Modulating the production of xylanase by Bacillus pumilus BS131 through optimization using waste fiber sludge / Modulando a produção de xilanase por Bacillus pumilus BS131 por meio da otimização usando lodo de fibra residual

In recent days, cheapest alternative carbon source for fermentation purpose is desirable to minimize production cost. Xylanases have become attractive enzymes as their potential in bio-bleaching of pulp and paper industry. The objective of the present study was to identify the potential ability on the xylanase production by locally isolated Bacillus pumilus BS131 by using waste fiber sludge and wheat bran media under submerged fermentation. Culture growth conditions were optimized to obtain significant amount of xylanase. Maximum xylanase production was recorded after 72 hours of incubation at 30 °C and 7 pH with 4.0% substrate concentration. In the nutshell, the production of xylanase using inexpensive waste fiber sludge and wheat-bran as an alternative in place of expensive xylan substrate was more cost effective and environment friendly.

Nos últimos dias, a fonte alternativa de carbono mais barata para fins de fermentação é desejável para minimizar o custo de produção. As xilanases têm se tornado enzimas atraentes como seu potencial no biobranqueamento da indústria de papel e celulose. O objetivo do presente estudo foi identificar a capacidade potencial na produção de xilanase por Bacillus pumilus BS131 isolado localmente usando lodo de fibra residual e farelo de trigo em meio de fermentação submersa. As condições de crescimento da cultura foram otimizadas para obter uma quantidade significativa de xilanase. A produção máxima de xilanase foi registrada após 72 horas de incubação a 30 °C e pH 7 com concentração de substrato de 4,0%. Resumindo, a produção de xilanase usando lodo de fibra residual de baixo custo e farelo de trigo como uma alternativa no lugar do substrato de xilano caro foi mais econômica e ecológica.

Modulating the production of xylanase by Bacillus pumilus BS131 through optimization using waste fiber sludge

Abstract In recent days, cheapest alternative carbon source for fermentation purpose is desirable to minimize production cost. Xylanases have become attractive enzymes as their potential in bio-bleaching of pulp and paper industry. The objective of the present study was to identify the potential ability on the xylanase production by locally isolated Bacillus pumilus BS131 by using waste fiber sludge and wheat bran media under submerged fermentation. Culture growth conditions were optimized to obtain significant amount of xylanase. Maximum xylanase production was recorded after 72 hours of incubation at 30 °C and 7 pH with 4.0% substrate concentration. In the nutshell, the production of xylanase using inexpensive waste fiber sludge and wheat-bran as an alternative in place of expensive xylan substrate was more cost effective and environment friendly.

Resumo Nos últimos dias, a fonte alternativa de carbono mais barata para fins de fermentação é desejável para minimizar o custo de produção. As xilanases têm se tornado enzimas atraentes como seu potencial no biobranqueamento da indústria de papel e celulose. O objetivo do presente estudo foi identificar a capacidade potencial na produção de xilanase por Bacillus pumilus BS131 isolado localmente usando lodo de fibra residual e farelo de trigo em meio de fermentação submersa. As condições de crescimento da cultura foram otimizadas para obter uma quantidade significativa de xilanase. A produção máxima de xilanase foi registrada após 72 horas de incubação a 30 °C e pH 7 com concentração de substrato de 4,0%. Resumindo, a produção de xilanase usando lodo de fibra residual de baixo custo e farelo de trigo como uma alternativa no lugar do substrato de xilano caro foi mais econômica e ecológica.

Modulating the production of xylanase by Bacillus pumilus BS131 through optimization using waste fiber sludge / Modulando a produção de xilanase por Bacillus pumilus BS131 por meio da otimização usando lodo de fibra residual

Abstract In recent days, cheapest alternative carbon source for fermentation purpose is desirable to minimize production cost. Xylanases have become attractive enzymes as their potential in bio-bleaching of pulp and paper industry. The objective of the present study was to identify the potential ability on the xylanase production by locally isolated Bacillus pumilus BS131 by using waste fiber sludge and wheat bran media under submerged fermentation. Culture growth conditions were optimized to obtain significant amount of xylanase. Maximum xylanase production was recorded after 72 hours of incubation at 30 °C and 7 pH with 4.0% substrate concentration. In the nutshell, the production of xylanase using inexpensive waste fiber sludge and wheat-bran as an alternative in place of expensive xylan substrate was more cost effective and environment friendly.

Resumo Nos últimos dias, a fonte alternativa de carbono mais barata para fins de fermentação é desejável para minimizar o custo de produção. As xilanases têm se tornado enzimas atraentes como seu potencial no biobranqueamento da indústria de papel e celulose. O objetivo do presente estudo foi identificar a capacidade potencial na produção de xilanase por Bacillus pumilus BS131 isolado localmente usando lodo de fibra residual e farelo de trigo em meio de fermentação submersa. As condições de crescimento da cultura foram otimizadas para obter uma quantidade significativa de xilanase. A produção máxima de xilanase foi registrada após 72 horas de incubação a 30 °C e pH 7 com concentração de substrato de 4,0%. Resumindo, a produção de xilanase usando lodo de fibra residual de baixo custo e farelo de trigo como uma alternativa no lugar do substrato de xilano caro foi mais econômica e ecológica.

Modulating the production of xylanase by Bacillus pumilus BS131 through optimization using waste fiber sludge / Modulando a produção de xilanase por Bacillus pumilus BS131 por meio da otimização usando lodo de fibra residual

In recent days, cheapest alternative carbon source for fermentation purpose is desirable to minimize production cost. Xylanases have become attractive enzymes as their potential in bio-bleaching of pulp and paper industry. The objective of the present study was to identify the potential ability on the xylanase production by locally isolated Bacillus pumilus BS131 by using waste fiber sludge and wheat bran media under submerged fermentation. Culture growth conditions were optimized to obtain significant amount of xylanase. Maximum xylanase production was recorded after 72 hours of incubation at 30 °C and 7 pH with 4.0% substrate concentration. In the nutshell, the production of xylanase using inexpensive waste fiber sludge and wheat-bran as an alternative in place of expensive xylan substrate was more cost effective and environment friendly.(AU)

Nos últimos dias, a fonte alternativa de carbono mais barata para fins de fermentação é desejável para minimizar o custo de produção. As xilanases têm se tornado enzimas atraentes como seu potencial no biobranqueamento da indústria de papel e celulose. O objetivo do presente estudo foi identificar a capacidade potencial na produção de xilanase por Bacillus pumilus BS131 isolado localmente usando lodo de fibra residual e farelo de trigo em meio de fermentação submersa. As condições de crescimento da cultura foram otimizadas para obter uma quantidade significativa de xilanase. A produção máxima de xilanase foi registrada após 72 horas de incubação a 30 °C e pH 7 com concentração de substrato de 4,0%. Resumindo, a produção de xilanase usando lodo de fibra residual de baixo custo e farelo de trigo como uma alternativa no lugar do substrato de xilano caro foi mais econômica e ecológica.(AU)

Selection of microorganisms and preparation of inoculants with potential applications in the remediation of soil contaminated with hexazinone / Seleção de microrganismos e preparo de inoculantes com potencial de aplicação na remediação de solo contaminado com hexazinona

The excessive use of agrochemicals negatively impacts the environment, making the development of sustainable technologies for the reduction of contaminants in soil necessary. Hexazinone is the herbicide most used for sugarcane crops and persists in the environment. Moreover, its main route of degradation in the soil is through microorganisms. Therefore, six microorganisms were selected that presented growth in the presence of the herbicide; SCR1 - Microbacterium arborescens; SCR2 - Bacillus pumilus; SCM3 - Stenotrophomonas maltophilia; SCM4 - Bacillus cereus; SCM5A - M. arborescens; and SCM5B - B. safensis. A test was performed to evaluate the ability of each lineage in phosphate solubilization. For the Ca3(PO4)2 solubilization test, the strains that showed the best results were B. pumilus and S. maltophilia. Subsequently, the inoculants were prepared and the concentrations after plating were 2.71 × 109 CFU mL-1 for B. pumilus, 1.02 × 109 CFU mL-1 for S. maltophilia, and 1.14 × 1010 CFU mL-1 for a combination of the two strains. These were satisfactory values for use as inoculants.(AU)

O uso de agroquímicos resulta em impactos ambientais e torna-se necessário o emprego de tecnologias sustentáveis para diminuição de contaminantes no solo. O hexazinona é o herbicida mais utilizado para a cultura da cana-de-açúcar, e apresenta persistência no ambiente. A principal via de degradação no solo é por meio de microrganismos. Com isso, selecionou-se seis microrganismos que apresentaram crescimento na presença do herbicida: SCR1 - Microbacterium arborescens; SCR2 - Bacillus pumilus; SCM3 - Stenotrophomonas maltophilia; SCM4 - Bacillus cereus; SCM5A - M. arborescens; SCM5B - Bacillus safensis. Foi realizado um teste para avaliar a habilidade de cada linhagem na solubilização de fosfatos, e no caso da solubilização de Ca3(PO4)2, as linhagens que apresentaram melhores resultados foram B. pumilus e S. maltophilia. Posteriormente, os inoculantes foram preparados e a concentração após plaqueamento de 2,71x109 UFC mL-1 para B. pumilus, 1,02x109 UFC mL-1 para S. maltophilia e consórcio com as duas linhagens 1,14x1010 UFC mL-1 apresentaram valores satisfatórios para utilização como inoculantes.(AU)

Thermoduric psychrotrophic proteolytic microbiota from refrigerated raw milk / Microbiota termodúrica psicrotrófica proteolítica do leite cru refrigerado

Thermoduric microorganisms may withstand high temperatures during the pasteurization of milk. Therefore, the microbiota in pasteurized milk consist of thermoduric microbes and directly influence the shelf-life of the milk. The aim of this study was to identify thermoduric psychrotrophic proteolytic microbiota in refrigerated raw milk. Twenty samples, previously heat-treated, were streaked and incubated at 7°C for 10 days. The strains isolated were streaked on milk agar to assess proteolytic activity and were initially analyzed morphologically by light microscopy and then by molecular techniques to identify the species. In 40% of the samples analyzed was observed only one bacterial growth and others 10 thermoduric psychrotrophic fungi. All isolates were proteolytic. The sequencing of 16S rRNA gene identified the bacterial strain as Bacillus pumilus and analysis of the ITS1-5.8S-ITS2 region of fungal isolates revealed the Cladosporium cladosporioides (60%), Curvularia geniculatus (10%), and the 3 remaining strains were identified as Geotrichum candidum (30%). This is a fist description of B. pumilus in Brazilian raw milk. Considering the spoilage potential of all isolates and of the fungi present in raw milk and their survival in pasteurized milk, it is extremely important to carry out further studies to your resistant to heat, their impact on the shelf-life of pasteurized milk, ultra-high temperature (UHT) milk and dairy products.(AU)

Os micro-organismos termodúricos são aqueles capazes de resistir ao processo de pasteurização do leite. Assim, a microbiota do leite pasteurizado é constituída por esses micro-organismos que podem influenciar diretamente na vida sua vida útil. O objetivo do presente trabalho foi identificar a microbiota termodurica psicrotrófica proteolítica do leite cru refrigerado. Foram avaliadas 20 amostras de leite cru refrigerado, plaqueadas e incubadas a 7°C por 10 dias. As cepas isolados foram repicadas em ágar leite para verificação da atividade proteolítica e inicialmente avaliadas microscopicamente e posteriormente identificadas por sequenciamento de DNA. Foi observado apenas um crescimento bacteriano e outros 10 isolados fúngicos termodúricos psicrotróficos em 40% das amostras avaliadas. Todos os isolados foram proteolíticos. O sequenciamento parcial do gene 16S rRNA da cepa bacteriana permitiu a identificação de Bacillus pumilus e a análise da região ITS1-5.8S-ITS2 dos isolados fúngicos os identificou como Cladosporium cladosporioides (60%), Curvularia geniculatus (10%), e Geotrichum candidum (30%). Não foram encontrados estudos anteriores sobre a presença de B. pumilus no leite cru brasileiro. Considerando o potencial deteriorante de todos os isolados e presença de fungos termodúricos psicrotróficos no leite cru, é importante a continuidade trabalhos que avaliem sua resistência térmica e seu impacto na vida útil do leite pasteurizado, longa vida e derivados.(AU)

Molecular characterization of a proteolysis-resistant lipase from Bacillus pumilus SG2

Proteolysis-resistant lipases can be well exploited by industrial processes which employ both lipase and protease as biocatalysts. A proteolysis resistant lipase from Bacillus pumilus SG2 was isolated, purified and characterized earlier. The lipase was resistant to native and commercial proteases. In the present work, we have characterized the lip gene which encodes the proteolysis-resistant lipase from Bacillus pumilus SG2. The parameters and structural details of lipase were analysed. The lip gene consisted of 650 bp. The experimental molecular weight of SG2 lipase was nearly double that of its theoretical molecular weight, thus suggesting the existence of the functional lipase as a covalent dimer. The proteolytic cleavage sites of the lipase would have been made inaccessible by dimerisation, thus rendering the lipase resistant to protease.

Purification and Partial characterization of manganese peroxidase from Bacillus pumilus AND Paenibacillus sp.

The production of manganese peroxidase (MnP) from Bacillus pumilus and Paenibacillus sp. was studied under absence and presence of the inducers indulin AT, guayacol, veratryl alcohol, lignosulfonic acid and lignosulfonic acid desulfonated. Indulin AT increased the activity of B. pumilus MnP up to 31.66 U/L after 8 h, but no improve was observed for Paenibacillus sp., which reached maximum activity (12.22 U/L) after 20 h. Both MnPs produced by these microorganisms were purified in phenyl sepharose resin and the proteins from crude extracts were eluted in two fractions. However, only the first fraction of each extract exhibited MnP activities. Tests in different pH and temperature values, from pH 5.0 to pH 10.0 and 30 ºC to 60 ºC, respectively, were carried out with the purified MnP. The maximum activity reached for B. pumilus and Paenibacillus sp. MnPs were 4.3 U/L at pH 8.0 and 25 ºC and 11.74 U/L at pH 9.0 and 35 ºC, respectively. The molar masses determined by SDS-PAGE gel eletrophoresis were 25 kDa and 40 kDa, respectively, for the purified enzyme from B. pumilus and Paenibacillus sp.

Use of Bacillus pumilus CBMAI 0008 and Paenibacillus sp. CBMAI 868 for colour removal from paper mill effluent

Bacillus pumilus and Paenibacillus sp. were applied on the paper mill effluent to investigate the colour remotion. Inocula were individually applied in effluent at pH 7.0, 9.0 and 11.0. The real colour and COD remotion after 48h at pH 9.0 were, respectively, 41.87% and 22.08% for B. pumilus treatment and 42.30% and 22.89% for Paenibacillus sp. Gel permeation chromatography was used to verify the molar masses of compounds in the non-treated and treated effluent, showing a decrease in the compounds responsible for the paper mill effluent colour.

Bacillus pumilus e Paenibacillus sp. foram aplicados separadamente no efluente da indústria papeleira a pH 7,0, 9,0 e 11,0, para verificação da remoção da cor e da DQO. As remoções da cor real e DQO após 48h a pH 9,0 foram, respectivamente, de 41,87% e 22,08% após o tratamento com B. pumilus e 42,30% e 22,89% após tratamento com Paenibacillus sp. As massas molares dos compostos presentes no efluente não tratado e tratado foram determinadas por cromatografia de permeação em gel. O emprego dos microrganismos reduziu os compostos responsáveis pela cor do efluente da indústria papeleira.

Biochemical and molecular characterization of Bacillus pumilus isolated from coastal environment in Cochin, India

Bacillus species constitute a diverse group of bacteria widely distributed in soil and the aquatic environment. In this study, Bacillus strains isolated from the coastal environment of Cochin, India were identified by detailed conventional biochemical methods, fatty acid methyl ester (FAME) analysis and partial 16S rDNA sequencing. Analysis of the data revealed that Bacillus pumilus was the most predominant species in the region under study followed by B. cereus and B. sphaericus. The B. pumilus isolates were further characterized by arbitrarily primed PCR (AP-PCR), antibiotic sensitivity profiling and PCR screening for known toxin genes associated with Bacillus spp. All B. pumilus isolates were biochemically identical, exhibited high protease and lipase activity and uniformly sensitive to antibiotics tested in this study. One strain of B. pumilus harboured cereulide synthetase gene cesB of B. cereus which was indistinguishable from rest of the isolates biochemically and by AP-PCR. This study reports, for the first time, the presence of the emetic toxin gene cesB in B. pumilus.

As espécies de Bacillus constituem um grupo diversificado de bactérias amplamente distribuídas no solo e no ambiente aquático. Neste estudo, cepas de Bacillus isoladas do ambiente costeiro de Cochin, Índia, foram identificadas através de métodos bioquímicos convencionais, análise de ésteres metílicos de ácidos graxos (FAME) e sequenciamento de 16S rDNA. A análise dos dados revelou que Bacillus pumilus foi a espécie predominante na região estudada, seguido de B. cereus e B. sphaericus. Os isolados de B. pumilus foram caracterizados através da reação em cadeia da polimerase com primers arbitrários (AP-PCR), perfil de sensibilidade a antibióticos e triagem por PCR de genes de toxinas associadas com Bacillus spp. Todos os isolados de B. pumilus foram bioquimicamente idênticos, apresentaram elevada atividade de protease e lipase e foram uniformemente sensíveis aos antibióticos estudados. Um dos isolados de B. pumilus apresentou o gene cesB de B. cereus, que não foinão distinguível dos demais isolados por testes bioquímicos nem por AP-PCR. Este é o primeiro relato da presença do gene cesB da toxina eméticaem B. pumilus.

BpuAmI: a novel SacI neoschizomer from Bacillus pumilus discovered in an isolate from Amazon Basin, recognizing 5'-GAG FONT FACE=Symbol>¯ /FONT>CTC-3'

A strain of Bacillus pumilus was isolated and identified from water samples collected from a small affluent of the Amazon River. Type II restriction endonuclease activity was detected in these bacteria. The enzyme was purified and the molecular weight of the native protein estimated by gel filtration and SDS-PAGE. The optimum pH, temperature and salt requirements were determined. Quality control assays showed the complete absence of "nonspecific nucleases." Restriction cleavage analysis and DNA sequencing of restriction fragments allowed the unequivocal demonstration of 5´GAG FONT FACE=Symbol>¯ /FONT>CTC3´ as the recognition sequence. This enzyme was named BpuAmI and is apparently a neoschizomer of the prototype restriction endonuclease SacI. This is the first report of an isoschizomer and/or neoschizomer of the prototype SacI identified in the genus Bacillus.

Uma linhagem de Bacillus pumilus foi isolada e identificada de amostras de águas coletadas em um pequeno Igarapé do Rio Amazonas. Foi detectada atividade de restrição do tipo II nesta bactéria. A enzima foi purificada e o peso molecular da proteína nativa foi estimado por gel filtração e por eletroforese em gel de poliacrilamida. Foram determinados, o pH e temperatura ótimos e as necessidades de sais. Os ensaios do controle de qualidade mostraram uma ausência completa de "nucleases não específicas". As analises das clivagens e o seqüenciamento do DNA dos fragmentos de restrição permitiram uma demonstração inequívoca de que 5´GAG FONT FACE=Symbol>¯ /FONT>CTC 3´ é a seqüência de reconhecimento da enzima. Esta enzima foi denominada de BpuAmI e aparentemente é um neoesquisômero da enzima protótipo SacI. Este é o primeiro relato de um isoesquisômero e/ou neoesquisômero da enzima protótipo SacI identificada no gênero Bacillus.

BpuAmI: a novel SacI neoschizomer from Bacillus pumilus discovered in an isolate from Amazon Basin, recognizing 5'-GAG FONT FACE=Symbol>¯ /FONT>CTC-3'

A strain of Bacillus pumilus was isolated and identified from water samples collected from a small affluent of the Amazon River. Type II restriction endonuclease activity was detected in these bacteria. The enzyme was purified and the molecular weight of the native protein estimated by gel filtration and SDS-PAGE. The optimum pH, temperature and salt requirements were determined. Quality control assays showed the complete absence of "nonspecific nucleases." Restriction cleavage analysis and DNA sequencing of restriction fragments allowed the unequivocal demonstration of 5´GAG FONT FACE=Symbol>¯ /FONT>CTC3´ as the recognition sequence. This enzyme was named BpuAmI and is apparently a neoschizomer of the prototype restriction endonuclease SacI. This is the first report of an isoschizomer and/or neoschizomer of the prototype SacI identified in the genus Bacillus.

Uma linhagem de Bacillus pumilus foi isolada e identificada de amostras de águas coletadas em um pequeno Igarapé do Rio Amazonas. Foi detectada atividade de restrição do tipo II nesta bactéria. A enzima foi purificada e o peso molecular da proteína nativa foi estimado por gel filtração e por eletroforese em gel de poliacrilamida. Foram determinados, o pH e temperatura ótimos e as necessidades de sais. Os ensaios do controle de qualidade mostraram uma ausência completa de "nucleases não específicas". As analises das clivagens e o seqüenciamento do DNA dos fragmentos de restrição permitiram uma demonstração inequívoca de que 5´GAG FONT FACE=Symbol>¯ /FONT>CTC 3´ é a seqüência de reconhecimento da enzima. Esta enzima foi denominada de BpuAmI e aparentemente é um neoesquisômero da enzima protótipo SacI. Este é o primeiro relato de um isoesquisômero e/ou neoesquisômero da enzima protótipo SacI identificada no gênero Bacillus.

Thermoduric psychrotrophic proteolytic microbiota from refrigerated raw milk / Microbiota termodúrica psicrotrófica proteolítica do leite cru refrigerado

Thermoduric microorganisms may withstand high temperatures during the pasteurization of milk. Therefore, the microbiota in pasteurized milk consist of thermoduric microbes and directly influence the shelf-life of the milk. The aim of this study was to identify thermoduric psychrotrophic proteolytic microbiota in refrigerated raw milk. Twenty samples, previously heat-treated, were streaked and incubated at 7°C for 10 days. The strains isolated were streaked on milk agar to assess proteolytic activity and were initially analyzed morphologically by light microscopy and then by molecular techniques to identify the species. In 40% of the samples analyzed was observed only one bacterial growth and others 10 thermoduric psychrotrophic fungi. All isolates were proteolytic. The sequencing of 16S rRNA gene identified the bacterial strain as Bacillus pumilus and analysis of the ITS1-5.8S-ITS2 region of fungal isolates revealed the Cladosporium cladosporioides (60%), Curvularia geniculatus (10%), and the 3 remaining strains were identified as Geotrichum candidum (30%). This is a fist description of B. pumilus in Brazilian raw milk. Considering the spoilage potential of all isolates and of the fungi present in raw milk and their survival in pasteurized milk, it is extremely important to carry out further studies to your resistant to heat, their impact on the shelf-life of pasteurized milk, ultra-high temperature (UHT) milk and dairy products.

Os micro-organismos termodúricos são aqueles capazes de resistir ao processo de pasteurização do leite. Assim, a microbiota do leite pasteurizado é constituída por esses micro-organismos que podem influenciar diretamente na vida sua vida útil. O objetivo do presente trabalho foi identificar a microbiota termodurica psicrotrófica proteolítica do leite cru refrigerado. Foram avaliadas 20 amostras de leite cru refrigerado, plaqueadas e incubadas a 7°C por 10 dias. As cepas isolados foram repicadas em ágar leite para verificação da atividade proteolítica e inicialmente avaliadas microscopicamente e posteriormente identificadas por sequenciamento de DNA. Foi observado apenas um crescimento bacteriano e outros 10 isolados fúngicos termodúricos psicrotróficos em 40% das amostras avaliadas. Todos os isolados foram proteolíticos. O sequenciamento parcial do gene 16S rRNA da cepa bacteriana permitiu a identificação de Bacillus pumilus e a análise da região ITS1-5.8S-ITS2 dos isolados fúngicos os identificou como Cladosporium cladosporioides (60%), Curvularia geniculatus (10%), e Geotrichum candidum (30%). Não foram encontrados estudos anteriores sobre a presença de B. pumilus no leite cru brasileiro. Considerando o potencial deteriorante de todos os isolados e presença de fungos termodúricos psicrotróficos no leite cru, é importante a continuidade trabalhos que avaliem sua resistência térmica e seu impacto na vida útil do leite pasteurizado, longa vida e derivados.

Thermoduric psychrotrophic proteolytic microbiota from refrigerated raw milk / Microbiota termodúrica psicrotrófica proteolítica do leite cru refrigerado

Thermoduric microorganisms may withstand high temperatures during the pasteurization of milk. Therefore, the microbiota in pasteurized milk consist of thermoduric microbes and directly influence the shelf-life of the milk. The aim of this study was to identify thermoduric psychrotrophic proteolytic microbiota in refrigerated raw milk. Twenty samples, previously heat-treated, were streaked and incubated at 7C for 10 days. The strains isolated were streaked on milk agar to assess proteolytic activity and were initially analyzed morphologically by light microscopy and then by molecular techniques to identify the species. In 40% of the samples analyzed was observed only one bacterial growth and others 10 thermoduric psychrotrophic fungi. All isolates were proteolytic. The sequencing of 16S rRNA gene identified the bacterial strain as Bacillus pumilus and analysis of the ITS1-5.8S-ITS2 region of fungal isolates revealed the Cladosporium cladosporioides (60%), Curvularia geniculatus (10%), and the 3 remaining strains were identified as Geotrichum candidum (30%). This is a fist description of B. pumilus in Brazilian raw milk. Considering the spoilage potential of all isolates and of the fungi present in raw milk and their survival in pasteurized milk, it is extremely important to carry out further studies to your resistant to heat, their impact on the shelf-life of pasteurized milk,

Os micro-organismos termodúricos são aqueles capazes de resistir ao processo de pasteurização do leite. Assim, a microbiota do leite pasteurizado é constituída por esses micro-organismos que podem influenciar diretamente na vida sua vida útil. O objetivo do presente trabalho foi identificar a microbiota termodurica psicrotrófica proteolítica do leite cru refrigerado. Foram avaliadas 20 amostras de leite cru refrigerado, plaqueadas e incubadas a 7C por 10 dias. As cepas isolados foram repicadas em ágar leite para verificação da atividade proteolítica e inicialmente avaliadas microscopicamente e posteriormente identificadas por sequenciamento de DNA. Foi observado apenas um crescimento bacteriano e outros 10 isolados fúngicos termodúricos psicrotróficos em 40% das amostras avaliadas. Todos os isolados foram proteolíticos. O sequenciamento parcial do gene 16S rRNA da cepa bacteriana permitiu a identificação de Bacillus pumilus e a análise da região ITS1-5.8S-ITS2 dos isolados fúngicos os identificou como Cladosporium cladosporioides (60%), Curvularia geniculatus (10%), e Geotrichum candidum (30%). Não foram encontrados estudos anteriores sobre a presença de B. pumilus no leite cru brasileiro. Considerando o potencial deteriorante de todos os isolados e presença de fungos termodúricos psicrotróficos no leite cru, é importante a continuidade trabalhos que avaliem sua resistência té