Gene characterization of Bradyrhizobium spp. strains contrasting in biological nitrogen fixation efficiency in soybean / Caracterização dos genes de cepas de Bradyrhizobium spp. contrastantes quanto à eficiência de fixação biológica de nitrogênio em soja

Bacteria from genus Bradyrhizobium can establish symbiosis with soybean and supply the plant nitrogen demands via biological nitrogen fixation (BNF). This study aimed to characterize genes related to BNF efficiency in B. japonicum strains contrasting in BNF efficiency. These gene sequences were previously identified in B. japonicum (strain S370) as probably related to the BNF efficiency in soybean using a DNA subtractive technique. These genes were amplified with primers based on B. japonicum USDA110 genome. The PCR products were digested with restriction endonucleases and the RFLP products were analyzed by horizontal electrophoresis. Among the four genes, only blr3208 and blr4511 amplified for most of the strains. Neither polymorphism of the restriction profile of blr3208 and blr4511 genes nor with endonuclease for PCR-RFLP was observed. The contrasting strains had blr3208 and blr4511 genes sequenced and the multiple alignment analysis of nucleotide sequences showed the presence of preserved internal regions, confirming the analysis with PCR-RFLP. The blr3208 and blr4511 genes are highly conserved among B. japonicum strains, which may be related to adaptive function during the evolutionary process of Bradyrhizobium genus.

Bactérias do gênero Bradyrhizobium podem estabelecer simbiose com a soja e suprir a demanda de nitrogênio pela fixação biológica de nitrogênio (FBN). Este estudo teve como objetivo caracterizar genes relacionados à eficiência na FBN em cepas de B. japonicum contrastantes quanto a eficiência na FBN. As sequências gênicas relacionadas à eficiência da FBN em soja foram previamente identificadas na cepa S370 de B. japonicum utilizando uma técnica de DNA subtrativo. Os genes foram amplificados com iniciadores construídos a partir do genoma da cepa USDA 110. Os produtos de PCR foram digeridos com endonucleases de restrição e os produtos de RFLP foram analisados por eletroforese horizontal. Dos quatro genes estudados, apenas blr 3208 e blr 4511 amplificaram na maioria das cepas. Não foi observado polimorfismo no perfil de restrição dos genes blr 3208 e blr 4511 por PCR-RFLP. As cepas contrastantes tiveram os genes blr 3208 e blr 4511 sequenciados e a comparação das sequências nucleotídicas por análise de alinhamento múltiplo mostrou a presença de regiões internas preservadas, confirmando a análise realizada por PCR-RFLP. Os genes blr 3208 e blr 4511 são altamente conservados entre as cepas de B. japonicum, o que pode estar relacionado à função adaptativa durante o processo evolutivo do gênero Bradyrhizobium.

Gene characterization of Bradyrhizobium spp. strains contrasting in biological nitrogen fixation efficiency in soybean / Caracterização dos genes de cepas de Bradyrhizobium spp. contrastantes quanto à eficiência de fixação biológica de nitrogênio em soja

Bacteria from genus Bradyrhizobium can establish symbiosis with soybean and supply the plant nitrogen demands via biological nitrogen fixation (BNF). This study aimed to characterize genes related to BNF efficiency in B. japonicum strains contrasting in BNF efficiency. These gene sequences were previously identified in B. japonicum (strain S370) as probably related to the BNF efficiency in soybean using a DNA subtractive technique. These genes were amplified with primers based on B. japonicum USDA110 genome. The PCR products were digested with restriction endonucleases and the RFLP products were analyzed by horizontal electrophoresis. Among the four genes, only blr3208 and blr4511 amplified for most of the strains. Neither polymorphism of the restriction profile of blr3208 and blr4511 genes nor with endonuclease for PCR-RFLP was observed. The contrasting strains had blr3208 and blr4511 genes sequenced and the multiple alignment analysis of nucleotide sequences showed the presence of preserved internal regions, confirming the analysis with PCR-RFLP. The blr3208 and blr4511 genes are highly conserved among B. japonicum strains, which may be related to adaptive function during the evolutionary process of Bradyrhizobium genus.(AU)

Bactérias do gênero Bradyrhizobium podem estabelecer simbiose com a soja e suprir a demanda de nitrogênio pela fixação biológica de nitrogênio (FBN). Este estudo teve como objetivo caracterizar genes relacionados à eficiência na FBN em cepas de B. japonicum contrastantes quanto a eficiência na FBN. As sequências gênicas relacionadas à eficiência da FBN em soja foram previamente identificadas na cepa S370 de B. japonicum utilizando uma técnica de DNA subtrativo. Os genes foram amplificados com iniciadores construídos a partir do genoma da cepa USDA 110. Os produtos de PCR foram digeridos com endonucleases de restrição e os produtos de RFLP foram analisados por eletroforese horizontal. Dos quatro genes estudados, apenas blr 3208 e blr 4511 amplificaram na maioria das cepas. Não foi observado polimorfismo no perfil de restrição dos genes blr 3208 e blr 4511 por PCR-RFLP. As cepas contrastantes tiveram os genes blr 3208 e blr 4511 sequenciados e a comparação das sequências nucleotídicas por análise de alinhamento múltiplo mostrou a presença de regiões internas preservadas, confirmando a análise realizada por PCR-RFLP. Os genes blr 3208 e blr 4511 são altamente conservados entre as cepas de B. japonicum, o que pode estar relacionado à função adaptativa durante o processo evolutivo do gênero Bradyrhizobium.(AU)

Iron and zinc mycelial bioaccumulation in Agaricus subrufescens strains / Bioacumulação micelial de ferro e zinco em linhagens de Agaricus subrufescens

Agaricus subrufescens, a basidiomycete native to Brazil, is worldwide cultivated due to its medicinal properties. This fungus is capable of bioaccumulating metals in the mycelial biomass when cultured in the presence of them; however, this capacity is little explored for functional food production. This study aimed to evaluate the amount of iron or zinc bioaccumulated in the vegetative mycelium of sixteen strains of A. subrufescens. Mycelia were grown in malt extract agar added with 50 mg/L of iron or with 7.5 mg/L of zinc. The metal bioaccumulation in the mycelial biomass was strain-dependent. In general, metal can inhibit or stimulate the mycelial growth ranging from -81 to +78% for iron and from -86 to +100% for zinc. The highest bioaccumulated iron and zinc concentrations in the mycelial biomass was 2,595.65 mg/kg and 1,655.83 mg/kg, respectively and occurred in the U4-4 strain. The supplementation of mycelial biomass using iron or zinc is an alternative to develop food supplements, that can be used both in the human and animal diet and in the prevention of diseases.

Agaricus subrufescens, basidiomiceto nativo do Brasil, é cultivado mundialmente devido aos seus aspectos medicinais. Este fungo tem capacidade de bioacumulação de metais na biomassa micelial, no entanto, esta propriedade é pouco explorada para a produção de alimentos funcionais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a quantidade de ferro ou zinco bioacumulada no micélio vegetativo de diversas linhagens de Agaricus subrufescens. Foram utilizadas 16 linhagens de A. subrufescens da coleção de culturas da Universidade Paranaense. O crescimento da biomassa micelial e a bioacumulação de ferro e zinco foram avaliados em micélio crescido em ágar extrato de malte adicionado de 50 mg L-1 de ferro ou 7,5 mg L-1 de zinco. A bioacumulação dos metais na biomassa micelial foi linhagem dependente. De forma geral, os metais podem inibir ou estimular o crescimento com variação entre de -81 a +78% para o ferro e de -86 a +100% para o zinco. A maior concentração de ferro na biomassa foi para o ferro de 2595,65 mg kg-1 e para o zinco de 1655,83 mg kg-1, ambos para a linhagem U4-4. O enriquecimento da biomassa micelial com ferro e/ou zinco é uma alternativa ao desenvolvimento de novos alimentos ou suplementos alimentares fonte de ferro e zinco de origem não-animal.

Iron and zinc mycelial bioaccumulation in Agaricus subrufescens strains / Bioacumulação micelial de ferro e zinco em linhagens de Agaricus subrufescens

Agaricus subrufescens, a basidiomycete native to Brazil, is worldwide cultivated due to its medicinal properties. This fungus is capable of bioaccumulating metals in the mycelial biomass when cultured in the presence of them; however, this capacity is little explored for functional food production. This study aimed to evaluate the amount of iron or zinc bioaccumulated in the vegetative mycelium of sixteen strains of A. subrufescens. Mycelia were grown in malt extract agar added with 50 mg/L of iron or with 7.5 mg/L of zinc. The metal bioaccumulation in the mycelial biomass was strain-dependent. In general, metal can inhibit or stimulate the mycelial growth ranging from -81 to +78% for iron and from -86 to +100% for zinc. The highest bioaccumulated iron and zinc concentrations in the mycelial biomass was 2,595.65 mg/kg and 1,655.83 mg/kg, respectively and occurred in the U4-4 strain. The supplementation of mycelial biomass using iron or zinc is an alternative to develop food supplements, that can be used both in the human and animal diet and in the prevention of diseases.(AU)

Agaricus subrufescens, basidiomiceto nativo do Brasil, é cultivado mundialmente devido aos seus aspectos medicinais. Este fungo tem capacidade de bioacumulação de metais na biomassa micelial, no entanto, esta propriedade é pouco explorada para a produção de alimentos funcionais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a quantidade de ferro ou zinco bioacumulada no micélio vegetativo de diversas linhagens de Agaricus subrufescens. Foram utilizadas 16 linhagens de A. subrufescens da coleção de culturas da Universidade Paranaense. O crescimento da biomassa micelial e a bioacumulação de ferro e zinco foram avaliados em micélio crescido em ágar extrato de malte adicionado de 50 mg L-1 de ferro ou 7,5 mg L-1 de zinco. A bioacumulação dos metais na biomassa micelial foi linhagem dependente. De forma geral, os metais podem inibir ou estimular o crescimento com variação entre de -81 a +78% para o ferro e de -86 a +100% para o zinco. A maior concentração de ferro na biomassa foi para o ferro de 2595,65 mg kg-1 e para o zinco de 1655,83 mg kg-1, ambos para a linhagem U4-4. O enriquecimento da biomassa micelial com ferro e/ou zinco é uma alternativa ao desenvolvimento de novos alimentos ou suplementos alimentares fonte de ferro e zinco de origem não-animal.(AU)

Long-term cryopreservation of basidiomycetes

Abstract Basidiomycetes have several biotechnological and industrial applications such as enzyme production, bioremediation, pharmaceutical and functional food production. Due to climatic features, the preservation of several basidiomycetes is threatened, and to guarantee the preservation of this genetic resource, the development of long-term preservation techniques is necessary once there is no universal protocol for the cryopreservation of basidiomycetes. Cryopreservation is a technique in which microorganisms are submitted to ultralow temperatures. Therefore, this study aimed to collect information on the main conditions for long-term cryopreservation of basidiomycetes in the last 20 years. Scientific articles on cryopreservation of basidiomycetes published from 1997 to 2016, were researched, and only the studies on two intervals of cryopreservation were considered: from 1 to 2 years and for longer than 2 years. The analyzed conditions of basidiomycete cryopreservation were: most studied genera, cryopreservation temperature, substrate, cryoprotectant (and preservation substrate), cryopreservation period, thawing temperature and cultivation medium after thawing, physiological and genetic stability of basidiomycetes after thawing in cryopreservation. In this review, the viability of the main cryopreservation conditions of basidiomycetes studied in the last 20 years are presented and discussed.

Long-term cryopreservation of basidiomycetes

Basidiomycetes have several biotechnological and industrial applications such as enzyme production, bioremediation, pharmaceutical and functional food production. Due to climatic features, the preservation of several basidiomycetes is threatened, and to guarantee the preservation of this genetic resource, the development of long-term preservation techniques is necessary once there is no universal protocol for the cryopreservation of basidiomycetes. Cryopreservation is a technique in which microorganisms are submitted to ultralow temperatures. Therefore, this study aimed to collect information on the main conditions for long-term cryopreservation of basidiomycetes in the last 20 years. Scientific articles on cryopreservation of basidiomycetes published from 1997 to 2016, were researched, and only the studies on two intervals of cryopreservation were considered: from 1 to 2 years and for longer than 2 years. The analyzed conditions of basidiomycete cryopreservation were: most studied genera, cryopreservation temperature, substrate, cryoprotectant (and preservation substrate), cryopreservation period, thawing temperature and cultivation medium after thawing, physiological and genetic stability of basidiomycetes after thawing in cryopreservation. In this review, the viability of the main cryopreservation conditions of basidiomycetes studied in the last 20 years are presented and discussed.(AU)

Cryopreservation at -75 °C of Agaricus subrufescens on wheat grains with sucrose

Abstract Agaricus subrufescens is a basidiomycete which is studied because of its medicinal and gastronomic importance; however, less attention has been paid to its preservation. This study aimed to evaluate the effect of sucrose addition to substrate and cryotube on the viability of Agaricus subrufescens cryopreserved at -20 °C and at -75 °C for one and two years. Zero, 10% or 20% sucrose was added to potato dextrose agar or wheat grain. The mycelia were cryopreserved in the absence of cryoprotectant or with sucrose solutions at 15%, 30% or 45%. After one or two years at -75 °C or at -20 °C, mycelia were thawed and evaluated about viability, initial time of growth, colony diameter and genomic stability. Cryopreservation at -20 °C is not effective to keep mycelial viability of this fungus. Cryopreservation at -75 °C is effective when sucrose is used in substrates and/or cryotubes. Without sucrose, cryopreservation at -75 °C is effective only when wheat grains are used. Physiological characteristic as mycelial colony diameter is negatively affected when potato dextrose agar is used and unaffected when wheat grain is used after two-year cryopreservation at -75 °C. The fungus genome does not show alteration after two-year cryopreservation at -75 °C.

Cryopreservation at -75 °C of Agaricus subrufescens on wheat grains with sucrose

Agaricus subrufescens is a basidiomycete which is studied because of its medicinal and gastronomic importance; however, less attention has been paid to its preservation. This study aimed to evaluate the effect of sucrose addition to substrate and cryotube on the viability of Agaricus subrufescens cryopreserved at -20 °C and at -75 °C for one and two years. Zero, 10% or 20% sucrose was added to potato dextrose agar or wheat grain. The mycelia were cryopreserved in the absence of cryoprotectant or with sucrose solutions at 15%, 30% or 45%. After one or two years at -75 °C or at -20 °C, mycelia were thawed and evaluated about viability, initial time of growth, colony diameter and genomic stability. Cryopreservation at -20 °C is not effective to keep mycelial viability of this fungus. Cryopreservation at -75 °C is effective when sucrose is used in substrates and/or cryotubes. Without sucrose, cryopreservation at -75 °C is effective only when wheat grains are used. Physiological characteristic as mycelial colony diameter is negatively affected when potato dextrose agar is used and unaffected when wheat grain is used after two-year cryopreservation at -75 °C. The fungus genome does not show alteration after two-year cryopreservation at -75 °C.(AU)

Atividade residual e carência irregular do ácido diclorofenoxiacético (2, 4-d) no desenvolvimento inicial da soja / Residual activity and irregular depletion of dichlorophenoxyactic acid (2, 4-d) in the early development of soybean / Actividad residual y carencia irregular del ácido diclorofenoxiacético (2, 4-d) en el desarrollo inicial de la soja

O 2,4-D (ácido diclorofenoxiacético) é amplamente utilizado no controle seletivo, pós-emergência, de plantas de folha estreita, como trigo, milho, arroz, entre outras. Contudo seu uso indiscriminado pode ocasionar problemas no desenvolvimento da cultura. O objetivo do trabalho foi avaliar os danos causados pelo uso inadequado do 2,4-D no desenvolvimento inicial da soja (Glycine max). Os tratamentos consistiram na combinação de cinco períodos de carência: um, quatro, oito, 12 e 15 dias antes da semeadura da soja e duas doses de aplicação: a dose recomendada e a dose duplicada (L/ha), consistindo em um esquema fatorial 5x2 com três repetições. As plantas foram cultivadas por 44 dias, e em seguida coletadas e analisadas quanto à taxa de germinação (%), número de rebrota, índice de clorofila, comprimento de raiz e parte aérea (cm), massa seca e fresca (g). A dose duplicada revelou maior efeito sobre todas as variáveis analisadas, reduzindo em 20% a porcentagem de emergência. O índice de clorofila decresceu quando comparados o menor período de carência (um dia) e o maior (15 dias), e na dose duplicada. A massa seca também foi superior na dose recomendada, assim como o comprimento da raiz e da parte aérea. Os períodos de carência de um, quatro e oito dias foram os que mais influenciaram o crescimento da raiz.(AU)

Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) is widely used in the selective, post-emergence control of narrow-leaf plants such as wheat, corn, and rice, among others. However, its uncontrolled use can cause problems in the development of the crop. The purpose of this paper was to evaluate the damage caused by the inadequate use of 2,4-D in the early development of soybean (Glycine max). The treatments consisted of a combination of five grace periods: 1, 4, 8, 12 and 15 days before sowing; and two application doses: the recommended dose and a duplicate dose (L/ha), consisting of a factorial matrix of 5x2, with three replicates. The plants were cultivated for 44 days, then collected and analyzed for germination rate (%), regrowth number, chlorophyll index, root and shoot length (cm), dry and fresh mass (g). The duplicate dose showed a greater effect on all analyzed variables, reducing the emergency percentage by 20%. The chlorophyll index decreased when compared to the shortest (1 day) and longest (15 days) grace periods, and in the duplicate dose. Dry mass was also higher when using the recommended dose, as well as the root and shoot length. Grace periods of 1, 4 and 8 days were the ones that were most influenced the root growth.(AU)

El 2,4-D (ácido diclorofenoxiacético) es ampliamente utilizado en el control selectivo, pos emergencia, de plantas de hoja estrecha, como trigo, maíz, arroz, entre otras. Sin embargo, su uso indiscriminado puede ocasionar problemas en el desarrollo de la cultura. El objetivo del trabajo fue evaluar los daños causados por el uso inadecuado del 2,4-D en el desarrollo inicial de la soja (Glycine max). Los tratamientos consistieron en la combinación de cinco períodos de carencia: 1, 4, 8, 12 y 15 días antes de la siembra de la soja y dos dosis de aplicación: la dosis recomendada y la dosis duplicada (L/ha), consistente en un esquema factorial 5x2 con tres repeticiones. Las plantas fueron cultivadas por 44 días, y luego recolectadas y analizadas en cuanto a la tasa de germinación (%), número de rebrote, índice de clorofila, longitud de raíz y parte aérea (cm), masa seca y fresca (g). La dosis duplicada reveló un mayor efecto sobre todas las variables analizadas, reduciendo en un 20% el porcentaje de emergencia. El índice de clorofila disminuyó cuando se comparó el menor período de carencia (1 día) y el mayor (15 días), y en la dosis duplicada. La masa seca también fue superior en la dosis recomendada, así como la longitud de la raíz y de la parte aérea. Los períodos de carencia de 1, 4 y 8 días fueron los que más influenciaron el crecimiento de la raíz.(AU)

Utilização de óleo essencial de duas variedades de laranja na eclosão de Meloidogyne javanica / Use of essential oil from two varieties of orange in the hatching of Meloidogyne javanica / Utilización de aceite esencial de dos variedades de naranja en la eclosión de Meloidogyne javanica

O Brasil é o maior produtor de laranja do mundo. Cultura rica em óleos essenciais de ampla aplicação, como no controle de pragas e patógenos, dentre eles os fitonematoides, causadores de prejuízos relevantes à agricultura. Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar a porcentagem de eclosão de juvenis de M. javanica submetidos à diferentes concentrações de óleos essenciais de duas variedades de laranja, Pêra Rio e Folha Murcha, em condições in vitro. Os óleos essenciais foram extraídos das variedades de laranja (Citrus sinensis) Pêra Rio e Folha Murcha, pela técnica de hidrodestilação. O experimento foi instalado em arranjo fatorial 2X8, DIC, sendo oito concentrações (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 e 500 µg mL-1) e dois tipos de OE, avaliados em três períodos (4 e 16 dias). Em cada unidade experimental, tubos de ensaio 10x75 mm, adicionou-se 1 mL de suspensão de nematoides contendo 50 ovos e 1 mL de emulsão para cada concentração, avaliando-se a porcentagem de juvenis eclodidos. As concentrações dos óleos essenciais das variedades influenciaram (p≤0,05) na porcentagem de eclosão de juvenis de M. javanica, em todos os períodos avaliados. Para a maioria das concentrações, aos quatro e 16 dias, o óleo essencial da var. Pêra Rio foi mais eficiente na redução da eclosão, quando comparado a var. Folha Murcha.(AU)

Brazil is the largest producer of oranges in the world. This crop is rich in essential oils which are used in a wide range of applications, such as controlling pests and pathogens. Phytonematodes are among such pests, and are responsible for causing harmful damages to agriculture. Thus, the purpose of this study was to evaluate the percentage of hatching of M. javanica juveniles submitted to different concentrations of orange essential oil under in-vitro conditions. Oils were extracted from two varieties of orange (Citrus sinensis) popularly known in Brazil as Pera Rio and Folha Murcha, using the hydro-distillation technique. The experiment was carried out in a 2X8 factorial arrangement, at eight concentrations (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 and 500 µg mL-1) and two types of essential oils, evaluated in two periods (4 and 16 days). In each experimental unit, 10x75-mm test tubes received 1-mL nematode suspension containing 50 eggs and 1-mL of emulsion added for each concentration. Then, the percentage of hatched juveniles was evaluated. The concentration of essential oils from the varieties influenced (p≤0.05) the percentage of hatching of M. javanica juveniles in all evaluated periods. For most concentrations, at 4 and 16 days, the Pera Rio variety was more efficient at reducing hatching when compared to the Folha Murcha variety.(AU)

Brasil es el mayor productor de naranja del mundo. Cultura rica en aceites esenciales de amplia aplicación, como en el control de plagas y patógenos, entre ellos los fitonematodos, causantes de perjuicios relevantes a la agricultura. Así, el objetivo del trabajo fue evaluar el porcentaje de eclosión de juveniles de M. javanica sometidos a diferentes concentraciones de aceites esenciales de dos variedades de naranja, Pera Río y Hoja Mustia, en condiciones in vitro. Los aceites esenciales fueron extraídos de las variedades de naranja (Citrus sinensis) Pera Río y Hoja Mustia, por la técnica de hidrodestilación. El experimento fue instalado en un arreglo factorial 2x8, DIC, siendo ocho concentraciones (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 y 500 µg mL-1) y dos tipos de OE, evaluados en tres períodos (4 y 16 días). En cada unidad experimental, tubos de ensayo 10x75 mm, se añadieron 1 mL de suspensión de nematodos conteniendo 50 huevos y 1 mL de emulsión para cada concentración, evaluando el porcentaje de juveniles eclosionados. Las concentraciones de los aceites esenciales de las variedades influenciaron (p≤0,05) en el porcentaje de eclosión de juveniles de M. javanica, en todos los períodos evaluados. Para la mayoría de las concentraciones, a los cuatro y 16 días, el aceite esencial de la var. Pera Río fue más eficiente en la reducción de la eclosión, cuando comparado a var. Hoja Mustia.(AU)

Atividade residual e carência irregular do ácido diclorofenoxiacético (2, 4-d) no desenvolvimento inicial da soja / Residual activity and irregular depletion of dichlorophenoxyactic acid (2, 4-d) in the early development of soybean / Actividad residual y carencia irregular del ácido diclorofenoxiacético (2, 4-d) en el desarrollo inicial de la soja

O 2,4-D (ácido diclorofenoxiacético) é amplamente utilizado no controle seletivo, pós-emergência, de plantas de folha estreita, como trigo, milho, arroz, entre outras. Contudo seu uso indiscriminado pode ocasionar problemas no desenvolvimento da cultura. O objetivo do trabalho foi avaliar os danos causados pelo uso inadequado do 2,4-D no desenvolvimento inicial da soja (Glycine max). Os tratamentos consistiram na combinação de cinco períodos de carência: um, quatro, oito, 12 e 15 dias antes da semeadura da soja e duas doses de aplicação: a dose recomendada e a dose duplicada (L/ha), consistindo em um esquema fatorial 5x2 com três repetições. As plantas foram cultivadas por 44 dias, e em seguida coletadas e analisadas quanto à taxa de germinação (%), número de rebrota, índice de clorofila, comprimento de raiz e parte aérea (cm), massa seca e fresca (g). A dose duplicada revelou maior efeito sobre todas as variáveis analisadas, reduzindo em 20% a porcentagem de emergência. O índice de clorofila decresceu quando comparados o menor período de carência (um dia) e o maior (15 dias), e na dose duplicada. A massa seca também foi superior na dose recomendada, assim como o comprimento da raiz e da parte aérea. Os períodos de carência de um, quatro e oito dias foram os que mais influenciaram o crescimento da raiz.

Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) is widely used in the selective, post-emergence control of narrow-leaf plants such as wheat, corn, and rice, among others. However, its uncontrolled use can cause problems in the development of the crop. The purpose of this paper was to evaluate the damage caused by the inadequate use of 2,4-D in the early development of soybean (Glycine max). The treatments consisted of a combination of five grace periods: 1, 4, 8, 12 and 15 days before sowing; and two application doses: the recommended dose and a duplicate dose (L/ha), consisting of a factorial matrix of 5x2, with three replicates. The plants were cultivated for 44 days, then collected and analyzed for germination rate (%), regrowth number, chlorophyll index, root and shoot length (cm), dry and fresh mass (g). The duplicate dose showed a greater effect on all analyzed variables, reducing the emergency percentage by 20%. The chlorophyll index decreased when compared to the shortest (1 day) and longest (15 days) grace periods, and in the duplicate dose. Dry mass was also higher when using the recommended dose, as well as the root and shoot length. Grace periods of 1, 4 and 8 days were the ones that were most influenced the root growth.

El 2,4-D (ácido diclorofenoxiacético) es ampliamente utilizado en el control selectivo, pos emergencia, de plantas de hoja estrecha, como trigo, maíz, arroz, entre otras. Sin embargo, su uso indiscriminado puede ocasionar problemas en el desarrollo de la cultura. El objetivo del trabajo fue evaluar los daños causados por el uso inadecuado del 2,4-D en el desarrollo inicial de la soja (Glycine max). Los tratamientos consistieron en la combinación de cinco períodos de carencia: 1, 4, 8, 12 y 15 días antes de la siembra de la soja y dos dosis de aplicación: la dosis recomendada y la dosis duplicada (L/ha), consistente en un esquema factorial 5x2 con tres repeticiones. Las plantas fueron cultivadas por 44 días, y luego recolectadas y analizadas en cuanto a la tasa de germinación (%), número de rebrote, índice de clorofila, longitud de raíz y parte aérea (cm), masa seca y fresca (g). La dosis duplicada reveló un mayor efecto sobre todas las variables analizadas, reduciendo en un 20% el porcentaje de emergencia. El índice de clorofila disminuyó cuando se comparó el menor período de carencia (1 día) y el mayor (15 días), y en la dosis duplicada. La masa seca también fue superior en la dosis recomendada, así como la longitud de la raíz y de la parte aérea. Los períodos de carencia de 1, 4 y 8 días fueron los que más influenciaron el crecimiento de la raíz.

Utilização de óleo essencial de duas variedades de laranja na eclosão de Meloidogyne javanica / Use of essential oil from two varieties of orange in the hatching of Meloidogyne javanica / Utilización de aceite esencial de dos variedades de naranja en la eclosión de Meloidogyne javanica

O Brasil é o maior produtor de laranja do mundo. Cultura rica em óleos essenciais de ampla aplicação, como no controle de pragas e patógenos, dentre eles os fitonematoides, causadores de prejuízos relevantes à agricultura. Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar a porcentagem de eclosão de juvenis de M. javanica submetidos à diferentes concentrações de óleos essenciais de duas variedades de laranja, Pêra Rio e Folha Murcha, em condições in vitro. Os óleos essenciais foram extraídos das variedades de laranja (Citrus sinensis) Pêra Rio e Folha Murcha, pela técnica de hidrodestilação. O experimento foi instalado em arranjo fatorial 2X8, DIC, sendo oito concentrações (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 e 500 µg mL-1) e dois tipos de OE, avaliados em três períodos (4 e 16 dias). Em cada unidade experimental, tubos de ensaio 10x75 mm, adicionou-se 1 mL de suspensão de nematoides contendo 50 ovos e 1 mL de emulsão para cada concentração, avaliando-se a porcentagem de juvenis eclodidos. As concentrações dos óleos essenciais das variedades influenciaram (p≤0,05) na porcentagem de eclosão de juvenis de M. javanica, em todos os períodos avaliados. Para a maioria das concentrações, aos quatro e 16 dias, o óleo essencial da var. Pêra Rio foi mais eficiente na redução da eclosão, quando comparado a var. Folha Murcha.(AU)

Brazil is the largest producer of oranges in the world. This crop is rich in essential oils which are used in a wide range of applications, such as controlling pests and pathogens. Phytonematodes are among such pests, and are responsible for causing harmful damages to agriculture. Thus, the purpose of this study was to evaluate the percentage of hatching of M. javanica juveniles submitted to different concentrations of orange essential oil under in-vitro conditions. Oils were extracted from two varieties of orange (Citrus sinensis) popularly known in Brazil as Pera Rio and Folha Murcha, using the hydro-distillation technique. The experiment was carried out in a 2X8 factorial arrangement, at eight concentrations (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 and 500 µg mL-1) and two types of essential oils, evaluated in two periods (4 and 16 days). In each experimental unit, 10x75-mm test tubes received 1-mL nematode suspension containing 50 eggs and 1-mL of emulsion added for each concentration. Then, the percentage of hatched juveniles was evaluated. The concentration of essential oils from the varieties influenced (p≤0.05) the percentage of hatching of M. javanica juveniles in all evaluated periods. For most concentrations, at 4 and 16 days, the Pera Rio variety was more efficient at reducing hatching when compared to the Folha Murcha variety.(AU)

Brasil es el mayor productor de naranja del mundo. Cultura rica en aceites esenciales de amplia aplicación, como en el control de plagas y patógenos, entre ellos los fitonematodos, causantes de perjuicios relevantes a la agricultura. Así, el objetivo del trabajo fue evaluar el porcentaje de eclosión de juveniles de M. javanica sometidos a diferentes concentraciones de aceites esenciales de dos variedades de naranja, Pera Río y Hoja Mustia, en condiciones in vitro. Los aceites esenciales fueron extraídos de las variedades de naranja (Citrus sinensis) Pera Río y Hoja Mustia, por la técnica de hidrodestilación. El experimento fue instalado en un arreglo factorial 2x8, DIC, siendo ocho concentraciones (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 y 500 µg mL-1) y dos tipos de OE, evaluados en tres períodos (4 y 16 días). En cada unidad experimental, tubos de ensayo 10x75 mm, se añadieron 1 mL de suspensión de nematodos conteniendo 50 huevos y 1 mL de emulsión para cada concentración, evaluando el porcentaje de juveniles eclosionados. Las concentraciones de los aceites esenciales de las variedades influenciaron (p≤0,05) en el porcentaje de eclosión de juveniles de M. javanica, en todos los períodos evaluados. Para la mayoría de las concentraciones, a los cuatro y 16 días, el aceite esencial de la var. Pera Río fue más eficiente en la reducción de la eclosión, cuando comparado a var. Hoja Mustia.(AU)

Interação entre nematicidas e herbicidas pré-emergentes no desenvolvimento inicial da cultura da cana-de-açúcar / Interaction between nematicides and pre-emergent herbicide in the initial development of sugar cane / Interacción entre nematicidas y herbicidas pre emergentes en el desarrollo inicial de la cultura de caña de azúcar

O objetivo do trabalho foi avaliar a interação do herbicida tebuthiuron (Combine® 500 SC), com nematicidas carbofuram (Furadan® 350 SC) e benfuracarbe (Pottente®), aplicados no plantio da cultura da cana-de-açúcar (RB 867515). O experimento foi conduzido em casa de vegetação da Universidade Paranaense, em Umuarama ­ PR, no período de abril a agosto de 2014. Foi instalado em vasos com capacidade para 4,5 L, contendo uma planta por vaso, em delineamento inteiramente casualizado, com seis tratamentos e quatro repetições, sendo os tratamentos testemunha (T1), sem aplicação de produtos; aplicação isolada de carbofuran (T2); aplicação isolada de benfuracarbe (T3); aplicação isolada de tebuthiuron (T4); aplicação combinada de carbofuran e tebuthiuron (T5) e aplicação combinada de benfuracarbe e tebuthiuron (T6). O experimento foi submetido a duas avaliações, 45 e 90 dias após o plantio (DAP) sendo que na primeira, as variáveis avaliadas foram altura da parte aérea, número de folhas e número de plantas daninhas por vaso, e, na segunda, altura da parte aérea; número de folhas; número de plantas daninhas; massa fresca e seca da parte aérea; massa fresca do sistema radicular; população final total de nematoides por vaso, calculada pelo somatório de nematoides nas raízes e solo. Quanto ao número de folhas, o tratamento T4 demonstrou fitotoxicidade aos 45 DAP. Os tratamentos T3, T5 e T6 apresentaram as maiores massa fresca e seca da parte área da cana, demonstraram ausência de interação antagônica entre as combinações do herbicida com os nematicidas aos 90 DAP. Os tratamentos T3 e T5 foram eficientes no controle populacional de P. zeae.(AU)

The aim of the study was to evaluate the interaction of the herbicide tebuthiuron (Combine® SC 500), with the following nematicides: carbofuran (350 Furadan® SC) and benfuracarb (Pottente®) applied during the planting of cane sugar (RB 867515). The experiment was conducted in a greenhouse at Universidade Paranaense in Umuarama - PR, from April to August 2014. The crop was started in 4.5-L vases containing one plant per vase, in a completely randomized design with six treatments and four replications, namely control treatments (T1), with no application of products; isolated application of carbofuran (T2); isolated application of benfuracarb (T3); isolated application of tebuthiuron (T4); combined application of carbofuran and tebuthiuron (T5) and combined application of benfuracarb and tebuthiuron (T6). The experiment was submitted to two assessments, at 45 and 90 days after planting (DAP). On the first assessment, the variables analyzed were shoot height, number of leaves and number of weeds per vase. The second assessment analyzed shoot height; number of leaves; number of weeds; fresh and dry weight of shoot; fresh weight of the root system; total final population of nematodes per vase, calculated by the sum of nematodes in the roots and soil. Regarding the number of leaves, the T4 treatment showed phytotoxicity at 45 DAP. The T3, T5 and T6 treatments had the highest fresh and dry weight of the aerial part of the sugar cane; with absence of antagonistic interaction between the combinations of herbicide and nematicides at 90 DAP. The T3 and T5 treatments were effective in controlling the population of P. zeae.(AU)

El objetivo del estudio ha sido evaluar la interacción del herbicida tebuthiuron (Combine® 500 SC), con nematicidas carbofuram (Furadan® 350 SC) y benfuracarbe (Pottente®), aplicados en plantío de caña de azúcar (RB 867515). El experimento ha sido dirigido en el área de vegetación de la Universidad Paranaense, en Umuarama - PR, en el período de abril a agosto de 2014. Se ha instalado en floreros con capacidad para 4,5 L, conteniendo una planta por florero, en delineamiento enteramente casualizado, con seis tratamientos y cuatro repeticiones, siendo los tratamientos testigo (T1), sin aplicación de productos; aplicación aislada de carbofuran (T2); aplicación aislada de benfuracarbe (T3); aplicación aislada de tebuthiuron (T4); aplicación combinada de carbofuran y tebuthiuron (T5) y aplicación combinada de benfuracarbe y tebuthiuron (T6). El experimento ha sido sometido a dos evaluaciones, 45 y 90 días después del plantío (DAP) siendo que en la primera, las variables evaluadas fue la altura de la parte aérea, número de hojas y el número de plantas dañinas por florero, y, en la segunda, altura de la parte aérea, número de hojas, número de plantas dañinas; masa fresca y seca de la parte aérea; masa fresca del sistema radicular; población final total de nematodos por florero, calculado por la suma de nematodos en las raíces y suelo. Cuanto al número de hojas, el tratamiento T4 demostró citotoxicidad a los 45 DAP. Los tratamientos T3, T5 y T6 presentaron mayor masa fresca y seca en la parte aérea de la caña, demostraron ausencia de interacción antagónica entre las combinaciones de los herbicidas con los nematicidas a los 90 DAP. Los tratamientos T3 y T5 fueron eficientes en el control poblacional de P. zeae.(AU)

Interação entre nematicidas e herbicidas pré-emergentes no desenvolvimento inicial da cultura da cana-de-açúcar / Interaction between nematicides and pre-emergent herbicide in the initial development of sugar cane / Interacción entre nematicidas y herbicidas pre emergentes en el desarrollo inicial de la cultura de caña de azúcar

O objetivo do trabalho foi avaliar a interação do herbicida tebuthiuron (Combine® 500 SC), com nematicidas carbofuram (Furadan® 350 SC) e benfuracarbe (Pottente®), aplicados no plantio da cultura da cana-de-açúcar (RB 867515). O experimento foi conduzido em casa de vegetação da Universidade Paranaense, em Umuarama ­ PR, no período de abril a agosto de 2014. Foi instalado em vasos com capacidade para 4,5 L, contendo uma planta por vaso, em delineamento inteiramente casualizado, com seis tratamentos e quatro repetições, sendo os tratamentos testemunha (T1), sem aplicação de produtos; aplicação isolada de carbofuran (T2); aplicação isolada de benfuracarbe (T3); aplicação isolada de tebuthiuron (T4); aplicação combinada de carbofuran e tebuthiuron (T5) e aplicação combinada de benfuracarbe e tebuthiuron (T6). O experimento foi submetido a duas avaliações, 45 e 90 dias após o plantio (DAP) sendo que na primeira, as variáveis avaliadas foram altura da parte aérea, número de folhas e número de plantas daninhas por vaso, e, na segunda, altura da parte aérea; número de folhas; número de plantas daninhas; massa fresca e seca da parte aérea; massa fresca do sistema radicular; população final total de nematoides por vaso, calculada pelo somatório de nematoides nas raízes e solo. Quanto ao número de folhas, o tratamento T4 demonstrou fitotoxicidade aos 45 DAP. Os tratamentos T3, T5 e T6 apresentaram as maiores massa fresca e seca da parte área da cana, demonstraram ausência de interação antagônica entre as combinações do herbicida com os nematicidas aos 90 DAP. Os tratamentos T3 e T5 foram eficientes no controle populacional de P. zeae.(AU)

The aim of the study was to evaluate the interaction of the herbicide tebuthiuron (Combine® SC 500), with the following nematicides: carbofuran (350 Furadan® SC) and benfuracarb (Pottente®) applied during the planting of cane sugar (RB 867515). The experiment was conducted in a greenhouse at Universidade Paranaense in Umuarama - PR, from April to August 2014. The crop was started in 4.5-L vases containing one plant per vase, in a completely randomized design with six treatments and four replications, namely control treatments (T1), with no application of products; isolated application of carbofuran (T2); isolated application of benfuracarb (T3); isolated application of tebuthiuron (T4); combined application of carbofuran and tebuthiuron (T5) and combined application of benfuracarb and tebuthiuron (T6). The experiment was submitted to two assessments, at 45 and 90 days after planting (DAP). On the first assessment, the variables analyzed were shoot height, number of leaves and number of weeds per vase. The second assessment analyzed shoot height; number of leaves; number of weeds; fresh and dry weight of shoot; fresh weight of the root system; total final population of nematodes per vase, calculated by the sum of nematodes in the roots and soil. Regarding the number of leaves, the T4 treatment showed phytotoxicity at 45 DAP. The T3, T5 and T6 treatments had the highest fresh and dry weight of the aerial part of the sugar cane; with absence of antagonistic interaction between the combinations of herbicide and nematicides at 90 DAP. The T3 and T5 treatments were effective in controlling the population of P. zeae.(AU)

El objetivo del estudio ha sido evaluar la interacción del herbicida tebuthiuron (Combine® 500 SC), con nematicidas carbofuram (Furadan® 350 SC) y benfuracarbe (Pottente®), aplicados en plantío de caña de azúcar (RB 867515). El experimento ha sido dirigido en el área de vegetación de la Universidad Paranaense, en Umuarama - PR, en el período de abril a agosto de 2014. Se ha instalado en floreros con capacidad para 4,5 L, conteniendo una planta por florero, en delineamiento enteramente casualizado, con seis tratamientos y cuatro repeticiones, siendo los tratamientos testigo (T1), sin aplicación de productos; aplicación aislada de carbofuran (T2); aplicación aislada de benfuracarbe (T3); aplicación aislada de tebuthiuron (T4); aplicación combinada de carbofuran y tebuthiuron (T5) y aplicación combinada de benfuracarbe y tebuthiuron (T6). El experimento ha sido sometido a dos evaluaciones, 45 y 90 días después del plantío (DAP) siendo que en la primera, las variables evaluadas fue la altura de la parte aérea, número de hojas y el número de plantas dañinas por florero, y, en la segunda, altura de la parte aérea, número de hojas, número de plantas dañinas; masa fresca y seca de la parte aérea; masa fresca del sistema radicular; población final total de nematodos por florero, calculado por la suma de nematodos en las raíces y suelo. Cuanto al número de hojas, el tratamiento T4 demostró citotoxicidad a los 45 DAP. Los tratamientos T3, T5 y T6 presentaron mayor masa fresca y seca en la parte aérea de la caña, demostraron ausencia de interacción antagónica entre las combinaciones de los herbicidas con los nematicidas a los 90 DAP. Los tratamientos T3 y T5 fueron eficientes en el control poblacional de P. zeae.(AU)

Produção de lacase de Pycnoporus sanguineus em meio de cultivo à base de melaço soja / Laccase production by Pycnoporus sanguineus in culture media with soybean molasses / Producción de lacasa de Pycnoporus sanguineus en medio de cultivo con melaza de soja

Lacases são polifenol oxidases que utilizam a capacidade redox de íons cobre para reduzir oxigênio a água e oxidar um substrato fenólico. A síntese e secreção de lacases de basidiomicetos dependem de vários fatores como os nutrientes presentes no meio de cultura. Visando à produção de lacase, Pycnoporus sanguineus foi cultivado em meio contendo melaço de soja como única fonte de carbono, ureia como fonte de nitrogênio suplementar em diferentes concentrações (0,6; 1,2; 2,4; 4,8 e 9,6 g/L de nitrogênio) e diferentes concentrações de CuSO4 (0, 150, 200, 250 e 300 µM). O extrato enzimático produzido nas melhores condições de cultivo foi utilizado para a descoloração dos corantes remazol azul brilhante R (antraquinona), amarelo 145, preto 5, vermelho 195 (azo) e verde malaquita (trifenilmetano). As concentrações de nitrogênio não afetaram a produção de lacase, exceto a maior concentração (9,6 g/L) que reduziu a atividade enzimática. A adição de cobre ao meio de cultivo (150 µM) aumentou a atividade de lacase em 112%. A maior atividade de lacase (~34300 U/L) promoveu a descoloração dos corantes remazol azul brilhante R (67,5%) e verde malaquita (28,3%) em 24h, sendo os corantes azo descoloridos apenas parcialmente. Concluiu-se que o melaço de soja é um resíduo agroindustrial adequado para produção de lacase de P. sanguineus com potencial para degradação de corantes.(AU)

Laccases are multicopper oxidases using the redox ability from copper ions to reduce oxygen to water, while oxidizing a phenolic substrate. Laccase synthesis and secretion in basidiomycetes depend on the conditions provided and on the nutrients present in the culture medium. Pycnoporus sanguineus was cultivated in medium containing soybean molasses as the sole carbon source, with urea as the source of supplemental nitrogen at different concentrations (0.6, 1.2, 2.4, 4.8 and 9.6 g/L nitrogen), and different CuSO4 concentrations (0, 150, 200, 250 and 300 µM). The enzymatic extract produced under the best cultivation conditions was used for the depigmentation of remazole brilliant blue R (anthraquinone), yellow 145, black 5, red 195 (azo) and malachite green (triphenylmethane). Nitrogen concentrations did not affect laccase production, except for the higher concentration (9.6 g/L) reducing enzymatic activity. The addition of copper to the culture medium (150 µM) increased laccase activity by 112%. The highest laccase activity (~34300 U/L) promoted the depigmentation of remazol brilliant blue R (67.5%) and malachite green (28.3%) dyes in 24 hours. Azo dyes were only partially discolored. Therefore, it can be considered that soybean molasses is an agro-industrial byproduct suitable for the production of P. sanguineus laccase with potential for dye degradation.(AU)

Lacasas son polifenoles oxidasas que utilizan la capacidad redox de iones de cobre para reducir el oxígeno del agua y oxidar un sustrato fenólico. La síntesis y secreción de lacasas de basidiomicetos dependen de las condiciones como los nutrientes presentes en el medio de cultura. Buscando la producción de lacasa, se cultivó Pycnoporus sanguineus en medio que contenía melaza de soja como única fuente de carbono, urea como fuente de nitrógeno suplementar a diferentes concentraciones (0,6, 1,2, 2,4, 4,8 y 9,6 g/L de nitrógeno) y diferentes concentraciones de CuSO4 (0, 150, 200, 250 y 300 µM). El extrato enzimático producido en mejores condiciones de cultivo ha sido utilizado para la decoloración de los colorantes remazol azul brillante R (antraquinona), amarillo 145, negro 5, rojo 195 (azoico) y verde malaquita (trifenilmetano). Las concentraciones de nitrógeno no afectaron la producción de lacasa, excepto la mayor concentración (9,6 g/L) que redujo la actividad enzimática. La adición de cobre al medio de cultivo (150 µM) aumentó la actividad de la lacasa en un 112%. La mayor actividad de lacasa (~34300 U/L) promovió la decoloración de los colorantes remazol azul brillante R (67,5%) y verde malaquita (28,3%) en 24h, siendo que los colorantes azoicos fueran parcialmente decolorados. Se concluye que la melaza de soja es un desecho agroindustrial adecuado para la producción de lacasa de P. sanguineus con potencial para degradación de colorantes.(AU)

Produção de lacase de Pycnoporus sanguineus em meio de cultivo à base de melaço soja / Laccase production by Pycnoporus sanguineus in culture media with soybean molasses / Producción de lacasa de Pycnoporus sanguineus en medio de cultivo con melaza de soja

Lacases são polifenol oxidases que utilizam a capacidade redox de íons cobre para reduzir oxigênio a água e oxidar um substrato fenólico. A síntese e secreção de lacases de basidiomicetos dependem de vários fatores como os nutrientes presentes no meio de cultura. Visando à produção de lacase, Pycnoporus sanguineus foi cultivado em meio contendo melaço de soja como única fonte de carbono, ureia como fonte de nitrogênio suplementar em diferentes concentrações (0,6; 1,2; 2,4; 4,8 e 9,6 g/L de nitrogênio) e diferentes concentrações de CuSO4 (0, 150, 200, 250 e 300 µM). O extrato enzimático produzido nas melhores condições de cultivo foi utilizado para a descoloração dos corantes remazol azul brilhante R (antraquinona), amarelo 145, preto 5, vermelho 195 (azo) e verde malaquita (trifenilmetano). As concentrações de nitrogênio não afetaram a produção de lacase, exceto a maior concentração (9,6 g/L) que reduziu a atividade enzimática. A adição de cobre ao meio de cultivo (150 µM) aumentou a atividade de lacase em 112%. A maior atividade de lacase (~34300 U/L) promoveu a descoloração dos corantes remazol azul brilhante R (67,5%) e verde malaquita (28,3%) em 24h, sendo os corantes azo descoloridos apenas parcialmente. Concluiu-se que o melaço de soja é um resíduo agroindustrial adequado para produção de lacase de P. sanguineus com potencial para degradação de corantes.

Laccases are multicopper oxidases using the redox ability from copper ions to reduce oxygen to water, while oxidizing a phenolic substrate. Laccase synthesis and secretion in basidiomycetes depend on the conditions provided and on the nutrients present in the culture medium. Pycnoporus sanguineus was cultivated in medium containing soybean molasses as the sole carbon source, with urea as the source of supplemental nitrogen at different concentrations (0.6, 1.2, 2.4, 4.8 and 9.6 g/L nitrogen), and different CuSO4 concentrations (0, 150, 200, 250 and 300 µM). The enzymatic extract produced under the best cultivation conditions was used for the depigmentation of remazole brilliant blue R (anthraquinone), yellow 145, black 5, red 195 (azo) and malachite green (triphenylmethane). Nitrogen concentrations did not affect laccase production, except for the higher concentration (9.6 g/L) reducing enzymatic activity. The addition of copper to the culture medium (150 µM) increased laccase activity by 112%. The highest laccase activity (~34300 U/L) promoted the depigmentation of remazol brilliant blue R (67.5%) and malachite green (28.3%) dyes in 24 hours. Azo dyes were only partially discolored. Therefore, it can be considered that soybean molasses is an agro-industrial byproduct suitable for the production of P. sanguineus laccase with potential for dye degradation.

Lacasas son polifenoles oxidasas que utilizan la capacidad redox de iones de cobre para reducir el oxígeno del agua y oxidar un sustrato fenólico. La síntesis y secreción de lacasas de basidiomicetos dependen de las condiciones como los nutrientes presentes en el medio de cultura. Buscando la producción de lacasa, se cultivó Pycnoporus sanguineus en medio que contenía melaza de soja como única fuente de carbono, urea como fuente de nitrógeno suplementar a diferentes concentraciones (0,6, 1,2, 2,4, 4,8 y 9,6 g/L de nitrógeno) y diferentes concentraciones de CuSO4 (0, 150, 200, 250 y 300 µM). El extrato enzimático producido en mejores condiciones de cultivo ha sido utilizado para la decoloración de los colorantes remazol azul brillante R (antraquinona), amarillo 145, negro 5, rojo 195 (azoico) y verde malaquita (trifenilmetano). Las concentraciones de nitrógeno no afectaron la producción de lacasa, excepto la mayor concentración (9,6 g/L) que redujo la actividad enzimática. La adición de cobre al medio de cultivo (150 µM) aumentó la actividad de la lacasa en un 112%. La mayor actividad de lacasa (~34300 U/L) promovió la decoloración de los colorantes remazol azul brillante R (67,5%) y verde malaquita (28,3%) en 24h, siendo que los colorantes azoicos fueran parcialmente decolorados. Se concluye que la melaza de soja es un desecho agroindustrial adecuado para la producción de lacasa de P. sanguineus con potencial para degradación de colorantes.

Molecular authentication of Maytenus sp by PCR-RFLP / Autenticação molecular de Maytenus sp por PCR-RFLP

Maytenus aquifolia and Maytenus ilicifolia are native plants from South America and popularly known as ‘Espinheira-santa. Both are used as tea due to their efficiency in the treatment of ulcer, gastritis and indigestion. However, adulteration of processed Maytenus genus tea with Sorocea genus may happen due to their botanical similarity, compromising the quality of the products and opening a derogatory business opportunity that may lead to the discrediting of medicinal plant products. This study aimed to distinguish Maytenus sp and Sorocea bonplandii by PCR-RFLP of a chloroplast DNA (cpDNA) intergenic region. Three commercial products of processed tea leaves of Maytenus sp, and in natura leaves of Maytenus sp and S. bonplandii were analyzed. PCR detected unique fragments for all samples in natura. The trnH-psbA region amplicon of both M. ilicifolia and M. aquifolia was 660 bp, and for S. bonplandii was 565 bp. These PCR products can be used as markers to distinguish the two genera. Forty-five percent of the processed samples presented only Maytenus genus, without adulterations. However, the amplification of 38% of the samples suggests adulteration with S. bonplandii while 17% seem to be adulterated with another plant (fragment of 649 bp in brand A and 690 bp in brand B). Three out of the fifteen restriction enzymes were able to detect M. ilicifolia and M. aquifolia in natura and in processed leaf samples. It was concluded that PCR technique is efficient to distinguish Maytenus sp from S. bonplandii, and other adulterating plants in processed commercial products of ‘Espinheira-santa tea. The trnH-psbA spacer of cpDNA is easily amplified and has satisfactory discriminating capacity to help in authentication processes of samples of the genera in natura and in processed plants.(AU)

Maytenus aquifolia e Maytenus ilicifolia são plantas nativas da América do Sul e conhecidas popularmente como “Espinheira-santa”. Ambas são usadas como chá devido à sua eficiência no tratamento de gastrite, úlcera e indigestão. No entanto adulteração de chá do gênero Maytenus com o gênero Sorocea pode acontecer devido a sua semelhança botânica e isto compromete a qualidade dos produtos, abrindo uma oportunidade para comércio depreciativo que leva ao descrédito das plantas medicinais. Este estudo teve como objetivo distinguir Maytenus sp e Sorocea bonplandii por PCR-RFLP de DNA da região intergênica do cloroplasto (cpDNA). Três produtos comerciais de chá de Maytenus sp foram analisados, e a análise foi feita também em folhas in natura de Maytenus sp e de S. bonplandii. PCR detectou fragmentos únicos para todas as amostras in natura. O amplicon da região trnH-psbA de M. ilicifolia e M. aquifolia foi de 660 pb e para S. bonplandii foi de 565 pb. Os produtos de PCR podem ser usados como marcadores para distinguir os dois gêneros. Quarenta e cinco por cento das amostras processadas apresentaram apenas o gênero Maytenus, sem adulterações. No entanto, a amplificação de 38% das amostras sugere adulteração com S. bonplandii, enquanto 17% parecem terem sido adulteradas com uma outra planta (fragmento de 649 pb na marca A e 690 pb na marca B). Três das quinze enzimas de restrição foram capazes de detectar M. ilicifolia e M. aquifolia in natura e em amostras de folhas processadas. Concluiu-se que a técnica de PCR é eficiente para distinguir Maytenus sp de S. bonplandii e outras plantas adulterantes nos produtos comerciais de chá de “Espinheira-santa”. O espaçador trnHpsbA de cpDNA é facilmente amplificado e tem capacidade discriminante satisfatória para ajudar em processos de autenticação dos gêneros em amostras in natura e processadas de plantas.(AU)

Microscopia de epifluorescência para a determinação de biomassa micelial em substrato de cultivo sólido particulado / Epifluorescense microscopy for the determination of mycelial biomass in particulated solid substrate cultivation / Microscopia de pifluorescencia para la determinación de biomasa micelial en sustrato de cultivo solido particulado

A determinação de biomassa micelial fúngica crescida em substratos de cultivo sólido particulado (SCSP) é ainda um desafio devido à dificuldade de separação do micélio e o substrato. O objetivo deste trabalho foi avaliar a técnica de microscopia de epifluorescência para determinação da biomassa micelial de Pleurotus ostreatus em SCSP. Para determinação da exatidão da metodologia P. ostreatus foi crescido em meio líquido de extrato de malte e; a biomassa micelial foi separada por centrifugação, liofilizada e moída. Concentrações conhecidas do pó do micélio foram misturadas ao SCSP, composto de bagaço de cana de açúcar e fibra de soja, previamente autoclavado. Em seguida, a biomassa micelial foi determinada por microscopia de epifluorescência. Para promover a variação da biomassa micelial a ser determinada por microscopia de epifluorescência, SCSP adicionado de diferentes concentrações de ferro foram utilizados para o crescimento do fungo. Concluiu- -se que a técnica apresenta baixa precisão e exatidão, o que implica na necessidade de maiores estudos para aplicação desta técnica para a determinação de biomassa micelial crescida em SCSP.

Determination of fungal mycelial biomass grown on solid substrate cultivation (SSC) is still a challenge due to the difficulty in separating mycelium and substrate. The objective of this study was to evaluate the epifluorescence microscopy to determine the mycelial biomass of Pleurotus ostreatus grown in SSC. P. ostreatus was grown in malt extract liquid medium and mycelial biomass was separated by centrifugation. It was then lyophilized and milled. Mycelial powder was added at known concentrations to SSC composed of sugarcane bagasse and soy fiber, previously autoclaved. Mycelial biomass was determined by epifluorescence microscopy. In order to promote mycelial biomass variation for the determination by epifluorescence microscopy, SSC added at different iron concentrations was used for fungus growth. It was concluded that the technique has low precision and accuracy, which implies the need for further studies in order to apply this technique for the determination of mycelial biomass grown in SSC.

La determinación de biomasa micelial fúngica crecida en sustratos de cultivo sólido particulado (SCSP) es todavía un reto debido a la dificultad de separación del micelio y el sustrato. El objetivo de este estudio fue evaluar la técnica de microscopía de epifluorescencia para determinación de la biomasa micelial de Pleurotus ostreatus en SCSP. Para determinación de exactitud de la metodología P. ostreatus se cultivó en medio líquido de extracto de malta y; la biomasa micelial separada por centrifugación, liofilizada y molida. Concentraciones conocidas del polvo del micelio fueron mezcladas al SCSP, compuesto de bagazo de caña de azúcar y fibra de soya, previamente tratado en autoclave. A continuación, la biomasa micelial a ser determinada por microscopía de epifluorescencia. Para promover la variación de la biomasa micelial a ser determinada por microscopía de epifluorescencia, SCSP añadida con diferentes concentraciones de hierro fueron utilizados para el crecimiento del hongo. Se concluye que la técnica presenta baja precisión y exactitud, lo que implica en la necesidad de realizar más estudios para aplicación de esta técnica para la determinación de biomasa micelial crecida en SCSP.

Produção de lacase de fungos basidiomicetos por fermentação submersa com cascas de café / Laccase production from basidiomycetes by submerged fermentation with coffee hurks / Producción de lacase de hongos basidiomicetos por fermentación sumergida con cascaras de café

Cascas de café são fonte de carboidratos e nutrientes que podem ser bioconvertidos em produtos de interesse como enzimas. Lacases são cobre polifenol oxidases que oxidam compostos fenólicos, enquanto reduzem oxigênio molecular à água e; sua baixa especificidade a substratos permite sua aplicação em várias áreas como indústria têxtil, de alimentos e biorremediação. Os objetivos desse trabalho foram avaliar a capacidade de produção de lacase de três linhagens de fungos basidiomicetos (Lentinula edodes U6/1, Pleurotus ostreatus U6/9 e Pleurotus florida U6/10) por fermentação submersa com cascas de café e avaliar o uso de cobre como indutor dessa enzima. A casca de café mostrou ser um bom substrato para produção de lacases e das três linhagens testadas Pleurotus ostreatus (U6/9) foi a mais produtiva (22,5 U mL-1). A melhor fonte de nitrogênio para produção de lacases de Pleurotus ostreatus (U6/9) foi o extrato de levedura na concentração de 9 g/L (20 U mL-1). A adição de 150 μM de CuSO4 resultou na indução significativa na produção de lacases nessa linhagem (21 U mL-1) no 12° dia de cultivo.

Coffee husks are a source of carbohydrates and nutrients that may be bioconverted into products of interest, such as enzymes. Laccases are copper polyphenol oxidases that oxidize phenolic compounds while reducing molecular oxygen to water. Laccase’s low specificity to substrates allows its application in several areas such as textiles, food processing and bioremediation industries. The aims of this study were to evaluate the potential to produce laccase from three strains of basidiomycetous fungi (Lentinula edodes U6/1, Pleurotus ostreatus U6/9, and Pleurotus florida U6/10) by submerged fermentation with coffee husks, and to evaluate the use of copper as an inducer of the enzyme. Coffee husk proved to be a good substrate for laccase production, with Pleurotus ostreatus (U6/9) being the most productive strain (22.5 U mL-1). The best source of nitrogen for laccase production of Pleurotus ostreatus (U6/9) was yeast extract 9 g/L (20 U mL-1). The addition of CuSO4 (150 μM) resulted in significant induction of laccase (21 U mL-1) on the 12th day of cultivation.

Cáscaras de café son fuente de carbohidratos y nutrientes que pueden ser bioconvertidos en productos de interés, tales como enzimas. Lacases son cobre polifenol oxidasas que oxidan compuestos fenólicos, mientras reducen el oxígeno molecular a el agua y; su baja especificidad a sustratos permite su aplicación en diversas áreas, como la industria textil, de alimentos y de biorremediación. Los objetivos de este estudio fueron evaluar la capacidad de producción de lacase de tres linajes de hongos basidiomicetos (Lentinula edodes U6/1, Pleurotus ostreatus U6/9 y Pleurotus florida U6/10) por fermentación sumergida con cáscaras de café, y evaluar el uso del cobre como inductor de esta enzima. La cáscara de café resultó ser un buen sustrato para la producción de lacases y, de las tres linajes probadas, Pleurotus ostreatus (U6/9) fue la más productiva (22,5 U mL-1). La mejor fuente de nitrógeno para la producción de lacases de Pleurotus ostreatus (U6/9) fue el extracto de levadura a una concentración de 9 g L-1 (20 U mL-1). La adición de 150 μM de CuSO4 resultó en la inducción significativa de Cáscaras de café son fuente de carbohidratos y nutrientes que pueden ser bioconvertidos en productos de interés, evadura a una concentración de 9 g L-1 (20 U mL-1). La adición de 150 μM de CuSO4 resultó en la inducción significativa de la producción de lacases en esa linaje (21 U mL-1), en el 12º día de cultivo.

Produção de lacase de fungos basidiomicetos por fermentação submersa com cascas de café / Laccase production from basidiomycetes by submerged fermentation with coffee hurks / Producción de lacase de hongos basidiomicetos por fermentación sumergida con cascaras de café

Cascas de café são fonte de carboidratos e nutrientes que podem ser bioconvertidos em produtos de interesse como enzimas. Lacases são cobre polifenol oxidases que oxidam compostos fenólicos, enquanto reduzem oxigênio molecular à água e; sua baixa especificidade a substratos permite sua aplicação em várias áreas como indústria têxtil, de alimentos e biorremediação. Os objetivos desse trabalho foram avaliar a capacidade de produção de lacase de três linhagens de fungos basidiomicetos (Lentinula edodes U6/1, Pleurotus ostreatus U6/9 e Pleurotus florida U6/10) por fermentação submersa com cascas de café e avaliar o uso de cobre como indutor dessa enzima. A casca de café mostrou ser um bom substrato para produção de lacases e das três linhagens testadas Pleurotus ostreatus (U6/9) foi a mais produtiva (22,5 U mL-1). A melhor fonte de nitrogênio para produção de lacases de Pleurotus ostreatus (U6/9) foi o extrato de levedura na concentração de 9 g/L (20 U mL-1). A adição de 150 μM de CuSO4 resultou na indução significativa na produção de lacases nessa linhagem (21 U mL-1) no 12° dia de cultivo.(AU)

Coffee husks are a source of carbohydrates and nutrients that may be bioconverted into products of interest, such as enzymes. Laccases are copper polyphenol oxidases that oxidize phenolic compounds while reducing molecular oxygen to water. Laccases low specificity to substrates allows its application in several areas such as textiles, food processing and bioremediation industries. The aims of this study were to evaluate the potential to produce laccase from three strains of basidiomycetous fungi (Lentinula edodes U6/1, Pleurotus ostreatus U6/9, and Pleurotus florida U6/10) by submerged fermentation with coffee husks, and to evaluate the use of copper as an inducer of the enzyme. Coffee husk proved to be a good substrate for laccase production, with Pleurotus ostreatus (U6/9) being the most productive strain (22.5 U mL-1). The best source of nitrogen for laccase production of Pleurotus ostreatus (U6/9) was yeast extract 9 g/L (20 U mL-1). The addition of CuSO4 (150 μM) resulted in significant induction of laccase (21 U mL-1) on the 12th day of cultivation.(AU)

Cáscaras de café son fuente de carbohidratos y nutrientes que pueden ser bioconvertidos en productos de interés, tales como enzimas. Lacases son cobre polifenol oxidasas que oxidan compuestos fenólicos, mientras reducen el oxígeno molecular a el agua y; su baja especificidad a sustratos permite su aplicación en diversas áreas, como la industria textil, de alimentos y de biorremediación. Los objetivos de este estudio fueron evaluar la capacidad de producción de lacase de tres linajes de hongos basidiomicetos (Lentinula edodes U6/1, Pleurotus ostreatus U6/9 y Pleurotus florida U6/10) por fermentación sumergida con cáscaras de café, y evaluar el uso del cobre como inductor de esta enzima. La cáscara de café resultó ser un buen sustrato para la producción de lacases y, de las tres linajes probadas, Pleurotus ostreatus (U6/9) fue la más productiva (22,5 U mL-1). La mejor fuente de nitrógeno para la producción de lacases de Pleurotus ostreatus (U6/9) fue el extracto de levadura a una concentración de 9 g L-1 (20 U mL-1). La adición de 150 μM de CuSO4 resultó en la inducción significativa de Cáscaras de café son fuente de carbohidratos y nutrientes que pueden ser bioconvertidos en productos de interés, evadura a una concentración de 9 g L-1 (20 U mL-1). La adición de 150 μM de CuSO4 resultó en la inducción significativa de la producción de lacases en esa linaje (21 U mL-1), en el 12º día de cultivo.(AU)