Resumo
Q fever is a worldwide zoonosis caused by Coxiella burnetiia small obligate intracellular Gram-negative bacterium found in a variety of animals. It is transmitted to humans by inhalation of contaminated aerosols from urine, feces, milk, amniotic fluid, placenta, abortion products, wool, and rarely by ingestion of raw milk from infected animals. Nested PCR can improve the sensitivity and specificity of testing while offering a suitable amplicon size for sequencing. Serial dilutions were performed tenfold to test the limit of detection, and the result was 10× detection of C. burnetti DNA with internal nested PCR primers relative to trans-PCR. Different biological samples were tested and identified only in nested PCR. This demonstrates the efficiency and effectiveness of the primers. Of the 19 samples, which amplify the partial sequence of C. burnetii, 12 were positive by conventional PCR and nested PCR. Seven samplesfive spleen tissue samples from rodents and two tick sampleswere only positive in nested PCR. With these new internal primers for trans-PCR, we demonstrate that our nested PCR assay for C. burnetii can achieve better results than conventional PCR.(AU)
Assuntos
Animais , Coxiella burnetii/isolamento & purificação , Febre Q/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase , Transposases , Técnicas de Diagnóstico MolecularResumo
Bartonella henselae e mais recentemente B. quintana têm sido apontados como agentes causais de diversas moléstias emhumanos, entre as quais a doença da arranhadura do gato, endocardite, meningoencefalite e neuroretinite, podendo levarao óbito, principalmente os imunocomprometidos. O gato doméstico é considerado o principal animal envolvido na transmissãodestes patógenos. Constituiu-se objetivo deste estudo a avaliação da frequência de Bartonella spp. em gatos domésticosdomiciliados do município de Vassouras (RJ) comparando-se os achados na reação em cadeia pela polimerase (PCR) e nasorologia por imunofluorescência indireta (IFA). Amostras sanguíneas de 37 (100%) gatos de um abrigo da cidade deVassouras (RJ) foram analisadas, sendo 36 (97,3%) positivas na PCR para Bartonella spp. Das amostras PCR positivas,nove (25%) e 27 (75%) apresentaram, respectivamente, reatividade e ausência de reatividade ao IFA. Apenas uma (2,7%)amostra de sangue foi concomitantemente negativa na PCR e IFA para Bartonella spp. Este é o primeiro registro de infecçãopor Bartonella spp. em felinos domésticos no estado do Rio de Janeiro (Brasil) identificada por análise molecular e sorológica,o que nos permite concluir que este agente zoonótico está presente em alta frequência em gatos domésticos do municípiode Vassouras (RJ).(AU)
Bartonella henselae and B. quintana have been pointed as causal agents of many diseases in humans, and can lead to death, mainly immunodefficient people. Domestic cat is considered the unique animal in transmission of these pathogens. The purpose of this study was to evaluate the frequency of Bartonella spp. in domestic cats from Vassouras city (RJ) by polimerase chain reaction (PCR) and indirect immunofluorescence test assay (IFA) and compare the results. Blood samples from 37 (100%) domestic cats from a shelter of Vassouras city (RJ) were analyzed and 36 (97.3%) were considered positive by polymerase chain reaction (PCR). The indirect immunofluorescence test assay (IFA) revealed 9 (25.0%) and 27 (75.0%) of that PCR positive samples showed, respectively, reaction and absence of reaction to IFA. Only one sample (2.7%) was negative in PCR and IFA. This is the first communication of Bartonella spp. infection in domestic cats in Rio de Janeiro State (Brazil) identified by molecular and serological assays, thus it can be concluded that this zoonotic agent is present in high frequencies in domestic cats from Vassouras city (RJ).(AU)
Assuntos
Animais , Gatos , Infecções por Bartonella/diagnóstico , Infecções por Bartonella/veterinária , Gatos/anormalidades , Gatos/microbiologiaResumo
Bartonella henselae e mais recentemente B. quintana têm sido apontados como agentes causais de diversas moléstias emhumanos, entre as quais a doença da arranhadura do gato, endocardite, meningoencefalite e neuroretinite, podendo levarao óbito, principalmente os imunocomprometidos. O gato doméstico é considerado o principal animal envolvido na transmissãodestes patógenos. Constituiu-se objetivo deste estudo a avaliação da frequência de Bartonella spp. em gatos domésticosdomiciliados do município de Vassouras (RJ) comparando-se os achados na reação em cadeia pela polimerase (PCR) e nasorologia por imunofluorescência indireta (IFA). Amostras sanguíneas de 37 (100%) gatos de um abrigo da cidade deVassouras (RJ) foram analisadas, sendo 36 (97,3%) positivas na PCR para Bartonella spp. Das amostras PCR positivas,nove (25%) e 27 (75%) apresentaram, respectivamente, reatividade e ausência de reatividade ao IFA. Apenas uma (2,7%)amostra de sangue foi concomitantemente negativa na PCR e IFA para Bartonella spp. Este é o primeiro registro de infecçãopor Bartonella spp. em felinos domésticos no estado do Rio de Janeiro (Brasil) identificada por análise molecular e sorológica,o que nos permite concluir que este agente zoonótico está presente em alta frequência em gatos domésticos do municípiode Vassouras (RJ).
Bartonella henselae and B. quintana have been pointed as causal agents of many diseases in humans, and can lead to death, mainly immunodefficient people. Domestic cat is considered the unique animal in transmission of these pathogens. The purpose of this study was to evaluate the frequency of Bartonella spp. in domestic cats from Vassouras city (RJ) by polimerase chain reaction (PCR) and indirect immunofluorescence test assay (IFA) and compare the results. Blood samples from 37 (100%) domestic cats from a shelter of Vassouras city (RJ) were analyzed and 36 (97.3%) were considered positive by polymerase chain reaction (PCR). The indirect immunofluorescence test assay (IFA) revealed 9 (25.0%) and 27 (75.0%) of that PCR positive samples showed, respectively, reaction and absence of reaction to IFA. Only one sample (2.7%) was negative in PCR and IFA. This is the first communication of Bartonella spp. infection in domestic cats in Rio de Janeiro State (Brazil) identified by molecular and serological assays, thus it can be concluded that this zoonotic agent is present in high frequencies in domestic cats from Vassouras city (RJ).
Assuntos
Animais , Gatos , Gatos/anormalidades , Gatos/microbiologia , Infecções por Bartonella/diagnóstico , Infecções por Bartonella/veterináriaResumo
The Brazilian Spotted Fever (BSF) is a zoonotic disease caused by Rickettsia rickettsii and transmitted by ticks of the genus Amblyomma, more frequently, Amblyomma cajennense. The aim of this paper was to report the first molecular detection of R. rickettsii on R. sanguineus naturally infected in Rio de Janeiro, Brazil. Ticks were collected from dogs in a rural region of Resende municipality, Rio de Janeiro State, Brazil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), where occurred five human cases of BSF in 2006. The ticks were identified under a stereoscopic microscope and separated in pools by stages, species and sex. DNA extraction was carried out using QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN®). The DNA was submitted to PCR amplification using 04 set of primers: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa protein-encoding gene, 246bp) and RpCS.877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). PCR products were separated by electrophoresis on 1 percent agarose gels and visualized under ultraviolet light with ethidium bromide. PCR products of the expected sizes were purified by QIAquick® and sequenced by ABI PRISM®. The generated nucleotide sequences were edited with using Bioedit® software and compared with the corresponding homologous sequences available through GenBank, using Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). It was confirmed R. rickettsii by sequencing of the material (GenBank FJ356230). The molecular characterization of R. rickettsii in the tick R. sanguineus emphasizes the role of dogs as carriers of ticks from the environment to home. Moreover, this result suggests that there is a considerable chance for active participation of R. sanguineus as one of tick species in the transmission of R. ricketsii to human being in the Brazilian territory.(AU)
A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma zoonose causada por Rickettsia rickettsii e transmitida por carrapatos do gênero Amblyomma, mais freqüentemente pela espécie Amblyomma cajennense. Este trabalho tem como objetivo relatar a primeira detecção molecular de R. rickettsii em Rhipicephalus sanguineus naturalmente infectado no Rio de Janeiro, Brasil. Carrapatos foram coletados de cães, procedentes de uma região rural do município de Resende, estado do Rio de Janeiro, Brasil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), onde ocorreram cinco casos humanos de FMB em 2006. Todos os carrapatos foram identificados segundo chave dicotômica, utilizando-se lupa estereoscópica e separados de acordo com estágio, espécie e sexo. Para a extração de DNA utilizou-se o kit comercial QIAamp DNA (QIAGEN ®). O DNA foi submetido à técnica de PCR utilizando 04 conjuntos de iniciadores para a amplificação dos genes: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa gene que codifica a proteína, 246bp) e RPCs .877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). Os produtos da PCR foram separados por eletroforese em gel agarose 1 por cento corados com brometo de etídio e visualizados sob luz ultravioleta e, aqueles que apresentaram bandas amplificadas foram purificados utilizando-se o kit comercial QIAquick ® e seqüenciados pelo ABI PRISM®. As seqüências nucleotídicas foram geradas usando Bioedit®, editado em software e comparados os correspondentes homólogos com as sequências disponíveis através GenBank, utilizando Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Confirmou-se R. rickettsii (GenBank FJ356230) no seqüenciamento de apenas um espécime, adulto de carrapato R. sanguineus. A caracterização molecular de R. rickettsii em exemplar de carrapato R. sanguineus confirma que esta espécie pode ter importante papel na transmissão de R. rickettsii para humanos no território brasileiro.(AU)