Aplicação de células tronco guiada por ultrassom em lesão do nervo radial em cão - relato de caso

As células-tronco mesenquimais (CTMs)  são células  indiferenciadas que podem ser isoladas de diferentes tecidos, mas primariamente do estroma da medula óssea, e dão origem a tecidos conjuntivos, como ossos, cartilagens, gordura, bem como o sistema vascular e hematopoiético(1,3,4). Descobertas científicas têm demonstrado o potencial de aplicação terapêutico das  CTMs em enfermidades complexas ou lesões de difícil reparação, como as do sistema nervoso, em virtude das suas propriedades  regenerativas, antiinflamatórias e imunomoduladoras (3,4). Entretanto, é importante ressaltar que algumas dificuldades ainda são encontradas para o implante das CTMs no sistema nervoso central e periférico, particularmente em relação a forma de aplicação das células no foco de lesão. Sendo assim, a aplicação  guiada das CTMs com ultrassom se mostra uma alternativa viável para o sistema nervoso periférico, visto que é de fácil aplicação e baixo custo relativo(6). O ultrassom é eficiente na identificação de alterações dos nervos periféricos, para guiar procedimentos como biópsias e mais recentemente na Medicina Veterinária, para auxiliar na terapia celular (2,5). Nesse sentido, o objetivo deste trabalho é relatar um caso bem sucedido de implante de CTMs guiado com ultrassom para o tratamento de lesão de nervo radial em um cão.

Spermatic morphology alterations in beef bulls supplemented or not with zinc in mineral salt / Alterações na morfologia espermática em touros de corte com e sem suplementação de zinco na mistura mineral

Seminal characteristics of bulls without Zn in the mineral supplementation (ZN-0, n=4, 0mg/Zn/kg/dia) were compared with bulls contemporary with appropriate mineral supplementation (ZN-60FI, n=4, 60mg/Zn/kg/dia). The semen was evaluated biweekly, between 17 and 29 months of age. The prevalence of abnormal chromatin and morphometric profile (length, superior and inferior width (µm) and area (µm2) of the sperm head were included in the analysis. ZN-0 bulls presented reduction of normal sperms in relation to ZN-60FI (63.3 ±2.88 x 74.5 ±2.83%), higher abnormal chromatin (16.7 ±2.05 x 9.3 ±0.81%) and abnormal intermediate piece (9.3 ±0.81 x 3.2 ±0.80%), respectively. Abnormalities of intermediate piece were characterized by irregularities in the mitochondrial organization and rupture of the external dense fibers in electronic microscopy. The area of head sperm of ZN-60 bulls was lower (25.0 ±3.8 x 27.9 ±4.6, p

rebanho sem Zn na suplementação mineral (ZN-0, n=4, 0mg/Zn/kg/dia) foram comparadas com as de touros contemporâneos criados com suplementação adequada (ZN-60FI, n=4, 60mg/Zn/kg/dia). O sêmen foi colhido quinzenalmente, entre 17 e 29 meses de idade. Incluíram-se no exame a análise da cromatina espermática e o perfil morfométrico da cabeça espermática, com base no comprimento, largura superior e inferior (µm) e área (µm2). Os touros do ZN-0 apresentaram redução de espermatozoides normais em relação ao ZN-60FI (62,4 ±2,88% x 74,5 ±2,83), sendo que a prevalência de anormalidades de cromatina (16,7 ±2,05%) e de defeitos de peça intermediária (9,3 ±0,81%) foi superior aos do ZN-60FI (9,5 ±2,03 e 3,2 ±0,80, respectivamente). A microscopia eletrônica de transmissão mostrou irregularidades mitocondriais e ruptura dos feixes de fibras densas externas.  Nos touros do ZN-60FI, a área da cabeça espermática foi proporcionalmente inferior a do ZN-0. Conclui-se que touros criados e mantidos a campo, provenientes de rebanhos com deficiência na suplementação de Zn, estão sujeitos à redução da qualidade seminal, por apresentarem maior frequência de anormalidades morfológicas, na cromatina, e nos padrões morfométricos da cabeça espermática com predomínio de lesões na estrutura mitocondrial e nos feixes de fibras densas na peça intermediária.PALAVRAS-CHAVES: Bovino, cromatina, morfometria espermáti

Infertilidade associada a defeito microtubular dos espermatozóides de jumento (Equus asinus) avaliados por microscopia eletrônica de transmissão

A donkey infertility was described by transmission electron microscopy (MET). The spermiogram evaluated by light microscopy showed low sperm motility and high concentration of abnormal sperm with proximal cytoplasmic droplets. The material was evaluated by MET, where it was observed disarrangement of microtubules, causing irregular protrusions in the spermatic neck. The last test done was the in vivo fertility, using four mares, with a reproductive healthy historic, where no pregnancy occurred. Facing the results that we had in vivo, associated with the MET findings, we diagnosed infertility associated with microtubular defect of the spermatozoa.

Descreve-se um caso de infertilidade de um jumento SRD confirmada por meio de microscopia eletrônica de transmissão (MET). O espermiograma, avaliado sob microscopia ótica, revelou baixa motilidade e alta concentração de anormalidades espermáticas do tipo gota citoplasmática proximal. O material foi avaliado por MET, observando-se um acúmulo desordenado de microtúbulos causando protusões irregulares na região do colo espermático. O último teste realizado correspondeu ao de fertilidade in vivo, utilizando-se quatro éguas portadoras de bom histórico reprodutivo, nas quais não foi possível confirmar nenhuma prenhez. Frente aos resultados obtidos, associados aos achados da MET, estabeleceu-se o diagnóstico de infertilidade associada a defeito microtubular dos espermatozóides.

Infertilidade associada a defeito microtubular dos espermatozóides de jumento (Equus asinus) avaliados por microscopia eletrônica de transmissão

A donkey infertility was described by transmission electron microscopy (MET). The spermiogram evaluated by light microscopy showed low sperm motility and high concentration of abnormal sperm with proximal cytoplasmic droplets. The material was evaluated by MET, where it was observed disarrangement of microtubules, causing irregular protrusions in the spermatic neck. The last test done was the in vivo fertility, using four mares, with a reproductive healthy historic, where no pregnancy occurred. Facing the results that we had in vivo, associated with the MET findings, we diagnosed infertility associated with microtubular defect of the spermatozoa.

Descreve-se um caso de infertilidade de um jumento SRD confirmada por meio de microscopia eletrônica de transmissão (MET). O espermiograma, avaliado sob microscopia ótica, revelou baixa motilidade e alta concentração de anormalidades espermáticas do tipo gota citoplasmática proximal. O material foi avaliado por MET, observando-se um acúmulo desordenado de microtúbulos causando protusões irregulares na região do colo espermático. O último teste realizado correspondeu ao de fertilidade in vivo, utilizando-se quatro éguas portadoras de bom histórico reprodutivo, nas quais não foi possível confirmar nenhuma prenhez. Frente aos resultados obtidos, associados aos achados da MET, estabeleceu-se o diagnóstico de infertilidade associada a defeito microtubular dos espermatozóides.

CONSIDERAÇÕES A RESPEITO DO PÓS-PARTO EM BOVINOS.

O puerpério é conhecido como o período que se inicia após o parto e persiste até o restabelecimento da condição de um animal não gestante. Compreendem na liberação dos restos placentários, involução uterina e mecanismos tais como contração uterina e digestão enzimática contribuem para a correta execução desses processos. Sua duração é variável e dependente de vários fatores tais como escore de condição corporal (ECC), produção leiteira, nutrição, condição uterina, entre outros. Tem-se também que para o estabelecimento de nova prenhez, é necessário que ocorra o retorno à ciclicidade por meio do crescimento, maturação e ovulação de um folículo e oócito sadios. Tal fato pode ser afetado pela presença do bezerro, amamentação e ECC em bovinos de corte e balanço energético, escore corporal, parição, estação do ano e doenças em bovinos de leite. Adicionalmente, é de extrema importância a característica do útero para o restabelecimento do estado reprodutivo fisiológico. Doenças uterinas podem afetar na liberação de substâncias que podem ser responsáveis pelo encurtamento ou prolongamento dos ciclos ovarianos, o que pode ocasionar perdas econômicas pelo fato de não atingir-se o desejável de produção de 1 bezerro/vaca/ano.

ASPECTOS BIOQUÍMICOS E ULTRAESTRUTURAIS DA MATURAÇÃO OOCITÁRIA

A maturação oocitária consiste numa etapa crucial e limitante para a produção de embriões in vitro, uma vez que o potencial de desenvolvimento oocitário e embrionário está diretamente relacionado à adequada maturação citoplasmática e nuclear. O bloqueio, reinício e progressão das divisões meióticas assim como as modificações moleculares e estruturais são fundamentais para que o oócito possa finalizar o processo de maturação, sofrer a fertilização, e sustentar os estádios iniciais do desenvolvimento embrionário. Estes eventos envolvem uma complexa interação entre segundo mensageiros, proteínas quinases e fosfatases, que ainda não está totalmente esclarecida. A maturação oocitária in vitro, no entanto, difere em determinados aspectos do observado in vivo. Deste modo, o esclarecimento dos mecanismos de ação das diversas moléculas envolvidas na regulação do processo de maturação oocitária é fundamental para o progresso científico e biotecnológico.Palavras-chave: oócito, maturação, meiose, in vivo, in vitro BIOCHEMICAL AND ULTRASTRUCTURAL ASPECTS OF OOCYTE MATURATION ABSTRACT The oocyte maturation is a crucial and limiting step for the in vitro embryo production, since the development potential of oocytes and embryos is directly related to proper nuclear and cytoplasmic maturation. The arrest, resumption and progression of meiotic divisions as well as molecular and structura

Aspectos bioquímicos e ultraestruturais da maturação oocitária

A maturação oocitária consiste numa etapa crucial e limitante para a produção de embriões in vitro, uma vez que o potencial de desenvolvimento oocitário e embrionário está diretamente relacionado à adequada maturação citoplasmática e nuclear. O bloqueio, reinício e progressão das divisões meióticas assim como as modificações moleculares e estruturais são fundamentais para que o oócito possa finalizar o processo de maturação, sofrer a fertilização, e sustentar os estádios iniciais do desenvolvimento embrionário. Estes eventos envolvem uma complexa interação entre segundo mensageiros, proteínas quinases e fosfatases, que ainda não está totalmente esclarecida. A maturação oocitária in vitro, no entanto, difere em determinados aspectos do observado in vivo. Deste modo, o esclarecimento dos mecanismos de ação das diversas moléculas envolvidas na regulação do processo de maturação oocitária é fundamental para o progresso científico e biotecnológico.Palavras-chave: oócito, maturação, meiose, in vivo, in vitro BIOCHEMICAL AND ULTRASTRUCTURAL ASPECTS OF OOCYTE MATURATION ABSTRACT The oocyte maturation is a crucial and limiting step for the in vitro embryo production, since the development potential of oocytes and embryos is directly related to proper nuclear and cytoplasmic maturation. The arrest, resumption and progression of meiotic divisions as well as molecular and structura

ASPECTOS ULTRAESTRUTURAIS DOS COMPLEXOS CUMULUS-OÓCITO DE MAMÍFEROS DOMÉSTICOS

Nos mamíferos domésticos, a competência oocitária para suportar os subseqüentes estadios de desenvolvimento, que envolve os processos de fertilização e embriogênese inicial, depende não apenas da correta segregação cromossômica que caracteriza a maturação nuclear, mas principalmente, das modificações morfológicas e funcionais ao longo da oogênese e maturação citoplasmática. Qualquer distúrbio no padrão de desenvolvimento e migração das organelas citoplasmáticas assim como no processo de transcrição gênica, síntese proteica e expansão das células do cumulus resultará em menor potencial de desenvolvimento oocitário. Deste modo, dada a relevância do tema, esta revisão visa elucidar os principais aspectos ultraestruturais dos complexos cumulus-oócitos de mamíferos com ênfase aos eventos biológicos que ocorrem ao longo da maturação oocitária.

APLICAÇÃO DE CÉLULAS TRONCO GUIADA POR ULTRASSOM EM LESÃO DO NERVO RADIAL EM CÃO - RELATO DE CASO

As células-tronco mesenquimais (CTMs)  são células  indiferenciadas que podem ser isoladas de diferentes tecidos, mas primariamente do estroma da medula óssea, e dão origem a tecidos conjuntivos, como ossos, cartilagens, gordura, bem como o sistema vascular e hematopoiético(1,3,4). Descobertas científicas têm demonstrado o potencial de aplicação terapêutico das  CTMs em enfermidades complexas ou lesões de difícil reparação, como as do sistema nervoso, em virtude das suas propriedades  regenerativas, antiinflamatórias e imunomoduladoras (3,4). Entretanto, é importante ressaltar que algumas dificuldades ainda são encontradas para o implante das CTMs no sistema nervoso central e periférico, particularmente em relação a forma de aplicação das células no foco de lesão. Sendo assim, a aplicação  guiada das CTMs com ultrassom se mostra uma alternativa viável para o sistema nervoso periférico, visto que é de fácil aplicação e baixo custo relativo(6). O ultrassom é eficiente na identificação de alterações dos nervos periféricos, para guiar procedimentos como biópsias e mais recentemente na Medicina Veterinária, para auxiliar na terapia celular (2,5). Nesse sentido, o objetivo deste trabalho é relatar um caso bem sucedido de implante de CTMs guiado com ultrassom para o tratamento de lesão de nervo radial em um cão.

Aspectos ultraestruturais dos complexos cumulus-oócito de mamíferos domésticos

Nos mamíferos domésticos, a competência oocitária para suportar os subseqüentes estadios de desenvolvimento, que envolve os processos de fertilização e embriogênese inicial, depende não apenas da correta segregação cromossômica que caracteriza a maturação nuclear, mas principalmente, das modificações morfológicas e funcionais ao longo da oogênese e maturação citoplasmática. Qualquer distúrbio no padrão de desenvolvimento e migração das organelas citoplasmáticas assim como no processo de transcrição gênica, síntese proteica e expansão das células do cumulus resultará em menor potencial de desenvolvimento oocitário. Deste modo, dada a relevância do tema, esta revisão visa elucidar os principais aspectos ultraestruturais dos complexos cumulus-oócitos de mamíferos com ênfase aos eventos biológicos que ocorrem ao longo da maturação oocitária.

ANEUPLOIDIA DAS CÉLULAS DA GLIA PROVENIENTES DA CULTURA DE MEDULA ESPINHAL DE EQUINO NEONATO

O objetivo desta comunicação é relatar a ocorrência de aneuploidia em células da glia provenientes do cultivo da medula espinhal de um equino neonato. As células foram mantidas em cultivo até a sexta passagem e caracterizadas pela técnica de imunocitoquimica previamente à análise citogenética. A análise do cariótipo revelou perda ou ganho de um ou mais cromossomos nas células gliais analisadas, quando comparado ao cariótipo normal para espécie equina. A ocorrência de aneuploidia pode ser considerada um achado normal em células jovens, bem como um sinal de enfermidade severa. Desta forma, outros estudos citogenéticos devem ser realizados para elucidar se a elevada ocorrência de aneulpoidia observadas em células da glia no sistema nervoso de neonato equino é achado fisiológico ou patológico.

SPERMATIC MORPHOLOGY ALTERATIONS IN BEEF BULLS SUPPLEMENTED OR NOT WITH ZINC IN MINERAL SALT / ALTERAÇÕES NA MORFOLOGIA ESPERMÁTICA EM TOUROS DE CORTE COM E SEM SUPLEMENTAÇÃO DE ZINCO NA MISTURA MINERAL

Seminal characteristics of bulls without Zn in the mineral supplementation (ZN-0, n=4, 0mg/Zn/kg/dia) were compared with bulls contemporary with appropriate mineral supplementation (ZN-60FI, n=4, 60mg/Zn/kg/dia). The semen was evaluated biweekly, between 17 and 29 months of age. The prevalence of abnormal chromatin and morphometric profile (length, superior and inferior width (µm) and area (µm2) of the sperm head were included in the analysis. ZN-0 bulls presented reduction of normal sperms in relation to ZN-60FI (63.3 ±2.88 x 74.5 ±2.83%), higher abnormal chromatin (16.7 ±2.05 x 9.3 ±0.81%) and abnormal intermediate piece (9.3 ±0.81 x 3.2 ±0.80%), respectively. Abnormalities of intermediate piece were characterized by irregularities in the mitochondrial organization and rupture of the external dense fibers in electronic microscopy. The area of head sperm of ZN-60 bulls was lower (25.0 ±3.8 x 27.9 ±4.6, p

rebanho sem Zn na suplementação mineral (ZN-0, n=4, 0mg/Zn/kg/dia) foram comparadas com as de touros contemporâneos criados com suplementação adequada (ZN-60FI, n=4, 60mg/Zn/kg/dia). O sêmen foi colhido quinzenalmente, entre 17 e 29 meses de idade. Incluíram-se no exame a análise da cromatina espermática e o perfil morfométrico da cabeça espermática, com base no comprimento, largura superior e inferior (µm) e área (µm2). Os touros do ZN-0 apresentaram redução de espermatozoides normais em relação ao ZN-60FI (62,4 ±2,88% x 74,5 ±2,83), sendo que a prevalência de anormalidades de cromatina (16,7 ±2,05%) e de defeitos de peça intermediária (9,3 ±0,81%) foi superior aos do ZN-60FI (9,5 ±2,03 e 3,2 ±0,80, respectivamente). A microscopia eletrônica de transmissão mostrou irregularidades mitocondriais e ruptura dos feixes de fibras densas externas.  Nos touros do ZN-60FI, a área da cabeça espermática foi proporcionalmente inferior a do ZN-0. Conclui-se que touros criados e mantidos a campo, provenientes de rebanhos com deficiência na suplementação de Zn, estão sujeitos à redução da qualidade seminal, por apresentarem maior frequência de anormalidades morfológicas, na cromatina, e nos padrões morfométricos da cabeça espermática com predomínio de lesões na estrutura mitocondrial e nos feixes de fibras densas na peça intermediária.PALAVRAS-CHAVES: Bovino, cromatina, morfometria espermáti