Validation of a one-tube nested real-time PCR assay for the detection of Cryptosporidium spp. in avian fecal samples / Validação da nested PCR em tempo real em um tubo para detecção de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de aves

Abstract The aim of this study was to validate a one-tube nested real-time PCR assay followed by genetic sequencing to detect and identify Cryptosporidium species and genotypes in birds. A total of 443 genomic DNA extracted from avian fecal samples were analyzed by one-tube nested real-time PCR and conventional nested PCR. By one-tube nested real-time PCR, 90/443 (20.3%) samples were positive for Cryptosporidium spp. In contrast, 36/443 (8.1%) samples were positive for Cryptosporidium spp. by conventional nested PCR. The analytical sensitivity test showed that one-tube nested real-time PCR detects approximately 0.5 oocyst (2 sporozoites) per reaction. An evaluation of analytical specificity did not reveal amplification of microorganisms that commonly present nonspecific amplification with primers used for the diagnosis of Cryptosporidium spp. The repeatability analysis showed the same result in 27 out of 30 samples (90%). As for the reproducibility of one-tube nested real-time PCR, 24 of the 30 samples examined (80%) showed the same result. All the 90 samples amplified by one-tube real-time nested PCR were successfully sequenced, leading to the identification of C. baileyi, C. galli, C. meleagridis, C. proventriculi, and Cryptosporidium avian genotype I. Genetic sequencing of conventional nested PCR amplicons was successful in 10/36 (27.8%) of positive samples.

Resumo O objetivo deste trabalho foi validar um protocolo de nested PCR em tempo real em um tubo (nPCR-TR-1T) seguida de sequenciamento genético para detectar e caracterizar as espécies e genótipos de Cryptosporidium em aves. Um total de 443 amostras de DNA genômico, extraído de amostras fecais de aves, foi analisado pela nPCR-TR-1T e pela nested PCR convencional. Pela nPCR-TR-1T, foi observada positividade para Cryptosporidium spp. de 20,3% (90/443), em contraste com a nested PCR convencional, que apresentou positividade de 8,1% (36/443). O teste de sensibilidade analítica mostrou que a nPCR-TR-1T detecta aproximadamente 0,5 oocisto (2 esporozoítos) por reação. A avaliação da especificidade analítica não revelou amplificação de microrganismos que comumente apresentam amplificação inespecífica com primers utilizados para o diagnóstico de Cryptosporidium spp. O cálculo da repetibilidade evidenciou o mesmo resultado em 27 de 30 amostras (90%). Em relação à reprodutibilidade da nPCR-TR-1T, foi observado o mesmo resultado em 80% (24/30) das amostras examinadas. Foi possível realizar o sequenciamento em todas as 90 amostras amplificadas pela nPCR-TR-1T, com identificação de C. baileyi, C. galli, C. meleagridis, C. proventriculi e Cryptosporidium genótipo I em aves. O sequenciamento dos fragmentos amplificados pela nested PCR convencional foi possível em 10/36 (27,8%) das amostras positivas.

Larva migrans in Votuporanga, São Paulo, Brazil: Where does the danger hide? / Larva migrans em Votuporanga, SP, Brazil: Onde se esconde o perigo?

Soil samples collected near municipal schools (public/EMEI and private/EPEI schools), clubs (CLB), public squares (PS) and residential condominiums (CND) and samples of animal faeces from the Zoonosis Control Centre (CCZ) of the municipality of Votuporanga/SP were analysed using the Baermann method for the detection of zoonotic helminth larvae. The prevalence rates of the nematode genera identified were determined, and the results were compared using Fishers exact and chi-square frequency tests. Information about cases of larvae migrans in the population were collected from the Family Health Units and the private health plans. All sites were positive for Ancylostoma spp. and, with the exception of EPEIs and dog faeces, for Strongyloides spp. The prevalence of Ancylostoma spp. was 87.5% for CND samples, 74.29% for EMIEs, 63.64% for CLB, 61.76% for PS and 64.29% for dogs and 42.86% for cats at CCZ. The prevalence of Strongyloides spp. ranged from 14.29% (cats/CCZ) to 41.18% (PS). Cases of cutaneous larva migrans were reported during interviews. Thus, from the public health perspective, the risk of individuals that frequent recreational areas in the municipality, especially children, to be infected by helminth larvae is noteworthy, indicating the need to develop policies aimed at controlling this important zoonosis.(AU)

Amostras de solo colhidas em escolas municipais (ensino público/EMEI e privado/EPEI), clubes (CLB), praças públicas (PP), condomínios residenciais (CND) e de fezes de animais do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) do município de Votuporanga/SP, foram submetidas ao método Baermann para detecção de larvas de helmintos zoonóticos. Foram determinadas as taxas de prevalência dos nematódeos identificados, e os resultados confrontados pelos testes Exato de Fisher e Qui-quadrado. Atendimentos de casos de larvas migrans na população foram levantados em entrevistas realizadas em Unidades de Saúde da Família e em planos de saúde privados. Todos os locais apresentaram positividade para Ancylostoma spp. e, com exceção de EPEIs e de fezes caninas, para Strongyloides spp. Prevalência de Ancylostoma spp. foi verificada em amostras de CNDs (87,50%), EMEIs (74,29%), CLBs (63,64%), PPs (61,76%) e em fezes de cães e gatos do CCZ (64,29% e 42,86%, respectivamente). As prevalências de Strongyloides spp. variaram de 14,29% (gatos/CCZ) a 41,18% (PP). Atendimentos de casos de larva migrans cutânea foram relatados nas entrevistas. Portanto, ressalta-se o risco de frequentadores de áreas de lazer do município, especialmente crianças, de adquirirem infecção por larvas de helmintos, indicando a necessidade da elaboração de propostas de políticas voltadas ao controle dessa importante zoonose.(AU)

Mello and Campos (1974) method adapted for the recovery of cestodes in birds (Gallus domesticus) / Método Mello e Campos (1974) adaptado para recuperação de cestódeos de aves (Gallus domesticus)

The specific diagnosis and evaluation of the intensity of avian helminth infections are essential for efficacy studies and the determination of drug doses targeted to their control. This study evaluated the Mello and Campos method, originally described for parasitological diagnosis in dogs, in the recovery of scolices from cestode parasites of poultry (Gallus domesticus). A total of 52 naturally infected birds obtained from farms underwent parasitological necropsy using the Mello and Campos method. The method consisted of four steps: content, soaking, scraping and evaluation. The number of scolices recovered per bird ranged from 1 to 4,345, and the highest number of scolices was recovered from material derived from the soaking step. The cestodes species diagnosed were Amoebotaenia cuneata, Choanotaenia infundibulum, Hymenolepis sp., Raillietina tetragona, Raillietina echinobothrida and Raillietina cesticillus. The  Mello and Campos method, originally used to test for helminths in dogs, was effective in avian cestode testing because it includes a soaking step, which enables a more efficient recovery of scolices.

O diagnóstico específico e a avaliação da intensidade da infecção helmíntica em aves são fundamentais em estudos de eficácia e determinação de doses de medicamentos direcionados ao seu controle. O presente trabalho avaliou a aplicação e adaptação da metodologia de Mello e Campos, descrita originalmente para diagnóstico parasitológico em cães, na recuperação de escólices de cestódeos parasitos de aves domésticas (Gallus domesticus). Foram empregadas 52 aves naturalmente infectadas e oriundas de produções rurais, as quais foram submetidas à necropsia parasitológica, adaptando-se a metodologia Mello e Campos. O método consistiu na realização de quatro etapas: conteúdo, imersão, raspado e avaliação. O número de escólices recuperadas por ave variou de 1 a 4.345, e o maior número de escólices foi recuperado do material oriundo da etapa de imersão. As espécies de cestódeos identificadas foram Amoebotaenia cuneata, Choanotaenia infundibulum, Hymenolepis sp., Raillietina tetragona, Raillietina echinobothrida e Raillietina cesticillus. Os resultados foram avaliados estatisticamente, concluindo-se que a metodologia adotada é eficaz para a recuperação de cestódeos de aves, uma vez que possui a etapa de imersão, que permite a recuperação mais eficiente de escólices.

Mello and Campos (1974) method adapted for the recovery of cestodes in birds ( Gallus domesticus ) / Método Mello e Campos (1974) adaptado para recuperação de cestódeos de aves (Gallus domesticus)

The specific diagnosis and evaluation of the intensity of avian helminth infections are essential for efficacy studies and the determination of drug doses targeted to their control. This study evaluated the Mello and Campos method, originally described for parasitological diagnosis in dogs, in the recovery of scolices from cestode parasites of poultry (Gallus domesticus ). A total of 52 naturally infected birds obtained from farms underwent parasitological necropsy using the Mello and Campos method. The method consisted of four steps: content, soaking, scraping and evaluation. The number of scolices recovered per bird ranged from 1 to 4,345, and the highest number of scolices was recovered from material derived from the soaking step. The cestodes species diagnosed were Amoebotaenia cuneata , Choanotaenia infundibulum , Hymenolepis sp., Raillietina tetragona , Raillietina echinobothrida and Raillietina cesticillus . The Mello and Campos method, originally used to test for helminths in dogs, was effective in avian cestode testing because it includes a soaking step, which enables a more efficient recovery of scolices.(AU)

O diagnóstico específico e a avaliação da intensidade da infecção helmíntica em aves são fundamentais em estudos de eficácia e determinação de doses de medicamentos direcionados ao seu controle. O presente trabalho avaliou a aplicação e adaptação da metodologia de Mello e Campos, descrita originalmente para diagnóstico parasitológico em cães, na recuperação de escólices de cestódeos parasitos de aves domésticas (Gallus domesticus ). Foram empregadas 52 aves naturalmente infectadas e oriundas de produções rurais, as quais foram submetidas à necropsia parasitológica, adaptando-se a metodologia Mello e Campos. O método consistiu na realização de quatro etapas: conteúdo, imersão, raspado e avaliação. O número de escólices recuperadas por ave variou de 1 a 4.345, e o maior número de escólices foi recuperado do material oriundo da etapa de imersão. As espécies de cestódeos identificadas foram Amoebotaenia cuneata , Choanotaenia infundibulum , Hymenolepis sp., Raillietina tetragona , Raillietina echinobothrida e Raillietina cesticillus . Os resultados foram avaliados estatisticamente, concluindo-se que a metodologia adotada é eficaz para a recuperação de cestódeos de aves, uma vez que possui a etapa de imersão, que permite a recuperação mais eficiente de escólices.(AU)

Mello and Campos (1974) method adapted for the recovery of cestodes in birds (Gallus domesticus) / Método Mello e Campos (1974) adaptado para recuperação de cestódeos de aves (Gallus domesticus)

The specific diagnosis and evaluation of the intensity of avian helminth infections are essential for efficacy studies and the determination of drug doses targeted to their control. This study evaluated the Mello and Campos method, originally described for parasitological diagnosis in dogs, in the recovery of scolices from cestode parasites of poultry (Gallus domesticus). A total of 52 naturally infected birds obtained from farms underwent parasitological necropsy using the Mello and Campos method. The method consisted of four steps: content, soaking, scraping and evaluation. The number of scolices recovered per bird ranged from 1 to 4,345, and the highest number of scolices was recovered from material derived from the soaking step. The cestodes species diagnosed were Amoebotaenia cuneata, Choanotaenia infundibulum, Hymenolepis sp., Raillietina tetragona, Raillietina echinobothrida and Raillietina cesticillus. The  Mello and Campos method, originally used to test for helminths in dogs, was effective in avian cestode testing because it includes a soaking step, which enables a more efficient recovery of scolices.(AU)

O diagnóstico específico e a avaliação da intensidade da infecção helmíntica em aves são fundamentais em estudos de eficácia e determinação de doses de medicamentos direcionados ao seu controle. O presente trabalho avaliou a aplicação e adaptação da metodologia de Mello e Campos, descrita originalmente para diagnóstico parasitológico em cães, na recuperação de escólices de cestódeos parasitos de aves domésticas (Gallus domesticus). Foram empregadas 52 aves naturalmente infectadas e oriundas de produções rurais, as quais foram submetidas à necropsia parasitológica, adaptando-se a metodologia Mello e Campos. O método consistiu na realização de quatro etapas: conteúdo, imersão, raspado e avaliação. O número de escólices recuperadas por ave variou de 1 a 4.345, e o maior número de escólices foi recuperado do material oriundo da etapa de imersão. As espécies de cestódeos identificadas foram Amoebotaenia cuneata, Choanotaenia infundibulum, Hymenolepis sp., Raillietina tetragona, Raillietina echinobothrida e Raillietina cesticillus. Os resultados foram avaliados estatisticamente, concluindo-se que a metodologia adotada é eficaz para a recuperação de cestódeos de aves, uma vez que possui a etapa de imersão, que permite a recuperação mais eficiente de escólices.(AU)

Integra SP - Integração lavoura-pecuária-floresta no Noroeste Paulista / Integra SP - Integrated crop-livestock-forest in Northwest of São Paulo State

No Noroeste do Estado de São Paulo, desde 2009, diversos estudos envolvendo integração lavoura-pecuária-floresta (ILPF) têm apresentado resultados satisfatórios, sendo boa opção para produção agropecuária sustentável, nas condições edafoclimáticas da região. O presente estudo apresenta resultados preliminares de pesquisas e observações de campo realizadas em cinco unidades demonstrativas e de pesquisa com o sistema ILPF, sendo três unidades com o sistemas agrossilvipastoril, duas localizadas no município de Votuporanga (SP), uma no Polo Regional de Desenvolvimento Tecnológico dos Agronegócios do Noroeste Paulista, da Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios (APTA), da Secretaria de Agricultura e Abastecimento (SAA) e outra no sítio São Luiz, e outra unidade na Fazenda Porto Brasil, no município de Riolândia (SP). Há também duas unidades demonstrativas com o sistema silvipastoril, uma com gado de leite no Sítio Matsumori, localizado no município de Aspásia (SP), e outra com gado de corte, na Fazenda Alto Alegre, localizada no município de Olímpia (SP).

In the northwest of São Paulo State, since 2009, several studies involving integrated crop-livestock-forest (ILPF), have shown satisfactory results, showing up as good options for a sustainable agricultural production on region. There are three demonstrative and research units with the system ILPF, two located in Votuporanga (SP), one at APTA and another at Sítio São Luiz, and another unit at Fazenda Porto Brazil in Riolândia (SP), and two demonstrative units with silvipastoral system, one with dairy cattle at Sítio Matsumori, located in Aspásia (SP), and another with beef cattle at Fazenda Alto Alegre, located in Olímpia (SP).

Integra SP - Integração lavoura-pecuária-floresta no Noroeste Paulista / Integra SP - Integrated crop-livestock-forest in Northwest of São Paulo State

No Noroeste do Estado de São Paulo, desde 2009, diversos estudos envolvendo integração lavoura-pecuária-floresta (ILPF) têm apresentado resultados satisfatórios, sendo boa opção para produção agropecuária sustentável, nas condições edafoclimáticas da região. O presente estudo apresenta resultados preliminares de pesquisas e observações de campo realizadas em cinco unidades demonstrativas e de pesquisa com o sistema ILPF, sendo três unidades com o sistemas agrossilvipastoril, duas localizadas no município de Votuporanga (SP), uma no Polo Regional de Desenvolvimento Tecnológico dos Agronegócios do Noroeste Paulista, da Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios (APTA), da Secretaria de Agricultura e Abastecimento (SAA) e outra no sítio São Luiz, e outra unidade na Fazenda Porto Brasil, no município de Riolândia (SP). Há também duas unidades demonstrativas com o sistema silvipastoril, uma com gado de leite no Sítio Matsumori, localizado no município de Aspásia (SP), e outra com gado de corte, na Fazenda Alto Alegre, localizada no município de Olímpia (SP).(AU)

In the northwest of São Paulo State, since 2009, several studies involving integrated crop-livestock-forest (ILPF), have shown satisfactory results, showing up as good options for a sustainable agricultural production on region. There are three demonstrative and research units with the system ILPF, two located in Votuporanga (SP), one at APTA and another at Sítio São Luiz, and another unit at Fazenda Porto Brazil in Riolândia (SP), and two demonstrative units with silvipastoral system, one with dairy cattle at Sítio Matsumori, located in Aspásia (SP), and another with beef cattle at Fazenda Alto Alegre, located in Olímpia (SP).(AU)

A survey on Cyathostominae nematodes (Strongylidea, Strongylidae) in pasture bred horses from São Paulo State, Brazil / Nematóides Ciatostomíneos (Strongylidea, Strongylidae) em eqüinos criados a pasto no Estado de São Paulo, Brasil

Foram selecionados, por meio de exames coprológicos, 14 eqüinos naturalmente infectados por nematóides, oriundos de haras do município de Jaboticabal, São Paulo, Brasil. Os animais foram distribuídos em dois grupos experimentais de sete animais cada, conforme a faixa etária: entre 12 e 24 meses (jovens) e com mais de 60 meses de idade (adultos). Após uma semana, os 14 equinos foram necropsiados e todo conteúdo e raspado de cada segmento do trato gastrintestinal (estômago, intestinos delgado e grosso) foram recolhidos. Os nematóides presentes em todos segmentos anatômicos foram identificados, sexados e contados. Foi dada ênfase aos Cyathostominae encontrados no intestino grosso. De um total de 537.128 nematóides recuperados dos 14 animais necropsiados, 80,5% pertenciam à sub-família Cyathostominae (pequenos estrôngilus). Destes, 72,64% foram encontrados nos equinos jovens e os 27,36% restantes nos animais adultos. Os animais jovens apresentaram 22 espécies de Cyathostominae, enquanto os adultos apresentaram apenas 14 espécies. Este estudo aponta a maior prevalência de ciatostomíneos, entre os nematóides parasitos, principalmente em equinos de 12 a 24 meses de idade, oriundos da região estudada.

Foram selecionados, por meio de exames coprológicos, 14 eqüinos naturalmente infectados por nematóides, oriundos de haras do município de Jaboticabal, São Paulo, Brasil. Os animais foram distribuídos em dois grupos experimentais de sete animais cada, conforme a faixa etária: entre 12 e 24 meses (jovens) e com mais de 60 meses de idade (adultos). Após uma semana, os 14 equinos foram necropsiados e todo conteúdo e raspado de cada segmento do trato gastrintestinal (estômago, intestinos delgado e grosso) foram recolhidos. Os nematóides presentes em todos segmentos anatômicos foram identificados, sexados e contados. Foi dada ênfase aos Cyathostominae encontrados no intestino grosso. De um total de 537.128 nematóides recuperados dos 14 animais necropsiados, 80,5% pertenciam à sub-família Cyathostominae (pequenos estrôngilus). Destes, 72,64% foram encontrados nos equinos jovens e os 27,36% restantes nos animais adultos. Os animais jovens apresentaram 22 espécies de Cyathostominae, enquanto os adultos apresentaram apenas 14 espécies. Este estudo aponta a maior prevalência de ciatostomíneos, entre os nematóides parasitos, principalmente em equinos de 12 a 24 meses de idade, oriundos da região estudada.

Doença de newcastle : ensaio experimental de diferentes programas de vacinação com as estirpes lintogenicas ulster 2c, b1 e lasota em frangos

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Aspectos imunológicos, clínicos e zootécnicos da vacinação contra a Doença de Newcastle em perdizes (Rhynchotus rufescens) : pesquisa do estado de portador do vírus e sua importância epidemiológica

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