Equine tracheobronchial wash filtration and its effects on differential cell count / Efeito da filtração do lavado traqueobrônquico de equinos sobre a contagem diferencial de células

Tracheobronchial wash (TBW) is a method to recover cell samples from the airways. The cytology of TBW fluid is an important technique for the diagnosis of pulmonary diseases in horses. Excessive mucus in TBW may cause cell damage and morphological changes that hinder cell type recognition, resulting in a misdiagnosis. The aim of this study was to compare the results of differential cell count in a tracheobronchial wash of filtered and non-filtered samples. Endoscopy and TBW procedures were performed in thirty horses. Each TBW sample was split into two aliquots. Two groups were formed: non-filtrated aliquots (NF) and filtrated aliquots (F). The filtration was performed using a hydrophilic gauze pad. After centrifugation, the differential cell count was performed considering 300 nucleated cells. The filtrated aliquots results presented a significant increase of macrophages count and a significant decrease in neutrophils count comparing to the results of non-filtrated aliquots. These findings were consistent with results of filtered bronchoalveolar wash published studies. Therefore, the filtration of TBW is not an efficient method

O lavado traqueobrônquico (LTB) é um método usado para recuperar uma amostra de células das vias respiratórias. A citologia do LTB é descrita como uma importante ferramenta no diagnóstico de doença pulmonar em equinos. O excesso de muco geralmente presente no LTB pode alterar a morfologia, dificultando a identificação dos tipos celulares e, por consequência, prejudicando a contagem diferencial de células e a interpretação diagnóstica. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da filtração do LTB de equinos sobre a contagem diferencial de células na avaliação citológica do lavado traqueobrônquico. Foram utilizados 30 equinos que foram submetidos a coletas de amostras de LTB via endoscópio. De cada amostra obtida foi separada uma primeira alíquota não filtrada (NF). Uma segunda alíquota (F) foi obtida filtrando-se o LTB, utilizando-se uma compressa de gaze hidrófila. As alíquotas F e NF foram submetidas à citocentrifugação para contagem diferencial de 300 células nucleadas. Verificou-se um aumento significativo no percentual de macrófagos e redução significativa de neutrófilos nas amostras filtradas. As alterações observadas foram condizentes com achados de estudos prévios realizados em lavado broncoalveolar. Conclui-se que a filtração do LTB não é uma metodologia aconselhável, pois acarreta em alterações de contagem significativas nas proporções de importantes marcadores celulares de inflamação, podendo gerar possíveis erros de diagnóstico

Equine tracheobronchial wash filtration and its effects on differential cell count / Efeito da filtração do lavado traqueobrônquico de equinos sobre a contagem diferencial de células

Tracheobronchial wash (TBW) is a method to recover cell samples from the airways. The cytology of TBW fluid is an important technique for the diagnosis of pulmonary diseases in horses. Excessive mucus in TBW may cause cell damage and morphological changes that hinder cell type recognition, resulting in a misdiagnosis. The aim of this study was to compare the results of differential cell count in a tracheobronchial wash of filtered and non-filtered samples. Endoscopy and TBW procedures were performed in thirty horses. Each TBW sample was split into two aliquots. Two groups were formed: non-filtrated aliquots (NF) and filtrated aliquots (F). The filtration was performed using a hydrophilic gauze pad. After centrifugation, the differential cell count was performed considering 300 nucleated cells. The filtrated aliquots results presented a significant increase of macrophages count and a significant decrease in neutrophils count comparing to the results of non-filtrated aliquots. These findings were consistent with results of filtered bronchoalveolar wash published studies. Therefore, the filtration of TBW is not an efficient method(AU)

O lavado traqueobrônquico (LTB) é um método usado para recuperar uma amostra de células das vias respiratórias. A citologia do LTB é descrita como uma importante ferramenta no diagnóstico de doença pulmonar em equinos. O excesso de muco geralmente presente no LTB pode alterar a morfologia, dificultando a identificação dos tipos celulares e, por consequência, prejudicando a contagem diferencial de células e a interpretação diagnóstica. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da filtração do LTB de equinos sobre a contagem diferencial de células na avaliação citológica do lavado traqueobrônquico. Foram utilizados 30 equinos que foram submetidos a coletas de amostras de LTB via endoscópio. De cada amostra obtida foi separada uma primeira alíquota não filtrada (NF). Uma segunda alíquota (F) foi obtida filtrando-se o LTB, utilizando-se uma compressa de gaze hidrófila. As alíquotas F e NF foram submetidas à citocentrifugação para contagem diferencial de 300 células nucleadas. Verificou-se um aumento significativo no percentual de macrófagos e redução significativa de neutrófilos nas amostras filtradas. As alterações observadas foram condizentes com achados de estudos prévios realizados em lavado broncoalveolar. Conclui-se que a filtração do LTB não é uma metodologia aconselhável, pois acarreta em alterações de contagem significativas nas proporções de importantes marcadores celulares de inflamação, podendo gerar possíveis erros de diagnóstico(AU)

EQUINE TRACHEOBRONCHIAL WASH FILTRATION AND ITS EFFECTS ON DIFFERENTIAL CELL COUNT

Abstract Tracheobronchial wash (TBW) is a method to recover cell samples from the airways. The cytology of TBW fluid is an important technique for the diagnosis of pulmonary diseases in horses. Excessive mucus in TBW may cause cell damage and morphological changes that hinder cell type recognition, resulting in a misdiagnosis. The aim of this study was to compare the results of differential cell count in a tracheobronchial wash of filtered and non-filtered samples. Endoscopy and TBW procedures were performed in thirty horses. Each TBW sample was split into two aliquots. Two groups were formed: non-filtrated aliquots (NF) and filtrated aliquots (F). The filtration was performed using a hydrophilic gauze pad. After centrifugation, the differential cell count was performed considering 300 nucleated cells. The filtrated aliquots results presented a significant increase of macrophages count and a significant decrease in neutrophils count comparing to the results of non-filtrated aliquots. These findings were consistent with results of filtered bronchoalveolar wash published studies. Therefore, the filtration of TBW is not an efficient method.

Resumo O lavado traqueobrônquico (LTB) é um método usado para recuperar uma amostra de células das vias respiratórias. A citologia do LTB é descrita como uma importante ferramenta no diagnóstico de doença pulmonar em equinos. O excesso de muco geralmente presente no LTB pode alterar a morfologia, dificultando a identificação dos tipos celulares e, por consequência, prejudicando a contagem diferencial de células e a interpretação diagnóstica. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da filtração do LTB de equinos sobre a contagem diferencial de células na avaliação citológica do lavado traqueobrônquico. Foram utilizados 30 equinos que foram submetidos a coletas de amostras de LTB via endoscópio. De cada amostra obtida foi separada uma primeira alíquota não filtrada (NF). Uma segunda alíquota (F) foi obtida filtrando-se o LTB, utilizando-se uma compressa de gaze hidrófila. As alíquotas F e NF foram submetidas à citocentrifugação para contagem diferencial de 300 células nucleadas. Verificou-se um aumento significativo no percentual de macrófagos e redução significativa de neutrófilos nas amostras filtradas. As alterações observadas foram condizentes com achados de estudos prévios realizados em lavado broncoalveolar. Conclui-se que a filtração do LTB não é uma metodologia aconselhável, pois acarreta em alterações de contagem significativas nas proporções de importantes marcadores celulares de inflamação, podendo gerar possíveis erros de diagnóstico.

Atividade da fosfatase alcalina no lavado broncoalveolar de equinos de policiamento montado no Estado do Rio de Janeiro / Alkaline phosphatase activity in bronchoalveolar lavage of police horses in Rio de Janeiro State, Brazil

A utilidade da determinação das atividades enzimáticas no trato respiratório posterior como ferramenta diagnóstica já foi demonstrada em várias espécies. Nesse contexto, este trabalho teve por objetivo determinar a atividade da Fosfatase Alcalina (FAL) no lavado broncoalveolar (LBA) de equinos da Polícia Militar do Estado do Rio de Janeiro, comparando animais sadios com portadores assintomáticos de doença inflamatória das vias aéreas (DIVA). Para tal, foram avaliados 28 animais adultos, machos, sem histórico de doença respiratória nos dois meses anteriores ao estudo, com os resultados dos exames físicos e laboratoriais (FAL sanguínea, hematócrito, leucograma, proteína total e fibrinogênio plasmáticos) dentro dos parâmetros fisiológicos. Os equinos foram divididos em dois grupos de acordo com o resultado da citologia broncoalveolar. A determinação da atividade da FAL foi realizada por meio de espectrofotometria a partir de alíquotas do sobrenadante do LBA preservadas em nitrogênio líquido. Para a estimativa do fluido epitelial pulmonar e da atividade da FAL neste, foi realizada a correção da diluição provocada pelo lavado. Os equinos com contagem diferencial de tipos celulares compatível com DIVA apresentaram atividade de FAL no LBA menor, quando comparados aos animais sadios, podendo essa dosagem ser utilizada como complementação do diagnóstico da DIVA.(AU)

The use of determining the enzymatic activities in the posterior respiratory tract as a diagnostic tool has already been demonstrated in several species. In this context, this paper aims to determine the activity of alkaline phosphatase (ALP) in the bronchoalveolar lavage (BAL) of horses from the Military Police of the State of Rio de Janeiro, comparing healthy animals with asymptomatic carriers of an inflammatory airway disease (IAD). Twenty-eight adult male animals with no history of respiratory diseases in the last two months prior to the study were studied. Physical exam and blood laboratory test results (ALP, hematocrit, leukogram, total protein and plasma fibrinogen) were within physiological parameters. The equines were separated into two groups according to the results of the bronchoalveolar cytology. The determination of ALP was done by spectrophotometry with aliquots of the supernatant of the BAL preserved in liquid nitrogen. To estimate pulmonary epithelial lining fluid and ALP activity, correction of the dilution caused by the lavage was done. The horses with a cell type differential count compatible with IAD presented a lower ALP activity in BAL when compared to healthy animals, therefore this dosage can be used as a complement in the diagnosis of IAD.(AU)

Cytology profile and age influence in the equine bronchoalveolar lavage in healthy and asymptomatic inflammatory airway disease

Pulmonary inflammatory diseases have been observed in equine since their domestication. Non-infectious disease processes of the lower airways are amongst the most important diseases of the equine respiratory tract. This study aims to determine the cytology profile and effect of age on the evaluation of equine bronchoalveolar lavage (BAL) obtained from healthy animals and from horses with asymptomatic inflammatory airway disease (IAD). Thirty two horses, including 20 males and 12 females, without clinical signs of pulmonary disease and with age varying from 4 to 21 years, were assigned to two groups: 15 animals in the control group and 17 in the asymptomatic group. Groups were divided according to physical examination and mucous accumulation observed during tracheal endoscopy. The BAL results from healthy and asymptomatic horses were, respectively: 56.9% and 48.0% macrophages, 37.2% and 40.0% lymphocytes, 3.3% and 7.1% neutrophils, 1.7% and 1.4% mast cells, 0.3% and 0.7% eosinophils; 0,5% and 0.4% epithelial cells. When horses in the two groups were analyzed according to their age range, no differences were found. In conclusion, IAD in the asymptomatic group was significantly different from the control group. The asymptomatic horses presented a discrete infiltrate of neutrophils, which does not influence cytological evaluation of BAL.

Doenças inflamatórias pulmonares são observadas na espécie equina desde sua domesticação. Dentre as enfermidades de maior importância do trato respiratório equino, estão os distúrbios não infecciosos de vias aéreas posteriores. Este trabalho teve por objetivo determinar o perfil citológico e o efeito da idade na avaliação do lavado broncoalveolar (LBA) de equinos sadios e com Doença Inflamatória das Vias Aéreas (DIVA) assintomática. Foram utilizados 32 equinos adultos, aparentemente sadios, de ambos os sexos (20 machos e 12 fêmeas), com faixa etária média semelhante, sendo 15 animais do grupo controle e 17 animais do grupo doente assintomático. Os grupos foram estabelecidos segundo os critérios de GERBER et al. (2004) para acúmulo de muco traqueal após a realização de exames físicos diretos e endoscopia traqueal. Foi realizado o LBA e o percentual dos valores médios obtidos na análise citológica dos cavalos sadios e com DIVA assintomática foram, respectivamente: 56,9% e 48,0% de macrófagos, 37,2% e 40,0% de linfócitos, 3,3% e 7,1% de neutrófilos, 1,7% e 1,4% de mastócitos, 0,3% e 0,7% de eosinófilos; e 0,5% e 0,4% de células epiteliais. Concluiu-se que a DIVA nos animais integrantes do grupo doente assintomático caracterizou- se por um discreto infiltrado de neutrófilos e que a idade não influencia na avaliação citológica do LBA.

Cytology profile and age influence in the equine bronchoalveolar lavage in healthy and asymptomatic inflammatory airway disease

Pulmonary inflammatory diseases have been observed in equine since their domestication. Non-infectious disease processes of the lower airways are amongst the most important diseases of the equine respiratory tract. This study aims to determine the cytology profile and effect of age on the evaluation of equine bronchoalveolar lavage (BAL) obtained from healthy animals and from horses with asymptomatic inflammatory airway disease (IAD). Thirty two horses, including 20 males and 12 females, without clinical signs of pulmonary disease and with age varying from 4 to 21 years, were assigned to two groups: 15 animals in the control group and 17 in the asymptomatic group. Groups were divided according to physical examination and mucous accumulation observed during tracheal endoscopy. The BAL results from healthy and asymptomatic horses were, respectively: 56.9% and 48.0% macrophages, 37.2% and 40.0% lymphocytes, 3.3% and 7.1% neutrophils, 1.7% and 1.4% mast cells, 0.3% and 0.7% eosinophils; 0,5% and 0.4% epithelial cells. When horses in the two groups were analyzed according to their age range, no differences were found. In conclusion, IAD in the asymptomatic group was significantly different from the control group. The asymptomatic horses presented a discrete infiltrate of neutrophils, which does not influence cytological evaluation of BAL.

Doenças inflamatórias pulmonares são observadas na espécie equina desde sua domesticação. Dentre as enfermidades de maior importância do trato respiratório equino, estão os distúrbios não infecciosos de vias aéreas posteriores. Este trabalho teve por objetivo determinar o perfil citológico e o efeito da idade na avaliação do lavado broncoalveolar (LBA) de equinos sadios e com Doença Inflamatória das Vias Aéreas (DIVA) assintomática. Foram utilizados 32 equinos adultos, aparentemente sadios, de ambos os sexos (20 machos e 12 fêmeas), com faixa etária média semelhante, sendo 15 animais do grupo controle e 17 animais do grupo doente assintomático. Os grupos foram estabelecidos segundo os critérios de GERBER et al. (2004) para acúmulo de muco traqueal após a realização de exames físicos diretos e endoscopia traqueal. Foi realizado o LBA e o percentual dos valores médios obtidos na análise citológica dos cavalos sadios e com DIVA assintomática foram, respectivamente: 56,9% e 48,0% de macrófagos, 37,2% e 40,0% de linfócitos, 3,3% e 7,1% de neutrófilos, 1,7% e 1,4% de mastócitos, 0,3% e 0,7% de eosinófilos; e 0,5% e 0,4% de células epiteliais. Concluiu-se que a DIVA nos animais integrantes do grupo doente assintomático caracterizou- se por um discreto infiltrado de neutrófilos e que a idade não influencia na avaliação citológica do LBA.

Cytology profile and age influence in the equine bronchoalveolar lavage in healthy and asymptomatic inflammatory airway disease

Pulmonary inflammatory diseases have been observed in equine since their domestication. Non-infectious disease processes of the lower airways are amongst the most important diseases of the equine respiratory tract. This study aims to determine the cytology profile and effect of age on the evaluation of equine bronchoalveolar lavage (BAL) obtained from healthy animals and from horses with asymptomatic inflammatory airway disease (IAD). Thirty two horses, including 20 males and 12 females, without clinical signs of pulmonary disease and with age varying from 4 to 21 years, were assigned to two groups: 15 animals in the control group and 17 in the asymptomatic group. Groups were divided according to physical examination and mucous accumulation observed during tracheal endoscopy. The BAL results from healthy and asymptomatic horses were, respectively: 56.9% and 48.0% macrophages, 37.2% and 40.0% lymphocytes, 3.3% and 7.1% neutrophils, 1.7% and 1.4% mast cells, 0.3% and 0.7% eosinophils; 0,5% and 0.4% epithelial cells. When horses in the two groups were analyzed according to their age range, no differences were found. In conclusion, IAD in the asymptomatic group was significantly different from the control group. The asymptomatic horses presented a discrete infiltrate of neutrophils, which does not influence cytological evaluation of BAL.

Doenças inflamatórias pulmonares são observadas na espécie equina desde sua domesticação. Dentre as enfermidades de maior importância do trato respiratório equino, estão os distúrbios não infecciosos de vias aéreas posteriores. Este trabalho teve por objetivo determinar o perfil citológico e o efeito da idade na avaliação do lavado broncoalveolar (LBA) de equinos sadios e com Doença Inflamatória das Vias Aéreas (DIVA) assintomática. Foram utilizados 32 equinos adultos, aparentemente sadios, de ambos os sexos (20 machos e 12 fêmeas), com faixa etária média semelhante, sendo 15 animais do grupo controle e 17 animais do grupo doente assintomático. Os grupos foram estabelecidos segundo os critérios de GERBER et al. (2004) para acúmulo de muco traqueal após a realização de exames físicos diretos e endoscopia traqueal. Foi realizado o LBA e o percentual dos valores médios obtidos na análise citológica dos cavalos sadios e com DIVA assintomática foram, respectivamente: 56,9% e 48,0% de macrófagos, 37,2% e 40,0% de linfócitos, 3,3% e 7,1% de neutrófilos, 1,7% e 1,4% de mastócitos, 0,3% e 0,7% de eosinófilos; e 0,5% e 0,4% de células epiteliais. Concluiu-se que a DIVA nos animais integrantes do grupo doente assintomático caracterizou- se por um discreto infiltrado de neutrófilos e que a idade não influencia na avaliação citológica do LBA.

Comparison between linear smear concentration and cytocentrifugation techniques to evaluate equine bronchoalveolar lavage cytology / Comparação entre as técnicas de esfregaço linear e citocentrifugação para avaliação citológica do lavado broncoalveolar equino

The bronchoalveolar lavage (BAL) is a sensitive method to diagnose diseases of the distal portion of the lower respiratory tract and has been broadly used by numerous researchers. Cytocentrifugation is the choice cytological preparation technique, but demands specific and costly equipment. Therefore, the present paper intends to verify the applicability of the linear smear technique to evaluate BAL samples. For this, BAL samples of 30 equines were used and the cytological preparations were done by cytocentrifugation and linear smear techniques. All glass microscope slides were fixed and stained with Giemsa for the differential cell count. Regarding the effect of the preparation technique on differential counts, no significant difference in any cell type was found. The linear smear is a reliable alternative and can be recommended as a substitution to cytocentrifugation.(AU)

O lavado broncoalveolar (LBA) é um método sensível para diagnosticar doenças do trato respiratório posterior e vem sendo utilizado por diversos pesquisadores. A citocentrifugação, técnica de escolha para processar amostras citológicas de LBA, exige equipamentos específicos e caros. Por isso, este trabalho verificou a aplicabilidade da técnica de esfregaço linear para avaliação citológica do LBA. Foram utilizadas amostras de LBA de 30 equinos adultos. As preparações citológicas foram realizadas tanto por citocentrifugação quanto por esfregaço linear. Todas as lâminas foram fixadas e coradas com Giemsa para realização da contagem celular diferencial. Não foram encontradas alterações morfológicas significativas e nem diferenças estatísticas entre nenhum dos tipos celulares processados pelos dois métodos, o que permite afirmar que o método de esfregaço linear é uma alternativa segura para avaliação morfológica celular do LBA de equinos, podendo ser utilizado no lugar da citocentrifugação quando esta não estiver disponível.(AU)

Determinação da atividade da fosfatase alcalina (EC 3.1.3.1) no lavado traqueal de equinos da Polícia Militar do Estado do Rio de Janeiro

Doenças respiratórias são a segunda principal causa de interrupção do treino de cavalos atletas, sendo responsáveis por perdas econômicas consideráveis no setor equestre mundial. A importância clínica das determinações das atividades enzimáticas como ferramenta diagnóstica das enfermidades do trato respiratório posterior já foi demonstrada em várias espécies, mas esses estudos ainda são escassos na espécie equina. Por isso, o objetivo deste trabalho foi determinar a atividade da Fosfatase Alcalina (FAL) no lavado traqueal (LT) de equinos considerados sadios e equinos portadores de inflamação do trato respiratório posterior, de acordo com o escore endoscópico e perfil citológico da traqueia. Para tal, foram avaliados 36 cavalos machos, adultos, pertencentes à Polícia Militar do Estado do Rio de Janeiro. Todos os animais apresentaram resultados do exame físico, hemogasometria, hematócrito, leucograma, proteína total e fibrinogênio plasmáticos dentro dos parâmetros fisiológicos. Os equinos selecionados foram submetidos ao exame endoscópico para quantificação do muco traqueal e coleta do lavado. O LT foi utilizado para citologia traqueal e dosagem da atividade da FAL, realizada por espectrofotometria a partir de alíquotas do sobrenadante preservadas em nitrogênio líquido. Esses 36 equinos foram classificados em três categorias divididos em sadios e/ou com inflamação: categoria 1 - endoscopia (GE1 e GE2), categoria 2 citologia (GC1 e GC2) e categoria 3 endoscopia + citologia (G1, G2, G3 e G4). A atividade da FAL no LT dos cavalos com achados compatíveis com inflamação do trato respiratório posterior (GE2, GC2, G4) foi maior que nos cavalos considerados sadios (GE1, GC1 e G1, respectivamente), sendo esta diferença estatisticamente significativa (P=0,021) entre os GC1 (10282,85 ± 5856,97) e GC2 (18865,05 ± 11233,40). A determinação da FAL no LT pode ser usada como complementação do diagnóstico de enfermidades respiratórias, estando esta elevada em equinos adultos, sem queixas clínicas, com perfil citológico traqueal compatível com inflamação do trato respiratório posterior