Evaluation of skimmed milk flocculation method for virus recovery from tomatoes

Abstract This study aimed to evaluate the elution-concentration methodology based on skimmed milk flocculation from three varieties of tomatoes (Solanum lycopersicum L. [globe], Solanum lycopersicum var. cerasiforme [cherry] and hybrid cocktail [grape tomato]) for further monitoring of field samples. Spiking experiments were performed to determine the success rate and efficiency recovery of human norovirus (NoV) genogroup II, norovirus murine-1 (MNV-1) used as sample process control virus and human adenovirus (HAdV). Mean values of 18.8%, 2.8% and 44.0% were observed for NoV GII, MNV-1 and HAdV, respectively with differences according to the types of tomatoes, with lower efficiency for cherry tomatoes. Analysis of 90 samples, obtained at commercial establishments in the metropolitan region of Rio de Janeiro State, revealed 4.5% positivity for HAdV. Bacterial analysis was also performed with no detection of Salmonella spp., L. monocytogenes and fecal coliforms. Data demonstrated that the skimmed milk flocculation method is suitable for recovering HAdV from tomatoes and highlights the need for considering investigation in order to improve food safety.

Evaluation of skimmed milk flocculation method for virus recovery from tomatoes

This study aimed to evaluate the elution-concentration methodology based on skimmed milk flocculation from three varieties of tomatoes (Solanum lycopersicum L. [globe], Solanum lycopersicum var. cerasiforme [cherry] and hybrid cocktail [grape tomato]) for further monitoring of field samples. Spiking experiments were performed to determine the success rate and efficiency recovery of human norovirus (NoV) genogroup II, norovirus murine-1 (MNV-1) used as sample process control virus and human adenovirus (HAdV). Mean values of 18.8%, 2.8% and 44.0% were observed for NoV GII, MNV-1 and HAdV, respectively with differences according to the types of tomatoes, with lower efficiency for cherry tomatoes. Analysis of 90 samples, obtained at commercial establishments in the metropolitan region of Rio de Janeiro State, revealed 4.5% positivity for HAdV. Bacterial analysis was also performed with no detection of Salmonella spp., L. monocytogenes and fecal coliforms. Data demonstrated that the skimmed milk flocculation method is suitable for recovering HAdV from tomatoes and highlights the need for considering investigation in order to improve food safety.(AU)

Pesquisa, identificação e perfil de suscetibilidade antimicrobiana de Cronobacter spp. em produtos destinados à alimentação infantil / Detection, identification and antimicrobial susceptibility profile of Cronobacter spp. in products for infant feeding

Cronobacter spp. emergiu como perigo microbiológico em fórmulas infantis desidratadas (FID), responsável por infecções graves em neonatos. Contudo, muitos pacientes não ingeriram FID, o que indica que outros alimentos podem atuar como veículo do patógeno. Os objetivos deste estudo foram pesquisar Cronobacter spp. em alimentos infantis, identificar as espécies e avaliar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos das cepas isoladas. Foram analisadas 47 amostras pré-cozidas de cereais à base de grãos, amidos de milho e farinhas lácteas. A pesquisa foi realizada com pré-enriquecimento em água peptonada tamponada, enriquecimento seletivo no Cronobacter Screening Broth, isolamento por meio de Enterobacter sakazakii Isolation Agar e identificação no Vitek 2.0. A identificação das espécies foi realizada por reação em cadeia pela polimerase com alvo nos genes rpoB e cgcA. O antibiograma foi realizado pelo método de difusão em ágar (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. foi identificada em 11 amostras (23,4 %). Oito cepas foram identificadas como C. sakazakii (72,7 %), duas como C. malonaticus (18,2 %) e uma como C. dublinensis (9,1 %). Apenas uma cepa de C. malonaticus apresentou resistência intermediária a ciprofloxacina. Os produtos destinados à alimentação infantil avaliados podem apresentar risco, no caso destes alimentos serem ingeridos por pacientes pertencentes ao grupo de risco, como neonatos e idosos.

Cronobacter spp. emerged as a microbiological hazard in powdered infant formulas (PIF) causing severe infections in newborns. However, among these patients many of them had not ingested PIF indicating that other foods categories might be as the pathogen vehicle. This study aimed at investigating Cronobacter spp. in infant foods, identifying the species and evaluating the antimicrobial susceptibility profile of the isolated strains. Forty-seven samples of precooked grain-based cereals, corn starch and milk flours were analyzed. The microbiological analysis was performed with pre-enrichment in buffered peptone water, followed by selective-enrichment in Cronobacter Screening Broth, isolation in Enterobacter sakazakii Isolation Agar and identification in Vitek 2.0. The identification of species was performed by polymerase chain reaction targeting rpoB and cgaA genes. The antibiogram was carried out using the agar diffusion method (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. was identified in 11 samples (23.4 %). Eight strains were identified as C. sakazakii (72.7 %), two as C. malonaticus (18.2 %) and one as C. dublinensis (9.1 %). Only one C. malonaticus strain showed an intermediate resistance to ciprofloxacin. The evaluated samples produced for infant feeding might cause hazard when ingested by patients belonging to the risk group as newborns and elderly.

Identificação de Cronobacter spp. em queijos e perfil de suscetibilidade antimicrobiana / Identification of Cronobacter spp. in cheeses and the antimicrobial susceptibility profile

Cronobacter spp. é um patógeno oportunista que pode causar infecções em indivíduos de qualquer idade, cuja incidência é maior em neonatos, pacientes imunocomprometidos e idosos. Neste estudo Cronobacter spp. foi pesquisado em 90 amostras de queijos (30 do tipo Minas Frescal, 30 do tipo Prato e 30 do tipo Prato fatiado). As espécies isoladas foram identificadas, e foi avaliado o perfil de suscetibilidade a antimicrobianos. A pesquisa foi realizada utilizando-se pré-enriquecimento em água peptonada tamponada, enriquecimento seletivo no caldo lauril sulfato triptose contendo vancomicina, isolamento no meio Enterobacter sakazakii Isolation Agar e identificação no Vitek 2.0. As espécies foram identificadas por meio de múltipla PCR com alvo no gene cgcA. O antibiograma foi realizado pela técnica de difusão em ágar (KirbyBauer). Cronobacter spp. foi isolada em uma (1,1 %) amostra de queijo tipo Minas Frescal, identificada como C. sakazakii que apresentou sensibilidade a todos os antimicrobianos testados. Cronobacter spp. pode não representar risco à saúde dos indivíduos pelo consumo de queijos produzidos com leite pasteurizado. Entretanto, a presença de Cronobacter spp. em uma amostra de queijo demonstra falhas na produção, o que reforça a necessidade de maior adesão às Boas Práticas de Fabricação.

Cronobacter spp. is an opportunistic pathogen that may cause infections in individuals of any age, and the highest incidence occurs in neonates, immunocompromised patients and elderly persons. This study investigated Cronobacter spp. occurrence in 90 cheese samples (30 “Minas Frescal” type cheeses, 30 “Prato” type and 30 sliced “Prato” type). The isolated species were identified and the antimicrobial susceptibility profile of the isolated strains was evaluated. The microbiological assay was performed with pre-enrichment in buffered peptone water, and selective-enrichment in modified lauryl sulphate tryptose broth containing vancomycin. Isolation and identification were done in Enterobacter sakazakii Isolation Agar and in Vitek 2.0, respectively. The species identification was performed by multiple PCR targeting cgaA gene. Antibiogram was done using agar diffusion method (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. was isolated from one (1.1 %) sample of “Minas Frescal” type cheese, identified as C. sakazakii which was sensitive to all of tested antimicrobials. Cronobacter spp. does not represent a risk to the individuals health by consuming cheeses made from pasteurized milk. However, the presence of Cronobacter spp. in one sample of analyzed cheese indicates failures in their production, reinforcing the need for following the Good Manufacturing Practices.

Identificação de Cronobacter spp. em queijos e perfil de suscetibilidade antimicrobiana / Identification of Cronobacter spp. in cheeses and the antimicrobial susceptibility profile

Cronobacter spp. é um patógeno oportunista que pode causar infecções em indivíduos de qualquer idade, cuja incidência é maior em neonatos, pacientes imunocomprometidos e idosos. Neste estudo Cronobacter spp. foi pesquisado em 90 amostras de queijos (30 do tipo Minas Frescal, 30 do tipo Prato e 30 do tipo Prato fatiado). As espécies isoladas foram identificadas, e foi avaliado o perfil de suscetibilidade a antimicrobianos. A pesquisa foi realizada utilizando-se pré-enriquecimento em água peptonada tamponada, enriquecimento seletivo no caldo lauril sulfato triptose contendo vancomicina, isolamento no meio Enterobacter sakazakii Isolation Agar e identificação no Vitek 2.0. As espécies foram identificadas por meio de múltipla PCR com alvo no gene cgcA. O antibiograma foi realizado pela técnica de difusão em ágar (KirbyBauer). Cronobacter spp. foi isolada em uma (1,1 %) amostra de queijo tipo Minas Frescal, identificada como C. sakazakii que apresentou sensibilidade a todos os antimicrobianos testados. Cronobacter spp. pode não representar risco à saúde dos indivíduos pelo consumo de queijos produzidos com leite pasteurizado. Entretanto, a presença de Cronobacter spp. em uma amostra de queijo demonstra falhas na produção, o que reforça a necessidade de maior adesão às Boas Práticas de Fabricação.(AU)

Cronobacter spp. is an opportunistic pathogen that may cause infections in individuals of any age, and the highest incidence occurs in neonates, immunocompromised patients and elderly persons. This study investigated Cronobacter spp. occurrence in 90 cheese samples (30 “Minas Frescal” type cheeses, 30 “Prato” type and 30 sliced “Prato” type). The isolated species were identified and the antimicrobial susceptibility profile of the isolated strains was evaluated. The microbiological assay was performed with pre-enrichment in buffered peptone water, and selective-enrichment in modified lauryl sulphate tryptose broth containing vancomycin. Isolation and identification were done in Enterobacter sakazakii Isolation Agar and in Vitek 2.0, respectively. The species identification was performed by multiple PCR targeting cgaA gene. Antibiogram was done using agar diffusion method (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. was isolated from one (1.1 %) sample of “Minas Frescal” type cheese, identified as C. sakazakii which was sensitive to all of tested antimicrobials. Cronobacter spp. does not represent a risk to the individuals health by consuming cheeses made from pasteurized milk. However, the presence of Cronobacter spp. in one sample of analyzed cheese indicates failures in their production, reinforcing the need for following the Good Manufacturing Practices.(AU)

Pesquisa, identificação e perfil de suscetibilidade antimicrobiana de Cronobacter spp. em produtos destinados à alimentação infantil / Detection, identification and antimicrobial susceptibility profile of Cronobacter spp. in products for infant feeding

Cronobacter spp. emergiu como perigo microbiológico em fórmulas infantis desidratadas (FID), responsável por infecções graves em neonatos. Contudo, muitos pacientes não ingeriram FID, o que indica que outros alimentos podem atuar como veículo do patógeno. Os objetivos deste estudo foram pesquisar Cronobacter spp. em alimentos infantis, identificar as espécies e avaliar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos das cepas isoladas. Foram analisadas 47 amostras pré-cozidas de cereais à base de grãos, amidos de milho e farinhas lácteas. A pesquisa foi realizada com pré-enriquecimento em água peptonada tamponada, enriquecimento seletivo no Cronobacter Screening Broth, isolamento por meio de Enterobacter sakazakii Isolation Agar e identificação no Vitek 2.0. A identificação das espécies foi realizada por reação em cadeia pela polimerase com alvo nos genes rpoB e cgcA. O antibiograma foi realizado pelo método de difusão em ágar (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. foi identificada em 11 amostras (23,4 %). Oito cepas foram identificadas como C. sakazakii (72,7 %), duas como C. malonaticus (18,2 %) e uma como C. dublinensis (9,1 %). Apenas uma cepa de C. malonaticus apresentou resistência intermediária a ciprofloxacina. Os produtos destinados à alimentação infantil avaliados podem apresentar risco, no caso destes alimentos serem ingeridos por pacientes pertencentes ao grupo de risco, como neonatos e idosos.(AU)

Cronobacter spp. emerged as a microbiological hazard in powdered infant formulas (PIF) causing severe infections in newborns. However, among these patients many of them had not ingested PIF indicating that other foods categories might be as the pathogen vehicle. This study aimed at investigating Cronobacter spp. in infant foods, identifying the species and evaluating the antimicrobial susceptibility profile of the isolated strains. Forty-seven samples of precooked grain-based cereals, corn starch and milk flours were analyzed. The microbiological analysis was performed with pre-enrichment in buffered peptone water, followed by selective-enrichment in Cronobacter Screening Broth, isolation in Enterobacter sakazakii Isolation Agar and identification in Vitek 2.0. The identification of species was performed by polymerase chain reaction targeting rpoB and cgaA genes. The antibiogram was carried out using the agar diffusion method (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. was identified in 11 samples (23.4 %). Eight strains were identified as C. sakazakii (72.7 %), two as C. malonaticus (18.2 %) and one as C. dublinensis (9.1 %). Only one C. malonaticus strain showed an intermediate resistance to ciprofloxacin. The evaluated samples produced for infant feeding might cause hazard when ingested by patients belonging to the risk group as newborns and elderly.(AU)

Listeria monocytogenes em hortaliças: isolamento e sorotipagem / Listeria monocytogenes in green vegetables: isolation and serotyping

A ingestão de alimentos contaminados com Listeria monocytogenes representa um risco à saúde humana. A pesquisa de L. monocytogenes por meio de técnica de enriquecimento seletivo foi efetuada em 97 amostras de hortaliças, comercializadas no Estado do Rio de Janeiro. Foram analisadas 35 hortaliças in natura, 32 minimamente processadas e 30 pratos de saladas cruas prontas para consumo. Os isolados foram sorotipados por soroaglutinação clássica utilizando-se antissoro policlonal flagelar e somático.Sete amostras (7,2 %) apresentaram L. monocytogenes, sendo duas hortaliças in natura e cinco em forma de salada. Todos os isolados foram identificados como sorovar 1/2a. Em virtude da ocorrência de contaminação de hortaliças in natura com L. monocytogenes, é fundamental que os consumidores estejam esclarecidos quanto à possível presença deste patógeno nesse tipo de alimento, e ficarem cientes quanto à realização de corretos procedimentos de sanitização e de cuidados para evitar a contaminação cruzada com outros alimentos. A presença de L. monocytogenes em saladas prontas para consumo representa um risco à saúde dos consumidores, principalmente para indivíduos pertencentes ao grupo de risco.(AU)

Consumption of food contaminated with Listeria monocytogenes poses as a risk to human health. Ninety-seven samples of green leafy vegetables marketed in the state of Rio de Janeiro were analyzed for detecting L. monocytogenes by selective enrichment. Thirty-five in natura green vegetables, 32 minimally processed samples and 30 ready-to-eat raw salads samples were assessed. The isolates were serotyped by means of classical seroagglutination technique using somatic and flagellar polyclonal antisera. Seven samples (7.2 %) showed to be contaminated with L. monocytogenes, being two in naturasamples and five ready-to-eat salads. All isolates were identified as serovar 1/2a. Considering these findings on the contamination of in natura green vegetables with L. monocytogenes, the consumers should be advised regarding to the possibility of this kind of product to be contaminated with this pathogen, and also to imply vigilance in observing the proper sanitization procedures to avoid the cross-contamination with other foods. Occurrence of L. monocytogenes in ready-to-eat salad samples denotes a health hazard to consumers, especially to those who belong to risk groups.(AU)

Avaliação de crioprotetores na produção de material de referência para enumeração de coliformes em leite em pó a ser utilizado em ensaio de proficiência / Evaluation of cryoprotectants in the production of reference material for coliforms counting in milk powder to be used for proficiency testing

O desafio na produção de materiais de referência (MR) destinados a ensaios microbiológicos é a instabilidade natural dos micro-organismos. A liofilização é indicada para criopreservação de culturas bacterianas quando o número de células deve ser resguardado. Agentes protetores podem ser adicionados antes do congelamento para aumentar a estabilidade do material. Neste trabalho foram avaliados os crioprotetores na produção de MR liofilizados a serem utilizados em ensaio de proficiência para contagem de coliformes. Foram produzidos quatro lotes utilizando-se diferentes crioprotetores: solução de leite desnatado a 10 % (EC1), a mesma solução contendo glicerol (EC2), sacarose (EC3) e trealose (EC4). Umacepa de Escherichia coli foi empregada no preparo dos materiais. A homogeneidade foi avaliada conforme o Protocolo Internacional Harmonizado. A estabilidade foi estudada durante quatro meses à ≤ -70 ºC (longa duração) e às temperaturas de -20 ºC, 4 ºC, 25 ºC e 35 ºC durante cinco dias (curta duração), segundo aISO/GUIDE 35. Apenas EC1 foi considerado não homogêneo. Os lotes permaneceram estáveis à ≤ -70 ºC durante quatro meses. EC2 apresentou resultados insatisfatórios na estabilidade de curta duração. EC3 eEC4 foram homogêneos e estáveis nas temperaturas estudadas. A sacarose e a trealose foram consideradas crioprotetores adequados para o preparo do MR em questão.(AU)

The challenge in producing reference materials (RM) for microbiological assays is the natural instability of microorganisms. Freeze-drying is suitable for bacterial cultures cryopreservation when the number of cells has to be retained. Protective agents can be added before freezing to increase the material stability. This study aimed at evaluating the use of different cryoprotectants during the production of RM, by freeze-drying, to be used in proficiency testing for coliforms enumeration. Four batches were produced adding different cryoprotectants: 10 % skim milk solution (EC1), the same solution containing glycerol (EC2), sucrose (EC3), and trehalose (EC4). A strain of Escherichia coli was used for preparing the materials. Homogeneity was assessed according to the International Harmonized Protocol. Stability was analyzed during four months at ≤ -70 ºC (long-term stability) and during five days at -20 ºC, 4 ºC, 25 ºC and 35 ºC (short-term stability), in accordance with the ISO guide 35. EC1 only was regarded as non-homogeneous. All of the lots remained stable at ≤ -70 ºC during the four-month study. EC2 showed unsatisfactory results in the short-term study. EC3 and EC4 were homogeneous and stable at the studied temperatures. Sucrose and trehalose were regarded as suitable cryoprotectants to prepare these specific MR.(AU)

Comparação das técnicas do número mais provável (NMP) e de filtração em membrana na avaliação da qualidade microbiológica de água mineral natural / Comparison of most probable number (MNP) and membrane filtration techniques for analyzing the natural mineral water microbiological quality

O consumo de água mineral tem sido associado a um estilo de vida saudável e à crença, por parte dos consumidores, de que esse produto é relativamente seguro. A RDC n. 275/05 determina os padrões microbiológicos para água mineral natural e água natural no Brasil. Este trabalho teve como objetivo comparar as técnicas de filtração em membrana e de número mais provável (NMP) pela avaliação da qualidade microbiológica de amostras de água mineral natural envasilhadas em garrafões de 20 litros, comercializadas no Município do Rio de Janeiro, Brasil. Das 31 amostras representativas (no total de 155 unidades amostrais) analisadas, 22 (70,97%) apresentaram-se insatisfatórias em virtude de ocorrência de coliformes termotolerantes em duas (6,45%) amostras, independentemente da técnica utilizada. A contagem de coliformes totais acima do limite especificado foi evidenciada em três amostras (9,68%), de enterococos em uma amostra (3,23%), de P. aeruginosa em 21 (67,74%) e de clostrídios sulfito redutores em duas amostras (6,46%). A técnica do NMP apresentou maior sensibilidade na detecção dos grupos de micro-organismos relacionados na resolução supracitada. Portanto, esta técnica demonstrou ser mais eficiente para executar o controle da qualidade microbiológica de água potável. (AU)

Isolation of Staphylococcus from minas frescal type cheese and detection of enterotoxin genes

This work aimed at isolating Staphylococcus spp. from minas frescal type cheese, and for this purpose a Multiplex PCR (M-PCR) was standardized for detecting the classical Staphylococcus aureus enterotoxingenes (sea, seb, sec, sed and see), using the femA gene as a positive control for S. aureus strains. Bacterial detection directly from the minas frescal type cheese and from artificially contaminated food was tested.One hundred eleven colonies (104 coagulase-positive and seven coagulase-negative) were selected for performing M-PCR assay. Thirty-four colonies (30.62%) were positive for at least one of the fiveente rotoxin genes analyzed; enterotoxins sea and seb were the most frequently detected. The study on Staphylococci coagulase-positive samples revealed that 40% of the samples showed bacterial counts above the limit established by Brazilian legislation. (AU)