Detection of virulence factors in coagulase-negative Staphylococcus spp. strains isolated from Emmental cheese / Detecção de fatores de virulência em cepas de Staphylococcus spp. coagulase negativos isoladas de queijo Emmental

Food prepared with products derived from animals are involved in most cases of staphylococcal poisoning; therefore, the research of Staphylococcus spp. in Emmental cheese is more applicable. The objective of this study was to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) in cheese using biochemical and molecular techniques to detect the presence of nine genes responsible for the production of enterotoxins. From 180 samples analyzed, 204 CNS strains were obtained and identified as being 46 (22.6%) S. saprophyticus strains, 27 (13.2%) S. hominis spp. hominis strains, 22 (10.8%) S. sciuri strains, 21 (10.3%) S. xylosus strains, 19 (9.3%) S. epidermidis strains, 19 (9.3%) S. haemolyticus strains, 17 (8.3%) S. lentus strains, 17 (8.3%) S. warneri strains, 11 (5.4%) S. equorum strains and 5 (2.5%) S. cohnni . Using the PCRm protocol, 14 (6.9%) strains with the presence of the genes on the enterotoxin E (SEE)11 (78.6%), J (SEJ) 1 (7%), C (SEC) 1 (7%) and I (SEI) 1 (7%) were detected. Based on the results, the type of package is not interfered of growth and isolated that Staphylococcus spp. in cheese. It was observed that bacteria capacity to produce coagulase cannot be understood as an indicative of enterotoxigenicity; therefore, the CNS should be considered as a target of importance in the epidemiology of staphylococcal intoxications. It can be concluded that CNS need to be included in bacterial foodborne disease research, since the genes responsible for the production of toxins were detected and none of the studied samples presented Staphylococcus spp. counting above the limits allowed by legislation.(AU)

Os alimentos preparados com produtos de origem animal são os mais envolvidos em casos de intoxicação alimentar estafilocócica; portanto a pesquisa do Staphylococcus spp. em queijos tipo Emmental é relevante. O objetivo foi isolar e identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativas (CNS)de queijo Emmental acondicionado em vários tipos de embalagem, por meio de técnicas bacteriológicas e bioquímicas e detectar, por PCR, a presença de nove genes responsáveis pela produção de enterotoxinas. Das 180 amostras, foram isoladas 204 cepas de CNS, que foram identificadas por provas bioquímicas como: 46 (22,6%) S. saprophyticus, 27 (13,2%) S. hominis spp. hominis, 22 (10,8%) S. sciuri, 21 (10,3%) S. xylosus, 19 (9,3%) S. epidermidis , 19 (9,3%) S. haemolyticus , 17 (8,3%) S. lentus , 17 (8,3%) S. warneri , 11(5,4%) S. equorum e 5 (2,5%) S. cohnii . Na PCR multiplex, em 14 (6,9%) isolados foi detectada a presença dos genes para enterotoxina E (SEE), em 11 (78,6%) J (SEJ), em 1 (7%) C (SEC) e em 1 (7%) I (SEI). Com base nos resultados, o tipo de embalagem não interferiu na multiplicação dos Staphylococcus spp. isolados dos queijos. Neste estudo, verificou-se que a capacidade para a produção de coagulase pela bactéria não pode ser concebida como indicativa de enterotoxigenicidade, portanto devem-se considerar os CNS como objeto de importância na epidemiologia das intoxicações estafilocócicas, fazendo-se necessária a atenção com relação à pesquisa dos CNS nos alimentos, uma vez que foram detectados genes responsáveis pela produção de toxinas, e nenhuma das amostras apresentou contagem para Staphylococcus spp. acima do limite permitido pela legislação.(AU)

Detection of virulence factors in coagulase-negative Staphylococcus spp. strains isolated from Emmental cheese / Detecção de fatores de virulência em cepas de Staphylococcus spp. coagulase negativos isoladas de queijo Emmental

Food prepared with products derived from animals are involved in most cases of staphylococcal poisoning; therefore, the research of Staphylococcus spp. in Emmental cheese is more applicable. The objective of this study was to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) in cheese using biochemical and molecular techniques to detect the presence of nine genes responsible for the production of enterotoxins. From 180 samples analyzed, 204 CNS strains were obtained and identified as being 46 (22.6%) S. saprophyticus strains, 27 (13.2%) S. hominis spp. hominis strains, 22 (10.8%) S. sciuri strains, 21 (10.3%) S. xylosus strains, 19 (9.3%) S. epidermidis strains, 19 (9.3%) S. haemolyticus strains, 17 (8.3%) S. lentus strains, 17 (8.3%) S. warneri strains, 11 (5.4%) S. equorum strains and 5 (2.5%) S. cohnni . Using the PCRm protocol, 14 (6.9%) strains with the presence of the genes on the enterotoxin E (SEE)11 (78.6%), J (SEJ) 1 (7%), C (SEC) 1 (7%) and I (SEI) 1 (7%) were detected. Based on the results, the type of package is not interfered of growth and isolated that Staphylococcus spp. in cheese. It was observed that bacteria capacity to produce coagulase cannot be understood as an indicative of enterotoxigenicity; therefore, the CNS should be considered as a target of importance in the epidemiology of staphylococcal intoxications. It can be concluded that CNS need to be included in bacterial foodborne disease research, since the genes responsible for the production of toxins were detected and none of the studied samples presented Staphylococcus spp. counting above the limits allowed by legislation.(AU)

Os alimentos preparados com produtos de origem animal são os mais envolvidos em casos de intoxicação alimentar estafilocócica; portanto a pesquisa do Staphylococcus spp. em queijos tipo Emmental é relevante. O objetivo foi isolar e identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativas (CNS)de queijo Emmental acondicionado em vários tipos de embalagem, por meio de técnicas bacteriológicas e bioquímicas e detectar, por PCR, a presença de nove genes responsáveis pela produção de enterotoxinas. Das 180 amostras, foram isoladas 204 cepas de CNS, que foram identificadas por provas bioquímicas como: 46 (22,6%) S. saprophyticus, 27 (13,2%) S. hominis spp. hominis, 22 (10,8%) S. sciuri, 21 (10,3%) S. xylosus, 19 (9,3%) S. epidermidis , 19 (9,3%) S. haemolyticus , 17 (8,3%) S. lentus , 17 (8,3%) S. warneri , 11(5,4%) S. equorum e 5 (2,5%) S. cohnii . Na PCR multiplex, em 14 (6,9%) isolados foi detectada a presença dos genes para enterotoxina E (SEE), em 11 (78,6%) J (SEJ), em 1 (7%) C (SEC) e em 1 (7%) I (SEI). Com base nos resultados, o tipo de embalagem não interferiu na multiplicação dos Staphylococcus spp. isolados dos queijos. Neste estudo, verificou-se que a capacidade para a produção de coagulase pela bactéria não pode ser concebida como indicativa de enterotoxigenicidade, portanto devem-se considerar os CNS como objeto de importância na epidemiologia das intoxicações estafilocócicas, fazendo-se necessária a atenção com relação à pesquisa dos CNS nos alimentos, uma vez que foram detectados genes responsáveis pela produção de toxinas, e nenhuma das amostras apresentou contagem para Staphylococcus spp. acima do limite permitido pela legislação.(AU)

Determinação da contagem de ovos de nematódeos no período peri-parto em vacas / Determination of nematode faecal egg counts during the periparturient period in cows

Dois experimentos foram conduzidos com o objetivo de se observar as alterações do número de ovos de nematódeos por grama de fezes (OPG) eliminados por vacas no período do peri-parto. No primeiro foram utilizadas vacas de raças européia (leiteiras) e zebuínas (de corte), da 6ª semana pré-parto à 6ª semana pós-parto. Observou-se diferença significativa (p<0,05) com maior número de animais leiteiros apresentando ovos de nematódeos nas fezes durante o peri-parto. Na categoria de animais leiteiros, houve um aumento significativo no OPG no momento do parto e na semana quatro pós-parto, em relação ao pré-parto. Também nesta categoria, observou-se uma associação negativa entre o número de partos e a positividade em relação ao OPG (p<0,05). Devido ao comportamento diferenciado dos animais leiteiros um segundo experimento foi feito para se comparar, nessa categoria animal, as alterações de OPG da quarta semana pré-parto à décima pós-parto, em vacas de primeira e segunda crias e três ou mais crias. Observou-se diferença significativa, com os animais de primeira e segunda crias apresentando maiores valores de OPG nas semanas dois, três e quatro pós-parto (p<0,05). Os valores de OPG para os animais de primeira e segunda crias foram de 0 - 1800, enquanto nos animais mais velhos a variação foi de 0 - 150 OPG. Os resultados de ambos os estudos sugerem que um esquema de controle contra nematódeos gastrintestinais deva ser implantado em vacas de primeira e segunda crias com o uso de anti-helmínticos no pré-parto, ao redor da segunda semana antes dos nascimentos (AU)

Two experiments were carried out to study the changes in the nematode faecal egg counts (EPG) in cows, during the periparturient period. In the first experiment, faeces from Holstein (dairy) and Zebu (beef) cows, were examined from the 6th week before birth up to the 6th week after birth. It was observed a significant difference (p<0,05) with a higher number of cows, from the Holstein group, with nematode eggs in faeces. In the dairy animals a significant rise in the EPG was observed at the moment of birth and on week four post parturition, when compared to pre parturition period. A negative association was found between the time of parturition and EPG, with the younger cows presenting higher EPG (p<0.05). Based on these results a second experiment was conducted to compare the EPG variations from the 4th week before birth up to the 10th week post parturition, in Holsteins cows, including primary and second gestation (group 1), and 3rd or more gestation (group 2). It was observed a significant difference with cows from the 1st and 2nd gestation showing higher EPG than group 2, at week 2, 3 and 4 after birth (p<0,05). The EPG from group 1 ranged from 0 to 1800, and from group 2 from 0 to 150 EPG. The results suggest that an anthelminthic treatment around the 2nd week before birth, in cows at the 1st and 2nd gestation, will decrease pasture contamination and nematode infection.(AU)

Neospora caninum em búfalos: cinética da resposta imune humoral em bezerros experimentalmente infectados e isolamento do agente de adultos naturalmente infectados

O búfalo (Bubalus bubalis) é um importante hospedeiro natural do Neospora caninum. A produção de anticorpos anti-N. caninum foi estudada em animais experimentalmente infectados, e tentativas foram realizadas para o isolamento do agente de búfalos adultos naturalmente infectados do Estado de São Paulo. Seis búfalos foram inoculados pela via subcutânea com 5x106 taquizoítos da cepa Nc-Illinois de N. caninum, derivados de cultivo celular do parasita, e dois animais permaneceram como controles não inoculados. Amostras de sangue foram coletadas semanalmente durante oito semanas e então mensalmente até um ano pós-inoculação (p.i.) e a cinética da resposta imune humoral acompanhada pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) considerando como positivos os títulos > 25. Nenhum dos búfalos inoculados com o parasita apresentou alteração na temperatura retal quando comparado com os animais do grupo controle. Todos os búfalos inoculados apresentaram título de anticorpos anti-N. caninum > 100 na RIFI entre os dias sete e 11 p.i., e seus títulos permaneceram elevados até sete semanas p.i. Os picos de anticorpos ocorreram entre a semana oito p.i., atingindo valores de 1600 em um, 800 em três e 400 em dois búfalos. Os títulos de anticorpos decaíram para 25 e 50 em todos os seis búfalos aos 12 meses p.i. Nos dois controles não inoculados, títulos de anticorpos não foram detectados (< 25) na RIFI. Cérebros de seis búfalos naturalmente infectados, com títulos > 100, foram colhidos e utilizados para o isolamento do parasita através das técnicas de bioensaio em cães, bioensaio em cultivo celular e bioensaio em gerbils. O material positivo foi analisado pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para confirmar-se a identidade do parasita. O cérebro do búfalo 403 foi positivo no bioensaio em cães (NcBrBuf 1), do búfalo 406 foi positivo no bioensaio em cães e células (NcBrBuf 2), dos búfalos 410 e 419 no bioensaio em gerbils (NcBrBuf 3 e 5) e o animal 412 foi positivo no bioensaio em cães, cultivo celular e gerbils (NcBrBuf 4). A identidade do parasita foi confirmada por métodos moleculares e biológicos. Os isolados não foram patogênicos a gerbils. O perfil protéico foi similar, porém não idêntico ao do isolado Nc-1. As sequências do gene Nc5 e do fragmento ITS-1 foram analisadas e foram idênticas entre elas e bastante similares as sequências de outros isolados de diferentes hospedeiros e regiões geográficas. Este é o primeiro relato do isolamento de N. caninum de búfalos