Histopathological evaluation and expression profile of PRM-1, TNP-2, 17B-HSD3, LHR, MHC-I, MIC-B, NC1 and NC3 genes in bovine testis / Análise histopatológica e perfil de expressão dos genes PRM-1, TNP-2, 17B-HSD3, LHR, MHC-I, MIC-B, NC1 e NC3 em testículo bovino

Histopathological and spermatogenesis classification by Johnsen is widely used in the germinal epithelium maturation analysis, besides identifying pathological alterations able to cause subfertility and even infertility. The aim of this study was to analyze cell-differentiation histopathological data and to correlate them with expression of PRM-1, TNP-2, 17β-HSD3, LHR, generic MHC-I, MIC-B, NC1 and NC3 genes, involved in bovine spermatogenesis using qRT-PCR from testicular parenchyma. Based on Johnsen’s criteria, the results showed normal spermatogenic activity in these animals, classified at 6, 7 and 8 scores. The qRT-PCR analysis expression showed that MHC-I (generic) gene was less expressed than all the other genes in evaluated scores (p < 0.05) and, PRM-1 and TNP-2 were the most expressed genes (p < 0.05). The PRM-1 gene expression was significantly higher than TNP-2 (p < 0.05). Comparing scores, 17β-HSD3 gene expression was lower (p < 0.05) in score 6 when compared to scores 7 and 8 animals. It was also observed that PRM-1 expression was lower in score 6 when compared to 7, as well as TNP-2 gene was less expressed in the score 6 (p < 0.05) when compared to 7 and 8 scores. Our results demonstrated that MHC I (generic), MIC-B, NC1, NC3, and LHR genes are poorly expressed in bovine testis, suggesting their marginal action on spermatogenesis. Instead, PRM-1, TNP-2, and 17β-HSD3 expression were higher, supporting the notion that these genes can act directly on the germ cells differential development during bovine spermatogenesis.

A classificação histopatológica e espermatogênica segundo Johnsen é amplamente utilizada na análise da matu-ração do epitélio germinativo, além de identificar alterações patológicas capazes de causar subfertilidade e até infertilidade. O objetivo deste estudo foi analisar dados histopatológicos de diferenciação celular e correlacioná-los à expressão dos genes PRM-1, TNP-2, 17β-HSD3, LHR, MHC-I genérico, MIC-B, NC1 e NC3, envolvidos na espermatogênese bovina usando qRT-PCR do parênquima testicular. Com base nos critérios de Johnsen, os resultados demonstraram atividade espermatogê-nica normal nesses animais, classificados nos escores 6, 7 e 8. A análise de expressão gênica (qRT-PCR) demonstrou que o gene MHC-I (genérico) foi menos expresso do que os demais nos escores avaliados (p < 0,05) e, PRM-1 e TNP-2 foram os mais expressos (p < 0,05). A expressão do PRM-1 foi significativamente maior do que TNP-2 (p < 0,05). Comparando os escores, a expressão do 17β-HSD3 foi menor (p < 0,05) no escore 6 quando comparado aos escores 7 e 8. Observou-se também que a expressão do PRM-1 foi menor no escore 6 quando comparado ao 7, bem como o TNP-2 foi menos expresso no escore 6 (p < 0,05) quando comparado aos escores 7 e 8. Nossos resultados demonstraram que os genes MHC-I (genérico), MIC-B, NC1, NC3 e LHR são pouco expressos em testículos bovinos, sugerindo sua ação indireta na espermatogênese. Em contrapartida, a expressão de PRM-1, TNP-2 e 17β-HSD3 foi alta, corroborando com a hipótese de que esses genes podem atuar diretamente no desenvolvimento diferencial de células germinativas durante a espermatogênese bovina.

Histopathological evaluation and expression profile of PRM-1, TNP-2, 17B-HSD3, LHR, MHC-I, MIC-B, NC1 and NC3 genes in bovine testis / Análise histopatológica e perfil de expressão dos genes PRM-1, TNP-2, 17B-HSD3, LHR, MHC-I, MIC-B, NC1 e NC3 em testículo bovino

Histopathological and spermatogenesis classification by Johnsen is widely used in the germinal epithelium maturation analysis, besides identifying pathological alterations able to cause subfertility and even infertility. The aim of this study was to analyze cell-differentiation histopathological data and to correlate them with expression of PRM-1, TNP-2, 17β-HSD3, LHR, generic MHC-I, MIC-B, NC1 and NC3 genes, involved in bovine spermatogenesis using qRT-PCR from testicular parenchyma. Based on Johnsens criteria, the results showed normal spermatogenic activity in these animals, classified at 6, 7 and 8 scores. The qRT-PCR analysis expression showed that MHC-I (generic) gene was less expressed than all the other genes in evaluated scores (p < 0.05) and, PRM-1 and TNP-2 were the most expressed genes (p < 0.05). The PRM-1 gene expression was significantly higher than TNP-2 (p < 0.05). Comparing scores, 17β-HSD3 gene expression was lower (p < 0.05) in score 6 when compared to scores 7 and 8 animals. It was also observed that PRM-1 expression was lower in score 6 when compared to 7, as well as TNP-2 gene was less expressed in the score 6 (p < 0.05) when compared to 7 and 8 scores. Our results demonstrated that MHC I (generic), MIC-B, NC1, NC3, and LHR genes are poorly expressed in bovine testis, suggesting their marginal action on spermatogenesis. Instead, PRM-1, TNP-2, and 17β-HSD3 expression were higher, supporting the notion that these genes can act directly on the germ cells differential development during bovine spermatogenesis.(AU)

A classificação histopatológica e espermatogênica segundo Johnsen é amplamente utilizada na análise da matu-ração do epitélio germinativo, além de identificar alterações patológicas capazes de causar subfertilidade e até infertilidade. O objetivo deste estudo foi analisar dados histopatológicos de diferenciação celular e correlacioná-los à expressão dos genes PRM-1, TNP-2, 17β-HSD3, LHR, MHC-I genérico, MIC-B, NC1 e NC3, envolvidos na espermatogênese bovina usando qRT-PCR do parênquima testicular. Com base nos critérios de Johnsen, os resultados demonstraram atividade espermatogê-nica normal nesses animais, classificados nos escores 6, 7 e 8. A análise de expressão gênica (qRT-PCR) demonstrou que o gene MHC-I (genérico) foi menos expresso do que os demais nos escores avaliados (p < 0,05) e, PRM-1 e TNP-2 foram os mais expressos (p < 0,05). A expressão do PRM-1 foi significativamente maior do que TNP-2 (p < 0,05). Comparando os escores, a expressão do 17β-HSD3 foi menor (p < 0,05) no escore 6 quando comparado aos escores 7 e 8. Observou-se também que a expressão do PRM-1 foi menor no escore 6 quando comparado ao 7, bem como o TNP-2 foi menos expresso no escore 6 (p < 0,05) quando comparado aos escores 7 e 8. Nossos resultados demonstraram que os genes MHC-I (genérico), MIC-B, NC1, NC3 e LHR são pouco expressos em testículos bovinos, sugerindo sua ação indireta na espermatogênese. Em contrapartida, a expressão de PRM-1, TNP-2 e 17β-HSD3 foi alta, corroborando com a hipótese de que esses genes podem atuar diretamente no desenvolvimento diferencial de células germinativas durante a espermatogênese bovina.(AU)

Molecular detection of Anaplasmataceae agents in Dasyprocta azarae in northeastern Brazil

Recently, the importance of wild-living rodents for maintenance of pathogens of the family Anaplasmataceae in the environment was investigated. These mammals play a role as reservoirs for these pathogens and act as hosts for the immature stages of tick vectors. The aim of the present study was to investigate the prevalence of Ehrlichia sp. and Anaplasma sp. in 24 specimens of Azaras agouti (Dasyprocta azarae) that had been trapped in the Itapiracَ Environmental Reserve, in Sمo Luيs, Maranhمo, northeastern Brazil, using molecular methods. Four animals (16.7%) were positive for Ehrlichia spp. in nested PCR assays based on the 16S rRNA gene. In a phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene, using the maximum likelihood method and the GTRGAMMA+I evolutionary model, Ehrlichia sp. genotypes detected in Azaras agoutis were found to be closely related to E. canis and to genotypes relating to E. canis that had previously been detected in free-living animals in Brazil. The present work showed the first molecular detection of Ehrlichia sp. in Azaras agoutis in Brazil.(AU)

Recentemente, a importância de roedores selvagens na manutençمo de agentes Anaplasmataceae no ambiente tem sido investigada, haja visto o papel que tais mamيferos podem desempenhar como reservatَrios para os patَgenos e como hospedeiros para estلgios imaturos dos carrapatos vetores. O presente estudo objetivou investigar a ocorrência de Ehrlichia sp. e Anaplasma sp. em 24 cotias (Dasyprocta azarae) capturadas na Reserva Ambiental de Itapiracَ, em Sمo Luيs, Maranhمo, nordeste do Brazil, utilizando métodos moleculares. Quatro animais (16,7%) mostraram-se positivos nos ensaios de nested PCR para Ehrlichia spp. baseados no gene 16S rRNA gene. Na anلlise filogenética baseda no gene 16S rRNA e utilizando o método de Mلxima Verossimilhança e modelo evolutivo GTRGAMMA+I, os genَtipos de Ehrlichia sp. detectados em cotias mostraram-se filogeneticamente relacionados às sequências de E. canis e outros genَtipos relacionados a E. canis detectados previamente em animais selvagens no Brasil. O presente trabalho mostrou a primeira detecçمo molecular de Ehrlichia sp. em cotias no Brasil.(AU)

Molecular detection of Anaplasmataceae agents in Dasyprocta azarae in northeastern Brazil / Detecção molecular de agentes Anaplasmataceae em Dasyprocta azarae no nordeste do Brasil

Recently, the importance of wild-living rodents for maintenance of pathogens of the family Anaplasmataceae in the environment was investigated. These mammals play a role as reservoirs for these pathogens and act as hosts for the immature stages of tick vectors. The aim of the present study was to investigate the prevalence of Ehrlichia sp. and Anaplasma sp. in 24 specimens of Azaras agouti (Dasyprocta azarae) that had been trapped in the Itapiracó Environmental Reserve, in São Luís, Maranhão, northeastern Brazil, using molecular methods. Four animals (16.7%) were positive for Ehrlichia spp. in nested PCR assays based on the 16S rRNA gene. In a phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene, using the maximum likelihood method and the GTRGAMMA+I evolutionary model, Ehrlichia sp. genotypes detected in Azaras agoutis were found to be closely related to E. canis and to genotypes relating to E. canis that had previously been detected in free-living animals in Brazil. The present work showed the first molecular detection of Ehrlichia sp. in Azaras agoutis in Brazil.(AU)

Recentemente, a importância de roedores selvagens na manutenção de agentes Anaplasmataceae no ambiente tem sido investigada, haja visto o papel que tais mamíferos podem desempenhar como reservatórios para os patógenos e como hospedeiros para estágios imaturos dos carrapatos vetores. O presente estudo objetivou investigar a ocorrência de Ehrlichia sp. e Anaplasma sp. em 24 cotias (Dasyprocta azarae) capturadas na Reserva Ambiental de Itapiracó, em São Luís, Maranhão, nordeste do Brazil, utilizando métodos moleculares. Quatro animais (16,7%) mostraram-se positivos nos ensaios de nested PCR para Ehrlichia spp. baseados no gene 16S rRNA gene. Na análise filogenética baseda no gene 16S rRNA e utilizando o método de Máxima Verossimilhança e modelo evolutivo GTRGAMMA+I, os genótipos de Ehrlichia sp. detectados em cotias mostraram-se filogeneticamente relacionados às sequências de E. canis e outros genótipos relacionados a E. canis detectados previamente em animais selvagens no Brasil. O presente trabalho mostrou a primeira detecção molecular de Ehrlichia sp. em cotias no Brasil.(AU)ipt

Alterações patológicas em rete ovarii de fêmeas bovinas / Anatomopathological changes in rete ovarii of mestizo cattle

O objetivo do presente estudo foi identificar e caracterizar as principais alterações patológicas em rete ovarii, observadas em rebanhobovino mestiço. Foram coletadas amostras de 467 pares de ovários de fêmeas bovinas (gestantes e não gestantes), com idadesvariáveis, provenientes de dois frigoríficos da região metropolitana de Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil, no período de setembroa dezembro de 2012, para avaliação anatomopatológica. Das amostras coletadas, observou-se a rete ovarii em ambos os ladosde 417/467 animais (89,3%). Na análise macroscópica, verificou-se a presença de cistos foliculares (5,03%), cistos de corpo lúteo(0,72%) e secreções purulentas (0,48%) de coloração amarela intensa e consistência viscosa, indicativo de processo inflamatóriosupurativo. No exame microscópico, observaram-se em 23/417 amostras (5,51%), um processo hiperplásico adenomatoso de reteovarii, com espessamento da camada epitelial, modificação do padrão de epitélio variando de cúbico a colunar, com duas ou trêscamadas de células, sendo em alguns momentos ciliadas e com dilatação tubular. Destas amostras, verificou-se associação delesão hiperplásica com infiltrado inflamatório predominantemente linfomacrofágico em 15/23 amostras (65,22%). Ainda em relaçãoàs amostras confirmadas para hiperplasia, observou-se reação proliferativa estromal com característica fibroplástica em 21/23amostras (91,30%). Conclui-se que em fêmeas bovinas mestiças a frequência de alterações encontradas em rete ovarii é baixaou rara e o conhecimento desta lesão pode auxiliar no manejo reprodutivo desta espécie animal, a fim de diagnosticar possíveisalterações patológicas que podem promover subfertilidade e até infertilidade do rebanho bovino, que resultam em significativasperdas econômicas.(AU)

The aim of this study was to identify and characterize the main pathological changes in rete ovarii observed in cattle herdmestizo. Samples were collected from 467 pairs of ovaries of cows (pregnant and non-pregnant), with varying ages, from tworefrigerators in the metropolitan region of Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, in the period from September to December 2012 foranatomopathological evaluation. From samples collected, the rete ovarii was observed on both sides of 417/467 animals (89.3%).In macroscopic analysis, the presence of follicular cysts (5.03%), corpus luteum cyst (0.72%) and purulent discharge (0.48%) withyellow color and viscous consistency indicating a suppurative inflammatory process. At microscopic analysis, were observed in23/417 samples (5.51%), a hyperplastic adenomatous rete ovarii process, and thickening of the epithelial cell layer, with two orthree cell layers of cuboidal to columnar cells, and some cilia and tubular dilatation. From these samples, there was associationbetween hyperplastic lesions with predominantly a lymphomacrofagic inflammatory cell infiltrate in 15/23 samples (65.22%). Alsoin relation to the samples confirmed for hyperplasia, there was proliferating fibroblasts in 21/23 samples (91.30%). It is concludedthat in mestizo cattle the frequency of alterations found in rete ovarii is low or rarity, and the knowledge of this lesion may assistin the reproductive management of this animals species, in order to diagnose possible pathological alterations that can promotesubfertility and even infertility of the herd that results in significant economic losses.(AU)

Genetic diversity of piroplasmids species in equids from island of São Luís, northeastern Brazil / Diversidade genética de espécies de piroplasmídeos em equídeos na ilha de São Luís, Nordeste do Brasil

Equine piroplasmosisis, a tick-borne disease caused by the intra-erythrocytic protozoans Babesia caballi and Theileria equi, has economic importance due to the international trade and the increased movement of horses all over the world. The goal of this study was to evaluate the occurrence of phylogenetic diversity of T. equi and B. caballi genotypes among infected equids from São Luís Island, state of Maranhão, northeastern Brazil. Between December of 2011 and June of 2012, EDTA-blood and serum samples were collected from 139 equids (90 donkeys, 39 horses and 10 mules). From 139 serum samples submitted to ELISA assay, IgG antibodies to T. equi and B. caballi were detected in 19.4% (27/139) and 25.2% (35/139), respectively. Among sampled animals, 21.6% (30/139) and 55.4% (77/139) were positive for cPCR assays for T. equi and B. caballi, based on ema-1 and rap-1 genes, respectively. Overall, the T. equi sequences (n=7) submitted to Maximum Likelihood analysis (based on a 18S rRNA fragment of 1700 bp after alignment) grouped into three main groups, which were subdivided in eight clusters. The present work showed that different genotypes of T. equi and B. caballi circulate among equids in Brazil.(AU)

A piroplasmose equina, uma doença transmitida por carrapatos e causada pelos protozoários intra-eritrocíticos Babesia caballi e Theileria equi, tem importância econômica devido ao comércio internacional e ao aumento do movimento de cavalos em todo o mundo. O objetivo do presente estudo foi mostrar a diversidade filogenética de T. equi e B. caballi infectando cavalos, burros e jumentos na Ilha de São Luís, Estado do Maranhão, Nordeste do Brasil. Entre dezembro de 2011 e junho de 2012, amostras de sangue com EDTA e soro de foram coletadas de 139 equídeos (90 jumentos, 39 cavalos e 10 burros). Dentre as 139 amostras de soro submetidas ao ensaio de ELISA, foram detectados anticorpos IgG contra T. equi e B. caballi em 19,4% (27/139) e 25,2% (35/139), respectivamente. Entre os animais amostrados, 21,6% (30/139) e 55,4% (77/139) foram positivos por meio dos ensaios de cPCR para T. equi e B. caballi, com base nos genes ema-1 e rap-1, respectivamente. No geral, as sequências T. equi (n = 7) submetidas à análise de Máxima Verossimilhança (baseada em um fragmento do 18S rRNA de 1700 pb, após o alinhamento) foram agrupadas em três grupos principais, os quais foram subdivididos em oito grupos. O presente trabalho mostrou que diferentes genótipos de T. equi e B. caballi circulam entre equídeos no Brasil.(AU)