Manejo de neonatos caninos prematuros / Management of premature neonatal puppies

Dentre as mais importantes causas de morbidade neonatal na prematuridade, destacam-se os distúrbios respiratórios, complicações infecciosas, instabilidade crítica da termorregulação, inabilidade para homeostase energética e falhas na transferência de imunidade passiva. Dentre os problemas de origem pulmonar intimamente relacionados à prematuridade, destaca-se a imaturidade pulmonar por deficiência de surfactante, evoluindo para diminuição da capacidade pulmonar, hipoxemia, hipercapnia e acidose. Os neonatos caninos prematuros apresentam baixa vitalidade, hipotermia, bradipnéia, irregularidade do padrão respiratório, reduzido tônus e responsividade neuro-muscular. As áreas do parênquima pulmonar para efetuar trocas gasosas são limitadas em filhotes prematuros, culminando em alterações do equilíbrio ácidobase. Além disto, os recém-nascidos prematuros apresentam instabilidade energética e falha de transferência de imunidade passiva. Como medida preventiva à morbidade do neonato prematuro, indicase a corticoterapia pré-natal 48 horas antes do parto em cadelas gestantes, induzindo a maturidade funcional do pulmão fetal, além de melhorar a vitalidade e evolução clínica neonatal. Ademais, a corticoterapia antenatal estimula a transferência placentária de imunoglobulinas e absorção de imunoglobulinas colostrais, bem como aumenta a capacidade glicogênica. Nos casos emergenciais, preconiza-se medidas intensivas aos recém-nascidos prematuros, as quais incluem: reanimação respiratória, controle da hipotermia, reposição glicêmica na hipoglicemia e controle imunológico da falha de transferência imune passiva.(AU)

Among the most important causes of neonatal morbidity in prematurity, respiratory disorders, infectious complications, critical instability of thermoregulation, inability for energy homeostasis and failures in the transfer of passive immunity stand out. Among the problems of pulmonary origin closely related to prematurity, pulmonary immaturity due to surfactant deficiency stands out, evolving to decreased lung capacity, hypoxemia, hypercapnia and acidosis. Premature canine neonates have low vitality, hypothermia, bradypnea, irregular breathing pattern, reduced tone and neuromuscular responsiveness. The areas of the lung parenchyma to carry out gas exchange are limited in premature pups, culminating in changes in acid-base balance. In addition, premature newborns have energetic instability and failure to transfer passive immunity. As a preventive measure against premature neonate morbidity, prenatal corticosteroid therapy is indicated 48 hours before delivery in pregnant bitches, inducing functional maturity of the fetal lung, in addition to improving neonatal vitality and clinical evolution. Furthermore, antenatal corticosteroid therapy stimulates the placental transfer of immunoglobulins and the absorption of colostral immunoglobulins, as well as increasing the glycogenic capacity. In emergency cases, intensive measures are recommended for premature newborns, which include: respiratory resuscitation, hypothermia control, glycemic replacement in hypoglycemia and immunological control of passive immune transfer failure.(AU)

Período neonatal em cães: a importância dos aspectos imunológicos e nutricionais na sua sobrevivência / Canine neonatal period: the importance of immunological and nutritional aspects on survival

O neonato é extremamente dependente dos cuidados maternos, seja no fornecimento de proteção imunológica, ou para nutrição adequada ao longo do desenvolvimento corpóreo. Para atingir o êxito no combate aos desafios infecciosos, a ingestão de colostro de boa qualidade imunológica nas primeiras horas de vida é essencial para a transferência de imunidade passiva, uma vez que a transposição placentária é mínima. Sequencialmente, a nutrição no período neonatal deve obedecer os requerimentos energéticos dos filhotes, em consonância ao crescimento corporal exponencial. A ingestão do leite é a principal fonte de energia para o neonato e, a falha em prover adequada nutrição predispõe o filhote à hipoglicemia, desidratação e infecções ao longo do período neonatal.(AU)

The neonate is extremely dependent on maternal care, either in providing immunological protection, or for adequate nutrition throughout its corporal development. To achieve success in combating infectious challenges, the ingestion of colostrum of good immunological quality during the first hours of life is essential for the transfer of passive immunity, since placental transposition is minimal. Sequentially, nutrition in the neonatal period must obey the energy requirements of the puppies, in line with exponential body growth. Milk ingestion is the main source of energy for the neonate, and failure to provide adequate nutrition predisposes the puppies to hypoglycemia, dehydration and infections throughout the neonatal period.(AU)

Reposição de colostro no neonato: o que, quando e como administrar? / Neonatal colostrum replacement: what, when and how?

O tipo placentário dos carnívoros representa uma barreira relativamente impenetrável para a transferência de imunoglobulinas maternas, tornando os cães e gatos extremamente dependentes da ingestão e absorção do colostro para a adequada transferência de imunidade passiva. Portanto, os filhotes são considerados hipogamaglobulinêmicos, sendo a ingestão de colostro essencial para a sobrevivência neonatal. O principal motivo pelo qual a reposição de colostro deve ser instituída é a orfandade ou ausência dos cuidados maternos, os quais podem gerar diferentes graus de cuidados intensivos com os filhotes. Portanto, no caso do óbito materno, enfermidade ou debilidade materna, ausência de aptidão materna ou rejeição da ninhada, alterações da glândula mamária, agalactia ou hipogalactia e filhotes debilitados ou de baixo peso. Na ausência de colostro ou de adequada colostragem, algumas alternativas podem ser adotadas para garantir a transferência de imunidade passiva. A reposição de colostro pode ser estabelecida naturalmente ou artificialmente, conforme a disponibilidade de preparações comerciais, banco de colostro ou fêmeas doadoras.(AU)

The placental type of carnivores represents a relatively impenetrable barrier to the transfer of maternal immunoglobulins, making dogs and cats extremely dependent on colostrum ingestion and absorption for adequate passive immunity transfer. Therefore, puppies are considered hypogammaglobulinemic, and colostrum ingestion is essential for neonatal survival. The main reason why colostrum replacement should be instituted is the orphanage or absence of maternal care, which can generate different degrees of neonatal intensive care. Therefore, in the case of maternal death, maternal illness or weakness, lack of maternal instinct or rejection of the litter, disorders of the mammary gland, agalactia or hypogalactia and weak or low birth weight puppies. In the absence of colostrum or inadequate colostrum uptake, some alternatives can be adopted to ensure the transfer of passive immunity. Colostrum replacement can be established naturally or artificially, depending on the availability of commercial preparations, colostrum bank or female donors.(AU)

Relationship between fetal biometric assessment by ultrasonography and neonatal lamb vitality, birth weight and growth

Ultrasonographic examination of pregnant ewes can enable the identification of perinatal abnormalities and establish prenatal assistance responsible for minimizing morbidity and perinatal mortality. Therefore, we aimed to evaluate the feasibility of a fetal biometric analysis by ultrasonography to predict neonatal vitality and lamb growth during the first month of life. A longitudinal study was conducted with 13 healthy ewes, subjected to ultrasonographic examination every 15 days from 60th day of pregnancy until lambing, evaluating thoracic diameter, abdominal diameter, biparietal diameter, humerus, femur and placentome length. At birth, 22 lambs were assessed through Apgar score at 5 minutes and after 1 hour. Measurement of body weight was also carried out immediately at birth and weekly during 30 days after birth. Thoracic diameter showed a significant increase between 91-105 days and 121-135 days. Conversely, abdominal diameter had a progressive growth until 106-120 days, and then, a steady development was observed. Biparietal diameter showed progressive growth only towards days 91 and 105. For the humerus length, we verified a significant increase between 106-120 days and 121-135 days, remaining unaltered onwards; while femur length continued to grow until lambing. The linear regression analysis between birth weight and biparietal diameter at 60-75 days was high (R2=0.96; P<0.0001; coefficient of variability of 3.3%). In conclusion, ultrasonographic analysis of fetal biparietal diameter at mid-pregnancy can be used as a predictor of lamb weight at birth. Moreover, assessment of femur length at final pregnancy can be employed for fetal and neonatal development estimation.

Relationship between fetal biometric assessment by ultrasonography and neonatal lamb vitality, birth weight and growth

Ultrasonographic examination of pregnant ewes can enable the identification of perinatal abnormalities and establish prenatal assistance responsible for minimizing morbidity and perinatal mortality. Therefore, we aimed to evaluate the feasibility of a fetal biometric analysis by ultrasonography to predict neonatal vitality and lamb growth during the first month of life. A longitudinal study was conducted with 13 healthy ewes, subjected to ultrasonographic examination every 15 days from 60th day of pregnancy until lambing, evaluating thoracic diameter, abdominal diameter, biparietal diameter, humerus, femur and placentome length. At birth, 22 lambs were assessed through Apgar score at 5 minutes and after 1 hour. Measurement of body weight was also carried out immediately at birth and weekly during 30 days after birth. Thoracic diameter showed a significant increase between 91-105 days and 121-135 days. Conversely, abdominal diameter had a progressive growth until 106-120 days, and then, a steady development was observed. Biparietal diameter showed progressive growth only towards days 91 and 105. For the humerus length, we verified a significant increase between 106-120 days and 121-135 days, remaining unaltered onwards; while femur length continued to grow until lambing. The linear regression analysis between birth weight and biparietal diameter at 60-75 days was high (R2=0.96; P<0.0001; coefficient of variability of 3.3%). In conclusion, ultrasonographic analysis of fetal biparietal diameter at mid-pregnancy can be used as a predictor of lamb weight at birth. Moreover, assessment of femur length at final pregnancy can be employed for fetal and neonatal development estimation.(AU)

Redox, acid-base and clinical analysis of preterm and term neonatal lambs

During pregnancy, fetal lambs are exposed to low oxygen tension. Thus, an effective antioxidant mechanism is partially developed which sensitizes fetus to oxidative stress. Consequently, term and preterm neonates are susceptible to molecular and cellular injury caused by oxygen species (ROS). This study aimed to evaluate the development of antioxidant enzymes and oxidative profile of preterm (135 days of pregnancy) and term (145 days of pregnancy) neonatal lambs, correlating with clinical analysis. Preterm lambs had significantly (P ≤ 0.05) lower score of vitality (4.00 ± 1.10), bradycardia (99 ± 34 bpm) and bradypnea (13 ± 10 mpm). However, both groups were normothermic and euglycemic. Preterm group had low blood pH (7.07 ± 0.10) and both groups had hypercapnia, more severe in preterm group (85.52 ± 18.65 mmHg). In addition, premature newborns had lower pO2 (10.67 ± 5.65 mmHg) and SO2 (6.17 ± 5.85%) values. No significant difference (P ≥ 0.05) on antioxidant enzymes and oxidative stress were verified among experimental groups, although glutathione peroxidase negatively correlated with Apgar score, heart rate, SO2 and pO2 . Our data show that preterm neonates are less adapted to the odds of labor and to overcome the immediate changes of extra-uterine life. Furthermore, we verified an influence of glutathione peroxidase in controlling oxidative stress, which highlights mature enzymatic mechanisms of cell redox, even in premature lambs.(AU)

Redox, acid-base and clinical analysis of preterm and term neonatal lambs

During pregnancy, fetal lambs are exposed to low oxygen tension. Thus, an effective antioxidant mechanism is partially developed which sensitizes fetus to oxidative stress. Consequently, term and preterm neonates are susceptible to molecular and cellular injury caused by oxygen species (ROS). This study aimed to evaluate the development of antioxidant enzymes and oxidative profile of preterm (135 days of pregnancy) and term (145 days of pregnancy) neonatal lambs, correlating with clinical analysis. Preterm lambs had significantly (P ≤ 0.05) lower score of vitality (4.00 ± 1.10), bradycardia (99 ± 34 bpm) and bradypnea (13 ± 10 mpm). However, both groups were normothermic and euglycemic. Preterm group had low blood pH (7.07 ± 0.10) and both groups had hypercapnia, more severe in preterm group (85.52 ± 18.65 mmHg). In addition, premature newborns had lower pO2 (10.67 ± 5.65 mmHg) and SO2 (6.17 ± 5.85%) values. No significant difference (P ≥ 0.05) on antioxidant enzymes and oxidative stress were verified among experimental groups, although glutathione peroxidase negatively correlated with Apgar score, heart rate, SO2 and pO2 . Our data show that preterm neonates are less adapted to the odds of labor and to overcome the immediate changes of extra-uterine life. Furthermore, we verified an influence of glutathione peroxidase in controlling oxidative stress, which highlights mature enzymatic mechanisms of cell redox, even in premature lambs.

Alterações hemodinâmicas na próstata e nos testículos de cães acometidos por hiperplasia prostática benigna e tratados com finasterida / Prostatic and testicular hemodynamic changes in dogs with untreated benign prostatic hyperplasia and treated with finasteride

Este trabalho avaliou os efeitos do tratamento com finasterida nas variáveis vasculares e hemodinâmicas da próstata e testículos de cães acometidos pela hiperplasia prostática benigna (HPB). Para tal, foram selecionados dez cães de idades variadas (5-13 anos). Os grupos experimentais foram constituídos de cães acometidos pela HPB (HPB, n=5) e cães com HPB e tratados com finasterida (HPB+F, n=5). Três avaliações foram realizadas, com intervalo mensal entre elas (dia 0 início do tratamento com finasterida, 30 dias e 60 dias). Foi realizada a ultrassonografia em modo-B para mensuração do volume da próstata e dos testículos. Com a ultrassonografia com Doppler colorido foi avaliado o escore de vascularização da próstata (1-3). O perfil hemodinâmico das artérias prostática e testicular foi mensurado com o Doppler espectral. Ocorreu redução de 35,2% no volume prostático no grupo HPB+F depois de 60 dias de tratamento, enquanto o grupo HPB sofreu elevação de 15,4%. O escore de vascularização no dia 60 foi maior no grupo HPB (2,4±0,2) em relação ao grupo HPB+F (1,6±0,2). Na análise por Doppler espectral, foi observado maior índice de pulsatilidade da artéria testicular no grupo HPB (2,1±0,2) em relação ao HPB+F (1,9±0,1). Os demais índices hemodinâmicos não apresentaram diferença estatística. Assim, a terapia com finasterida além de promover a redução da angiogênese provocada pela HBP também reduziu o índice de pulsatilidade da artéria testicular e, portanto, é capaz de reduzir a eficiência da espermatogênese. Em conclusão, aterapia com finasterida reduz o volume e a vascularização da próstata.Ademais, sugere-se a análise do índice de pulsatilidade como possível marcador para prognóstico da HPB em cães.

The aim of this study was to evaluate the effects of finasteride treatment on prostatic and testicular hemodynamic and vascular variables in dogs with benign prostatic hyperplasia (BPH). Ten dogs aged between 5 and 13 years were selected and assigned to two experimental groups: dogs with BPH (BPH, n=5), and dogs with BPH treated with finasteride (BPH+F, n=5). Three monthly evaluations were performed (day 0 onset of finasteride treatment, day 30 and day 60). Testicular and prostatic volumes were measured through mode-B ultrasound; prostatic vascularization score (1-3) was measured with the color Doppler ultrasound; and the hemodynamic profile of the prostatic and testicular arteries was measured with spectral Doppler. A reduction of 35.2% in the prostate volume occured in the HPB+F group after 60 days of treatment, while in the HPB group, it increased 15.4%.Vascularization score on day 60 was higher in the BPH group (2.4±0.2) in comparison to the BPH+F group (1.6±0.2), suggesting that finasteride therapy reduces the angiogenesis caused by BPH. Regarding the spectral Doppler analysis, it was possible to observe higher pulsatility index of the testicular artery in the BPH group (2.1±0.2) compared to BPH+F (1.9±0.1), which is capable of reducing the efficiency of spermatogenesis. The remaining hemodynamic indexes presented no statistical difference. In conclusion, finasteride therapy reducesprostatic volume and vascularization. Moreover, the pulsatility index can be employed as an prognostic markerof BPH in dogs.

Sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken egg yolk as a functional test for sperm evaluation in dogs / Teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinha como avaliação funcional do sêmen de cães

During fertilization, spermatozoa interact with the zona pellucida (ZP) through the binding between the acrosome and proteins 2 and 3 (ZP2 and ZP3). The perivitelline membrane of chicken egg yolk is homologous to the mammalian ZP3, which allows the binding of sperm of several species. The aim of this study was to standardize and evaluate the efficiency of sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken eggs as a functional method for canine semen evaluation. For this purpose, nine post-thaw sperm samples were used, which were divided into two aliquots: the first was kept in water bath at 37ºC (live sample) and the second was submitted to cold shock to induce cellular damage (dead sample). The two aliquots were mixed on five proportions, corresponding to 0%, 25%, 50%, 75%, and 100% of viable cells, and the binding test was performed by analyzing the number of spermatozoa bonded to the perivitelline membrane by means of computerized assessment of sperm motility (CASA) or conventional microscopy. Additionally, samples were submitted to sperm motility analysis, evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, and sperm mitochondrial activity. The sperm-binding test to the perivitelline membrane of chicken egg yolk was considered a feasible sperm analysis test for both fertilizing capacity and overall sperm attributes evaluation, mainly when the analysis is performed by a conventional microscope, which expands its practicality to the majority of canine reproduction laboratories.(AU)

Durante a fecundação, os espermatozoides interagem com a zona pelúcida (ZP) por meio da ligação entre o acrossomo e as proteínas 2 e 3 (ZP2 e ZP3). A membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas é homóloga à ZP3 de mamíferos, possibilitando a ligação espermática de diversas espécies. Este trabalho padronizou e avaliou a eficiência do teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas como avaliação funcional do sêmen de cães. Para tal, foram utilizadas nove amostras seminais previamente criopreservadas. Cada amostra foi dividida em duas alíquotas: a primeira foi mantida em banho-maria à 37ºC (vivos) e a segunda submetida a choque térmico com o intuito de induzir dano celular (mortos). As duas alíquotas foram misturadas, correspondendo a 0, 25, 50, 75 e 100% de células viáveis. As amostras foram avaliadas quanto ao número de espermatozoides ligados à membrana perivitelínica por meio da análise computadorizada da motilidade (CASA) ou microscopia convencional. Ademais, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade espermática, integridade das membranas acrossomal e plasmática e atividade mitocondrial espermática. O teste de ligação espermática à membrana perivitelínica de ovos de galinha foi considerado um teste de análise seminal exequível tanto para avaliar a capacidade fecundante dos espermatozoides como atributos seminais gerais, especialmente quando realizado em microscopia convencional, expandindo sua praticidade para a maioria dos laboratórios de análise de sêmen canino.(AU)

Alterações hemodinâmicas na próstata e nos testículos de cães acometidos por hiperplasia prostática benigna e tratados com finasterida / Prostatic and testicular hemodynamic changes in dogs with untreated benign prostatic hyperplasia and treated with finasteride

Este trabalho avaliou os efeitos do tratamento com finasterida nas variáveis vasculares e hemodinâmicas da próstata e testículos de cães acometidos pela hiperplasia prostática benigna (HPB). Para tal, foram selecionados dez cães de idades variadas (5-13 anos). Os grupos experimentais foram constituídos de cães acometidos pela HPB (HPB, n=5) e cães com HPB e tratados com finasterida (HPB+F, n=5). Três avaliações foram realizadas, com intervalo mensal entre elas (dia 0 início do tratamento com finasterida, 30 dias e 60 dias). Foi realizada a ultrassonografia em modo-B para mensuração do volume da próstata e dos testículos. Com a ultrassonografia com Doppler colorido foi avaliado o escore de vascularização da próstata (1-3). O perfil hemodinâmico das artérias prostática e testicular foi mensurado com o Doppler espectral. Ocorreu redução de 35,2% no volume prostático no grupo HPB+F depois de 60 dias de tratamento, enquanto o grupo HPB sofreu elevação de 15,4%. O escore de vascularização no dia 60 foi maior no grupo HPB (2,4±0,2) em relação ao grupo HPB+F (1,6±0,2). Na análise por Doppler espectral, foi observado maior índice de pulsatilidade da artéria testicular no grupo HPB (2,1±0,2) em relação ao HPB+F (1,9±0,1). Os demais índices hemodinâmicos não apresentaram diferença estatística. Assim, a terapia com finasterida além de promover a redução da angiogênese provocada pela HBP também reduziu o índice de pulsatilidade da artéria testicular e, portanto, é capaz de reduzir a eficiência da espermatogênese. Em conclusão, aterapia com finasterida reduz o volume e a vascularização da próstata.Ademais, sugere-se a análise do índice de pulsatilidade como possível marcador para prognóstico da HPB em cães.(AU)

The aim of this study was to evaluate the effects of finasteride treatment on prostatic and testicular hemodynamic and vascular variables in dogs with benign prostatic hyperplasia (BPH). Ten dogs aged between 5 and 13 years were selected and assigned to two experimental groups: dogs with BPH (BPH, n=5), and dogs with BPH treated with finasteride (BPH+F, n=5). Three monthly evaluations were performed (day 0 onset of finasteride treatment, day 30 and day 60). Testicular and prostatic volumes were measured through mode-B ultrasound; prostatic vascularization score (1-3) was measured with the color Doppler ultrasound; and the hemodynamic profile of the prostatic and testicular arteries was measured with spectral Doppler. A reduction of 35.2% in the prostate volume occured in the HPB+F group after 60 days of treatment, while in the HPB group, it increased 15.4%.Vascularization score on day 60 was higher in the BPH group (2.4±0.2) in comparison to the BPH+F group (1.6±0.2), suggesting that finasteride therapy reduces the angiogenesis caused by BPH. Regarding the spectral Doppler analysis, it was possible to observe higher pulsatility index of the testicular artery in the BPH group (2.1±0.2) compared to BPH+F (1.9±0.1), which is capable of reducing the efficiency of spermatogenesis. The remaining hemodynamic indexes presented no statistical difference. In conclusion, finasteride therapy reducesprostatic volume and vascularization. Moreover, the pulsatility index can be employed as an prognostic markerof BPH in dogs.(AU)

Sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken egg yolk as a functional test for sperm evaluation in dogs / Teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinha como avaliação funcional do sêmen de cães

During fertilization, spermatozoa interact with the zona pellucida (ZP) through the binding between the acrosome and proteins 2 and 3 (ZP2 and ZP3). The perivitelline membrane of chicken egg yolk is homologous to the mammalian ZP3, which allows the binding of sperm of several species. The aim of this study was to standardize and evaluate the efficiency of sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken eggs as a functional method for canine semen evaluation. For this purpose, nine post-thaw sperm samples were used, which were divided into two aliquots: the first was kept in water bath at 37ºC (live sample) and the second was submitted to cold shock to induce cellular damage (dead sample). The two aliquots were mixed on five proportions, corresponding to 0%, 25%, 50%, 75%, and 100% of viable cells, and the binding test was performed by analyzing the number of spermatozoa bonded to the perivitelline membrane by means of computerized assessment of sperm motility (CASA) or conventional microscopy. Additionally, samples were submitted to sperm motility analysis, evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, and sperm mitochondrial activity. The sperm-binding test to the perivitelline membrane of chicken egg yolk was considered a feasible sperm analysis test for both fertilizing capacity and overall sperm attributes evaluation, mainly when the analysis is performed by a conventional microscope, which expands its practicality to the majority of canine reproduction laboratories.(AU)

Durante a fecundação, os espermatozoides interagem com a zona pelúcida (ZP) por meio da ligação entre o acrossomo e as proteínas 2 e 3 (ZP2 e ZP3). A membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas é homóloga à ZP3 de mamíferos, possibilitando a ligação espermática de diversas espécies. Este trabalho padronizou e avaliou a eficiência do teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas como avaliação funcional do sêmen de cães. Para tal, foram utilizadas nove amostras seminais previamente criopreservadas. Cada amostra foi dividida em duas alíquotas: a primeira foi mantida em banho-maria à 37ºC (vivos) e a segunda submetida a choque térmico com o intuito de induzir dano celular (mortos). As duas alíquotas foram misturadas, correspondendo a 0, 25, 50, 75 e 100% de células viáveis. As amostras foram avaliadas quanto ao número de espermatozoides ligados à membrana perivitelínica por meio da análise computadorizada da motilidade (CASA) ou microscopia convencional. Ademais, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade espermática, integridade das membranas acrossomal e plasmática e atividade mitocondrial espermática. O teste de ligação espermática à membrana perivitelínica de ovos de galinha foi considerado um teste de análise seminal exequível tanto para avaliar a capacidade fecundante dos espermatozoides como atributos seminais gerais, especialmente quando realizado em microscopia convencional, expandindo sua praticidade para a maioria dos laboratórios de análise de sêmen canino.(AU)

Acute-phase protein profile of healthy bitches in diestrus: the influence of steroid hormones

Background: Acute-phase proteins are known as significant indicators of inflammation for several animal species, allowing more accurate follow-up of diseases, particularly when other clinical signs are not apparent. Nevertheless, the difficulty of data interpretation due to the absence of reference values for canine species represents an imperative obstacle for systematic clinical application. Moreover, no influence of hormonal status has yet been established for dogs. The aim of this study was thus to propose reference values of fibrinogen, haptoglobin, ceruloplasmin, seromucoid and glycoprotein for diestrous healthy females and therefore verify the influence of the hormone status.Materials, Methods & Results: Data consisted of weekly blood sampling from 20 Great Dane diestrous bitches during 9 weeks. Each animals health condition was verified through physical assessment and the absence of acute inflammatory or infectious processes was guaranteed by a total white cell count. Sampling started with diestrus onset and continued until the beginning of anestrus, evaluated by vaginal cytology. From blood samples, the concentrations of fibrinogen, haptoglobin, ceruloplasmin, seromucoid, glycoprotein, progesterone and estrogen were determined accordingly. No statistical variations (P < 0.05) on plasmatic fibrinogen, serum haptoglobin and ceruloplasmin concentrations were observed between weeks of diestrus nor a correlation between the hormonal profile. Significant increase in seromucoid concentration was verified between the 1st and 6th week of diestrus, while significant variation (P < 0.05) of glycoprotein was measured between the 1st and 3rd weeks of diestrus, as well as between weeks 2 and 9. The reference values proposed were: 182.22 (±46.40) mg/ dL for fibrinogen, 80.22 (±9.80) mg/dL of HbCN binding capacity for haptoglobin, 8.19 (±1.68) IU/L for ceruloplasmin, 79.88 (±15.78) mg/dL for seromucoid and 11.89 (±0.92) % for glycoprotein.[...](AU)

Acute-phase protein profile of healthy bitches in diestrus: the influence of steroid hormones

Background: Acute-phase proteins are known as significant indicators of inflammation for several animal species, allowing more accurate follow-up of diseases, particularly when other clinical signs are not apparent. Nevertheless, the difficulty of data interpretation due to the absence of reference values for canine species represents an imperative obstacle for systematic clinical application. Moreover, no influence of hormonal status has yet been established for dogs. The aim of this study was thus to propose reference values of fibrinogen, haptoglobin, ceruloplasmin, seromucoid and glycoprotein for diestrous healthy females and therefore verify the influence of the hormone status.Materials, Methods & Results: Data consisted of weekly blood sampling from 20 Great Dane diestrous bitches during 9 weeks. Each animal’s health condition was verified through physical assessment and the absence of acute inflammatory or infectious processes was guaranteed by a total white cell count. Sampling started with diestrus onset and continued until the beginning of anestrus, evaluated by vaginal cytology. From blood samples, the concentrations of fibrinogen, haptoglobin, ceruloplasmin, seromucoid, glycoprotein, progesterone and estrogen were determined accordingly. No statistical variations (P < 0.05) on plasmatic fibrinogen, serum haptoglobin and ceruloplasmin concentrations were observed between weeks of diestrus nor a correlation between the hormonal profile. Significant increase in seromucoid concentration was verified between the 1st and 6th week of diestrus, while significant variation (P < 0.05) of glycoprotein was measured between the 1st and 3rd weeks of diestrus, as well as between weeks 2 and 9. The reference values proposed were: 182.22 (±46.40) mg/ dL for fibrinogen, 80.22 (±9.80) mg/dL of HbCN binding capacity for haptoglobin, 8.19 (±1.68) IU/L for ceruloplasmin, 79.88 (±15.78) mg/dL for seromucoid and 11.89 (±0.92) % for glycoprotein.[...]

Estrogen and oxytocin receptors in the canine corpus luteum during pregnancy and parturition / Receptores de estrógeno e ocitocina no corpo lúteo durante a gestação e parto em cadelas

The expression of genes encoding the receptors for estrogen (ERαmRNA) and oxytocin (OTRmRNA) was studied in the corpus luteum during pregnancy and parturition in dogs. Real-time PCR was performed to quantify the levels of ERαmRNA and OTRmRNA in the corpus luteum of bitches during Early (up to 20 days of gestation), Mid (20 to 40 days) and Late Pregnancy (40 to 60 days), and Parturition (first stage of labor). The corpus luteum expressed mRNA for OTR, however ERα mRNA was not detected. There was a reduction of OTR mRNA expression in the corpus luteum from gestational Day 20 onward, which suggests an important role of OTR mRNA in the mechanism of pregnancy recognition in dogs. We concluded that the expression of OTR mRNA in canine corpus luteum vary over time, which support the idea that the sensitivity and response to hormone therapy can vary along the course of pregnancy and labor. Moreover, the canine CL lacks ERα mRNA expression during pregnancy.(AU)

A expressão dos genes que codificam os receptores de estrógeno (REα RNAm) e ocitocina (ROT RNAm) foi estudado no corpo lúteo de cadelas durante a gestação e parto. A técnica de PCR em tempo real foi realizada para quantificar a expressão do REα RNAm e ROT RNAm no corpo lúteo de cadelas durante o início (até 20 dias de gestação), meio (20 a 40 dias) e final da gestação (40 a 60 dias), e durante o parto (pródomos do parto). O corpo lúteo apresentou expressão do RNAm para o ROT, entretanto o RNAm para o REα não foi detectado. Houve redução na expressão do ROT RNAm no corpo lúteo a partir de 20 dias da gestação, indicando papel no mecanismo de reconhecimento gestacional em cadelas. Em conclusão, a expressão do ROT RNAm no corpo lúteo de cadelas apresentou variação ao longo do tempo de gestação, sugerindo que a resposta e sensibilidade à terapia hormonal pode variar conforme o momento da gestação e parto. Ademais, o corpo lúteo canino não expressa REα RNAm durante a gestação.(AU)

Avaliação clínica e hemodinâmica periparto de fêmeas bovinas da raça Holandesa em diferentes condições obstétricas / Peripartum clinical and hemodynamic evaluation of Holstein cows under distinct obstetric conditions

As distocias na espécie bovina são normalmente corrigidas por manobras obstétricas, sendo a extração forçada um procedimento obstétrico de risco, podendo causar injúrias tanto maternas quanto fetais. Partos induzidos com administração de ocitocina exógena nas inércias uterinas podem levar ao comprometimento fetal pela hipotensão e bradicardia materna, pois a ocitocina participa de regulações endócrinas e neuroendócrinas de órgãos como o coração e rins. O objetivo deste estudo foi comparar as mensurações de frequência cardíaca (FC), pressão arterial não-invasiva (PA) e eletrocardiograma de fêmeas bovinas da raça Holandesa agrupadas segundo a condição obstétrica: eutocia (G EUT; n = 10); distocia com manobra obstétrica (G DIST; n = 10); inércia uterina com infusão de ocitocina (G OCT; n = 10); nos seguintes momentos: pré-parto, intraparto, pós-parto imediato e uma hora após o parto. Os traçados eletrocardiográficos denotaram ritmo sinusal normal em todos os períodos. Observou-se taquicardia em todos os grupos, sendo que apenas no G OCT a FC pós-parto (111 ± 23 bpm) elevou-se estatisticamente em relação ao pré-parto (94 ± 11 bpm). Houve acréscimo significativo da PA no intraparto do G DIST (PA média = 101 ± 24 mmHg), decorrente de contrações uterinas e abdominais mais intensas. As fêmeas bovinas do Grupo OCT não apresentaram aumento significativo da PA diastólica intraparto em relação ao pré-parto como observado nos G EUT e G DIST. Os resultados apresentados demonstram que a distocia com correção manual eleva a pressão arterial das fêmeas bovinas, enquanto a administração de ocitocina altera momentaneamente as variáveis hemodinâmicas com possível efeito bradicárdico e hipotensor intraparto, impondo adaptação circulatória materna frente às alterações do parto. (AU)

Bovine dystocias are commonly assisted through obstetric procedures. However, manual traction delivery can be a dangerous strategy for the treatment of dystocia as it may lead to maternal and fetal injuries. Use of oxytocin for uterine atonia or hypotonia to induce contractions may compromise fetal welfare due to maternal hypotension and bradycardia, because this hormone regulates renal and heart endocrine and neuroendocrine actions. The aims of this study were to compare heart rate (HR) measurement, non-invasive blood pressure (BP) and electrocardiograms records of Holstein cows during the first stage of labour, intrapartum, immediately after calving and one hour later of physiological birth and dystocia. The animals were allocated in: group EUT eutocia (n = 10); group DYST dystocia with obstetric assistance (n = 10); group OCT uterine inertia treated with oxytocin (n = 10). The electrocardiograph tracing showed a normal sinus rhythm during all parturition. Tachycardia was observed in all groups, however, group OCT showed higher heart rate immediately after calving (111 ± 23 bpm) than prepartum evaluation (94 ± 11 bpm). During labor, DYST G presented significantly higher BP (Medium BP = 101 ± 24 mmHg), due to uterine and abdominal strengthened contractions. Group OCT cows didn't show significative elevation on diastolic BP during calving as occurred on EUT and DYST groups. The present results indicate superior blood pressure on manual traction delivery of bovine females, while oxytocin infusion altered transitorily hemodynamic variables with a possible bradicardiac effect and intrapartum hypotension and impose maternal circulatory adaptation during parturition. (AU)

Endocrinologia da gestação e parto em cadelas / Endocrinology of pregnancy and parturition in bitches

Os mecanismos relacionados ao controle endócrino do período gestacional e parto em cadelas ainda não estão totalmente elucidados. Desta maneira, a presente compilação de trabalhos científicos referentes aos principais eventos durante a gestação e o parto em cadelas tem por escopo a atualização sobre a endocrinologia em tais eventos fisiológicos e a divulgação sumariada dos conhecimentos gerados a partir das pesquisas científicas na área. É de conhecimento comum que a síntese e a secreção da progesterona, originária principalmente do corpo lúteo, são de extrema importância para manutenção e conseqüente progresso da gestação. Ainda, os níveis plasmáticos desse hormônio podem ser utilizados como método para predizer o momento do parto na espécie canina. Adicionalmente, a relaxina é detectada somente em cadelas gestantes, portanto sua detecção pode ser considerada um método de diagnóstico de gestação. Durante a segunda fase da gestação, observa-se liberação pulsátil de prolactina, simultaneamente ao aumento dos níveis de estrógeno. Entretanto, a influência do estrógeno no mecanismo de secreção de prolactina ainda é incerta. Por outro lado, ao final da gestação, evidencia-se queda dos níveis de progesterona e aumento dos níveis séricos de estrógeno, decorrente principalmente da ação do cortisol fetal. Tais eventos, associados à liberação de PGF2α pelo útero, culminam com o início do parto. O aumento das contrações uterinas e a expulsão fetal ocorrem principalmente pela ação da ocitocina. Entretanto, a ação desse hormônio não requer necessariamente o aumento das concentrações plasmáticas, sugerindo haver uma ação autócrina ou parácrina da ocitocina em cadelas. Embora os estudos relacionados à endocrinologia da gestação e do parto em cadelas tenham elucidado diversas interações e padrões hormonais, tais processos ainda não estão totalmente descritos, uma vez que as cadelas apresentam particularidades reprodutivas que as diferem das demais espécies. Neste particular sentido, futuras pesquisas devem ser conduzidas para contribuir com o conhecimento técnico-científico nesta espécie.(AU)

The mechanisms related to the endocrine control of pregnancy and parturition in bitches are still unknown. Thus, this compilation of scientific articles referred to canine pregnancy and parturition aims to update on the endocrinology of the main physiological events and to disclose in a summarized manner the knowledge generated from scientific research. It is known that the synthesis and secretion of progesterone mainly originated from the corpus luteum are of utmost importance for pregnancy maintenance. In addition, plasma levels of this hormone can be employed as a method to predict the onset of parturition in bitches. Moreover, relaxine is present only in pregnant bitches; therefore its serum determination can be considered as pregnancy diagnostic method. During midgestation, it is observed a pulsatile release of prolactin simultaneously to increased levels of estrogen. However, the influence of estrogen on the mechanism of prolactin secretion remains unknown. On the other hand, decreased levels of progesterone and increased concentrations of estrogen are observed at the end of pregnancy, as a consequence of enhanced fetal cortisol synthesis. These events in association to the release of uterine PGF2α trigger the onset of labor. The increase in uterine contractions and fetal expulsion occur mainly as an oxytocin influence. However, the action of this hormone does not necessarily require the increase in plasma concentrations, suggesting an autocrine or paracrine mechanism of action in bitches. Although studies related to canine endocrinology of pregnancy and parturition have clarified several hormonal interactions and patterns, these mechanism are not fully described, as the bitches have reproductive characteristics that differ from other species. Additional research should be undertaken in order to improve technical and scientific knowledge in this species.(AU)

Endocrinologia da gestação e parto em cadelas / Endocrinology of pregnancy and parturition in bitches

Os mecanismos relacionados ao controle endócrino do período gestacional e parto em cadelas ainda não estão totalmente elucidados. Desta maneira, a presente compilação de trabalhos científicos referentes aos principais eventos durante a gestação e o parto em cadelas tem por escopo a atualização sobre a endocrinologia em tais eventos fisiológicos e a divulgação sumariada dos conhecimentos gerados a partir das pesquisas científicas na área. É de conhecimento comum que a síntese e a secreção da progesterona, originária principalmente do corpo lúteo, são de extrema importância para manutenção e conseqüente progresso da gestação. Ainda, os níveis plasmáticos desse hormônio podem ser utilizados como método para predizer o momento do parto na espécie canina. Adicionalmente, a relaxina é detectada somente em cadelas gestantes, portanto sua detecção pode ser considerada um método de diagnóstico de gestação. Durante a segunda fase da gestação, observa-se liberação pulsátil de prolactina, simultaneamente ao aumento dos níveis de estrógeno. Entretanto, a influência do estrógeno no mecanismo de secreção de prolactina ainda é incerta. Por outro lado, ao final da gestação, evidencia-se queda dos níveis de progesterona e aumento dos níveis séricos de estrógeno, decorrente principalmente da ação do cortisol fetal. Tais eventos, associados à liberação de PGF2α pelo útero, culminam com o início do parto. O aumento das contrações uterinas e a expulsão fetal ocorrem principalmente pela ação da ocitocina. Entretanto, a ação desse hormônio não requer necessariamente o aumento das concentrações plasmáticas, sugerindo haver uma ação autócrina ou parácrina da ocitocina em cadelas. Embora os estudos relacionados à endocrinologia da gestação e do parto em cadelas tenham elucidado diversas interações e padrões hormonais, tais processos ainda não estão totalmente descritos, uma vez que as cadelas apresentam particularidades reprodutivas que as diferem das demais espécies. Neste particular sentido, futuras pesquisas devem ser conduzidas para contribuir com o conhecimento técnico-científico nesta espécie.

The mechanisms related to the endocrine control of pregnancy and parturition in bitches are still unknown. Thus, this compilation of scientific articles referred to canine pregnancy and parturition aims to update on the endocrinology of the main physiological events and to disclose in a summarized manner the knowledge generated from scientific research. It is known that the synthesis and secretion of progesterone mainly originated from the corpus luteum are of utmost importance for pregnancy maintenance. In addition, plasma levels of this hormone can be employed as a method to predict the onset of parturition in bitches. Moreover, relaxine is present only in pregnant bitches; therefore its serum determination can be considered as pregnancy diagnostic method. During midgestation, it is observed a pulsatile release of prolactin simultaneously to increased levels of estrogen. However, the influence of estrogen on the mechanism of prolactin secretion remains unknown. On the other hand, decreased levels of progesterone and increased concentrations of estrogen are observed at the end of pregnancy, as a consequence of enhanced fetal cortisol synthesis. These events in association to the release of uterine PGF2α trigger the onset of labor. The increase in uterine contractions and fetal expulsion occur mainly as an oxytocin influence. However, the action of this hormone does not necessarily require the increase in plasma concentrations, suggesting an autocrine or paracrine mechanism of action in bitches. Although studies related to canine endocrinology of pregnancy and parturition have clarified several hormonal interactions and patterns, these mechanism are not fully described, as the bitches have reproductive characteristics that differ from other species. Additional research should be undertaken in order to improve technical and scientific knowledge in this species.

In vitro viability of canine spermatozoa frozen in tris-fructose-citric acid extender with ethylene glycol / Viabilidade in vitro do espermatozóide canino congelado em diluidor tris-frutose-ácido cítrico com etileno glicol

A utilização de sêmen congelado tornou-se extremamente comum na prática da inseminação artificial em cães, estimulando a pesquisa de métodos de congelação e diluidores. Neste estudo foram avaliadas as propriedades criopreservativas do etileno glicol na concentração final de 5%, utilizado em 3 diferentes protocolos de congelação. No Método I, uma parte de sêmen foi adicionada a duas partes de tris-frutose-ácido cítrico, contendo 7,5% de etileno glicol e congelado sem prévia refrigeração. No Método II, uma parte de sêmen foi adicionada a duas partes de tris-frutose-ácido cítrico contendo 7,5% de etileno glicol e resfrigerado até 5ºC por 1 hora antes da congelação. No Método III, uma parte de sêmen foi adicionada a uma parte de tris-frutose-ácido cítrico sem etileno glicol e refrigerado até 5ºC por 1 hora, sendo em seguida adicionada uma parte de tris-frutose-ácido cítrico, previamente refrigerado até 5ºC, contendo 15% de etileno glicol, mantido a 5ºC por mais 1 hora e congelado. Para a congelação em cada método, o sêmen foi envasado em palhetas plásticas de 0,5 ml, colocadas em vapor de nitrogênio a 5 cm da coluna líquida por 20 minutos, mergulhadas no nitrogênio líquido e armazenadas. Todas as amostras foram descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos e imediatamente avaliadas. O Método III não apresentou decréscimo significante da motilidade retilínea progressiva após a descongelação e apresentou os melhores resultados para o vigor espermático, comparando-se aos demais métodos. Entretanto, os 3 métodos não apresentaram diferença significativa com relação aos defeitos espermáticos pós-descongelação. Os tipos de defeitos mais freqüentemente encontrados foram cabeça solta normal, cauda dobrada, fortemente dobrada e fortemente enrolada. Foi possível concluir que o tempo de equilíbrio maior no diluidor tris-frutose-ácido cítrico seguido pela diluição em etileno glicol antes da congelação parece produzir para os espermatozóides de cães ... (AU)

Estudo da maturação nuclear in vitro de oócitos de cães em meios suplementados com hormônios e co-cultivo em células homólogas da tuba uterina / In vitro canine oocyte nuclear maturation in hormonal supplemented mediums and homologal oviductal cells co-culture in dogs

As novas biotécnicas são ferramentas inovadoras no estudo da fisiologia da reprodução de cães, bem como na preservação do material genético de espécies ameaçadas de extinção. Tendo em vista, pois, a relevância de tais ferramentas, emprestou-se a este estudo o objetivo maior de avaliar os efeitos do 17-ß estradiol, progesterona e do co-cultivo em células da tuba uterina na maturação in vitro de oócitos de cães. Ovários de cadelas em anestro foram fatiados em PBS com 10% SFB. Os oócitos foram selecionados e divididos em 8 grupos: grupo 1 (sem suplementação hormonal), grupo 2 (20 µg/ml de 17-ß estradiol), grupo 3 (20 µg/ml de progesterona), grupo 4 (20 µg/ml de 17-ß estradiol e 20 µg/ml de progesterona), grupo 5 (co-cultivo em células da tuba uterina sem suplementação hormonal), grupo 6 (co-cultivo em células da tuba uterina + 20 mg/ml de 17-ß estradiol), grupo 7 (co-cultivo em células da tuba uterina + 20 µg/ml de progesterona) e grupo 8 (co-cultivo em células da tuba uterina + 20 µg/ml de 17-ß estradiol + 20 µg/ml de progesterona). O cultivo das células da tuba uterina foi realizado por no mínimo 48 horas previamente à adição dos oócitos. Para a maturação, utilizou-se TCM 199 suplementado com 2,5 µg/ml de FSH e 5 µg/ml de LH. Decorridas 48, 72 e 96 horas em estufa a 39ºC, 5% de CO2 em ar e alta umidade, os oócitos foram fixados em paraformaldeído a 4% com Triton 10X e corados com Hoescht 33342 (10 µg/ml) em glicerol. O estágio de maturação nuclear (vesícula germinativa - VG, quebra da vesícula germinativa QVG, metáfase I MI, metáfase II MII, degenerados ou não passíveis de determinação) foi avaliado em microscópio invertido equipado com luz ultravioleta e filtro de 365-420 de excitação/emissão. Os dados foram analisados mediante o PROC NPAR1WAY de análise de variância não paramétrica, sendo o efeito dos tratamentos verificado por meio do teste de Kruskal-Wallis, e as comparações múltiplas do teste de Wilcoxon com os tratamentos comparados dois a dois, considerando as diferenças significativas quando p<0,05. Verificou-se influência positiva da suplementação hormonal no desenvolvimento oocitário in vitro, particularmente com referência à adição de progesterona, associada ou não ao estrógeno. Não houve influência significativa do co-cultivo de células da tuba uterina na maturação oocitária em comparação aos meios de cultivo, sem presença de células epiteliais da tuba uterina, suplementados com hormônios esteróides. Conquanto sem significância estatística, verificou-se tendência de os oócitos, obtidos de cadelas em anestro, desenvolverem-se ao estágio de metáfase II após o período de maturação de 96 horas. Demonstrou-se, portanto, ser plenamente exeqüível o estudo da maturação de oócitos de cães em sistemas de cultivo in vitro a partir de ovários obtidos por ovário-histerectomia, tal estudo propicia, ademais, a pesquisa de características reprodutivas fisiológicas da espécie

Recent biotechniques are innovative tools for the canine reproductive physiology research, as well as for assisted reproduction of endangered species. The aim of this study was to evaluate the effects of estradiol-17ß, progesterone and the co-culture with oviductal ephitelial cells on in vitro maturation. Ovaries from anestrous bitches were sliced in PBS with 10% FCS. Oocytes were selected and distributed in 8 groups: group 1 (no hormonal suplementation), group 2 (estradiol-17ß at 20 µg/ml), group 3 (progesterone at 20 µg/ml), group 4 (estradiol-17ß at 20 µg/ml + progesterone at 20 µg/ml), group 5 (co-culture in oviductal ephitelial cells without hormonal suplementation), group 6 (co-culture in oviductal ephitelial cells + estradiol-17ß at 20 µg/ml), group 7 (co-culture with oviductal ephitelial cells + progesterone at 20 µg/ml) and group 8 (co-culture with oviductal ephitelial cells + estradiol-17ß at 20 µg/ml + progesterone at 20 µg/ml). Oviductal ephitelial cells culture was performed at least 48 hours prior to oocyte co-culture. For in vitro maturation, TCM 199 supplemented with FSH (2.5 µg/ml) and LH (5 µg/ml) was utilized. After periods of 48, 72 and 96 hour at 39ºC in humidified atmosphere of 5% CO2 in air, oocytes were fixed with Triton-X10 in paraformaldehyde at 4% and and stained with Hoescht 33342 (10 µg/ml) in glycerol. Oocytes were examined through an inverted fluorescence microscope equipped with a 365-420 nm wavelength excitation/emisson filter. Nuclear maturation was classified according to chromatin configuration as: germinal vesicle stage (GV), germinal vesicle break down (GVBD), metaphase I (MI), metaphase II (MII) and degenerated and unidentifiable oocytes. Data was evaluated through PROC NPAR1WAY of non parametrical variance analysis and treatment was verified by the Kruskal-Wallis test and the Wilcoxon test for multiple comparisions. Differences were considered significant at p<0.05. Positive influence of hormonal supplementation for oocyte development rates was verified, particularly with respec to progesterone. No significant influence of oviductal cells co-culture was however verified. In addition, a tendency of the oocytes reaching metaphase II in the 96 hour period was observed. Therefore, the study of canine in vitro oocyte maturation is feasible and provides an important tool for reproductive physiology research