Resumo
Adipose tissue can be a source of bovine mesenchymal stromal/stem cells (MSCs). However, most studies do not incorporate post-mortem collection or in vitro differentiation of these cells from bovine fat and other sources into three mesodermal lineages. This study characterized and cryopreserved bovine adipose tissue-derived MSCs (AD-MSCs) collected post-mortem. Cells were isolated from cattle (Bos taurus) and cultured under standard conditions for ex vivo expansion and cryopreservation. Cell growth kinetics was determined by cell doubling time after consecutive cellular passages. Clonogenic capacity was determined using the colony-forming unit fibroblast (CFU-F) assay. The trilineage differentiation assay was performed to determine its in vitro multipotency. The in vitro proliferation and clonogenic capacity of bovine AD-MSCs was maintained across successive passages (P2-P6). Greater clonogenic capacity was found in fresh than post-cryopreservation cells. Cells showed multipotential capacity in adipose, cartilage and bone lineages. In conclusion, no changes were observed in the growth kinetics and colony-forming capacity of the successive passages evaluated. Clonogenic capacity was higher in fresh than post-cryopreserved cells.
O tecido adiposo pode ser uma fonte de células estromais/tronco mesenquimais bovinas (MSCs). No entanto, a maioria dos estudos não incorpora a coleta post-mortem ou a diferenciação in vitro dessas células a partir de gordura bovina e outras fontes em três linhagens mesodérmicas. O objetivo deste estudo foi caracterizar e criopreservar MSCs derivadas de tecido adiposo bovino (AD-MSCs) coletadas post-mortem. As células foram isoladas de bovinos (Bos taurus) e cultivadas sob condições padrão para expansão ex vivo e criopreservação. A cinética de crescimento celular foi determinada pelo tempo de duplicação celular após passagens celulares consecutivas. A capacidade clonogênica foi determinada usando o ensaio de fibroblastos de unidades formadoras de colônias (CFU-F). O ensaio de diferenciação de trilinhagem foi realizado para determinar sua multipotência in vitro. A proliferação in vitro e a capacidade clonogênica das AD-MSCs bovinas foram mantidas através de passagens sucessivas (P2-P6). Maior capacidade clonogênica foi encontrada em células frescas do que em células pós-criopreservadas. As células mostraram capacidade multipotencial nas linhagens adiposa, cartilaginosa e óssea. Concluindo, não foram observadas alterações na cinética de crescimento e na capacidade de formação de colônias das sucessivas passagens avaliadas. A capacidade clonogênica foi maior em células frescas do que em células pós-criopreservadas.
Assuntos
Animais , Bovinos , Criopreservação/veterinária , Tecido Adiposo , Células-Tronco MesenquimaisResumo
Bovine spongiform encephalopathy (BSE) is a transmissible progressive neurodegenerative disease characterized by the accumulation of a pathological isoform (PrpSC) of the cellular prion protein (PrpC) in the brain of cattle. Two insertion/deletion polymorphisms in the PRNP gene (23bp in the promoter and 12bp in intron 1) have been associated with resistance or susceptibility to the disease. The aim of this study was to analyze the distribution of these polymorphisms in 214 healthy bovines belonging to four different breed groups (Aberdeen Angus, Aberdeen Angus x Hereford, Holstein Friesian and Uruguayan Creole cattle). DNA samples were amplified by end-point PCR. A high frequency of the alleles and haplotype associated with susceptibility to BSE (del12 and del23, and del12-del23, respectively) were found in the Aberdeen Angus, Aberdeen Angus x Hereford and Holstein Friesian animals. At the same time, the Uruguayan Creole cattle presented a higher frequency of the alleles and haplotype associated with resistance to BSE (ins12 and ins23, and ins12-ins23, respectively). These data could indicate a greater genetic resistance of the Uruguayan Creole cattle to BSE compared to other analyzed breeds, reinforcing its value as a zoogenetic resource.
A encefalopatia espongiforme bovina (EEB) é uma doença neurodegenerativa progressiva transmissível dos bovinos, caracterizada pelo acúmulo no cérebro de uma isoforma patológica (PrpSC) da proteína priônica celular (PrpC). Dois polimorfismos de inserção/deleção no gene PRNP (23bp no promotor e 12bp no íntron 1) foram associados à resistência ou suscetibilidade à doença. O objetivo deste trabalho foi analisar a distribuição desses polimorfismos em 214 bovinos sadios, pertencentes a quatro diferentes grupos raciais (Aberdeen Angus, Aberdeen Angus x Hereford, Holstein Friesian e Crioulo Uruguaio). As amostras de DNA foram amplificadas por PCR de tempo final. Uma alta frequência dos alelos e haplótipos associados à suscetibilidade à BSE (del12 e del23 e del12-del23, respectivamente) foram encontrados nos animais Aberdeen Angus, Aberdeen Angus x Hereford e Holstein Friesian, enquanto o gado Crioulo Uruguaio apresentou maior frequência dos alelos e haplótipos associados à resistência à BSE (ins12 e ins23 e ins12-ins23, respectivamente). Esses dados podem indicar uma maior resistência genética do gado Crioulo Uruguaio à BSE em comparação com as outras raças analisadas, reforçando seu valor como recurso zoogenético.
Assuntos
Animais , Bovinos , Polimorfismo Genético , Príons , Doenças dos Bovinos , Encefalopatia Espongiforme Bovina/genética , Predisposição Genética para Doença , Suscetibilidade a Doenças/veterináriaResumo
Brachyspina syndrome (BS) is a rare monogenic autosomal recessive hereditary disorder of the Holstein Fresian breed caused by a deletion of 3.3Kb in the Fanconi anemia complementation group I (FANCI) gene on BTA-21, which leads to a frame-shift and premature stop codon. Some of the consequences of BS are the reduction of the fertility rate and milk production. This study developed a simple, sensitive, rapid cost- effective assay method based on real time PCR and melting curve analysis for the detection of BS carrier animals. Sixty-eight normal homozygous and four heterozygous carrier genotypes were detected and confirmed through traditional PCR- electrophoresis analysis. We concluded that the assay we have developed proved to be a reliable, highly precise and low-cost tool, which could be used to monitor the presence of the BS mutation in uruguayan Holstein breed.
A síndrome de Brachyspina (BS) é um defeito hereditário monogênico autossômico recessivo raro da raça Holstein Friesian causado por uma exclusão de 3,3 KB no gene FANCI localizado no cromossomo bovino 21, o que leva a um deslocamento de quadro e um códon de parada prematuro. Uma consequência da BS é a eficiência de reprodução reduzida e a produção de leite. O objetivo deste estudo foi o desenvolvimento de um método simples, rápido e sensível, baseado em PCR em tempo real e análise da curva de fusão para identificar animais portadores de BS. Sessenta e oito genótipos homozigotos normais e quatro heterozigotos foram detectados e confirmados através da análise tradicional de PCR e electophorese. Concluímos que o novo método é uma ferramenta confiável, altamente precisa e de baixo custo, que poderia ser usado para monitorar a presença da mutação BS na raça Holandês uruguaia.