Resumo
A Salmonella Pullorum (SP) é muito semelhante à Salmonella Gallinarum (SG), agentes da Pulorose e Tifo aviário, respectivamente, sendo responsáveis por perdas econômicas no setor avícola. São salmonelas de composição antigênica similar e a distinção de ambas tem sido baseada em provas bioquímicas. Entretanto, este procedimento é laborioso e o surgimento de estirpes com comportamento bioquímico atípico tem estimulado a procura por outros métodos de diagnóstico, como os testes moleculares. No presente estudo, analisou-se o método descrito na literatura envolvendo o gene rfbS em conjunto com testes desenvolvidos com base nos genes speC e speF. O gene rfbS codifica a enzima que atua na parede celular de bactérias e tem sido utilizado para diferenciar SP e SG. Com o propósito de padronizar a PCR para ser utilizada na rotina laboratorial, empregou-se dois métodos de extração de DNA e diferentes concentrações de reagentes. Entretanto, tendo em vista a dificuldade de padronização encontrada desde o início, foi concomitantemente desenvolvida a PCR para os genes speC e speF. Estes dois últimos estão relacionados com a produção da enzima ornitina-descarboxilase, a qual é ativa em SP e inativa em SG. Após testes inicias, foi possível padronizar a PCR do gene speC com posterior utilização da técnica de tratamento enzimático com a enzima de restrição Eco RI. Tanto para o gene rfbS quanto para os genes speC e speF, os resultados encontrados permitiram a diferenciação de 13 amostras de SP e 20 de SG isoladas no Brasil e duas cepas ATCC. Sendo assim, as ações sanitárias e a tomada de decisão no campo podem ser conduzidas de maneira rápida e segura
Salmonella Pullorum (SP) is very similar to Salmonella Gallinarum (SG). They are respectively agents of Pulorosis and Avian Typhoid, both diseases responsible for economic losses to poultry production. Due to the fact that both salmonellas have similar antigenic composition, their differentiation has been based in biochemical tests. However, this fact that this kind of procedure is very troublesome and the occurence of strains showing atypical behavior have stimulated the search for others diagnostic methods, such as molecular tests. In the present study, a method described in the literature using gene rfbS was analyzed together with tests developed based on genes speC and speF. Gene rfbS encodes an enzyme that acts on the cell wall of bacteria and has been used in the differentiation between SP and SG. In order to standardize the PCR procedure to be used in laboratory routine, two methods for DNA extraction were used, as well as different concentrations of the reagents. However, due to the difficulty in the standardization observed from the beginning of the study, a PCR procedure was developed for genes speC and speF. These genes are related to the production of the enzyme ornithine-descarboxilase, active in SP and inactive in SG. After the initial tests, PCR of gene speC was standardized, and later on it was coupled with the enzymatic treatment with restriction enzyme Eco RI. Results obtained for gene rfbS as well as for genes speC and speF enabled differentiation of 13 SP and 20 SG strains isolated in Brazil and two strains ATCC. So, the sanitary actions and the decisions in the livestock can to be conduced with safety and rapidity
Resumo
A amostra utilizada neste trabalho foi Salmonella enterica subsp enterica sorovar Kottbus (6,8:e,h:1,5) isolada de patos importados de um dia de idade no Laboratório Regional de Apoio Animal (LARA) do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) do Brasil. Devido à falta de informação disponível sobre esta Salmonella e tendo sido isolada de aves de um dia de idade, foi delineado este estudo para avaliar a infecção de aves comerciais de um dia de idade por esta bactéria. S. Kottbus foi inoculada oralmente em pintos de corte de um dia de idade, os quais foram divididos em três grupos: 20 aves receberam 0,1mL da cultura não diluída de S. Kottbus contendo 108 fcu/mL, 20 aves de outro grupo receberam a mesma quantia da cultura diluída a 10-3 e 10 aves foram utilizadas como controle. Os resultados foram similares nos dois grupos infectados: suabes cloacais demonstraram que a bactéria estava presente nas fezes 24 hs após a infecção e persistiu até o fim do experimento (42 dias pós-infecção - dpi). Aos 15 e 42 dpi, realizou-se a necrópsia de aves para exame bacteriológico e analisou-se o conteúdo cecal, fígado e baço. Aos 15dpi havia a presença de células viáveis de S. Kottbus em todos os órgãos. No entanto, aos 42 dpi a Salmonella estava presente em algumas aves e com pequeno número de células viáveis no fígado e baço, enquanto que no conteúdo cecal permanecia grande número de células em quase todas as aves analisadas. Estudo adicional foi conduzido com ovos embrionados Specific Pathogen Free - SPF, os quais foram divididos em três grupos: 10 ovos infectados através da casca com o auxílio de um suabe estéril embebido em cultura de S. Kottbus diluída a 10-3, 10 inoculados diretamente no interior do ovo e 10 ovos controle. O grupo que teve a casca contaminada não produziu embriões infectados...
The strain used in this work was a Salmonella enterica subsp enterica serovar Kottbus (6,8:e,h:1,5) isolated from imported day-old duckling by the Laboratório Regional de Apoio Animal do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento of Brazil. In view of the lack of information available about this Salmonella and also because it was detected in day-old imported birds, this study was carried out to assess day-old commercial birds to assessed the chicks infection potential by it. S. Kottbus was inoculated in day-old commercial broiler chick orally. The birds were placed in three groups: One group of of 20 birds received 0.1 mL of the neat culture of S. Kottbus, containing approximately 108-9 fcu/mL, the second group of 20 birds received the culture diluted at 10-3 and the third group of 10 birds received nothing (control). The results were similar to both infected groups of birds. Cloacal swabs done showed the bacterium was presented in the feces from the next day after the experimental infection till the end of the trial (42 day post-inoculation). At 15 and 42 days post-inoculation (dpi), some birds were killed for bacteriological examination of the caecal contents, liver and spleen. At 15 dpi viable count of S. Kottbus was obtained in all of them, however, at 42 dpi Salmonella was presented in the feces of few birds but uncountable in the liver and spleen while it still remained in large amount in the caecal contents of almost all examined birds. An additional study was done with specific-pathogen-free embryonating chicken eggs, which were infected either by cotton swab soaked in S. Kottbus broth culture and spread on the shell (10 eggs) or by inoculation of the broth culture in the chorioallantoic sac (10 eggs) and control (10 eggs received nothing). The contamination on the shell did not yield infected embryos. Only one bird was born from the eggs inoculated internally...