated with the existence of reproductive problems. In conclusion, this study shows that BLV, but not BTV, is present in the uterus of seropositive cows, regardless of reproductive performance.

O desempenho reprodutivo das vacas leiteiras tem impacto direto na produtividade dos rebanhos. Agentes infecciosos como o Vírus da Língua Azul (BTV) e o Vírus da Leucemia Bovina (BLV) estãoassociados à ocorrência de falhas reprodutivas. Entretanto, não se sabe se estes vírus poderiam estar presentes no útero resultando nas perdas gestacionais. Este estudo utilizou métodos moleculares para investigar se os vírus BTV e BLV estão presentes no úterio de vacas leiteiras sorologicamente positivas com histórico de abortos, natimortos e repetição de cio (n=23) e em vacas sem histórico de problema reprodutivos (n =23) provenientes de três rebanhos leiteiros localizados no estado de Minas Gerais, Brasil. Não foi detectado BTV em nenhuma amostra de biópsia uterina. Por outro lado, o DNA proviral de BLV foi detectado no útero de 54.5 % das vacas soropositivas, independentemente da ocorrência de problemas reprodutivos. Conclui-se que o vírus BLV, ao contrário do BTV está presente no útero de vacas soropositivas, entretanto, sem associação com o desempenho reprodutivo.

Molecular detection of Bluetongue Virus (BTV) and Bovine Leukemia Virus (BLV) in uterine biopsies of dairy cows with or without reproductive problems / Detecção molecular do Vírus da Língua Azul (BTV) e do Vírus da Leucemia bovina (BLV) em amostras de biópsia uterina de vacas leiteiras com e sem problemas reprodutivos

Reproductive performance of dairy cows has a direct impact on herd productivity. Infectious agents, such as Bluetongue Virus (BTV) and Bovine Leukemia Virus (BLV), are associated with reproductive failure. However, it remains unknown if these viruses are present in the uterus and cause gestational loss. This study used molecular methods to assess if BTV and BLV can be detected in the uterus of serologically positive dairy cows with a record of abortions, stillbirths and repeat breeding (n=23) and without a record of reproductive problems (n =23). The cows came from three dairy herds of the state of Minas Gerais, Brazil. BTV was not detected in any of the uterine biopsies. Proviral DNA of BLV was detected in 54.5 % of the seropositive cows, but positivity for BLV in the uterus was not associated with the existence of reproductive problems. In conclusion, this study shows that BLV, but not BTV, is present in the uterus of seropositive cows, regardless of reproductive performance.(AU)

O desempenho reprodutivo das vacas leiteiras tem impacto direto na produtividade dos rebanhos. Agentes infecciosos como o Vírus da Língua Azul (BTV) e o Vírus da Leucemia Bovina (BLV) estãoassociados à ocorrência de falhas reprodutivas. Entretanto, não se sabe se estes vírus poderiam estar presentes no útero resultando nas perdas gestacionais. Este estudo utilizou métodos moleculares para investigar se os vírus BTV e BLV estão presentes no úterio de vacas leiteiras sorologicamente positivas com histórico de abortos, natimortos e repetição de cio (n=23) e em vacas sem histórico de problema reprodutivos (n =23) provenientes de três rebanhos leiteiros localizados no estado de Minas Gerais, Brasil. Não foi detectado BTV em nenhuma amostra de biópsia uterina. Por outro lado, o DNA proviral de BLV foi detectado no útero de 54.5 % das vacas soropositivas, independentemente da ocorrência de problemas reprodutivos. Conclui-se que o vírus BLV, ao contrário do BTV está presente no útero de vacas soropositivas, entretanto, sem associação com o desempenho reprodutivo.(AU)

Detection of agents associated with respiratory diseases of swine by real time PCR / Detecção de agentes associados com doenças respiratórias de suínos por PCR em tempo real

Porcine Respiratory Disease Complex (PRDC) is a group of diseases that cause high losses in the swine industry. Several infectious agents are related to PRDC including porcine circovirus 2 (PCV-2), pseudorabies virus (SuHV-1), Haemophilus parasuis (HP), Mycoplasma hypneumoniae (MH) and Pasteurela multocida (PM). The aim of this study was to develop real-time PCRs (qPCR) for the detection of these infectious agents. Oligonucleotides were designed for each specific infectious agent and labeled with different fluorophores to amplify specific parts of the genome. This was done in two groups of reactionsa duplex qPCR for SuHV-1 and PCV-2 and a multiplex qPCR to detect the three bacteria simultaneously. The reactions were tested in 142 pooled samples of swine lymph nodes and lungs with clinical signs of PRDC. There were 135 samples that tested positive for PCV-2, 61 for HP, 29 for PM, 30 for MH and zero for SuHV-1. We recorded 76 cases of co-infection. The qPCRs developed in this study are useful tools in the diagnosis of PRDC.(AU)

Complexo de Doenças Respiratórias de Suínos (CDRS ) é um grupo de doenças que causam grandes perdas na indústria suína. Vários agentes infecciosos estão relacionados com a CDRS , entre eles o circovírus suíno 2 (PCV -2), vírus da pseudo-raiva (SuHV -1) , Haemophilus parasuis (HP) , Mycoplasma hypneumoniae (MH ) e Pasteurela multocida (PM). O objetivo com este estudo foi desenvolver PCR em tempo real (qPCR) para a detecção destes agentes infecciosos. Os oligonucleotídeos foram concebidos para cada agente infeccioso específico e marcado com fluoróforos diferentes para amplificar partes específicas do genoma em dois grupos de reacções , uma qPCR dúplex em SuHV -1 e PCV- 2 e uma qPCR multiplex para detectar as três bactérias simultaneamente. As reações foram testadas em 142 amostras de pools de linfonodos e pulmões de suínos com sinais clínicos de CDRS. Foram detectadas 135 amostras positivas para PCV- 2 , 61 para a HP, 29 para PM e 30 para MH e zero para SuHV -1, dentre esses foram registrados 76 casos de co-infecção . As qPCRs desenvolvidas neste estudo são ferramentas úteis no diagnóstico da CDRS.(AU)

Detection of agents associated with respiratory diseases of swine by real time PCR / Detecção de agentes associados com doenças respiratórias de suínos por PCR em tempo real

Porcine Respiratory Disease Complex (PRDC) is a group of diseases that cause high losses in the swine industry. Several infectious agents are related to PRDC including porcine circovirus 2 (PCV-2), pseudorabies virus (SuHV-1), Haemophilus parasuis (HP), Mycoplasma hypneumoniae (MH) and Pasteurela multocida (PM). The aim of this study was to develop real-time PCRs (qPCR) for the detection of these infectious agents. Oligonucleotides were designed for each specific infectious agent and labeled with different fluorophores to amplify specific parts of the genome. This was done in two groups of reactionsa duplex qPCR for SuHV-1 and PCV-2 and a multiplex qPCR to detect the three bacteria simultaneously. The reactions were tested in 142 pooled samples of swine lymph nodes and lungs with clinical signs of PRDC. There were 135 samples that tested positive for PCV-2, 61 for HP, 29 for PM, 30 for MH and zero for SuHV-1. We recorded 76 cases of co-infection. The qPCRs developed in this study are useful tools in the diagnosis of PRDC.

Complexo de Doenças Respiratórias de Suínos (CDRS ) é um grupo de doenças que causam grandes perdas na indústria suína. Vários agentes infecciosos estão relacionados com a CDRS , entre eles o circovírus suíno 2 (PCV -2), vírus da pseudo-raiva (SuHV -1) , Haemophilus parasuis (HP) , Mycoplasma hypneumoniae (MH ) e Pasteurela multocida (PM). O objetivo com este estudo foi desenvolver PCR em tempo real (qPCR) para a detecção destes agentes infecciosos. Os oligonucleotídeos foram concebidos para cada agente infeccioso específico e marcado com fluoróforos diferentes para amplificar partes específicas do genoma em dois grupos de reacções , uma qPCR dúplex em SuHV -1 e PCV- 2 e uma qPCR multiplex para detectar as três bactérias simultaneamente. As reações foram testadas em 142 amostras de pools de linfonodos e pulmões de suínos com sinais clínicos de CDRS. Foram detectadas 135 amostras positivas para PCV- 2 , 61 para a HP, 29 para PM e 30 para MH e zero para SuHV -1, dentre esses foram registrados 76 casos de co-infecção . As qPCRs desenvolvidas neste estudo são ferramentas úteis no diagnóstico da CDRS.

Inquérito sorológico da infecção pelos vírus da encefalomielite equina no estado de Minas Gerais, Brasil / Serological survey of equine encephalomyelitis virus infection in the state of Minas Gerais, Brazil

Foi investigada a ocorrência da infecção pelos vírus da Encelafalomielite Equina do Leste (EEE), Encefalomielite Equina do Oeste (WEE) e Encefalomielite Equina Venezuelana (VEE) em equídeos não vacinados contra tais agentes, criados em dez delegacias regionais do estado de Minas Gerais (Almenara, Bambuí, Curvelo, Governador Valadares, Montes Claros, Oliveira, São Gonçalo do Sapucaí, Teófilo Otoni, Unaí e Viçosa), empregando-se a técnica de soroneutralização em microplacas. Dos 826 animais examinados, 30,2% ((250/826) foram soropositivos para EEE e 1,9% (16/826) para o zuelano de Encefalomielite Equina circulam na população equina do estado de Minas Gerais.(AU)}

The occurrence of Equine Eastern Encephalomyelitis (EEE), Equine Western Encephalomyelitis (WEE) and Equine Venezuelan Encephalomyelitis (VEE) virus infection was investigated in equids not vaccinated against these viruses. The animals were distributed in ten regional districts of the state of Minas Gerais (Almenara, Bambuí, Curvelo, Governador Valadares, Montes Claros, Oliveira, São Gonçalo do Sapucaí, Teófilo Otoni, Unaí e Viçosa). Microplate serum neutralization test was used to detect antibodies against encephalitis virus. Two hundred and fifty animals (30.2%, 250/826) were EEE-seropositive, while 1.9% of them (16/826) were VEE-seropositive. No animals were found to be seropositive for WEE. In conclusion, either EEE or VEE viruses circulate in the equid population of the state of Minas Gerais.(AU)