In vitro anthelmintic activity of nitazoxanide in comparison to praziquantel against Eurytrema coelomaticum / Atividade anti-helmíntica in vitro de nitazoxanida em comparação com praziquantel contra Eurytrema coelomaticum

ABSTRACT: Eurytrema coelomaticum are trematodes that parasitize cattle, buffaloes, goats, sheep, and camelids, and, accidentally, humans and cats. The affected animal usually has a subclinical pancreatic disease, but the damage caused to health and animal production is underestimated. Currently, praziquantel is the unique drug proven effective against this parasite, but no formulations containing this drug are available for ruminants in Brazilian market. The objective of the present study was to separately evaluate in vitro anthelmintic activity of praziquantel (PZQ) and nitazoxanide (NTZ) against E. coelomaticum by assessing motility after 3, 12, and, 15 hours of incubation and subsequent histopathological examination of the parasites. E. coelomaticum specimens were obtained from the pancreas of naturally infected cattle, collected from animals slaughtered in the city of Concordia-SC, Brazil. The specimens were incubated in plates with a culture medium (n = 60 per group), with 80µg/ml of PZQ (positive control group), or 61,5µg/ml of NTZ (treated group), or UNT (untreated control). After 12 hours of incubation all parasites of the NTZ and PZQ groups were motionless or dead, while in the negative control group, 91.67% (55/60) presented normal motility after 15 hours of incubation (P < 0.001). Histopathological examination showed severe damage in vitellogenic gland, intestine, parenchyma, integument, and testicle in both treated and positive control groups. It was concluded that PZQ and NTZ showed in vitro anthelmintic action against the parasite Eurytrema coelomaticum, as they caused significant lesions in the evaluated organs and reduced the parasite's motility.

RESUMO: Eurytrema coelomaticum são trematódeos que parasitam bovinos, bubalinos, caprinos, ovinos e camelídeos, e de forma acidental, humanos e felinos. O animal acometido geralmente apresenta doença pancreática subclínica, mas os danos causados à saúde e produção animal são subestimados. Atualmente, o praziquantel é o único medicamento comprovadamente eficaz contra este parasita, mas não há formulações contendo esse medicamento disponíveis para ruminantes no mercado brasileiro. O objetivo deste trabalho foi avaliar separadamente a atividade anti-helmíntica in vitro de praziquantel (PZQ) e nitazoxanida (NTZ) frente ao E. coelomaticum pela avaliação de motilidade após três, 12 e 15 horas de incubação e posterior exame histopatológico dos parasitos. Exemplares de E. coelomaticum foram obtidos do pâncreas de bovinos naturalmente infectados, coletados em animais abatidos na cidade de Concórdia, SC, Brasil. Incubados em placas com meio de cultura (n = 60 por grupo), adicionados de 80µg/ml de PZQ (grupo controle positivo) ou 61,5µg/ml de NTZ (grupo tratado) ou UNT (grupo controle sem tratamento). Em 12h de incubação todos os parasitos dos grupos NTZ e PZQ estavam imóveis ou mortos, enquanto no grupo controle negativo 91,67% (55/60) apresentaram motilidade normal após 15h de incubação (P < 0.001). Por exame histopatológico observou-se danos graves em glândula vitelogênica, intestino, parênquima, tegumento e testículo em ambos os grupos tratado e controle positivo. Concluiu-se que PZQ e NTZ apresentaram ação anti-helmíntica in vitro contra o parasito Eurytrema coelomaticum, pois causaram lesões significativas nos órgãos avaliados e diminuíram a motilidade do parasito.

In vitro anthelmintic activity of nitazoxanide in comparison to praziquantel against Eurytrema coelomaticum / Atividade anti-helmíntica in vitro de nitazoxanida em comparação com praziquantel contra Eurytrema coelomaticum

Eurytrema coelomaticum are trematodes that parasitize cattle, buffaloes, goats, sheep, and camelids, and, accidentally, humans and cats. The affected animal usually has a subclinical pancreatic disease, but the damage caused to health and animal production is underestimated. Currently, praziquantel is the unique drug proven effective against this parasite, but no formulations containing this drug are available for ruminants in Brazilian market. The objective of the present study was to separately evaluate in vitro anthelmintic activity of praziquantel (PZQ) and nitazoxanide (NTZ) against E. coelomaticum by assessing motility after 3, 12, and, 15 hours of incubation and subsequent histopathological examination of the parasites. E. coelomaticum specimens were obtained from the pancreas of naturally infected cattle, collected from animals slaughtered in the city of Concordia-SC, Brazil. The specimens were incubated in plates with a culture medium (n = 60 per group), with 80µg/ml of PZQ (positive control group), or 61,5µg/ml of NTZ (treated group), or UNT (untreated control). After 12 hours of incubation all parasites of the NTZ and PZQ groups were motionless or dead, while in the negative control group, 91.67% (55/60) presented normal motility after 15 hours of incubation (P < 0.001). Histopathological examination showed severe damage in vitellogenic gland, intestine, parenchyma, integument, and testicle in both treated and positive control groups. It was concluded that PZQ and NTZ showed in vitro anthelmintic action against the parasite Eurytrema coelomaticum, as they caused significant lesions in the evaluated organs and reduced the parasite's motility.

Eurytrema coelomaticum são trematódeos que parasitam bovinos, bubalinos, caprinos, ovinos e camelídeos, e de forma acidental, humanos e felinos. O animal acometido geralmente apresenta doença pancreática subclínica, mas os danos causados à saúde e produção animal são subestimados. Atualmente, o praziquantel é o único medicamento comprovadamente eficaz contra este parasita, mas não há formulações contendo esse medicamento disponíveis para ruminantes no mercado brasileiro. O objetivo deste trabalho foi avaliar separadamente a atividade anti-helmíntica in vitro de praziquantel (PZQ) e nitazoxanida (NTZ) frente ao E. coelomaticum pela avaliação de motilidade após três, 12 e 15 horas de incubação e posterior exame histopatológico dos parasitos. Exemplares de E. coelomaticum foram obtidos do pâncreas de bovinos naturalmente infectados, coletados em animais abatidos na cidade de Concórdia, SC, Brasil. Incubados em placas com meio de cultura (n = 60 por grupo), adicionados de 80µg/ml de PZQ (grupo controle positivo) ou 61,5µg/ml de NTZ (grupo tratado) ou UNT (grupo controle sem tratamento). Em 12h de incubação todos os parasitos dos grupos NTZ e PZQ estavam imóveis ou mortos, enquanto no grupo controle negativo 91,67% (55/60) apresentaram motilidade normal após 15h de incubação (P < 0.001). Por exame histopatológico observou-se danos graves em glândula vitelogênica, intestino, parênquima, tegumento e testículo em ambos os grupos tratado e controle positivo. Concluiu-se que PZQ e NTZ apresentaram ação anti-helmíntica in vitro contra o parasito Eurytrema coelomaticum, pois causaram lesões significativas nos órgãos avaliados e diminuíram a motilidade do parasito.

Eurytrema coelomaticum infection: correlation between parasite burden and impairment of pancreatic exocrine enzyme secretion / Eurytrema coelomaticum: correlação entre carga parasitária e insuficiência pancreática exócrina

Eurytrema coelomaticum is a trematode reported in the pancreatic ducts of ruminants. It is conjectured that may cause disorders in the pancreas, as well as digestive and metabolic processes dependent on them. This study, determined if there is an impairment of exocrine pancreatic function, and correlated it with parasite burden. Pancreas, blood, and fecal samples were collected from 119 bovines at a abattoir. Stool samples were subjected to the gelatin and x-ray film digestion tests (to detect the presence of trypsin in feces). Using blood samples, the following biochemical tests were performed: amylase, lipase, glucose, fructosamine, cholesterol, triglycerides, total protein, albumin, and globulins. Analyses were correlated with pancreatic parasite burden. Cattle with a high parasitic load presented higher incidence of negative tests in both gelatin digestion and x-ray film digestion tests (P < 0.001) when compared to non-parasitized animals and those with a low parasitic load. Changes in those tests only occurred if the parasitemia was moderate or severe. The activity of the amylase and lipase enzymes was significantly higher in animals with low parasitemia (P < 0.05), compared to non-parasitized animals and with a high parasitic burden. In this study, in cases of high parasitemia, negative results were observed in both gelatin and x-ray film in the feces digestion tests. However, the low infection of E. coelomaticum, higher levels of serum amylase and lipase that also indicated loss of pancreatic exocrine functions were reported.

Eurytrema coelomaticum, um trematódeo de ductos pancreáticos de ruminantes. Conjectura-se que possa ocasionar transtornos nas funções pancreáticas, mais especificamente nos processos digestivos e metabólicos dependentes destas. Neste estudo, o objetivo foi determinar se há comprometimento da função pancreática exócrina, correlacionado-a a carga parasitária. Foram utilizados pâncreas e respectivas amostras de sangue e fezes de 119 bovinos. As amostras de fezes foram submetidas aos testes de digestão da gelatina em tubo e digestão de filme radiográfico, ambos para detecção de tripsina nas fezes. Foram realizados os seguintes exames bioquímicos em amostras de sangue: amilase, lipase, glicemia, frutosamina, colesterol, triglicerídeos, proteínas totais, albumina e globulinas. Após isto, as análises bioquímicas foram correlacionadas com a quantidade numérica de parasitas encontrados no pâncreas (post-mortem). Houve maior quantidade de testes negativos (digestão do filme radiográfico e prova de digestão da gelatina) nos animais com alta carga parasitária (P < 0.001), quando comparados aos animais não parasitados e com baixa carga parasitária. Portanto, os exames supracitados se alteram somente se a quantidade de parasitas for moderada ou severa. As atividades das enzimas amilase e lipase foram significativamente maiores nos animais que apresentavam baixa parasitemia (P < 0.05), em comparação com os animais com alta carga parasitária e não parasitados. Conclui-se que em quadros de alta parasitemia há alteração significativa nos testes de digestão nas fezes, e que em quadros de baixa parasitemia há alterações significativas nos valores de amilase e lipase séricas, ambos comprovando alterações pancreáticas importantes, de acordo com o quadro de parasitemia.

Plant poisoning containing hydrocyanic acid in cattle in Southern Brazil

Background: Cyanogenic plants accumulate cyanogenic glycosides and release hydrocyanic acid (HCN). In Brazil, therehave been reports of several plants that cause HCN poisoning in animals and lead to a fast death with few clinical signs andlesions on post mortem examination. Some cultivars of Cynodon spp. grasses cause HCN poisoning in cattle in Brazil. Theobjectives of this work were to report the occurrence of deaths by HCN poisoning in cattle as diagnosed by the veterinarypathology laboratory, describe the quantity of HCN in some cultivars of Cynodon spp., as well as, to describe one cultivarof genus Cynodon never reported as poisonous.Materials, Methods & Results: The archives of the Veterinary Pathology Laboratory (LPV) at the Concórdia Campus ofthe Instituto Federal Catarinense (IFC) were reviewed, seeking cases with a diagnosis of hydrocyanic acid poisoning incattle after post mortem examination. The amount of HCN present in some cultivars of the Cynodon genus was quantified due to the high frequency of poisoning cases. From the 1,235 post mortem examinations of cattle 28 (2.27%) werediagnosed with spontaneous hydrocyanic acid poisoning, 17 cases (60.7%) due to ingestion of Prunus sp. or Manihotsp., and 11 cases (39.3%) of Cynodon dactylon ingestion. Most animals were found dead, normally having presented noclinical signs. Macroscopic evaluation mainly showed a severe amount of unchewed and undigested leaves or grass mixedin the ruminal content presenting a bitter almond odor. It was possible to infer that, among cultivars of the Cynodon genus, Florakirk showed the highest levels of HCN compared (P < 0.05) with Star of Puerto Rico, Tifton 68, Tifton 44, andCoast-Cross. Furthermore, Tifton 85 and Jiggs showed undetected levels of HCN...

Plant poisoning containing hydrocyanic acid in cattle in Southern Brazil

Background: Cyanogenic plants accumulate cyanogenic glycosides and release hydrocyanic acid (HCN). In Brazil, therehave been reports of several plants that cause HCN poisoning in animals and lead to a fast death with few clinical signs andlesions on post mortem examination. Some cultivars of Cynodon spp. grasses cause HCN poisoning in cattle in Brazil. Theobjectives of this work were to report the occurrence of deaths by HCN poisoning in cattle as diagnosed by the veterinarypathology laboratory, describe the quantity of HCN in some cultivars of Cynodon spp., as well as, to describe one cultivarof genus Cynodon never reported as poisonous.Materials, Methods & Results: The archives of the Veterinary Pathology Laboratory (LPV) at the Concórdia Campus ofthe Instituto Federal Catarinense (IFC) were reviewed, seeking cases with a diagnosis of hydrocyanic acid poisoning incattle after post mortem examination. The amount of HCN present in some cultivars of the Cynodon genus was quantified due to the high frequency of poisoning cases. From the 1,235 post mortem examinations of cattle 28 (2.27%) werediagnosed with spontaneous hydrocyanic acid poisoning, 17 cases (60.7%) due to ingestion of Prunus sp. or Manihotsp., and 11 cases (39.3%) of Cynodon dactylon ingestion. Most animals were found dead, normally having presented noclinical signs. Macroscopic evaluation mainly showed a severe amount of unchewed and undigested leaves or grass mixedin the ruminal content presenting a bitter almond odor. It was possible to infer that, among cultivars of the Cynodon genus, Florakirk showed the highest levels of HCN compared (P < 0.05) with Star of Puerto Rico, Tifton 68, Tifton 44, andCoast-Cross. Furthermore, Tifton 85 and Jiggs showed undetected levels of HCN...(AU)

Acción del luz UV y riboflavina en inactivación da Leishmania en sangre canino mantenido en bolsas de transfusión / Action of ultraviolet light and riboflavin in the inactivation of Leishmania in canine blood stored in bags for transfusion / Ação da luz ultravioleta e da riboflavina na inativação de Leishmania em sangue canino conservado em bolsas para transfusão

Es extremadamente importante para la medicina de transfusión tener seguridad en procedimiento de transferencia de componentes de la sangre, lo que minimiza la aparición de transmisión de patógenos. Este estudio investigó la eficacia de la luz ultravioleta y riboflavina en la inactivación de Leishmania infantum chagasi en muestras de sangre de perros recogidos en bolsas de plástico para la transfusión. Para detectar bolsas de sangre positivos para ser utilizado en el experimento se realizó PCR convencionales de las bolsas tomadas de animales sintomáticos, la aspiración positiva de los ganglios linfáticos y IFA (título de 1: 640) a partir de CCZ Araçatuba-SP. Después de 21 días de almacenamiento a 4C la sangre canina parasitada se añadió a riboflavina a una concentración final de 50µM. A partir de entonces, la bolsa fue colocada en el iluminador a una longitud de onda de 365 nm de luz UV durante 30 a 45 minutos y se mantuvo sobre uno homogeneizador de bolsa de sangre. Para demostrar la inactivación se usaron 28 hámsteres (Mesocricetus auratus), machos, adultos. Siete animales fueron inoculados con la sangre sin tratamiento (grupo de leishmaniasis: GL); siete de sangre después de la adición de riboflavina (grupo de riboflavina: GRB); siete de sangre después del tratamiento con riboflavina asociada con luz ultravioleta durante 30 minutos (grupo tratado 1: GT30) y siete con la [...](AU)

It is extremely important for the transfusion medicine the safety in blood components transfer procedure, minimizing the occurrence of pathogen transmission. This study investigated the efficiency of ultraviolet light and riboflavin in the inactivation of Leishmania infantum chagasi in canine blood samples collected in plastic bags for transfusion. To detect positive blood bags to be used in the experiment, it was performed conventional PCR of the bags collected from symptomatic animals, with positive aspiration of lymph node and IFA (title 1: 640), from an epidemic region for the disease. After 21 days of storage at 4C, parasitized canine blood riboflavin was added to a final concentration of 50M. Thereafter, the bag was placed in the illuminator at a wavelength of 365 nm UV light for 30 to 45 minutes and maintained over a homogenizer blood bag. To prove the inactivation, they were used 28 hamsters (Mesocricetus auratus), adult, male. Seven animals were inoculated with the blood without treatment (group leishmaniasis: GL); seven, with blood after the addition of riboflavin (riboflavin group: GRB); seven, with blood after treatment with riboflavin associated with ultraviolet light for 30 minutes (treated group 1: GT30) and seven, with blood after treatment with riboflavin associated with ultraviolet light for 45 minutes (treated group 2: GT45). The animals were kept [...](AU)

É de extrema importância para a medicina transfusional que haja segurança no procedimento de transferência de hemocomponentes, minimizando a ocorrência da transmissão de patógenos. O presente trabalho investigou a eficiência da luz ultravioleta e riboflavina na inativação de Leishmania infantum chagasi em amostras de sangue canino, colhidas em bolsas plásticas para transfusão. Para detectar as bolsas de sangue positivas a serem utilizadas no experimento, foi realizada PCR convencional de sangue de bolsas colhidas de animais sintomáticos, positivos na punção aspirativa de linfonodo e na RIFI (título 1:640), procedentes do CCZ de região epidêmica para a enfermidade. Após 21 dias de armazenamento em temperatura de 4ºC, o sangue canino parasitado foi adicionado de riboflavina na concentração final de 50µM. Posteriormente, a bolsa foi colocada no iluminador a um comprimento de onda de 365 nm de luz UV por 30 e 45 minutos, sendo mantida sobre um homogeinizador de bolsa de sangue. Para comprovar a inativação, foram utilizados 28 hamsters (Mesocricetus auratus), machos e adultos. Sete animais foram inoculados com o sangue sem tratamento (grupo leishmaniose: GL); sete, com sangue após a adição de riboflavina (grupo riboflavina: GRB); sete, com sangue após tratamento com riboflavina associado à luz ultravioleta por 30 minutos (grupo tratado 1: GT30) e sete, com sangue após tratamento [...](AU)

Acción del luz UV y riboflavina en inactivación da Leishmania en sangre canino mantenido en bolsas de transfusión / Action of ultraviolet light and riboflavin in the inactivation of Leishmania in canine blood stored in bags for transfusion / Ação da luz ultravioleta e da riboflavina na inativação de Leishmania em sangue canino conservado em bolsas para transfusão

Es extremadamente importante para la medicina de transfusión tener seguridad en procedimiento de transferencia de componentes de la sangre, lo que minimiza la aparición de transmisión de patógenos. Este estudio investigó la eficacia de la luz ultravioleta y riboflavina en la inactivación de Leishmania infantum chagasi en muestras de sangre de perros recogidos en bolsas de plástico para la transfusión. Para detectar bolsas de sangre positivos para ser utilizado en el experimento se realizó PCR convencionales de las bolsas tomadas de animales sintomáticos, la aspiración positiva de los ganglios linfáticos y IFA (título de 1: 640) a partir de CCZ Araçatuba-SP. Después de 21 días de almacenamiento a 4C la sangre canina parasitada se añadió a riboflavina a una concentración final de 50µM. A partir de entonces, la bolsa fue colocada en el iluminador a una longitud de onda de 365 nm de luz UV durante 30 a 45 minutos y se mantuvo sobre uno homogeneizador de bolsa de sangre. Para demostrar la inactivación se usaron 28 hámsteres (Mesocricetus auratus), machos, adultos. Siete animales fueron inoculados con la sangre sin tratamiento (grupo de leishmaniasis: GL); siete de sangre después de la adición de riboflavina (grupo de riboflavina: GRB); siete de sangre después del tratamiento con riboflavina asociada con luz ultravioleta durante 30 minutos (grupo tratado 1: GT30) y siete con la [...]

It is extremely important for the transfusion medicine the safety in blood components transfer procedure, minimizing the occurrence of pathogen transmission. This study investigated the efficiency of ultraviolet light and riboflavin in the inactivation of Leishmania infantum chagasi in canine blood samples collected in plastic bags for transfusion. To detect positive blood bags to be used in the experiment, it was performed conventional PCR of the bags collected from symptomatic animals, with positive aspiration of lymph node and IFA (title 1: 640), from an epidemic region for the disease. After 21 days of storage at 4C, parasitized canine blood riboflavin was added to a final concentration of 50M. Thereafter, the bag was placed in the illuminator at a wavelength of 365 nm UV light for 30 to 45 minutes and maintained over a homogenizer blood bag. To prove the inactivation, they were used 28 hamsters (Mesocricetus auratus), adult, male. Seven animals were inoculated with the blood without treatment (group leishmaniasis: GL); seven, with blood after the addition of riboflavin (riboflavin group: GRB); seven, with blood after treatment with riboflavin associated with ultraviolet light for 30 minutes (treated group 1: GT30) and seven, with blood after treatment with riboflavin associated with ultraviolet light for 45 minutes (treated group 2: GT45). The animals were kept [...]

É de extrema importância para a medicina transfusional que haja segurança no procedimento de transferência de hemocomponentes, minimizando a ocorrência da transmissão de patógenos. O presente trabalho investigou a eficiência da luz ultravioleta e riboflavina na inativação de Leishmania infantum chagasi em amostras de sangue canino, colhidas em bolsas plásticas para transfusão. Para detectar as bolsas de sangue positivas a serem utilizadas no experimento, foi realizada PCR convencional de sangue de bolsas colhidas de animais sintomáticos, positivos na punção aspirativa de linfonodo e na RIFI (título 1:640), procedentes do CCZ de região epidêmica para a enfermidade. Após 21 dias de armazenamento em temperatura de 4ºC, o sangue canino parasitado foi adicionado de riboflavina na concentração final de 50µM. Posteriormente, a bolsa foi colocada no iluminador a um comprimento de onda de 365 nm de luz UV por 30 e 45 minutos, sendo mantida sobre um homogeinizador de bolsa de sangue. Para comprovar a inativação, foram utilizados 28 hamsters (Mesocricetus auratus), machos e adultos. Sete animais foram inoculados com o sangue sem tratamento (grupo leishmaniose: GL); sete, com sangue após a adição de riboflavina (grupo riboflavina: GRB); sete, com sangue após tratamento com riboflavina associado à luz ultravioleta por 30 minutos (grupo tratado 1: GT30) e sete, com sangue após tratamento [...]