Kinematic and spermatic recovery after selection by centrifugation in colloid solutions of ovine cryopreserved semen / Cinética e recuperação espermática após seleção por centrifugação em soluções coloidais de sêmen ovino criopreservado

Frozen and thawed ovine semen undergo morphological and functional changes that prevent or decrease the efficiency of fertilization. Sperm selection methods seek to improve the quality and viability of the fertilizing materials. Four sperm selection methods were employed, using two silica colloidal solutions coated with silane (silica colloidal-silane) or by polyvinylpyrrolidone (silica colloidal-PVP), and varying the volume of colloidal solution. Sperm kinematic and sperm recovery were evaluated by means of CASA. The protocols using silica colloidal-silane showed higher total motility (TM), progressive motility (PM) and percentage of rapid sperm (%RAP) compared to the methods employing silica colloidal-PVP and to the samples prior to sperm selection. The silica colloidal-PVP had greater sperm recovery compared to the silica colloidal-silane. Only the method using 4mL of silica colloidal-PVP was not efficient in selecting samples with better quality compared to the samples analyzed prior to sperm selection. The methods using lower volumes of colloidal solution did not differ from those using higher volumes and the best results were shown by the method with 1mL silica colloidal-silane. The results found in the study indicated greater efficiency of the silica colloidal-silane solution for sperm selection of thawed ovine semen when compared to selection using silica colloidal-PVP. The method using 1mL of silica colloidal-silane was equally efficient to the method with higher volume, presenting itself as an alternative to process samples with lower sperm concentration.(AU)

O sêmen ovino congelado e descongelado sofre alterações morfofuncionais que impossibilitam ou diminuem a eficiência na fecundação. Os métodos de seleção espermática visam melhorar a qualidade e a viabilidade do material fecundante. Foram utilizados quatro métodos de seleção espermática utilizando duas soluções de sílica coloidal revestida por silano (sílica coloidal-silano) ou por polivinilpirrolidona (sílica coloidal-PVP), variando o volume de solução coloidal. Foram testadas a cinética espermática no CASA e a recuperação espermática. Os protocolos utilizando sílica coloidal-silano apresentaram maior motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP) e porcentagem de espermatozoides rápidos (% RAP) quando comparados aos métodos utilizando a sílica coloidal-PVP e às amostras antes da seleção espermática. A sílica coloidal-PVP teve maior recuperação espermática quando comparada à sílica coloidal-silano. Somente o método utilizando 4mL de sílica coloidal-PVP não foi eficiente na seleção de amostras com melhor qualidade quando comparado às amostras analisadas antes da seleção espermática. Os métodos utilizando menores volumes de solução coloidal não diferiram dos métodos de maior volume, sendo a sílica coloidal-silano com 1mL o método que apresentou os melhores resultados. Como conclusão, os resultados encontrados no trabalho apontaram a maior eficiência da sílica coloidal-silano em selecionar sêmen ovino congelado e descongelado quando comparado à seleção em sílica coloidal-PVP. O método utilizando 1mL de sílica coloidal-silano foi igualmente eficiente ao método com maior volume, sendo uma alternativa para processar amostras com baixa concentração espermática.(AU)

Kinematic and spermatic recovery after selection by centrifugation in colloid solutions of ovine cryopreserved semen / Cinética e recuperação espermática após seleção por centrifugação em soluções coloidais de sêmen ovino criopreservado

Frozen and thawed ovine semen undergo morphological and functional changes that prevent or decrease the efficiency of fertilization. Sperm selection methods seek to improve the quality and viability of the fertilizing materials. Four sperm selection methods were employed, using two silica colloidal solutions coated with silane (silica colloidal-silane) or by polyvinylpyrrolidone (silica colloidal-PVP), and varying the volume of colloidal solution. Sperm kinematic and sperm recovery were evaluated by means of CASA. The protocols using silica colloidal-silane showed higher total motility (TM), progressive motility (PM) and percentage of rapid sperm (%RAP) compared to the methods employing silica colloidal-PVP and to the samples prior to sperm selection. The silica colloidal-PVP had greater sperm recovery compared to the silica colloidal-silane. Only the method using 4mL of silica colloidal-PVP was not efficient in selecting samples with better quality compared to the samples analyzed prior to sperm selection. The methods using lower volumes of colloidal solution did not differ from those using higher volumes and the best results were shown by the method with 1mL silica colloidal-silane. The results found in the study indicated greater efficiency of the silica colloidal-silane solution for sperm selection of thawed ovine semen when compared to selection using silica colloidal-PVP. The method using 1mL of silica colloidal-silane was equally efficient to the method with higher volume, presenting itself as an alternative to process samples with lower sperm concentration.(AU)

O sêmen ovino congelado e descongelado sofre alterações morfofuncionais que impossibilitam ou diminuem a eficiência na fecundação. Os métodos de seleção espermática visam melhorar a qualidade e a viabilidade do material fecundante. Foram utilizados quatro métodos de seleção espermática utilizando duas soluções de sílica coloidal revestida por silano (sílica coloidal-silano) ou por polivinilpirrolidona (sílica coloidal-PVP), variando o volume de solução coloidal. Foram testadas a cinética espermática no CASA e a recuperação espermática. Os protocolos utilizando sílica coloidal-silano apresentaram maior motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP) e porcentagem de espermatozoides rápidos (% RAP) quando comparados aos métodos utilizando a sílica coloidal-PVP e às amostras antes da seleção espermática. A sílica coloidal-PVP teve maior recuperação espermática quando comparada à sílica coloidal-silano. Somente o método utilizando 4mL de sílica coloidal-PVP não foi eficiente na seleção de amostras com melhor qualidade quando comparado às amostras analisadas antes da seleção espermática. Os métodos utilizando menores volumes de solução coloidal não diferiram dos métodos de maior volume, sendo a sílica coloidal-silano com 1mL o método que apresentou os melhores resultados. Como conclusão, os resultados encontrados no trabalho apontaram a maior eficiência da sílica coloidal-silano em selecionar sêmen ovino congelado e descongelado quando comparado à seleção em sílica coloidal-PVP. O método utilizando 1mL de sílica coloidal-silano foi igualmente eficiente ao método com maior volume, sendo uma alternativa para processar amostras com baixa concentração espermática.(AU)

Avaliação da heterogeneidade espermática de carneiros por meio da análise morfométrica computadorizada não automatizada utilizando-se preparação úmida e coloração de Karras / Evaluation of spermatic heterogeneity in ram with computerized non automatized morphometric analysis using humid preparation and Karras stain

A avaliação espermática é fundamental para resultados satisfatórios na biotecnologia da reprodução emovinos. A heterogeneidade das células no ejaculado pode afetar o congelamento de sêmen e morfologiasalteradas podem formar embriões de má qualidade. A análise do sêmen de 10 ovinos da raça Somalis demonstraque existe, entre as células espermáticas, variação na morfometria de nove dos 11 parâmetros avaliados namensuração computadorizada não automatizada, ao comparar as técnicas utilizadas no trabalho (coloração deKarras sob microscopia óptica e preparação úmida sob microscopia de contraste de fase). As diferençasestatísticas entre a maioria dos parâmetros medidos tornam importante a busca por uma justificativa que possaesclarecer tal fenômeno com o objetivo de aprimorar e melhorar a qualidade da avaliação seminal, já que ela estádiretamente relacionada com os índices de fertilidade nos ovinos.(AU)

Sperm evaluation is critical for satisfactory results in the biotechnology of reproduction in sheepbreeding. The heterogeneity of cells in the ejaculate can affect semen freezing, and altered morphologies canproduce bad quality embryos. The semen analysis of 10 Somalis ram found that there is variation betweenmorphometric analysis of two techniques (staining Karras and wet preparation), finding statistical differencesamong most of the parameters measured. The semen analysis of 10 Somali sheep breed shows that there isvariation among sperm cells in 9 of the 11 morphometric parameters evaluated in non-automated computedmeasurement comparing the techniques used (Karras staining under optical microscopy and wet preparationunder phase contrast microscopy). Statistical differences between measured parameters is important to searchfor a justification that can clarify this phenomenon with the aim to enhance and improve quality of seminalreview, since it is directly related to fertility rates in sheep.(AU)

Avaliação da heterogeneidade espermática de carneiros por meio da análise morfométrica computadorizada não automatizada utilizando-se preparação úmida e coloração de Karras / Evaluation of spermatic heterogeneity in ram with computerized non automatized morphometric analysis using humid preparation and Karras stain

A avaliação espermática é fundamental para resultados satisfatórios na biotecnologia da reprodução emovinos. A heterogeneidade das células no ejaculado pode afetar o congelamento de sêmen e morfologiasalteradas podem formar embriões de má qualidade. A análise do sêmen de 10 ovinos da raça Somalis demonstraque existe, entre as células espermáticas, variação na morfometria de nove dos 11 parâmetros avaliados namensuração computadorizada não automatizada, ao comparar as técnicas utilizadas no trabalho (coloração deKarras sob microscopia óptica e preparação úmida sob microscopia de contraste de fase). As diferençasestatísticas entre a maioria dos parâmetros medidos tornam importante a busca por uma justificativa que possaesclarecer tal fenômeno com o objetivo de aprimorar e melhorar a qualidade da avaliação seminal, já que ela estádiretamente relacionada com os índices de fertilidade nos ovinos.

Sperm evaluation is critical for satisfactory results in the biotechnology of reproduction in sheepbreeding. The heterogeneity of cells in the ejaculate can affect semen freezing, and altered morphologies canproduce bad quality embryos. The semen analysis of 10 Somalis ram found that there is variation betweenmorphometric analysis of two techniques (staining Karras and wet preparation), finding statistical differencesamong most of the parameters measured. The semen analysis of 10 Somali sheep breed shows that there isvariation among sperm cells in 9 of the 11 morphometric parameters evaluated in non-automated computedmeasurement comparing the techniques used (Karras staining under optical microscopy and wet preparationunder phase contrast microscopy). Statistical differences between measured parameters is important to searchfor a justification that can clarify this phenomenon with the aim to enhance and improve quality of seminalreview, since it is directly related to fertility rates in sheep.

Effect of hydrogen peroxide on thawed ovine sperm motility

Oxidative stress, resulting from excessive levels of ROS in semen, has a negative impact on functional parameters and sperm fertility. In this study we examined the influence of the oxidative stress induced by hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) in ovine sperm motility after thawing and catalase (CAT) ability to preserve sperm motility. Semen was incubated at 37 °C with 100 μM H 2 O 2 , 1 U catalase + 100 μM H 2 O 2 or no treatment, for 30 min. Immediately after adding treatments, sperm motility was determined by computer - assisted semen analysis (CASA). Incubation with H 2 O 2 led to a significant (P < 0.05) decrease in motility parameters whereas catalase prevented a decline in motility secondary to oxidative stress. After 30 min of incubation with H 2 O 2 , total motility (12.0% v s . control 73.0%, H 2 O 2 +CAT 70.0%), progressive motility (0.0% vs . control 19.0%, H 2 O 2 +CAT 19.0%) and rapid motility (1.0% v s . control 43.0%, H 2 O 2 +CAT 40.0%) decreased significantly ( P < 0. 05 ), whereas percentage of static cells increased (84.0% v s . control 18.0%, H 2 O 2 +CAT 20.0%). We conclude that H 2 O 2 causes damage to ovine sperm motility and that catalase is able to avoid detrimental effect of H 2 O 2 on sperm motility.

Effect of hydrogen peroxide on thawed ovine sperm motility

Oxidative stress, resulting from excessive levels of ROS in semen, has a negative impact on functional parameters and sperm fertility. In this study we examined the influence of the oxidative stress induced by hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) in ovine sperm motility after thawing and catalase (CAT) ability to preserve sperm motility. Semen was incubated at 37 °C with 100 μM H 2 O 2 , 1 U catalase + 100 μM H 2 O 2 or no treatment, for 30 min. Immediately after adding treatments, sperm motility was determined by computer - assisted semen analysis (CASA). Incubation with H 2 O 2 led to a significant (P < 0.05) decrease in motility parameters whereas catalase prevented a decline in motility secondary to oxidative stress. After 30 min of incubation with H 2 O 2 , total motility (12.0% v s . control 73.0%, H 2 O 2 +CAT 70.0%), progressive motility (0.0% vs . control 19.0%, H 2 O 2 +CAT 19.0%) and rapid motility (1.0% v s . control 43.0%, H 2 O 2 +CAT 40.0%) decreased significantly ( P < 0. 05 ), whereas percentage of static cells increased (84.0% v s . control 18.0%, H 2 O 2 +CAT 20.0%). We conclude that H 2 O 2 causes damage to ovine sperm motility and that catalase is able to avoid detrimental effect of H 2 O 2 on sperm motility. (AU)

Gargalos tecnológicos na reprodução assistida em ovinos: o estado da arte / Technological bottlenecks in sheep assisted reproduction: the state of the art

A expansão da criação de ovinos tem representado uma oportunidade no avanço dos estudos referentes às Biotécnicas de Reprodução Assistidas em ovinos. Como principal objetivo deste trabalho está uma análise dos principais gargalos tecnológicos à aplicação da Reprodução Assistida na espécie ovina. Serão ainda abordados princípios básicos que podem ser úteis à adoção de estratégias visando à superação desses entraves. (AU)

The expansion of the creation of sheep has represented an opportunity in the advancement of studies related to Biotechnology of Assisted Reproduction in sheep. The main objective of this study is an analysis of the major technological bottlenecks to the implementation of Assisted Reproduction in sheep. Basic principles that may be useful to adopt strategies aimed at overcoming these barriers will be approached. (AU)

Gargalos tecnológicos na reprodução assistida em ovinos: o estado da arte / Technological bottlenecks in sheep assisted reproduction: the state of the art

A expansão da criação de ovinos tem representado uma oportunidade no avanço dos estudos referentes às Biotécnicas de Reprodução Assistidas em ovinos. Como principal objetivo deste trabalho está uma análise dos principais gargalos tecnológicos à aplicação da Reprodução Assistida na espécie ovina. Serão ainda abordados princípios básicos que podem ser úteis à adoção de estratégias visando à superação desses entraves.

The expansion of the creation of sheep has represented an opportunity in the advancement of studies related to Biotechnology of Assisted Reproduction in sheep. The main objective of this study is an analysis of the major technological bottlenecks to the implementation of Assisted Reproduction in sheep. Basic principles that may be useful to adopt strategies aimed at overcoming these barriers will be approached.

Efeito do sevofluorano sobre a freqüência cardíaca fetal no terço final de gestação de cadelas / Effect of sevoflurane on fetal heart rate in last third pregnant bitches

Estudaram-se os efeitos do sevofluorano sobre a freqüência cardíaca nos fetos de cadelas no terço final de gestação, mediante a mensuração da freqüência cardíaca fetal com a utilização do ultra-som. Nove cadelas, sem raça definida, entre um e cinco anos de idade, com aproximadamente 45 dias de gestação, foram anestesiadas com acepromazina (0,05mg/kg, IV), propofol (5mg/kg, IV) e sevofluorano. O monitoramento da freqüência cardíaca fetal foi realizado antes da medicação pré-anestésica (M0), 15 minutos após a intubação traqueal (M1), aos 30 minutos (M2) e 60 minutos (M3) do período de manutenção anestésica. A pressão arterial sistólica (PAS), média (PAM) e diastólica (PAD) foram obtidas pelo método não invasivo, sendo a PAM avaliada também pelo método invasivo. Por meio do monitoramento da freqüência cardíaca fetal média não se observou diferença significativa entre M0, M1 e M2, e verificou-se elevação apenas aos 60 minutos da manutenção anestésica (M3) em relação ao M0, porém sem significado clínico. O protocolo anestésico provocou diminuição significativa da pressão sangüínea arterial materna sem alterar, porém a freqüência cardíaca dos fetos.(AU)

The effect of sevoflurane on fetal heart rate of 45-day fetuses was investigated through monitoring fetal heart rate by ultrasonographic evaluation in nine adult bitches aging from 1 to 5-year-old. After sedation with acepromazine (0.05mg/kg, IV), the anesthetic induction was accomplished using propofol (5mg/kg, IV) and the maintenance was kept with sevoflurane. The fetal heart rate was measured before sedation (M0), 15 minutes after endotracheal intubation (M1), at 30 (M2) and 60 minutes (M3) from the beginning of general anesthesia. The systolic, diastolic and mean blood pressures were obtained by indirect techniques, while mean blood pressure were also obtained by direct technique. The measure of fetal heart rate did not show any difference between M0, M1 and M2, but there was a remarkable increase in the last moment of the study (M3) comparing to M0, however without clinical relevance. The anesthetic protocol employing acepromazine, propofol and sevoflurane in 45-day pregnancy bitches decreased their arterial blood pressure without affecting the fetal heart rate.(AU)