Methodology of the tetrazolium test for identifying viable seeds of orchids of the genus Cattleya native to the Brazilian Cerrado / Metodologia do teste de tetrazólio para identificação de sementes viáveis de orquídeas do gênero Cattleya nativas do Cerrado brasileiro

Orchids need measures for conservation of their species, among them the creation of seed banks. This study analyzes suitable methodologies to identify the viability of Cattleya seeds through the tetrazolium test. Seeds of Cattleya nobilior Rchb. and Cattleya walkeriana Gardn. were submitted to three preconditioning: no soaking (control); sucrose (10%); or distilled water. After 24 hours, they were submitted to tetrazolium solution with three types of conditioning: oven (40 °C); water bath (40 °C); or room temperature. Subsequently, the percentage of viable seeds (VS) was calculated and in vitro sowing was carried out. Germination percentage (G) was determined after 45 days. A completely randomized design was used for each species studied, with treatments arranged in a 3x3 factorial scheme (three preconditioning and three conditioning), with eight replicates of one tube each. The experiment was performed in duplicate. The highest viability values found in the tetrazolium test were close to those of germination (C. nobilior: VS = 88% e G = 97%; C. walkeriana: VS = 88% e G = 95%) for Cattleya species native to the Cerrado. The conditioning at ambient temperature had a greater effect on seed visualization for both species studied, suggesting that the tetrazolium test should be performed at this conditioning temperature.(AU)

As orquídeas necessitam de medidas para a conservação de suas espécies, entre essas a criação de bancos de sementes. Objetivou-se identificar metodologia adequada para a identificação da viabilidade de sementes de Cattleya por meio do teste de tetrazólio. Sementes de Cattleya nobilior Rchb. e Cattleya walkeriana Gardn. foram submetidas a três pré-condicionamentos: sem embebição (controle); sacarose (10%) ou água destilada. Decorridas 24 horas, foram submetidas à solução de tetrazólio, com três tipos de condicionamento: estufa (40 °C), banho maria (40 °C) ou temperatura ambiente. Após esse período foi calculada a porcentagem de sementes viáveis (SV). Foi realizada a semeadura in vitro e, após 45 dias, determinada a porcentagem de germinação (G). Para cada espécie estudada, foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado e os tratamentos foram arranjados em esquema fatorial 3x3 (três précondicionamentos e três condicionamentos) com oito repetições de um tubo de ensaio cada, sendo o experimento realizado em duplicata. Os maiores valores de viabilidade encontrados no teste de tetrazólio foram próximos aos de germinação (C. nobilior: SV = 88% e G = 97%; C. walkeriana: SV = 88% e G = 95%) para essas espécies de Cattleya nativas do Cerrado. Para as duas espécies estudadas, o condicionamento em temperatura ambiente apresentou melhor visualização das sementes, sugerindo que o teste de tetrazólio deve ser realizado nesta temperatura de condicionamento.(AU)

Light sources on the germination and initial in vitro establishment of Schomburgkia crispa Lindl., a species of the Brazilian Cerrado / Fontes de luz na germinação e estabelecimento inicial in vitro de Schomburgkia crispa Lindl. uma espécie do Cerrado brasileiro

Light is one of the factors that influence the germination and initial establishment of orchids under in vitro cultivation. This study evaluated the effect of different light sources on these stages in in vitro cultivation of Schomburgkia crispa Lindl. After sowing in an aseptic environment, we stored the cultures in a screened greenhouse (natural light) or in a growth room with the following light sources: 3,000 K yellow LED; 6,500 K white LED [1]; 6,500 K white LED [2]; or 6,500 K white fluorescent lamp (control). We assessed germination percentage and initial seedling establishment at 45 and 90 days after sowing. Light did not influence the germination of S. crispa. However, the use of 3,000 K LED provided a faster initial establishment of S. crispa when compared to the other light sources, also presenting lower seedling mortality. Thus, the light source 3,000 K LED is a potential substitute for the 6,500 K fluorescent lamps and LEDs used in growth rooms in in vitro culture laboratories.(AU)

A luz é um dos fatores que influenciam a germinação e o estabelecimento inicial no cultivo in vitro de orquídeas. Assim, objetivou-se avaliar o efeito de diferentes fontes de luz na germinação e no estabelecimento inicial in vitro de Schomburgkia crispa Lindl. Após semeadura em ambiente asséptico, as culturas foram acondicionadas em viveiro telado (luz natural) ou em sala de crescimento nas seguintes fontes luminosas: LEDs amarelo 3.000 K, branco 6.500 K [1], branco 6.500 K [2] ou lâmpada fluorescente branca 6.500 K (controle). Aos 45 e 90 dias após a semeadura foi avaliada a porcentagem de germinação e o estabelecimento inicial dos propágulos. A luz não influenciou a germinação das sementes de S. crispa, mas a utilização do LED 3.000 K proporcionou estabelecimento inicial de S. crispa em menor período e com menor mortalidade das plântulas, quando comparado com as demais fontes de luz utilizadas. A fonte de luz LED 3.000 K pode ser indicada como um substituto potencial para as lâmpadas fluorescentes e LEDs 6.500 K, utilizadas em salas de crescimento em laboratórios de cultivo in vitro.(AU)

Meios de cultivo e sacarose no crescimento inicial in vitro de Miltonia flavescens / Culture media and sucrose on initial in vitro growth of Miltonia flavescens

O cultivo in vitro tem sido utilizado para propagação de plantas ornamentais. A escolha do meio de cultivo e a concentração ideal de produtos orgânicos utilizados no enriquecimento dos meios, como a sacarose, são decisivos na elaboração de protocolos. Dessa forma, objetivou-se avaliar o crescimento inicial de Miltonia flavescens, cultivada por 90 e 180 dias, em quatro meios de cultivo com diferentes concentrações de sacarose. Plantas com 12 meses e germinadas in vitro foram cultivadas nos meios MS, MS 1/2, K e VW, cada um deles suplementado com 1,5g L-1 de carvão ativado, 6,5g L-1 de ágar bacteriológico e com 25, 30, 35, 40 e 45g L-1 de sacarose. Aos 90 e 180 dias, foram avaliadas quanto à massa fresca, número de raízes, de folhas e de brotos e quanto ao comprimento da parte aérea e da maior raiz. As maiores médias para número de raízes, comprimento da parte aérea e massa fresca total foram obtidas nas plantas cultivadas por 180 dias em meio MS 1/2, suplementado com 25g L-1 de sacarose. O maior comprimento de raiz foi verificado nas plantas cultivadas por 180 dias em meio MS suplementado com 45g L-1 de sacarose. Já o número de brotos e de folhas não foram influenciados pelas concentrações de sacarose. M. flavescens apresentou maior crescimento da parte aérea e raiz, quando cultivada por 180 dias em meio MS 1/2, suplementado com 25g L-1 de sacarose.(AU)

The in vitro culture has been widely used for the ornamental plants propagation. The choice of the best medium and organic products concentration, such as sucrose, are decisive in the protocols. Thus, the aim of this study was to evaluate the initial growth of Miltonia flavescens, grown for 90 and 180 days, in four culture media supplemented with different concentrations of sucrose. Plants aged 12 months were germinated in vitro and cultured on MS, MS 1/2 K and VW media each one supplemented with 1.5g L-1 of activated charcoal, 6.5g L-1 bacteriological agar and 25, 30 35, 40 and 45g L-1 sucrose. After 90 and 180 days, fresh mass, number of roots, leaves and shoots, length shoot and the largest root were evaluated. The highest average for number of roots, shoot, length and total fresh weight were obtained in plants grown for 180 days on MS 1/2 medium supplemented with 25g L-1 sucrose. The greater length of roots was observed in plants grown for 180 days on MS medium supplemented with 45g L-1 sucrose. M. flavescens showed higher growth of shoots and roots when cultivated for 180 days on MS 1/2 medium supplemented with 25g L-1 sucrose.(AU)

Light in intermediate acclimatization of in vitro germinated seedlings of Dendrobium phalaenopsis Deang Suree / Luz na aclimatização intermediária de mudas germinadas in vitro de Dendrobium phalaenopsis Deang Suree

The success in micropropagation of Dendrobium phalaenopsis Deang Suree is high, but when transplanted into the greenhouse, their survival is minimal. To increase survival in production in the present study it was evaluated the effect of intermediate acclimatization for 30 days in a grow room utilizing the following luminosity conditions: 1- white fluorescent light (B) (18.9µmol m-2 s-1); 2- white fluorescent light + red fluorescent light (GRO-LUX(r)) (BV) (14.85µmol m-2 s-1); 3- red fluorescent light (GRO-LUX(r)) (V) (9.45µmol m-2 s-1) and the control plants were accommodated directly in a greenhouse (162.0µmol m-2 s-1). After this the leaves were characterized anatomically and the plants transferred to the control greenhouse. It was evaluated survival percentage and final number of roots, and calculated the relations between the final and initial values of fresh weight, number of leaves, length and diameter of the largest pseudo bulb, number of pseudo bulbs and longest root length. Only plants submitted to red light, were statistically better than the control in relation to the survival percentage and in relation to fresh weight, while the control showed a higher number of roots that plants acclimatized in this luminosity conditions. Intermediate acclimatization, using red light or red + white light, is recommended for D. phalaenopsis Deang Suree.(AU)

O sucesso na micropropagação de Dendrobium phalaenopsis Deang Suree é alto, porém, quando transplantado para o viveiro, sua sobrevivência é mínima. Com o intuito de aumentar a sobrevivência na produção, no presente trabalho, avaliou-se o efeito da aclimatização intermediária, por 30 dias em sala de crescimento, sob as seguintes condições de luminosidade: 1- luz fluorescente branca (18,9µmol m-2 s-1); 2- luz fluorescente branca + luz fluorescente vermelha (14,85µmol m-2 s-1); e 3- luz fluorescente vermelha (9,45µmol m-2 s-1), o controle foi acondicionado diretamente em viveiro coberto (162,0µmol m-2 s-1). Na sequência, as folhas foram caracterizadas anatomicamente e as plantas foram transferidas para o viveiro que continha o controle. Foi avaliada a porcentagem de sobrevivência e o número final de raízes, sendo calculadas também as relações entre os valores finais e iniciais de massa fresca, número de folhas, comprimento e diâmetro do maior pseudobulbo, número de pseudobulbos e comprimento da maior raiz das plantas aclimatizadas. Apenas as plantas submetidas à luz vermelha foram estatisticamente superiores ao controle, em relação à porcentagem de sobrevivência e relação de massa fresca, enquanto que o controle apresentou maior número de raízes que plantas aclimatizadas nessa condição de luminosidade. Aclimatização intermediária, utilizando luz vermelha ou a luz vermelha + branca, é recomendada para D. phalaenopsis Deang Suree.(AU)

Potencial germinativo de sementes e qualidade de keikis de Dendrobium nobile em diferentes fases do desenvolvimento dos frutos / Germination potential of seeds and keikis quality of Dendrobium nobile at different fruit development stages

Objetivou-se com este trabalho avaliar o potencial germinativo das sementes, formadas por autopolinização manual, em frutos de pseudobulbos de Dendrobium nobile, em diferentes estágios de maturação. Aos 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270 e 300 dias após polinização (DAP), cinco pseudobulbos contendo frutos foram destacados da planta-mãe e plantados em recipiente de polipropileno, permanecendo até 300 DAP. Depois desse período, os pseudobulbos foram avaliados quanto ao número de keikis e os keikis produzidos quanto ao diâmetro e comprimento de pseudobulbo, número de folhas e de raízes. A seguir, os frutos foram destacados dos pseudobulbos e avaliados quanto ao diâmetro da maior porção do ovário, comprimento e massa fresca do fruto, massa fresca das sementes e do pericarpo. Para cada época de coleta de frutos, as sementes foram submetidas ao teste de tetrazólio e ao teste de germinação. Quanto maior o diâmetro do fruto, a porcentagem de sementes viáveis e a porcentagem de germinação de D. nobile também aumentaram, e essa relação foi crescente à medida que aumentam os dias de permanência dos frutos na planta-mãe. Além disso, pseudobulbos que permaneceram menos tempo na planta-mãe apresentaram maiores números de keikis e, para que a porcentagem de germinação in vitro de D. nobile seja superior a 75% os pseudobulbos, contendo fruto, devem ser coletados a partir dos 166 DAP.(AU)

The objective of this study was to evaluate the germination potential of seeds formed by manual self pollination in fruits of pseudobulbs of Dendrobium nobile in different maturation stages. At 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270 and 300 days after pollination (DAP), five pseudobulbs containing fruits, were detached from the mother plant and planted in a polypropylene container, where they remained until 300 DAP. After this period, the pseudobulbs were evaluated on the number of keikis and all keikis produced as the diameter and length of pseudobulb, number of leaves and roots. After, the fruits were detached from pseudobulbs, and evaluated as the diameter of the largest portion of the ovary, length and fresh weight of fruit, fresh weight of seed and pericarp. For each collecting period of fruits, seeds were tested with tetrazolium test and germination test. The larger the diameter of the fruit, the percentage of viable seeds and the germination percentage of D. nobile also increased, and this relationship was growing as they increase the length of fruit stay on the mother plant. Morover, the pseudobulbs remained shortest time in the mother plant showed higher numbers of keikis and so that the percentage of germination in vitro of D. nobile is above 75%, the pseudobulbs, containing fruit, should be collected from the 166 DAP.(AU)

Identificação da viabilidade de sementes de orquídeas pelo teste de tetrazólio / Orchid seeds viability identification by tetrazolium test

O conhecimento do potencial germinativo otimiza a prática de germinação in vitro de Orchidaceae. Este trabalho avaliou o tipo e a concentração de soluções de tetrazólio sobre o tempo de reação e a identificação de sementes viáveis de orquidáceas. Foram utilizadas sementes das espécies Brassavola tuberculata Hook, Cattleya labiata Lindley var Amoema, Cattleya intermedia e Dendrobium antenatum e de dois híbridos primários de Cattleya labiata autumnalis x Cattleya labiata Lindley var. Alba. As sementes (0,01g) de cada espécie ou híbrido foram embebidas em 3 mL da solução aquosa ou da neutra de cloreto de 2,3,5 trifeniltetrazólio, nas concentrações de 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5% ou 1,0%e acondicionadas em ambiente desprovido de luz a 25±2 ºC, sendo avaliadas a cada 30 minutos para identificação do tempo necessário para a coloração dos embriões e posterior contagem do número de sementes viáveis por miligrama de sementes. Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, em esquema fatorial 6 x 2 x 5 (seis genótipos de orquídeas, dois tipos de soluções tetrazólicas e cinco concentrações) com 3 repetições. Os genótipos estudados responderam diferentemente no que se refere ao número de sementes viáveis por miligrama de sementes e quanto ao tempo necessário para a coloração dos embriões, sendo que C. intermedia não respondeu ao teste. Independentemente do tipo de solução, as concentrações só interferiram no tempo de reação para um dos híbridos. Recomenda-se, portanto, a utilização de solução neutra de tetrazólio a 0,5% para identificação de sementes viáveis dos híbridos de Cattleya labiata autumnalis x Cattleya labiata var. Alba e a utilização de solução aquosa a 0,125% para as espécies Brassavola tuberculata, Cattleya labiata var Amoema e Dendrobium antenatum.(AU)

The knowledge of germinal potential optimizes the practice of in vitro germination of Orchidaceae. This work evaluated of the type and concentrations of tetrazolium solutions on reaction time and on the identification of viable orchid seeds. Were used seeds of the species Brassavola tuberculata Hook, Cattleya labiata Lindley var Amoema, Cattleya intermedia and Dendrobium antenatum and of two primary hybrids of Cattleya labiata autumnalis x Cattleya labiata Lindley var. Alba. The seeds(0.01g) of each species or hybrid were soaked in 3 mL of aqueous and neutral solutions of 2, 3, 5 triphenyltetrazolium chloride at 0.0625%, 0.125%, 0.25%, 0.5% and 1.0% concentrations and stored in a light-free environment at 25±2 °C, being evaluated every 30 minutes for identification of the time needed for embryos coloring and later counting of the number of viable seeds by milligram of seed. A completely randomized design was used, in a factorial scheme 6 x 2 x 5 (six genotypes of orchids, two types of tetrazolium solutions and five concentrations) with 3 replications. The genotypes responded differently both for viable seeds by milligram of seed and for the time required for embryos coloring and C. intermedia not respond to the test. Irrespective of solution type, concentrations only interfered in reaction time for the hybrids. It is recommended, therefore, the use of neutral tetrazolium solution at 0.5% for indentification of viable seeds of hybrids of Cattleya labiata autumnalis x Cattleya labiata var. Alba and use of aqueous solution at 0.125% for Brassavola tuberculata, Cattleya labiata var Amoema and Dendrobium antenatum.(AU)

Armazenamento de sementes e aclimatização de Brassavola tuberculata Hook / Seed storage and acclimatization of Brassavola tuberculata Hook

A semeadura in vitro e a aclimatização das plântulas produzidas são responsáveis pelo sucesso da produção de Orchidaceae. Este trabalho teve por objetivos 1) avaliar a viabilidade das sementes de B. tuberculata armazenadas em diferentes temperaturas e 2) avaliar o crescimento ex vitro de B. tuberculata em diferentes substratos. As sementes foram armazenadas, por 84 dias, sob três condições: temperatura ambiente (23 ± 2 ºC), refrigerador (4 ± 2 ºC) ou freezer (-14,5 ± 2 ºC). Foi utilizado o delineamento experimental inteiramente casualizado e os tratamentos foram arranjados em esquema fatorial 3 (condições de temperatura) x 6 (períodos de armazenamento) com três repetições. A viabilidade das sementes foi determinada através do teste de tetrazólio. Para a aclimatização, plantas com dois anos, oriundas de semeadura in vitro, foram aclimatizadas em bandejas plásticas contendo: 1- esfagno; 2- carvão ou 3- fibra de coco. Foi utilizado o delineamento experimental inteiramente casualizado com 3 tratamentos e 4 repetições de 10 plantas cada. As plantas permaneceram por 365 dias em viveiro, sob condições ambientais e recebendo luminosidade média diária de 130 μmol m-2 s-2. Após esse período, as plantas foram avaliadas quanto à porcentagem de sobrevivência, de massa fresca e seca da parte aérea e das raízes, sendo também calculadas as relações entre a massa fresca das plantas, o comprimento da parte aérea e da maior raiz, o número de raízes e o número de perfilhos, observados no final do período experimental em relação àqueles registrados no plantio. Após 84 dias sementes armazenadas em condições ambientais apresentaram 0,0 % de viabilidade, enquanto que aquelas armazenadas em refrigerador e em freezer apresentaram 77,6 e 67,2 % de viabilidade.[...](AU)

In vitro sowing and acclimatization of the produced plantlets are responsible factors for the successful production of Orchidaceae. This study aimed to: 1) evaluate the viability of B. tuberculata seeds stored at different temperatures, and 2) evaluate the ex vitro growth of B. tuberculata on different substrates. The seeds were stored for 84 days under three conditions: ambient temperature (23 ± 2 ° C), refrigerator (4 ± 2 ° C) or freezer (-14.5 ± 2 º C). The completely randomized design was used and treatments were arranged in a 3 (temperature conditions) x 6 (storage period) factorial scheme with three replications. Seed viability was determined by tetrazolium test. For acclimatization, two-year plants coming from in vitro sowing were acclimatized in plastic trays containing: 1 sphagnum; 2 charcoal or 3 coconut fiber. We used the completely randomized design with 3 treatments and 4 replications of 10 plants each. The plants remained in the greenhouse for 365 days under ambient conditions, receiving daily average brightness of 130 μm-2 s-2. After this period, the plants were evaluated for survival percentage, fresh and dry weight of shoots and roots, and it was calculated the relationship between fresh weight of the plants, the shoot length and the largest root, the number roots and the number of tillers, observed at the end of the experimental period compared to those recorded at planting. For the seed study, after 84 days seeds stored under ambient conditions showed 0.0% viability, while those stored in the refrigerator and freezer showed 77.6 and 67.2% viability.[...](AU)

Identificação da viabilidade de sementes de orquídeas pelo teste de tetrazólio / Orchid seeds viability identification by tetrazolium test

O conhecimento do potencial germinativo otimiza a prática de germinação in vitro de Orchidaceae. Este trabalho avaliou o tipo e a concentração de soluções de tetrazólio sobre o tempo de reação e a identificação de sementes viáveis de orquidáceas. Foram utilizadas sementes das espécies Brassavola tuberculata Hook, Cattleya labiata Lindley var Amoema, Cattleya intermedia e Dendrobium antenatum e de dois híbridos primários de Cattleya labiata autumnalis x Cattleya labiata Lindley var. Alba. As sementes (0,01g) de cada espécie ou híbrido foram embebidas em 3 mL da solução aquosa ou da neutra de cloreto de 2,3,5 trifeniltetrazólio, nas concentrações de 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5% ou 1,0%e acondicionadas em ambiente desprovido de luz a 25±2 ºC, sendo avaliadas a cada 30 minutos para identificação do tempo necessário para a coloração dos embriões e posterior contagem do número de sementes viáveis por miligrama de sementes. Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, em esquema fatorial 6 x 2 x 5 (seis genótipos de orquídeas, dois tipos de soluções tetrazólicas e cinco concentrações) com 3 repetições. Os genótipos estudados responderam diferentemente no que se refere ao número de sementes viáveis por miligrama de sementes e quanto ao tempo necessário para a coloração dos embriões, sendo que C. intermedia não respondeu ao teste. Independentemente do tipo de solução, as concentrações só interferiram no tempo de reação para um dos híbridos. Recomenda-se, portanto, a utilização de solução neutra de tetrazólio a 0,5% para identificação de sementes viáveis dos híbridos de Cattleya labiata autumnalis x Cattleya labiata var. Alba e a utilização de solução aquosa a 0,125% para as espécies Brassavola tuberculata, Cattleya labiata var Amoema e Dendrobium antenatum.

The knowledge of germinal potential optimizes the practice of in vitro germination of Orchidaceae. This work evaluated of the type and concentrations of tetrazolium solutions on reaction time and on the identification of viable orchid seeds. Were used seeds of the species Brassavola tuberculata Hook, Cattleya labiata Lindley var Amoema, Cattleya intermedia and Dendrobium antenatum and of two primary hybrids of Cattleya labiata autumnalis x Cattleya labiata Lindley var. Alba. The seeds(0.01g) of each species or hybrid were soaked in 3 mL of aqueous and neutral solutions of 2, 3, 5 triphenyltetrazolium chloride at 0.0625%, 0.125%, 0.25%, 0.5% and 1.0% concentrations and stored in a light-free environment at 25±2 °C, being evaluated every 30 minutes for identification of the time needed for embryos coloring and later counting of the number of viable seeds by milligram of seed. A completely randomized design was used, in a factorial scheme 6 x 2 x 5 (six genotypes of orchids, two types of tetrazolium solutions and five concentrations) with 3 replications. The genotypes responded differently both for viable seeds by milligram of seed and for the time required for embryos coloring and C. intermedia not respond to the test. Irrespective of solution type, concentrations only interfered in reaction time for the hybrids. It is recommended, therefore, the use of neutral tetrazolium solution at 0.5% for indentification of viable seeds of hybrids of Cattleya labiata autumnalis x Cattleya labiata var. Alba and use of aqueous solution at 0.125% for Brassavola tuberculata, Cattleya labiata var Amoema and Dendrobium antenatum.

Armazenamento de sementes e aclimatização de Brassavola tuberculata Hook / Seed storage and acclimatization of Brassavola tuberculata Hook

A semeadura in vitro e a aclimatização das plântulas produzidas são responsáveis pelo sucesso da produção de Orchidaceae. Este trabalho teve por objetivos 1) avaliar a viabilidade das sementes de B. tuberculata armazenadas em diferentes temperaturas e 2) avaliar o crescimento ex vitro de B. tuberculata em diferentes substratos. As sementes foram armazenadas, por 84 dias, sob três condições: temperatura ambiente (23 ± 2 ºC), refrigerador (4 ± 2 ºC) ou freezer (-14,5 ± 2 ºC). Foi utilizado o delineamento experimental inteiramente casualizado e os tratamentos foram arranjados em esquema fatorial 3 (condições de temperatura) x 6 (períodos de armazenamento) com três repetições. A viabilidade das sementes foi determinada através do teste de tetrazólio. Para a aclimatização, plantas com dois anos, oriundas de semeadura in vitro, foram aclimatizadas em bandejas plásticas contendo: 1- esfagno; 2- carvão ou 3- fibra de coco. Foi utilizado o delineamento experimental inteiramente casualizado com 3 tratamentos e 4 repetições de 10 plantas cada. As plantas permaneceram por 365 dias em viveiro, sob condições ambientais e recebendo luminosidade média diária de 130 μmol m-2 s-2. Após esse período, as plantas foram avaliadas quanto à porcentagem de sobrevivência, de massa fresca e seca da parte aérea e das raízes, sendo também calculadas as relações entre a massa fresca das plantas, o comprimento da parte aérea e da maior raiz, o número de raízes e o número de perfilhos, observados no final do período experimental em relação àqueles registrados no plantio. Após 84 dias sementes armazenadas em condições ambientais apresentaram 0,0 % de viabilidade, enquanto que aquelas armazenadas em refrigerador e em freezer apresentaram 77,6 e 67,2 % de viabilidade.[...]

In vitro sowing and acclimatization of the produced plantlets are responsible factors for the successful production of Orchidaceae. This study aimed to: 1) evaluate the viability of B. tuberculata seeds stored at different temperatures, and 2) evaluate the ex vitro growth of B. tuberculata on different substrates. The seeds were stored for 84 days under three conditions: ambient temperature (23 ± 2 ° C), refrigerator (4 ± 2 ° C) or freezer (-14.5 ± 2 º C). The completely randomized design was used and treatments were arranged in a 3 (temperature conditions) x 6 (storage period) factorial scheme with three replications. Seed viability was determined by tetrazolium test. For acclimatization, two-year plants coming from in vitro sowing were acclimatized in plastic trays containing: 1 – sphagnum; 2 – charcoal or 3 – coconut fiber. We used the completely randomized design with 3 treatments and 4 replications of 10 plants each. The plants remained in the greenhouse for 365 days under ambient conditions, receiving daily average brightness of 130 μm-2 s-2. After this period, the plants were evaluated for survival percentage, fresh and dry weight of shoots and roots, and it was calculated the relationship between fresh weight of the plants, the shoot length and the largest root, the number roots and the number of tillers, observed at the end of the experimental period compared to those recorded at planting. For the seed study, after 84 days seeds stored under ambient conditions showed 0.0% viability, while those stored in the refrigerator and freezer showed 77.6 and 67.2% viability.[...]