Resistance of bovine gastrointestinal nematodes to four classes of anthelmintics in the semiarid region of Paraíba state, Brazil / Resistência de nematódeos gastrintestinais de bovinos à quatro classes de anti-helmínticos no semiárido do Estado da Paraíba, Brasil

The effectiveness of four anthelmintic classes on cattle gastrointestinal nematodes in the semi-arid region of Paraiba State, Brazil, was evaluated. Twenty farms were used, testing 40 animals in each one, totaling 800 animals. Cattle were divided into four groups composed with ten animals: I, treated with albendazole sulfoxide 15%; II, treated with ivermectin 1%; III, treated with closantel 25%; IV, treated with levamisole hydrochloride 7.5%. All treatments were administered subcutaneously. For the Fecal Egg Count Reduction Test (FECRT), individual fecal samples were collected on days 0 and 14, and sent for analysis of egg count per gram of feces (EPG) and larval cultures. It was observed that multiresistance was present in 95% (19/20) of the farms. Resistance to ivermectin and albendazole was observed in 95% (19/20), to closantel in 75% (15/20) and to levamisole in 20% (4/20). The most used management system was semi-intensive (75%; 15/20) and the ivermectin was the most reported drug for controlling helminths (65%; 13/20). Haemonchus spp. was the most prevalent helminth genus. It was concluded that the anthelmintic resistance of bovine gastrointestinal nematodes is high in the semi-arid of Paraíba State, Brazil, with multiresistance observed mainly to ivermectin, albendazole and closantel.(AU)

Avaliou-se a eficácia de quatro classes de anti-helmínticos sobre nematódeos gastrintestinais de bovinos na região semiárida da Paraíba, Brasil. Foram utilizadas 20 fazendas, sendo testados 40 animais em cada uma, totalizando 800 animais. Os bovinos foram distribuídos em quatro grupos compostos por dez animais: I, tratado com sulfóxido de albendazol 15%; II, tratado com ivermectina 1%; III, tratado com closantel 25%; IV, tratado com cloridrato de levamisole 7,5%. Para o Teste de Redução da Contagem de Ovos Fecais (TRCOF), amostras fecais individuais foram coletadas nos dias 0 e 14 e enviadas para análises de contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e coproculturas. Observou-se que a multirressistência estava presente em 95% (19/20) das fazendas. Foi observada resistência à ivermectina e ao albendazol, em 95% das fazendas (19/20); ao closantel, em 75% (15/20) e, ao levamisole, em 20% (4/20). O sistema de manejo mais utilizado foi o semi-intensivo (75%; 15/20) e a ivermectina foi o fármaco mais relatado para controle de verminose (65%; 13/20). O gênero de helminto mais prevalente foi Haemonchus spp. (76,7%). Conclui-se que é alta a resistência anti-helmíntica por nematódeos gastrintestinais de bovinos no Semiárido da Paraíba, Brasil, com multirressistência observada principalmente à ivermectina, ao albendazol e ao closantel.(AU)

Resistance of bovine gastrointestinal nematodes to four classes of anthelmintics in the semiarid region of Paraíba state, Brazil / Resistência de nematódeos gastrintestinais de bovinos à quatro classes de anti-helmínticos no semiárido do Estado da Paraíba, Brasil

Abstract The effectiveness of four anthelmintic classes on cattle gastrointestinal nematodes in the semi-arid region of Paraiba State, Brazil, was evaluated. Twenty farms were used, testing 40 animals in each one, totaling 800 animals. Cattle were divided into four groups composed with ten animals: I, treated with albendazole sulfoxide 15%; II, treated with ivermectin 1%; III, treated with closantel 25%; IV, treated with levamisole hydrochloride 7.5%. All treatments were administered subcutaneously. For the Fecal Egg Count Reduction Test (FECRT), individual fecal samples were collected on days 0 and 14, and sent for analysis of egg count per gram of feces (EPG) and larval cultures. It was observed that multiresistance was present in 95% (19/20) of the farms. Resistance to ivermectin and albendazole was observed in 95% (19/20), to closantel in 75% (15/20) and to levamisole in 20% (4/20). The most used management system was semi-intensive (75%; 15/20) and the ivermectin was the most reported drug for controlling helminths (65%; 13/20). Haemonchus spp. was the most prevalent helminth genus. It was concluded that the anthelmintic resistance of bovine gastrointestinal nematodes is high in the semi-arid of Paraíba State, Brazil, with multiresistance observed mainly to ivermectin, albendazole and closantel.

Resumo Avaliou-se a eficácia de quatro classes de anti-helmínticos sobre nematódeos gastrintestinais de bovinos na região semiárida da Paraíba, Brasil. Foram utilizadas 20 fazendas, sendo testados 40 animais em cada uma, totalizando 800 animais. Os bovinos foram distribuídos em quatro grupos compostos por dez animais: I, tratado com sulfóxido de albendazol 15%; II, tratado com ivermectina 1%; III, tratado com closantel 25%; IV, tratado com cloridrato de levamisole 7,5%. Para o Teste de Redução da Contagem de Ovos Fecais (TRCOF), amostras fecais individuais foram coletadas nos dias 0 e 14 e enviadas para análises de contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e coproculturas. Observou-se que a multirressistência estava presente em 95% (19/20) das fazendas. Foi observada resistência à ivermectina e ao albendazol, em 95% das fazendas (19/20); ao closantel, em 75% (15/20) e, ao levamisole, em 20% (4/20). O sistema de manejo mais utilizado foi o semi-intensivo (75%; 15/20) e a ivermectina foi o fármaco mais relatado para controle de verminose (65%; 13/20). O gênero de helminto mais prevalente foi Haemonchus spp. (76,7%). Conclui-se que é alta a resistência anti-helmíntica por nematódeos gastrintestinais de bovinos no Semiárido da Paraíba, Brasil, com multirressistência observada principalmente à ivermectina, ao albendazol e ao closantel.

Efficacy, toxicity, and lethality of plants with potential anthelmintic activity in small ruminants in Brazil / Eficácia, toxicidade e letalidade de plantas com potencial atividade anti-helmíntica em pequenos ruminantes no Brasil

The use of medicinal plants as a therapeutic method in the control of diseases has been increasing in animal production. In the case of small ruminants, the endoparasitic disease is a major concern, since they are considered the greater sanitary problem, especially when considering the phenomenon of parasite resistance to the medicines used. Therefore, the development of alternative methods of endoparasitary control in goats and sheep has become a pressing need. The use of plants to control endoparasites can reduce the use of chemical inputs, making more environmentally sustainable livestock, minimizing the occurrence of parasitic resistance to conventional medicines and contributing to the reduction of production costs. In this sense, several studies have been carried out in order to evaluate the in vitro and in vivo activity of plants with anthelmintic potential. However, despite the potentiality found in many studies, the results are sometimes contradictory or do not replicate in vivo the same efficacy obtained in the in vitro assays. Another relevant aspect is the low utilization of the lethality and toxicity tests, which are indispensable so that the knowledge can be spread and applied by the producers in their herds. Thus, this review aims to provide the results from studies carried out in Brazil with extract of plants with potential for control of parasitic disease in goats and sheep, describing the main evaluated plants species, mechanisms of action, preparation forms and tests of efficacy, toxicity, and lethality.(AU)

A utilização de plantas medicinais como método terapêutico no controle de enfermidades tem sido crescente na produção animal. No caso de pequenos ruminantes, as verminoses representam uma grande preocupação, visto que são consideradas o maior problema sanitário, especialmente quando se considera o fenômeno da resistência dos parasitas aos fármacos utilizados. Portanto, o desenvolvimento de métodos alternativos de controle endoparasitário em caprinos e ovinos tem se tornado uma necessidade premente. O uso de plantas para controlar as endoparasitoses pode reduzir o uso de insumos químicos, tornando a atividade pecuária mais ambientalmente sustentável, minimizando a ocorrência da resistência parasitária aos medicamentos convencionais e contribuindo para redução dos custos de produção. Nesse sentido, diversos estudos têm sido executados a fim de se avaliar a atividade in vitro e in vivo de plantas com potencial anti-helmíntico. Contudo, a despeito da potencialidade verificada em muitos estudos, os resultados são, por vezes, contraditórios ou não reproduzem in vivo a mesma eficácia obtida nos ensaios in vitro. Outro aspecto relevante é a baixa utilização dos testes de letalidade e toxicidade, indispensáveis para que o conhecimento possa ser difundido e aplicado pelos produtores rurais. Assim, essa revisão visa fornecer os resultados obtidos nos estudos realizados no Brasil com extratos de plantas com potencial para controle de verminose em caprinos e ovinos, descrevendo as principais espécies vegetais avaliadas, mecanismos de ação, formas de preparo e os testes de eficácia, toxicidade e letalidade.(AU)

Efficacy, toxicity, and lethality of plants with potential anthelmintic activity in small ruminants in Brazil / Eficácia, toxicidade e letalidade de plantas com potencial atividade anti-helmíntica em pequenos ruminantes no Brasil

The use of medicinal plants as a therapeutic method in the control of diseases has been increasing in animal production. In the case of small ruminants, the endoparasitic disease is a major concern, since they are considered the greater sanitary problem, especially when considering the phenomenon of parasite resistance to the medicines used. Therefore, the development of alternative methods of endoparasitary control in goats and sheep has become a pressing need. The use of plants to control endoparasites can reduce the use of chemical inputs, making more environmentally sustainable livestock, minimizing the occurrence of parasitic resistance to conventional medicines and contributing to the reduction of production costs. In this sense, several studies have been carried out in order to evaluate the in vitro and in vivo activity of plants with anthelmintic potential. However, despite the potentiality found in many studies, the results are sometimes contradictory or do not replicate in vivo the same efficacy obtained in the in vitro assays. Another relevant aspect is the low utilization of the lethality and toxicity tests, which are indispensable so that the knowledge can be spread and applied by the producers in their herds. Thus, this review aims to provide the results from studies carried out in Brazil with extract of plants with potential for control of parasitic disease in goats and sheep, describing the main evaluated plants species, mechanisms of action, preparation forms and tests of efficacy, toxicity, and lethality.

A utilização de plantas medicinais como método terapêutico no controle de enfermidades tem sido crescente na produção animal. No caso de pequenos ruminantes, as verminoses representam uma grande preocupação, visto que são consideradas o maior problema sanitário, especialmente quando se considera o fenômeno da resistência dos parasitas aos fármacos utilizados. Portanto, o desenvolvimento de métodos alternativos de controle endoparasitário em caprinos e ovinos tem se tornado uma necessidade premente. O uso de plantas para controlar as endoparasitoses pode reduzir o uso de insumos químicos, tornando a atividade pecuária mais ambientalmente sustentável, minimizando a ocorrência da resistência parasitária aos medicamentos convencionais e contribuindo para redução dos custos de produção. Nesse sentido, diversos estudos têm sido executados a fim de se avaliar a atividade in vitro e in vivo de plantas com potencial anti-helmíntico. Contudo, a despeito da potencialidade verificada em muitos estudos, os resultados são, por vezes, contraditórios ou não reproduzem in vivo a mesma eficácia obtida nos ensaios in vitro. Outro aspecto relevante é a baixa utilização dos testes de letalidade e toxicidade, indispensáveis para que o conhecimento possa ser difundido e aplicado pelos produtores rurais. Assim, essa revisão visa fornecer os resultados obtidos nos estudos realizados no Brasil com extratos de plantas com potencial para controle de verminose em caprinos e ovinos, descrevendo as principais espécies vegetais avaliadas, mecanismos de ação, formas de preparo e os testes de eficácia, toxicidade e letalidade.

Fungo nematófago Arthrobotrys musiformis como controlador biológico de nematoides de equinos

Arthrobotrys musiformis é um fungo formador de armadilhas do tipo redes adesivas tridimensionais, capazes de capturar e predar larvas infectantes (L3) de nematoides. Nos equinos, os nematoides gastrintestinais podem levar a condições patológicas que interferem no desenvolvimento corporal e podem, inclusive, levar os animais a óbito. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do fungo nematófago Arthrobotrys musiformis (isolado A144) no controle de L3 de nematoides estrongilídeos que acometem equinos. Inicialmente foi analisado a capacidade do isolado A144 de passar pelo trato gastrintestinal de equinos e manter a sua atividade predatória sobre larvas infectantes de ciatostomíneos. Coletas de fezes foram feitas 12h, 24, 36, 48 e 72h após a administração de péletes contendo micélio fúngico. Os péletes recuperados na última coleta foram colocados em placas de Petri contendo meio ágar-ágar 2% para germinarem, e larvas infectantes de ciatostomíneos foram adicionadas, para avaliar a atividade do fungo sobre essas. Paralelamente, placas contendo o isolado A144 crescido a partir de colônias mantidas em laboratório também receberam L3 de ciatostomíneos e ao final de sete dias de interação, foram obtidos os percentuais de redução de 96.61% e 96.18% dos grupos contendo o fungo mantido em laboratório e o fungo recuperados dos péletes, respectivamente, demonstrando que o fungo é capaz de passar pelo trato gastrintestinal de equinos e manter a sua capacidade predatória. Diferentes doses de conídios do isolado A144 foram avaliadas em placas, em coproculturas e em bolos fecais depositados em pastagem e o que se observou é que a redução de L3 nas dosagens de conídios testadas apresentou pouca variação entre elas, mas todas apresentaram diferença estatisticamente significativa quando comparadas ao grupo controle. As doses iniciais de esporos avaliadas neste trabalho não foram determinantes na capacidade do isolado A144 em reduzir o número de larvas infectantes de estrongilídeos, tanto em condições controladas, quanto em condições à campo. O isolado A144 do fungo nematófago Arthrobotrys musiformis é capaz de manter sua viabilidade após passagem pelo trato gastrintestinal de equinos e predar larvas infectantes de estrongilídeos. Os resultados encontrados indicam que o fungo Arthrobotrys musiformis (isolado A144) é uma alternativa para o controle das fases de vida livre dos estrongilídeos nematoides de equinos.

Arthrobotrys musiformis is a trap-forming fungus of three-dimensional adhesive nets, capable of capturing and predating infective (L3) nematode larvae. In horses, gastrointestinal nematodes can cause pathological conditions that interfere with body development and can even cause death. The objective of this work was to evaluate the efficacy of the nematophagous fungus Arthrobotrys musiformis (isolate A144) in the control of L3 of strongylid nematodes of horses. Initially, the ability of the isolate A144to pass through the gastrointestinal tract of horses and to maintain its predatory activity on infective Cyathostomin larvae was analyzed. The mycelium of the fungus was incorporated into pellets of sodium alginate and administered orally, in a single dose, to horses. Fecal collections were performed 12h, 24, 36, 48 and 72h after administration of pellets. Pellets recovered in the last collection were placed in Petri dishes containing 2% agar-agar medium to germinate, and infective larvae of cyathostomins were added to evaluate fungus activity on them. In parallel, plaques containing the A144 isolate grown from colonies kept in the laboratory also received L3 from cyathostomins and at the end of seven days of interaction, reduction rates of 96.61% and 96.18% of the L3 in group containing the fungus were kept in the laboratory and the fungus recovered from the pellets, respectively, demonstrating that the fungus is able to pass through the gastrointestinal tract of horses and maintain its predatory capacity. Different doses of conidia of isolate A144 were evaluated in plaques, coprocultures and fecal pats deposited on pasture and was observed that the reduction of L3 in the dosages of conidia tested showed little variation among them, but all presented a statistically significant difference when compared to the control group. The initial doses of spores evaluated in this work were not determinant in the ability of isolate A144 to reduce the number of infectious larvae of strongyles under both controlled and field conditions. The A144 isolate of the nematophagous fungus Arthrobotrys musiformis is able to maintain its viability after passage through the gastrointestinal tract of horses and predate infectious larvae of strongyles. The results indicate that the fungus Arthrobotrys musiformis (isolate A144) is an alternative to the control of free life stages of equine nematodes strongyles.

Viabilidade in vitro do parasito intestinal Neoechinorhynchus buttnerae (Acantocephala) de Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) e seu controle com óleos essenciais

Este estudo teve como objetivo validar um protocolo para cultivo de Neoechinorhyncus buttnerae (Acanthocephala), parasito de Colossoma macropomum e avaliar a eficácia in vitro e in vivo dos óleos essenciais de Mentha piperita, Lippia alba e Zengiber officinale no seu controle. Para o cultivo in vitro, os parasitos foram obtidos a partir de peixes naturalmente parasitados, e distribuídos em placas de cultura de 6 poços distribuídos nos seguintes tratamentos em triplicata: NaCl a 0,9%; água do tanque estéril; L-15 Leibovitz meio de cultura; L-15 Leibovitz + ágar 2% meio de cultura; Meio de cultura RPMI 1640; RPMI 1640 + agar 2% de meio de cultura. As placas contendo os parasitas foram mantidas a 24°, 28° e 32°C. Os resultados do cultivo in vitro, mostraram que o meio de cultura que apresentou a melhor sobrevivência nas três temperaturas foi o meio RPMI e a temperatura considerada ideal foi a de 24°, pois os parasitos obtiveram um periodo mais longo de vida sem apresentar alterações morfológicas. Para o ensaio in vitro tambaquis naturalmente parasitados foram necropsiados para retirada dos acantocéfalos. Os parasitos foram expostos a cinco diferentes concentrações (360, 540, 720, 1440, 2880 mg L-1 ) dos óleos essenciais de Mentha, Lippia e Zingiber, diluídas em Tween 80 a 3% 1g:10 mL). Observou-se atividade anti-helmíntica nas maiores concentrações, sendo que o óleo essencial de Mentha apresentou a melhor atividade contra N. buttnerae, pois em menor concentração (540 mg L-1 ) foi capaz de inibir 100% em apenas 120 minutos, poucos minutos a mais que as concentrações mais fortes. Os óleos essenciais de Lippia e Zingiber apresentaram 100% de atividade anti-helmíntica nas concentrações de 1440 e 2880 mg L-1 . Para os ensaios in vivo foram utilizados 210 juvenis de tambaqui, os quais foram alimentados por 30 dias com as dietas experimentais: controle (três réplicas), óleo essencial de Mentha 0,54 g kg-1 (três réplicas), Mentha 2,88g kg-1 (três réplicas); óleo essencial de Lippia 1,44 g kg-1 (três réplicas), Lippia 2,88 g kg-1 (três réplicas) e óleo essencial de Zingiber 1,44 g kg-1 (três réplicas), Zingiber 2,88 g kg-1 (três réplicas). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, constituído por sete tratamentos em 21 unidades experimentais (10 peixes por tanque). A prevalência dos parasitos em peixes tratados com óleos essenciais de Mentha 0,54 g kg-1; Mentha 2,88 g kg-1 e Lippia 2,88 g kg-1 foi 84%, 84% e 88,46% respectivamente. O cálculo da eficácia resultou em 85,46% e 70,03% nos animais que tiveram a dieta suplementada com Mentha nas concentrações de 0,54 e 2,88 g kg-1 respectivamente, 67,10% e 56,93% em Lippia 1,44 e 2,88 g kg-1 respectivamente e 11,70% e 5,19% em Zingiber 1,44 e 2,88 g kg-1 respectivamente. Os números totais de eritrócitos (RBC) e trombócitos foram 9 maiores em peixes tratados com Mentha 0,54 g kg-1 e Zingiber 1,44 g kg-1. A concentração de glicose foi significativamente maior nos peixes que não tiveram suplementação do óleo essencial. Devido a alta eficácia e ao resultado positivo sobre os parâmetros hematológicos analisados e ao ganho de peso, recomenda-se o uso do óleo essencial de Mentha 0,54 g kg-1 administrados na ração para o controle de acantocéfalos.

This study aimed to validate a protocol for the cultivation of Neoechinorhyncus buttnerae (Acanthocephala), a parasite of Colossoma macropomum and to evaluate the in vitro and in vivo efficacy of the essential oils of Mentha piperita, Lippia alba and Zengiber officinale in its control. For in vitro culture, the parasites were obtained from naturally parasitized fish, and distributed in 6-well culture plates distributed in the following treatments in triplicate: 0.9% NaCl; sterile tank water; L-15 Leibovitz culture medium; L-15 Leibovitz + agar 2% culture medium; RPMI 1640 culture medium; RPMI 1640 + agar 2% culture medium. Plaques containing the parasites were maintained at 24 °, 28 ° and 32 ° C. The in vitro culture results showed that the culture medium that showed the best survival at the three temperatures was the RPMI medium and the temperature considered ideal was 24 °, as the parasites obtained a longer period of life without presenting morphological changes. For the in vitro assay naturally parasitized tambaquis were necropsied for removal of the acantocephalan. The parasites were exposed to five different concentrations (360, 540, 720, 1440, 2880 mg L-1 ) of Mentha, Lippia and Zingiber essential oils, diluted in 3% Tween 80 1g: 10ml). It was observed anthelmintic activity at the highest concentrations, and Mentha essential oil showed the best activity against N. buttnerae, because at a lower concentration (540 mg L-1 ) it was able to inhibit 100% in only 120 minutes, few minutes longer than the strongest concentrations. The essential oils of Lippia and Zingiber presented 100% of anthelmintic activity in the concentrations of 1440 and 2880 mg L-1 . For the in vivo tests, 210 tambaqui juveniles were used, which were fed for 30 days with the experimental diets: control (three replicates), Mentha essential oil 0.54 g kg-1 (three replicates), Mentha 2.88 g kg-1 (three replicates); Lippia essential oil 1.44 g kg-1 (three replicates), Lippia 2.88 g kg-1 (three replicates) and Zingiber essential oil 1.44 g kg-1 (three replicates), Zingiber 2.88 g kg-1 (three replicates). The experimental design was completely randomized, consisting of seven treatments in 21 experimental units (10 fish per tank). The prevalence of parasites in fish treated with essential oils of Mentha 0.54 g kg-1; Mentha 2.88 g kg-1 and Lippia 2.88 g kg-1 was 84%, 84% and 88.46% respectively. Efficacy was calculated as 85.46% and 70.03% in the animals fed the Mentha supplemented diet at concentrations of 0.54 and 2.88 g kg -1, respectively, 67.10% and 56.93%, respectively. Lippia 1.44 and 2.88 g kg-1 respectively and 11.70% and 5.19% in Zingiber 1.44 and 2.88 g kg-1 respectively. Total numbers of erythrocytes (RBC) and thrombocytes were higher in fish treated with Mentha 0.54 g kg-1 and Zingiber 1.44 g kg -1. Glucose concentration was significantly higher in fish 11 that did not have essential oil supplementation. Due to the high efficacy and the positive result on the haematological parameters analyzed and the weight gain, it is recommended the use of the essential oil of Mentha 0.54 g kg-1 administered in the diet for the control of acantocephalan.

RESÍDUOS DE ANTIPARASITÁRIOS E AGROTÓXICOS EM LEITE BOVINO NO RIO GRANDE DO NORTE

O leite é uma das vias de eliminação de resíduos de antiparasitários e agrotóxicos que podem afetar a saúde dos consumidores. Sendo assim, objetivou-se verificar a presença de resíduos de antiparasitários e agrotóxicos em leite bovino no Rio Grande do Norte. Foram coletadas 35 amostras de leite, 15 pasteurizados comercializadas formalmente e 20 in natura, comercializadas informalmente para análises de resíduos. Foram utilizadas a Cromatografia Líquida acoplada à Espectrometria de Massas (LC-MS/MS) para detecção de resíduos de antiparasitários e Cromatografia Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas (GC-MS/MS) para detecção de resíduos de agrotóxicos. Observou-se ausência de resíduos de antiparasitários nas 35 amostras analisadas. Em relação a determinação de agrotóxicos, as 23 amostras analisadas foram consideradas satisfatórias, abaixo do Limite Máximo de Resíduo (LMR). Foram detectados e quantificados resíduos de agrotóxicos em cinco amostras de leite (22%), três pasteurizado (60%) e duas (40%) in natura com sete (6,6%) compostos químicos. Foi detectada a presença de resíduos de agrotóxicos proibidos no leite como flusilazol, penconasol e tebufempirade, o que indica um alerta em relação à qualidade do produto e a saúde dos consumidores, bem como a necessidade de um maior controle na entrada e comercialização destes produtos no Brasil.

Antiparasitics and pesticides residues are expelled through the milk, what may affect consumers health. The aim of this research was to determine the presence of antiparasitics residues and pesticides on the cows milk produced in Rio Grande do Norte. A quantity of 35 samples of milk were collected, being 15 whole pasteurized, formally commercialized, and 20 raw milk, informally commercialized. In order to detect antiparasitics residues, the Liquid Chromatography coupled with Mass Spectrometry (LC-MS/MS) method was carried, as well as the and Gas Chromatography coupled with Mass Spectrometry (GC-MS/MS) method was used to detect pesticides residues. After data analysis, no antiparasitic residues were found on the analyzed samples. Regarding the pesticides determination, the 23 milk analyzed samples were considered adequate, being under the Maximum Residue Limits (MRL). Pesticides residues were detected and quantified in five (22%) milk samples, being three (60%) in whole pasteurized milk and two (40%) in raw milk, with seven (6,6%) chemical compounds. Pesticides like flusilazole, penconazole and tebufenpyrad, that are prohibited, were found on the milk, what can be a warning related to the quality of the product and the consumers health, as well as the need of a more efficient control system in what regards the entry and trading of these products in Brazil

DOSES TERAPÊUTICAS AGUDAS DE IVERMECTINA PREJUDICAM A ESPERMATOGÊNESE COM ÊNFASE NA ESPERMIOGÊNESE EM RATOS ADULTOS

As avermectinas e as milbemicinas, muitas vezes também referidas como lactonas macrocíclicas, são os medicamentos antiparasitários mais vendidos no mundo, dada sua ampla utilização tanto na Medicina Veterinária e humana, quanto na agricultura. Esse trabalho apresenta inicialmente uma revisão dos principais trabalhos do nosso grupo em vários aspectos da exposição às avermectinas e suas consequências no âmbito reprodutivo, tais como redução no comportamento sexual de ratos sem experiência sexual; redução do reflexo de lordose em fêmeas e ainda, incoordenação motora fina resultando em alteração de comportamento sexual em machos e fêmeas. A seguir, oferece uma revisão sobre os aspectos anatomofisiológicos do testículo humano e do rato, enfocando o desenvolvimento pré e pós-natal, bem como sua anatomia e funções. Enfocou-se também o testículo do rato como modelo experimental na validação de estudos de reprodução. Finalmente, foi apresentado trabalho publicado Cordeiro F, Gonçalves V Jr, Moreira N, Slobodticov JI, de Andrade Galvão N, de Souza Spinosa H, Bonamin LV, Bondan EF, Ciscato CHP, Barbosa CM, Bernardi MM. Ivermectin acute administration impaired the spermatogenesis and spermiogenesis of adult rats. Res Vet Sci. 2018 Apr;117:178-186. doi:10.1016/j.rvsc.2017.12.013. No referido trabalho foram estudados os efeitos temporais das doses terapêuticas da ivermectina na morfometria e histologia do testículo para verificar se a administração aguda do medicamento prejudicaria a espermatogênese e a espermiogênese de ratos adultos e se esses efeitos seriam reversíveis. Além disto, os níveis de testosterona e a de ivermectina plasmáticos foram avaliados. Os resultados mostraram que a exposição aguda à ivermectina: 1) reduziu o volume testicular, o diâmetro tubular e a altura do epitélio germinativo principalmente na dose mais alta; 2) não interferiu na frequência de células de Leydig; 3) na histologia verificou-se que as seções tubulares continham diversas alterações histológicas indicativas de interrupção da espermatogênese, como desorganização do epitélio germinativo, degeneração vacuolar das células germinativas e descamação das células no lúmen tubular; 4) não houve diferenças nos níveis de testosterona; 5) os níveis plasmáticos da ivermectinas foram reduzidos significativamente às 72 h após a dose de 0,2 mg / kg. Concluiu-se que a ivermectina administrada agudamente prejudicou a espermatogênese e espermiogênese de ratos. Provavelmente, esses efeitos não foram consequência da ivermectina nas células de Leydig porque nenhum efeito foi observado nesse nível. Finalmente, nossos resultados sugerem que alguns efeitos testiculares são reversíveis e correlacionados com os níveis plasmáticos de ivermectina. Estes trabalhos em conjunto mostram que doses terapêuticas de diferentes avermectinas causam inúmeros danos na esfera reprodutiva dos animais, incluindo prejuízos comportamentais e testiculares, como desorganização celular em diferentes estágios do ciclo do epitélio seminífero e reduções de parâmetros morfométricos testiculares, sugere-se que as avermectinas não sejam empregadas no período da reprodução.

Avermectins and milbemycins, often also referred to as macrocyclic lactones, are the world's best selling antiparasitic medicines and are widely used in veterinary and human medicine and agriculture. In this study, initially it was reviewed the main studies of our group about the different aspects of exposure to avermectins and their consequences in the reproductive scope such as reduction in the sexual behavior of rats without sexual experience; reduction of lordosis reflex in female and reduction of fine motor coordination resulting in changing sexual behavior in males and females. A review of the anatomical and physiological aspects of the human testis and the rats was carried out, focusing on aspects of pre and postnatal development, and the testis anatomy and functions. Finally, it was presented a paper published: Cordeiro F, Gonçalves V Jr, Moreira N, Slobodticov JI, Andrade Galvão N, Souza Spinosa H, Bonamin LV, Bondan EF, Ciscato CHP, Barbosa CM, Bernardi MM. Ivermectin acute administration impaired the spermatogenesis and spermiogenesis of adult rats. Res Vet Sci. 2018 Apr; 117: 178-186. doi: 10.1016 / j.rvsc.2017.12.013 ". The results show: 1) IVM acute exposure, mainly in the higher dose, reduced the testicular volume, the tubular diameter and the germinal epithelium height; 2) no interferences on Leydig cells frequency;3) histological studies show that tubular sections containing several histological changes indicative of spermatogenesis interruption, such as disorganization of germinal epithelium, vacuolar degeneration of the germ cells and sloughing of cells into the tubular lumen; 4) no differences in testosterone levels; 5) The IVM plasmatic levels were significantly reduced at 72 h after the 0.2 mg/kg. It was concluded that acute IVM impaired the spermatogenesis and spermiogenesis of rats. Probably these effects were not consequence of IVM at the Leydig cells because no effects were observed at this level. Finally, our results suggest that some testicular effects are reversible and correlated with the plasmatic levels of IVM.As general conclusion, it was suggested that avermectins are not used in the reproduction period because, even in therapeutic doses, avermectins cause numerous damages in the reproductive sphere of the animals, including behavioral and testicular damages, as cellular disorganization at different stages of the seminiferous epithelium cycle and reduction of testicular morphometric parameters.

Distribuição de resíduos de ivermectina e eprinomectina em diferentes tecidos bovinos e em produtos cárneos enlatados termicamente processados

Um total de 168 machos Bos indicus foram abatidos depois de 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 e 154 dias após a aplicação de eprinomectina e ivermectina (convencional e longa ação), e 18 diferentes tecidos comestíveis foram avaliados quanto à concentração de resíduos dessas moléculas para verificar se o período de carência estabelecido garante o esgotamento em todos eles, em níveis abaixo dos limites máximos estabelecidos por agências reguladoras internacionais, com o objetivo de abordar questões relacionadas à barreiras técnico-comerciais entre países. Além disso, visou analisar se a concentração desses resíduos é afetada pelo processamento térmico, para avaliar a coerência de se considerar para produtos enlatados, os mesmos limites determinados para produtos crus. As análises de concentração de resíduos foram feitas por HPLC (sistema LC-MS/MS). Os dados foram transformados para escala logaritmo natural e foi realizada análise de variância, teste de comparação múltipla, análises de regressão e de correlação. Os resultados demonstraram que os níveis de eprinomectina encontrados foram abaixo de todos os limites máximos de resíduos (LMR), ao longo de todos os períodos e tecidos avaliados. Com relação à ivermectina, padrões diferenciados de distribuição foram observados, porém ao final do período de carência, dos 18 tecidos avaliados, 17 apresentaram concentrações dentro dos LMR, com exceção do sítio de aplicação, em que se observou alto nível de dispersão e valores acima de alguns LMR, mesmo após cumprido o período de carência indicado na bula. Foram observadas correlações significativas (P<0,01) entre concentrações residuais em fígado e em tecidos musculares, sendo que as equações obtidas podem ser úteis em programas de vigilância. O processamento térmico afetou os resultados de concentração de resíduos de ivermectina em alguns músculos testados, que apresentaram concentração significativamente mais elevada (P<0,05) após a esterilização. Conclui-se que a eprinomectina é mais recomendada que a ivermectina, no que tange ao propósito de se evitar violações de LMR; que foram distintos os padrões de distribuição de resíduos em cada tecido avaliado, mas que se respeitado o período de carência, praticamente todos os tecidos estarão abaixo dos LMR estabelecidos internacionalmente, exceto pelo sítio de aplicação; portanto, que o tempo de depleção de resíduos do sítio de aplicação (até abaixo dos LMR) deveria ser considerado para a determinação do período de carência dos medicamentos; e que é fundamental haver uma harmonização dos LMR em esfera global. Além disso, observou-se que o processamento térmico a que os enlatados são submetidos provoca níveis discrepantes (mais elevados) de resíduos em relação aos produtos crus e isso deve ser levado em consideração nas análises de vigilância, pois pode gerar incertezas quanto à possibilidade de violação em mercados importadores.

A total of 168 Bos indicus males were slaughtered after 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 and 154 days post-application of eprinomectin and ivermectin (conventional and long-acting), and 18 different edible tissues were evaluated for the residue concentration of these molecules to verify if the established withdrawal period guarantees depletion in all of them, at levels below the maximum limits established by regulatory agencies around the world, in order to address issues related to technical trade barriers between countries. In addition, it aimed to analyze if the concentration of these residues is affected by thermal processing, to evaluate the consistency of considering for canned goods, the same limits determined for raw products. Residue concentration analyzes were performed using HPLC (LC-MS / MS system). Data were converted into "natural logarithm" scale and analysis of variance, multiple comparison test, regression and correlation analysis were performed. Results showed that eprinomectin levels were found to be below all maximum residue limits (MRL) throughout all periods and tissues evaluated. Regarding ivermectin, differentiated distribution patterns were observed, but at the end of the withdraw period, 17 of the 18 tissues evaluated had concentrations within the MRLs, except for the injection site, where a high level of dispersion was observed and values above some of MRLs recommended by the main international regulations, even after having been completed the withdraw period indicated in the instructions. Significant correlations (P <0.01) were observed between residual concentrations in liver and muscle tissues, and the equations obtained may be useful in surveillance programs. The thermal processing affected ivermectin concentration results in some tested muscle types, which had a significantly higher residue concentration (P <0.05) after sterilization. It was concluded that eprinomectin is more recommended than ivermectin for the purpose of avoiding MRL violations; that the residue distribution patterns in each tissue were different, but if the withdrawal period is met, almost all tissues will be below internationally established MRLs except for the application site; therefore, that the depletion time of injection site residues (to below the MRL) should be considered for the determination of the drug withdrawal period; and that harmonization of MRLs is essential in the global sphere. In addition, it has been observed that the thermal processing to which the canned products are subjected causes discrepant (higher) levels of residues in relation to the raw products and this must be taken into account in surveillance analyzes, since it may generate uncertainties as to the possibility of violation in importers markets.

OCORRÊNCIA DE RESÍDUOS DE AVERMECTINAS NO LEITE PRODUZIDO NO ESTADO DE PERNAMBUCO

O leite é o alimento de origem animal mais consumido pela população, assim é importante que apresente condições higiênicas adequadas e que esteja livre de contaminantes químicos das mais diversas origens. Objetivou-se com esse estudo avaliar a ocorrência de resíduos de avermectinas no leite produzido no estado de Pernambuco. As coletas foram realizadas em dois momentos, uma no período seco e outra no período chuvoso em do estado de Pernambuco, sendo coletadas, 60 e 48 amostras, respectivamente. As amostras de leite foram provenientes de laticínios que possuíam Serviço de Inspeção Federal (S.I.F.) ou Serviço de Inspeção Estadual (S.I.E.) localizados em oito diferentes municípios do estado. Cada amostra de leite foi acondicionada em frascos estéreis de plástico, permanecendo congeladas a -18°C até o seu processamento. Foram transportadas congeladas, até o LANAGRO/RS e analisadas por Cromatografia Líquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS/MS). No período seco obteve-se 46,7% (28/60) das amostras com resíduos acima do Limite de Detecção (LD), 1,7% (01/60) com nível acima do Limite Quantificável (LQ) e em 51,6% (31/60) das amostras não se detectou resíduos. Já no período chuvoso, 6,25% (03/48) apresentaram resíduos de avermectinas acima do LD. Em 93,75% (45/48) não houve detecção de resíduos da substância estudada. Considerando-se o total de amostras nos dois períodos (108), observou-se que em 70,37% (76/108) das amostras não se detectou resíduos de avermectinas. Já 28,07% (31/108) das amostras apresentaram resíduos de avermectinas em quantidades acima do LD, porém abaixo do LQ. Apenas 0,93% (1/108) das amostras estava acima do LQ. Não se detectou amostras com quantidades de avermectinas acima do Limite Máximo de Resíduo (LMR). As amostras de leite estudado não expõem a riscos a saúde humana, devido ao baixo nível de resíduos presentes. No entanto, dados de monitoramento de resíduos de medica¬mentos veterinários são essenciais para avaliar a exposição humana a estes compostos.

Milk is the food of animal origin most consumed by the population, thereby it is important to provide appropriate hygienic conditions and is free of chemical contaminants from many different backgrounds. The objective of this study was to evaluate the occurrence of avermectin residues in milk produced in the state of Pernambuco. The samples were collected in two distinctly periods: dry season and wet season, in Pernambuco State, being collected 60 and 48 samples, respectively. Milk samples were from dairy that had the Federal Inspection Service (F.I.S.) or State Inspection Service (E.I.S.), located in eight different cities in the state. The milk samples were analysed in LANAGRO/RS by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). In the dry period there were obtained 46,7% (28/60) of the samples above the Detection Limit (DL), 1,7% (01/60) samples with levels beyond the Quantifiable Limit (QL) and in 51,6% (31/60) of the samples, no leavings were detected. Still, in the dry period, 6,25% (03/48) had avermectins residues above the DL. In 93,75% (45/48) there were no residues detection of the studied substance. Considering the total number of samples in the two periods (108), it was noted that at 70.37% (76/108) no avermectins residues were detected in the samples. Still in 28.07% (31/108) of the samples had avermectins residues above the DL, but below the QL. Only 0,93% (1/108) of the samples were above the QL. No samples were detected with amounts of avermectins residues above the Maximum Residues Limit (MRL). The studied milk does not expose risks to the population health, due to the low levels of avermectins residues present, although data monitoring of veterinary medicinal products are essential to assess human exposure to these compounds.