Resumo
Objetivou-se avaliar a expressão de genes relacionados ao metabolismo lipídico, bem como identificar por meio da ferramenta de proteômica diferencial, as principais diferenças no perfil proteico do músculo longissimus thoracis (LT) e da espessura de gordura subcutânea (EGS) de progênies Nelore, filhos de touros com DEP contrastante para precocidade sexual e crescimento. Para isso, o presente estudo foi dividido em 3 manuscritos. Em síntese, foram utilizados 105 bovinos, machos não castrados, com idade média de 20 ± 2 meses e 400 ± 24 kg, provenientes de um mesmo rebanho, com informações genéticas para precocidade e crescimento. Os animais foram confinados por 100 dias e realizada a ultrassonografia de carcaça a cada 28 dias. Foram coletadas amostras de sangue para determinar as concentrações metabólicas e hormonais na última pesagem. Os animais foram abatidos após 100 dias e durante o abate foram colhidas amostras do músculo LT e da EGS entre a 12a e 13a costelas além de amostras da gordura visceral (GV). Todas essas amostras foram imediatamente congeladas em nitrogênio líquido e mantidas em freezer 80ºC até a realização das análises de expressão gênica por PCR em tempo real (RT-qPCR) e análise e SDS-PAGE, seguida de identificação proteica pela análise de espectrometria de massas acoplada a cromatografia liquida (LC-MS/MS). Durante a desossa foi avaliada a gordura intramuscular (MAR) no músculo LT. Também foram coletados bifes para lipídeos totais, perfil de ácidos graxos e solubilidade do colágeno. Os animais foram selecionados de acordo com a DEP de seus pais (touros). Do total de 105 animais, foram selecionados 6 pais com DEPs simultaneamente contrastantes para precocidade e crescimento, de forma que cada grupo experimental tivessem 3 pais. A partir dos pais, foram formados 2 grupos contrastantes denominados de alta DEP (H_EPD; N=16) e baixa DEP (L_EPD; N=16). Os animais do grupo H_EPD tiveram maior EGS (P=0,006); menor LDL (P=0,014); maior IGF-1 (P=0,064); maior solubilidade do colágeno (P=0,098); menor expressão do gene LPL, no LT (P=0,045). Também este grupo apresentou maior expressão dos genes envolvidos na lipogênese avaliados na EGS: ACACA (P=0,060), LPL (P=0,085), ACOX1 (P= 0,100), LEP (P=0,030), SDC (P= 0,009), e GAPDH (P=0,081), do que os animais do grupo L_DEP. Uma banda eletroforética foi detectada como diferentemente abundante no músculo LT (banda 16) e três bandas eletroforéticas foram detectadas como diferentemente abundantes na EGS (bandas 24, 30, 32). As vias KEGG do metabolismo de piruvato, glicólise/gluconeogênese, metabolismo de carbono, biossíntese de aminoácidos, dentre outras, foram enriquecidas para as proteínas diferencialmente abundantes identificadas no LT e na EGS. A seleção genética para precocidade e crescimento afeta o proteoma muscular e consequentemente o metabolismo lipídico e proteico de bovinos não castrados. O hormônio IGF-1, o gene LPL e as proteínas PKLR, PKM, ALDOA, DLD, GPI, VIM, ACTC1, OXCT1, GAPDH, LDHA, LDHB, MDH1, MDH2, IDH1, PGK1, SUCLG2 and ACY1 podem ser considerados futuros biomarcadores candidatos para EGS. Palavras-chave: Bovinos de corte. Espessura de gordura subcutânea. Vias metabólicas. Metabolismo proteico e lipídico. Proteômica.
This study aimed to evaluate the expression of genes related to lipid metabolism, as well as to identify, through the proteomics tool, differences in the protein profile of Longissimus thoracis (LT) and backfat thickness (BFT) proteins of Nelore progenies, offspring of bulls with contrasting factors of expected progeny difference (EPD) for precocity and growth. For this, the present study was divided into 3 manuscripts. In summary, 105 male bulls were used, with a mean age of 20 ± 2 months and 400 ± 24 kg, from the same herd, with the genetic information of precocity and growth. The animals remained confined for 100 days, and the carcass ultrasound was performed every 28 days. Blood samples were collected to determine the metabolic and hormonal profile. The animals were slaughtered after 100 days and during slaughter, muscle LT and BFT were collected between the 12th and 13th ribs, in addition to visceral fat (GV). All of these were immediately frozen in liquid nitrogen and kept in a freezer - 80ºC until the analysis of gene expression by real-time PCR (RT-qPCR) and analysis and SDSPAGE, followed by the identification of proteins by coupled mass spectrometry liquid chromatography (LC-MS / MS). During boning, the intramuscular fat (MAR) in the LT muscle was evaluated. Steaks for total lipids, fatty acid profile, and collagen solubility were also collected. The animals were selected according to a EPD from their parent bulls. Were selected 6 parents with EPD contrasting simultaneously for precocity and growth, so that each experimental group had 3 parents bulls. Then, were formed, 2 contrasting groups called high EPD (H_EPD; N = 16) and low EPD (L_EPD; N = 16), using 32 progenies. The animals in the H_EPD group had higher BFT (P = 0.006); lower LDL (P = 0.014); higher IGF-1 (P = 0.064); greater collagen solubility (P = 0.098); lower expression of the LPL gene, in LT (P = 0.045). This group also showed greater expression of the genes involved in lipogenesis evaluated in BFT: ACACA (P = 0.060), LPL (P = 0.085), ACOX1 (P = 0.100), LEP (P = 0.030), SDC (P = 0.009), and GAPDH (P = 0.081), than the animals in the L_EPD group. One electrophoretic band was detected as differently abundant in the LT muscle (band 16) and three electrophoretic bands were detected as differently abundant in the BFT (bands 24, 30, 32). The KEGG pathways of pyruvate metabolism, glycolysis/gluconeogenesis, carbon metabolism, amino acid biosynthesis, among others, were enriched for the differentially abundant proteins identified in the LT and BFT. The genetic selection for precocity and growth affects the muscle proteome and consequently the lipid and protein metabolism of noncastrated cattle. The IGF-1 hormone, the LPL gene, and the PKLR, PKM, ALDOA, DLD, GPI, VIM, ACTC1, OXCT1, GAPDH, LDHA, LDHB, MDH1, MDH2, IDH1, PGK1, SUCLG2, and ACY1 proteins can be considered future biomarkers candidates for BFT. Keywords: Beef Cattle. Backfat thickness. Metabolic pathways. Protein and lipid metabolism. Proteomics.