Evaluation of the presence of Leishmania infantum in bone stored in glycerol or sterilized by autoclave for cortical bone grafting / Avaliação da presença de Leishmania infantum em ossos armazenados em glycerol ou esterilizados em autoclave para enxertia óssea cortical

This study was performed to evaluate the effects of autoclaving and storage in 85% glycerol on cortical bone from dogs infected with Leishmania sp. We used 42 cadavers with leishmaniasis. The dogs were evaluated for the presence of Leishmania sp. in culture of bone marrow and by culturing cortical bone. From the infected animals, we harvested 42 diaphysis of the right femur for culture of cortical bone before and after autoclaving or storage in glycerol. There was no significant difference in growth of the parasite in culture of bone marrow or cortical bone. There was no growth of Leishmania sp. in culture of samples after autoclaving or storage in glycerol. Both treatments were effective in preventing the growth of the parasite in vitro, so it was considered viable for grafting.(AU)

Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da esterilização em autoclave e do armazenamento em glicerol a 85% no osso cortical de cães infectados por Leishmania sp. Foram utilizados 42 cadáveres de cães com leishmaniose. Os cães foram avaliados para a presença de Leishmania sp. em cultura de medula óssea e de osso cortical. Foram coletadas 42 diáfises do fêmur direito para cultura do osso cortical antes e após a esterilização e o armazenamento em glicerol. Não houve diferença significativa no crescimento do parasito em cultura utilizando-se medula óssea ou osso cortical. Não houve crescimento de Leishmania sp. em cultura de amostras de osso cortical após a autoclavagem ou o armazenamento em glicerol. Ambos os tratamentos foram eficazes na prevenção do crescimento do parasita in vitro, de modo que foram considerados viáveis para enxerto.(AU)

Evaluation of the presence of Leishmania infantum in bone stored in glycerol or sterilized by autoclave for cortical bone grafting / Avaliação da presença de Leishmania infantum em ossos armazenados em glycerol ou esterilizados em autoclave para enxertia óssea cortical

This study was performed to evaluate the effects of autoclaving and storage in 85% glycerol on cortical bone from dogs infected with Leishmania sp. We used 42 cadavers with leishmaniasis. The dogs were evaluated for the presence of Leishmania sp. in culture of bone marrow and by culturing cortical bone. From the infected animals, we harvested 42 diaphysis of the right femur for culture of cortical bone before and after autoclaving or storage in glycerol. There was no significant difference in growth of the parasite in culture of bone marrow or cortical bone. There was no growth of Leishmania sp. in culture of samples after autoclaving or storage in glycerol. Both treatments were effective in preventing the growth of the parasite in vitro, so it was considered viable for grafting.(AU)

Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da esterilização em autoclave e do armazenamento em glicerol a 85% no osso cortical de cães infectados por Leishmania sp. Foram utilizados 42 cadáveres de cães com leishmaniose. Os cães foram avaliados para a presença de Leishmania sp. em cultura de medula óssea e de osso cortical. Foram coletadas 42 diáfises do fêmur direito para cultura do osso cortical antes e após a esterilização e o armazenamento em glicerol. Não houve diferença significativa no crescimento do parasito em cultura utilizando-se medula óssea ou osso cortical. Não houve crescimento de Leishmania sp. em cultura de amostras de osso cortical após a autoclavagem ou o armazenamento em glicerol. Ambos os tratamentos foram eficazes na prevenção do crescimento do parasita in vitro, de modo que foram considerados viáveis para enxerto.(AU)

Avaliação de diferentes fixadores na preservação das características histológicas de pele de orelha de cães / Evaluation of different fixatives for histological studies in canine ear skin

Os fixadores biológicos desempenham um papel importante na qualidade final da histologia. Na rotina veterinária, a biópsia de pele é um procedimento comum e a escolha do fixador é primordial para resultado final adequado. Os fixadores mais usados são à base de formalina, ainda que sejam tóxicos, cancerígenos, de baixa penetração e de fixação lenta. Mesmo assim, não existe um fixador ideal que substitua as suas qualidades. O objetivo deste trabalho foi avaliar qualitativamente a preservação das características histológicas de pele de cão utilizando diferentes fixadores de tecidos incluídos em parafina, cortados e corados pela hematoxilina-eosina. Utilizou-se uma caneta Punch de 4 milímetros para coletar amostras de pele de orelha em seis cadáveres de cães. Após coleta, os tecidos foram fixados em: (1) Bouin, durante seis horas; (2) Carnoy, durante quatro horas; (3) formaldeído tamponado 10% durante 24 horas, todos sob refrigeração (4ºC). Posteriormente, os tecidos foram processados, cortados e corados em hematoxilina e eosina. As lâminas foram avaliadas, às cegas, por quatro patologistas diferentes, que consideraram aspectos qualitativos a seguir: (1) qualidade da coloração; (2) preservação das características histológicas; e (3) preservação dos limites citoplasmáticos utilizando a escala de LIKERT de pontuação para cada lâmina. O fixador com a maior média de pontuação em todos os itens foi o formol tamponado com 3,76 pontos, seguido pelo Bouin (3,39) e pelo Carnoy (2,52). O formol pode trazer riscos à saúde do profissional que rotineiramente o manuseia, portanto se faz necessária a busca por fixadores com as mesmas qualidades, mas menos nocivos à saúde.(AU)

The biological fixatives have an important role in the final histology quality. In veterinary, routine skin biopsy is a common procedure and the choice of fixative is essential for the final result. The most common fixative is Formalin, even though it is toxic, carcinogenic, and has low and slow penetration. Still, there isn't a fixer which can replace the qualities of formalin. The aim of this study was to evaluate qualitatively the preservation of the histological features of dog skin using different tissue fixative embedded in paraffin, sectioned and stained with hematoxylin - eosin. We used a 4 mm punch pen to collect ear skin samples in six dog cadavers. After collection, the tissues were fixed in: (1) Bouin for 6 hours; (2) Carnoy for 4 hours; (3) 10% buffered formaldehyde for 24 hours, all under refrigeration (4 ° C). The tissues were then processed, sectioned and stained with hematoxylin and eosin. The slides were evaluated blindly by four different pathologists who considered the qualitative aspects below: (1) quality of coloring; (2) preservation of the histological characteristics; (3) preservation of cytoplasmic boundaries using a Likert scale score for each blade. The fixative with the highest mean score on all items was buffered formalin with 3.76 points followed by Bouin (3.39) and Carnoy (2.52). Formaldehyde can bring health a risk of professional routine handling, so it is necessary to search for a biological fixative with the same qualities being less harmful to health.(AU)

Avaliação de diferentes fixadores na preservação das características histológicas de pele de orelha de cães / Evaluation of different fixatives for histological studies in canine ear skin

Os fixadores biológicos desempenham um papel importante na qualidade final da histologia. Na rotina veterinária, a biópsia de pele é um procedimento comum e a escolha do fixador é primordial para resultado final adequado. Os fixadores mais usados são à base de formalina, ainda que sejam tóxicos, cancerígenos, de baixa penetração e de fixação lenta. Mesmo assim, não existe um fixador ideal que substitua as suas qualidades. O objetivo deste trabalho foi avaliar qualitativamente a preservação das características histológicas de pele de cão utilizando diferentes fixadores de tecidos incluídos em parafina, cortados e corados pela hematoxilina-eosina. Utilizou-se uma caneta Punch de 4 milímetros para coletar amostras de pele de orelha em seis cadáveres de cães. Após coleta, os tecidos foram fixados em: (1) Bouin, durante seis horas; (2) Carnoy, durante quatro horas; (3) formaldeído tamponado 10% durante 24 horas, todos sob refrigeração (4ºC). Posteriormente, os tecidos foram processados, cortados e corados em hematoxilina e eosina. As lâminas foram avaliadas, às cegas, por quatro patologistas diferentes, que consideraram aspectos qualitativos a seguir: (1) qualidade da coloração; (2) preservação das características histológicas; e (3) preservação dos limites citoplasmáticos utilizando a escala de LIKERT de pontuação para cada lâmina. O fixador com a maior média de pontuação em todos os itens foi o formol tamponado com 3,76 pontos, seguido pelo Bouin (3,39) e pelo Carnoy (2,52). O formol pode trazer riscos à saúde do profissional que rotineiramente o manuseia, portanto se faz necessária a busca por fixadores com as mesmas qualidades, mas menos nocivos à saúde.(AU)

The biological fixatives have an important role in the final histology quality. In veterinary, routine skin biopsy is a common procedure and the choice of fixative is essential for the final result. The most common fixative is Formalin, even though it is toxic, carcinogenic, and has low and slow penetration. Still, there isn't a fixer which can replace the qualities of formalin. The aim of this study was to evaluate qualitatively the preservation of the histological features of dog skin using different tissue fixative embedded in paraffin, sectioned and stained with hematoxylin - eosin. We used a 4 mm punch pen to collect ear skin samples in six dog cadavers. After collection, the tissues were fixed in: (1) Bouin for 6 hours; (2) Carnoy for 4 hours; (3) 10% buffered formaldehyde for 24 hours, all under refrigeration (4 ° C). The tissues were then processed, sectioned and stained with hematoxylin and eosin. The slides were evaluated blindly by four different pathologists who considered the qualitative aspects below: (1) quality of coloring; (2) preservation of the histological characteristics; (3) preservation of cytoplasmic boundaries using a Likert scale score for each blade. The fixative with the highest mean score on all items was buffered formalin with 3.76 points followed by Bouin (3.39) and Carnoy (2.52). Formaldehyde can bring health a risk of professional routine handling, so it is necessary to search for a biological fixative with the same qualities being less harmful to health.(AU)

Miocardite crônica em um cão naturalmente infectado com Leishmania (Leishmania) infantum chagasi: aspectos clínicos e patológicos / Chronic myocarditis in a dog naturally infected by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi: clinical and pathological aspects

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa crônica frequentemente fatal causada pela Leishmania infantum chagasi nas Américas. A enfermidade pode acometer vários órgãos, determinando diferentes manifestações clínicas. Contudo o envolvimento do coração raramente tem sido reportado em cães infectados por Leishmania sp. Dessa forma, descreve-se um caso de miocardite crônica com repercussões clínicas e patológicas em um cão naturalmente infectado por Leishmania infantum chagasi. A positividade para Leishmaniose Visceral foi determinada pela presença de anticorpos antiLeishmania sp. nos testes sorológicos (RIFI, ELISA e DPP) e confirmada por visualização de formas amastigotas de Leishmania sp. em punção aspirativa do linfonodo poplíteo. O exame cardiovascular revelou alterações radiográficas, eletrocardiográficas, na pressão arterial e nos biomarcardores cardíacos. Após eutanásia, amostras de tecido cardíaco foram avaliadas histologicamente e submetidas à imunomarcação, onde foi observado infiltrado mononuclear (plasmo-histiolinfocitário), com presença de estruturas arredondadas de coloracão marrom-amareladas (imunomarcadas), indicando formas amastigotas de Leishmania infantum chagasi no miocárdio. Os aspectos etiopatogênicos da leishmaniose visceral sobre o miocárdio neste caso podem estar relacionados tanto à presença do parasita quanto à resposta "reacional inespecífica" do tecido à agressão do parasita no organismo. Todavia ainda não se sabem se as cepas de Leishmania infantum chagasi da região semiárida paraibana apresentam algum tropismo por tecido cardíaco ou se induzem a reação imunológica cruzada, com implicações clínicas.(AU)

Visceral leishmaniasis (VL) is a chronic, often fatal infectious disease caused by Leishmania infantum chagasi in the Americas. The disease can affect many organs and may express different clinical forms. However, the involvement of the heart has rarely been reported in dogs infected by Leishmania sp. Thus, we describe a case of chronic myocarditis with clinical and pathological effects in a dog naturally infected by Leishmania infantum chagasi. Positivity for Visceral Leishmaniasis was determined by the presence of anti-Leishmania sp. in serological tests (IFAT, ELISA and DPP) and confirmed by visualization of amastigote forms of the parasite in the popliteal lymph node aspiration samples. The cardiovascular clinical examination showed changes in the radiographic, ECG, blood pressure and heart biomarkers. After euthanasia, heart tissue samples were histologically examined and underwent our immunohistochemistry assessment, where mononuclear infiltrate was observed (plasma cells, lymphocytes and macrophages) with the presence of rounded brownish-yellow (immunomarked) cells, indicating amastigotes of Leishmania infantum chagasi within the myocardium. The etiopathogenic aspects of visceral leishmaniasis in the myocardium in this case may be related either to the presence of the parasite or the "nonspecific reactive" response of the tissue attributable to the aggression of the parasite in the body. However, it is not known if the strains of Leishmania infantum chagasi found in the semi-arid of Paraíba have some tropism for cardiac tissue or if they induce immunological cross-reaction with clinical implications.(AU)

Detection of Leishmania infantum in the smegma of infected dogs / Detecção de Leishmania infantum no esmegma de cães infectados

Considering the venereal transmission of visceral leishmaniasis from dogs to bitches, the aim of this study was to verify if the penile surface and smegma from infected dogs can be the source of parasites in bitches. Twelve Leishmania infantum infected dogs had semen and smegma samples collected for submission to PCR identification of the DNA of the parasite. Semen (41.7 percent) and smegma (50.0 percent) have similar positive incidence (P>0.05; Fisher's exact test), with 58.3 percent of the dogs positive for semen and/or smegma samples. The proportion of positivity for both semen and smegma was 33.3 percent, but 8.3 percent was positive only for semen, and 16.7 percent only for smegma, revealing a moderate agreement between tests (K=0.5; Kappa index). It was concluded that Leishmania infantum is present in the smegma of contaminated dogs and it can be a source of parasites for the semen and the bitch.(AU)

Tendo em vista a transmissão venérea da leishmaniose visceral do cão para a cadela, o objetivo deste estudo foi verificar se a superfície peniana e o esmegma de cães infectados poderiam ser a fonte de parasitas para a fêmea. Amostras de sêmen e esmegma de 12 cães infectados com Leishmania infantum foram submetidas à identificação do DNA do parasita por PCR. As incidências de positividade no sêmen (41,7 por cento) e no esmegma (50,0 por cento) foram semelhantes (P>0,05; teste exato de Fisher), sendo 58,3 por cento dos cães positivos para sêmen e/ou esmegma. A positividade para sêmen e esmegma juntos ocorreu em 33,3 por cento, mas em 8,3 por cento dos casos apenas no sêmen, e em 16,7 por cento apenas no esmegma, o que revela uma concordância moderada entre os testes (K=0,5; índice Kappa). Conclui-se que a Leishmania infantum está presente no esmegma de cães contaminados, podendo ser a fonte de parasitas para o sêmen e a cadela.(AU)

Hepatic granulomas in canine visceral leishmaniasis and clinical status / Granulomas hepáticos na leishmaniose visceral canina e classificação clínica

The histopathological description of intralobular hepatic granulomas in animals with a defined clinical status (asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic animals) was reported. Seventy-one mongrel dogs naturally infected with Leishmania chagasi were obtained from two Brazilian endemic areas: João Pessoa, PB and Belo Horizonte, MG. The hepatic parasite load was determined and compared to granuloma formation. Liver fragments from all infected animals showed remarkable leishmaniotic granulomatous inflammatory reaction. Granulomas with variable size were constituted by macrophages (parasitized or not with amastigotes of L. chagasi), some epithelioid cells, small numbers of lymphocytes, plasma cells, and rare neutrophils. Asymptomatic dogs had higher numbers of granulomas than oligosymptomatic and symptomatic animals from both geographical regions. However, the average diametric size of granulomas was very heterogeneous in all groups, independently of the geographic region (P>0.05). Parasite tissue load did not show any difference among liver fragments of all animals, especially when considering the defined clinical status and/or their geographic origin(AU)

Descreve-se a formação de granulomas hepáticos na leishmaniose canina em animais com classificação clínica definida - assintomáticos, oligossintomáticos e sintomáticos. Setenta e um animais, sem raça definida e naturalmente infectados com Leishmania chagasi, foram obtidos de duas regiões endêmicas brasileiras: João Pessoa, PB e Belo Horizonte, MG. A carga parasitária tecidual foi determinada mediante emprego do Leishmania Donovani Units (LDU) e comparada com a formação de granulomas hepáticos. Fragmentos de fígado de todos os animais infectados mostraram reação granulomatosa notadamente leishmaniótica. Granulomas de variáveis tamanhos eram constituídos por macrófagos, parasitados ou não com formas amastigotas de L. chagasi, algumas células epitelióides, pequeno número de linfócitos e plasmócitos, e raros neutrófilos. Cães assintomáticos apresentaram maior número de granulomas do que os animais oligossintomáticos e sintomáticos, em ambas as regiões geográficas. As médias dos diâmetros foram heterogêneas em todos os grupos, independente da região geográfica (P>0,05). Quanto ao parasitismo (LDU), não houve diferença entre as amostras de fígado, especialmente quando se consideraram a classificação clínica e a região geográfica(AU)

Canine visceral leishmaniasis: a remarkable histopathological picture of one asymptomatic animal reported from Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil / Leishmaniose visceral canina: um caso inusitado de um animal assintomático proveniente de Belo Horizonte, Minas Gerais

A remarkable histopathological picture of one asymptomatic dog naturally infected with Leishmania infantum (syn. chagasi) has been presented. Intracellular parasites were ease found in macrophages of all exanimated organs, especially in skin. Embedded paraffin tissues of liver, spleen, axillary and popliteal lymph nodes, and skin (ear, muzzle and abdomen) were stained by hematoxylin and eosin and by immunocytochemical reaction (streptoavidin-peroxidase method) to detect parasites. All organs showed an intense parasitism associated to severe pathological changes. All lymph nodes had conspicuous histological architecture alterations. Lymphocytes were replaced by macrophages stuffed with an intense number of amastigotes forms of Leishmania. The lymphoid nodules (without germinal centers) and the mantle zones in the cortex that surround the follicles were markedly attenuated. Livers showed small intralobular granulomas composed by macrophages loaded with amastigotes. Spleens had an intense depression of the white pulp whereas the lymphocytes were replaced by parasitized macrophages. All fragments of different anatomical region of skin (ear, muzzle and abdomen) showed a diffuse chronic inflammation. The cellular exudate was composed by macrophages, plasmocytes and lymphocytes. Macrophages loaded with amastigotes were ease found in all tissue fragments, but more intense in ear and muzzle. Thus, this fact enhances the importance of asymptomatic dogs in the epidemiology of visceral leishmaniasis.(AU)

Relata-se um quadro histológico caracterizado por lesões acentuadas em tecidos de um cão assintomático naturalmente infectado por Leishmania infantum (sin. chagasi). Cortes parafinados de fígado, baço, linfonodos (cervical, axilar e poplíteo) e pele (orelha, espelho nasal e abdome) foram corados pela técnica de hematoxilina-eosina e pela técnica imunoistoquímica de estreptoavidina-peroxidase para detecção de formas amastigotas de Leishmania. Os linfonodos apresentaram profundas alterações estruturais. Em todos observou-se depleção linfocitária, principalmente da córtex, com substituição dos linfócitos por macrófagos abarrotados de formas amastigotas de Leishmania. No fígado, observou-se a presença de pequenos granulomas intralobulares compostos por macrófagos intensamente parasitados, plasmócitos e raros linfócitos. No baço, a alteração marcante foi a depressão da polpa branca. Os folículos linfóides foram substituídos por macrófagos intensamente parasitados com as formas amastigotas de Leishmania. Fragmentos de pele de orelha, espelho nasal e abdome apresentaram reação inflamatória crônica e difusa com exsudato celular composto por macrófagos, plasmócitos e linfócitos. Parasitos foram detectados em todos os tecidos estudados e mais numerosos na pele da orelha e focinho. Os achados mostram a importância de cães assintomáticos na epidemiologia da leishmaniose visceral.(AU)

Histopathological and immunohistochemical study of the gastrointestinal tract from a dog naturally infected with Leishmania (Leishmania) chagasi: a case report

Samples of stomach, duodenum, jejunun, ileum, cecum and colon were collected for Giemsa-smears ("imprints") from one asymptomatic mongrel dog, naturally infected with Leishmania (L) chagasi. Other fragments were obtained and fixed in formalin (10% and buffered) for histopathological and immunohistochemical studies. The immunohistochemistry was carried out by a streptavidin-peroxidase technique and it allowed to detect amastigote forms of Leishmania chagasi in the different paraffin gut sections. The principal lesion observed was a discrete to moderate chronic inflammatory reaction in the mucosa and submucosa in all fragments of the gastrointestinal tract (GIT). A chronic cellular exsudate was observed in all GIT tissues and it was composed by mononuclear cells (monocytes, plasmocytes and lymphocytes). A comparison between the two techniques showed that the immunohistochemistry study is the best method to detect amastigote forms of Leishmania.

Um cão assintomático e naturalmente infectado com Leishmania (L.) chagasi foi sacrificado e fragmentos do estômago, duodeno, jejuno, íleo, ceco e cólon foram coletados para confecção de esfregaços por aposição corados pelo Giemsa ("imprints"). Outros fragmentos foram obtidos e fixados em formol tamponado a 10% para estudos histopatológicos e imunoistoquímicos. Empregou-se a técnica imunoistoquímica de estreptavidina-peroxidase a qual possibilitou detecção de formas amastigotas de Leishmaniachagasi em todos os segmentos do trato gastrintestinal (TGI). A principal lesão observada foi a reação inflamatória crônica de intensidade variável, localizada principalmente na mucosa e submucosa de todos os segmentos do TGI. O exsudato celular era composto de monócitos, plasmócitos e linfócitos. O estudo imunoistoquímico mostrou a presença de amastigotas de Leishmania em todos os fragmentos do TGI. A pesquisa de parasitas não pôde ser observada de forma satisfatória pela técnica da HE. Concluiu-se que a técnica de imunoistoquímica como diagnóstico da doença no caso de envolvimento gastrintestinal é eficaz.

A new methodology for the improvement of diagnostic immunohistochemistry in canine veterinary pathology: automated system using human monoclonal and polyclonal antibodies

The authors describe their experience with an automated immunohistochemical system applied to canine tissue samples. Twenty human cellular markers specific monoclonal and polyclonal antibodies and two different antigen retrieval methods were used in normal and neoplastic breast tissue, as well as skin samples obtained from female dogs of pure and mixed breeds. The antibodies tested were the most frequently used in human and veterinary medicine studies, employed with diagnostic purposes in breast pathology, as well as in cancer research. Most of them may be used to study other normal and abnormal tissues and included cytokeratins, progesterone receptor, c-erbB2, p53, MIB-1, PCNA, EMA, vimentin, desmin, alpha-actin, S-100, pan-cadherin, and E-cadherin. The results demonstrated that using an automated staining system it is possible to use different human markers in veterinary pathology. The advantages of automated immunohistochemistry are improved quality, reproducibility, speed, and standardisation.

Os autores descrevem sua experiência com um sistema automático de imunoistoquímica aplicada à amostras de tecido canino. Foram utilizados 20 anticorpos humanos monoclonais e policlonais e dois diferentes métodos de recuperação antigênica em tecido mamário normal e neoplásico, bem como em amostras de pele obtidas de cadelas. Os anticorpos testados estão entre os mais usados em estudos de medicina humana e veterinária, com finalidade de diagnóstico em patologia mamária, bem como na pesquisa do câncer. Muitos deles podem ser usados para estudar outros tecidos normais e com alterações e incluem citoqueratinas, receptor de progesterona, c-erbB2, p53, MIB-1, PCNA, EMA, vimentina, desmina, alfa-actina, S-100, pan-caderina e E-caderina. Os resultados demonstraram que usando um sistema automático de imunoistoquímica é possível usar diferentes marcadores humanos em patologia veterinária. As vantagens da imunoistoquímica automatizada são melhora da qualidade, reprodutibilidade, rapidez e padronização.