Polymerase Chain Reaction and blood culture for diagnosis of canine sepsis / Reação em Cadeia da Polimerase e hemocultura para diagnóstico de sepse canina

Sepsis is characterized by the presence of organ dysfunction secondary to the dysregulated systemic inflammatory response associated with an infection, and has high mortality rates. Traditional diagnostic techniques based on non-microbiological isolation are time-consuming and may delay treatment. Thus, this study aimed to compare bacterial and fungal broad-range polymerase chain reaction (PCR) and blood culture for diagnosis of sepsis in dogs. Blood samples from 88 dogs with suspected sepsis were analyzed by blood culture, and PCR to detect bacterial and fungal DNA. On blood culture, 20 (22.7%) samples tested positive for bacterial isolates; however, none tested positive for fungi. Through PCR analysis, bacterial DNA was detected in 46 (52.3%) animals, whereas fungal DNA was present in one (1.1%) sample. Our results showed that PCR-based testing has important diagnostic value for canine blood infections because it has a shorter turnaround time and higher sensitivity than traditional blood culture.(AU)

Sepse se caracteriza pela presença de disfunção orgânica secundária à resposta inflamatória sistêmica desregulada, associada a uma infecção com elevadas taxas de mortalidade. As técnicas tradicionais baseadas no isolamento microbiológico são demoradas e podem atrasar o tratamento. O objetivo deste estudo foi comparar a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) bacteriana e fúngica e hemocultura em cães com sepse. Foram analisadas 88 amostras de sangue de cães com suspeita de sepse por meio de hemocultura e PCR para detectar DNA bacteriano e fúngico. Nas culturas sanguíneas, 20 (22,7%) amostras foram positivas para isolados bacterianos. No entanto, nenhuma amostra foi positiva para fungos. Através da análise por PCR, o DNA bacteriano foi detectado em 46 animais (52,3%), enquanto que o DNA fúngico estava presente em uma amostra (1,1%). Neste caso, a PCR apresenta importante valor diagnóstico em cães com infeções sanguíneas devido a sua rapidez e maior sensibilidade do que a isolamento por hemocultura.(AU)

Canine visceral leishmaniasis: dermatological aspects and associated dermatoses / Leishmaniose visceral canina: aspectos dermatológicos e dermatoses associadas

Background: Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic disease caused by Leishmania chagasi (syn. L. infantum). The dog is the main reservoir for this infectious agent in the urban environment. Among the various systemic signs of viscerotropic infection by L. chagasi, cutaneous lesions, including exfoliative dermatitis, cutaneous ulcers and nodules, alopecia, papular or pustular dermatitis, and onychogryphosis, are the most common in dogs. This study aimed to describe the major cutaneous lesions, evaluate the skin parasite L. chagasi by PCR, and investigate the main dermatoses associated with this zoonosis. Materials, Methods & Results: This study evaluated 50 seropositive dogs of various breeds and sizes for VL by ELISA and IFA and for the dermatological signs associated with VL. Moreover, molecular analysis of skin fragments was performed with primers 150 and 152 for the genus Leishmania, and the species was verified as L. chagasi with RV1 and RV2 primers. Deep skin scraping for mites and fungal culture analysis were performed in all dogs. Of the 50 dogs, 15 (30%) were free of systemic or cutaneous signs; however, changes in skin and annexes were observed in 35 (70%) dogs. Thirty-one dogs (62%) presented infection with dermatophytes, 26 (83.9%) with Microsporum sp., and 5 (16.1%) with Trichophyton sp.; only one dog showed parasitism by Sarcoptes scabiei. A statistically [...](AU)

Canine visceral leishmaniasis: dermatological aspects and associated dermatoses / Leishmaniose visceral canina: aspectos dermatológicos e dermatoses associadas

Background: Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic disease caused by Leishmania chagasi (syn. L. infantum). The dog is the main reservoir for this infectious agent in the urban environment. Among the various systemic signs of viscerotropic infection by L. chagasi, cutaneous lesions, including exfoliative dermatitis, cutaneous ulcers and nodules, alopecia, papular or pustular dermatitis, and onychogryphosis, are the most common in dogs. This study aimed to describe the major cutaneous lesions, evaluate the skin parasite L. chagasi by PCR, and investigate the main dermatoses associated with this zoonosis. Materials, Methods & Results: This study evaluated 50 seropositive dogs of various breeds and sizes for VL by ELISA and IFA and for the dermatological signs associated with VL. Moreover, molecular analysis of skin fragments was performed with primers 150 and 152 for the genus Leishmania, and the species was verified as L. chagasi with RV1 and RV2 primers. Deep skin scraping for mites and fungal culture analysis were performed in all dogs. Of the 50 dogs, 15 (30%) were free of systemic or cutaneous signs; however, changes in skin and annexes were observed in 35 (70%) dogs. Thirty-one dogs (62%) presented infection with dermatophytes, 26 (83.9%) with Microsporum sp., and 5 (16.1%) with Trichophyton sp.; only one dog showed parasitism by Sarcoptes scabiei. A statistically [...]

Expressão diferencial de proteínas do fungo Conidiobolus lamprauges cultivado em diferentes temperaturas / Differential expression of protein of the fungus Conidiobolus lamprauges cultivated at different temperatures

Para sobreviverem na temperatura corpórea de seu hospedeiro, os fungos patogênicos têm desenvolvido mecanismos moleculares importantes, como a expressão de proteínas relacionadas ao crescimento em altas temperaturas. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar o crescimento in vitro de Conidiobolus lamprauges em diferentes temperaturas e comparar o perfil de proteínas expressas através de eletroforese bidimensional (2D), em duas temperaturas distintas, sendo uma considerada baixa (28°C) e alta (37°C). Para análise do crescimento em diferentes temperaturas, cinco isolados de C. lamprauges, oriundos de ovinos doentes, foram incubados a 20, 25, 30, 35 e 40°C e o crescimento radial foi medido a cada 24 horas. Para análise da expressão diferencial, realizou-se a extração de proteínas do fungo cultivado a 28°C e a 37°C por 48 horas. A média de crescimento radial dos isolados foi diferente nas temperaturas analisadas, sendo 35°C a melhor temperatura para crescimento em todas as amostras. A temperatura ótima ajustada variou entre 33,3°C a 34,8°C. Os limites inferior e superior de inibição de crescimento foram 18°C e 42°C, respectivamente. Na análise da expressão diferencial, foram encontrados 16 spots diferencialmente expressos, sete (7/16) estavam com expressão diminuída e nove (9/16) com expressão aumentada a 37°C, quando comparado a 28°C. Além disso, oito spots estavam presentes apenas a 28°C e seis a 37°C. Sugere-se que C. lamprauges produza um perfil de proteínas relacionadas à termorregulação desencadeado pela alta temperatura do hospedeiro.(AU)

To survive at the body temperature of their hosts, pathogenic fungi have developed important molecular mechanisms, such as protein expression associated with growth at high temperatures. Thus, the aim of this study was to analyze the in vitro growth of Conidiobolus lamprauges at different temperatures and compare proteins expressed by two-dimensional electrophoresis (2D), for the pathogen cultivated at low (28°C) and high (37°C) temperatures. For the analysis of growth temperatures, five isolates of C. lamprauges from sick sheep were incubated at 20, 25, 30, 35 and 40°C and radial growth was measured every 24 hours. For the analysis of differential expression, protein extraction and two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis were performed with C. lamprauges cultivated at 28°C and 37°C for 48 hours. The average radial growth was different at the temperatures tested, and 35°C was found to be the best growth temperature for all isolates. The optimum adjusted temperature ranged between 33.3°C and 34.8°C. The upper and lower limits of growth inhibition were 18°C and 42°C, respectively. Upon expression analysis, a total of 16 spots were differentially expressed, seven (7/16) proteins were downregulated and nine (9/16) were over-expressed at 37ºC compared to 28°C. In addition, eight spots were present only at 28ºC and six were present only at 37ºC. It is suggested that C. lamprauges produces a profile of proteins that is related to thermoregulation triggered by the high temperature of the host.(AU)

Desenvolvimento de reação em cadeia da Polimerase e Ecoepidemiologia de Conidiobolus lamprauges em ovinos de Alto Paraguai, Mato Grosso

A conidiobolomicose é uma doença granulomatosa associada ao fungo Conidiobolus spp observada em humanos e animais. As técnicas tradicionais para o diagnóstico da doença são o isolamento do agente associado a aspectos epidemiológicos e a presença de sinais clínicos típicos e as condições patológicas. Esse trabalho descreve o desenvolvimento de PCR específico para Conidiobolus lamprauges a fim de detectar a presença do fungo em amostras clínicas. Foi realizada cultura fúngica a partir de amostras de tecidos frescos de ovinos suspeitos da doença (15), e testes histopatológicos e PCR. Amostras de tecidos parafinados (18) também foram submetidas aos testes histopatológicos e à tecnica de PCR. Foram realizadas reações de PCR a partir do DNA dos tecidos frescos e parafinados com primers universais para fungos, amplificando fragmento da região 18S rDNA e primers específicos foram desenhados com base no mesmo gene para C. lamprauges, que gerou produtos de aproximadamente 540 pb e 222 pb respectivamente. A cultura foi positiva em 26,6% das amostras clínicas. A técnica de PCR para C. lamprauges mostrou amplificação de DNA nos tecidos frescos (80%), e parafinados (44,4%). Amostras de pasto e água foram coletadas mensalmente em uma propriedade onde ocorreu surto da doença, a fim de realizar o estudo para detecção de prováveis fontes de infecção para os ovinos. Foram coletadas 12 de amostras de vegetal e água, extraido o DNA e submetidas ao qPCR. Nas analises das amostras ambientais, dos doze meses de coleta, seis mostraram-se positivos para C. lamprauges em vegetal, e três nas amostras de água. A curva-padrão foi gerada resultando em limite de detecção de 1 fg de DNA de C. lamprauges (3,4 x 102 moléculas), ? = 0.98, R2= 0.98 e slope= -3.3. Os resultados evidenciaram que não houve relação da presença do fungo em material vegetal com o período chuvoso observado no estudo. Em conclusão, a técnica de PCR descrita aqui demonstra elevada sensibilidade e especificidade para a detecção de C. lamprauges em amostras clínicas de tecido fresco e parafinado, tornando-se uma ferramenta para um diagnóstico rápido, e que a sazonalidade da doença pode não estar estreitamente relacionada com a presença do agente no ambiente, pois C. lamprauges foi observado em diferentes épocas do ano, no entanto foram quantificados em diferentes níveis durante o periodo do estudo