Características seminais pós-descongelamento em garanhões da raça crioula / Post-thaw seminal characteristics of Criollo breed stallions

Este trabalho teve como objetivo avaliar as características seminais de garanhões da raça Crioula após o processo de criopreservação utilizando o BotuCrio® . Foram utilizados 24 garanhões alojados nas proximidades de Porto Alegre, RS, Brasil. As análises do sêmen foram realizadas pré e pósdescongelamento através do sistema Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision®. Somente foram utilizadas amostras com motilidade total ≥ 60 % e vigor ≥ 3, estas foram envasadas em palhetas de 0,5 ml, dispostas horizontalmente a 5ºC durante 20 minutos. Após colocadas a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido durante 20 minutos. Sendo finalmente imersas em nitrogênio líquido, após descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos. Os valores médios e desvios padrões das variáveis pós-descongelamento foram: motilidade total (52,85 % ± 7,27); motilidade progressiva (31,15 % ± 10,21); motilidade rápida (4,78 % ± 5,37); motilidade local (22,44 % ± 8,68); velocidade curvilinear (97,67 μm/s ± 35,25); velocidade em linha reta (35,33 μm/s ± 15,29); velocidade da trajetória média (44,99 μm/s ± 17,98); linearidade (0,3 % ± 0,15); BCF (2,5 Hz ± 1,7); ALH (0,35 μm ± 0,3); integridade funcional da membrana (42,73 % ± 7,06) e integridade estrutural da membrana (48,06 % ± 8,99). Concluímos que o protocolo utilizando diluente BotuCrio® é viável para criopreservação do sêmen de cavalos da raça Crioula, pois garante motilidade acima de 30 % pós-descongelamento que é recomendado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.(AU)

The aim of this study was to evaluate seminal characteristics of Criollo breed stallions, after cryopreservation process using the BotuCrio®. One ejaculate from twenty-four stallions located near to Porto Alegre, RS, Brazil were used. Semen analysis were performed pre and post-freezing through the Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision® system. Only samples with total motility ≥ 60 % and vigor ≥ 3 were used. The samples were placed in 0.5 ml straws, arranged horizontally at 5ºC for 20 minutes. Then, 6 cm above the level of liquid nitrogen in vapor for 20 minutes. Finally, being immersed in liquid nitrogen, the samples thawed in a water bath at 37ºC for 30 seconds. Mean values and standard deviations of post-freeze variables were: total motility (52.85 % ± 7.27); progressive motility (31.15 % ± 10.21); rapid motility (4.78 % ± 5.37); local motility (22.44 % ± 8.68); Curvilinear Velocity (97.67 μm/s ± 35.25); Straight Line Velocity (35.33 μm/s ± 15.29); Average Path Velocity (44.99 μm/s ± 17.98); Linearity (0.3 % ± 0.15); BCF (2.5 Hz ± 1.7); ALH (0.35 μm ± 0.3) functional integrity (42.73 % ± 7.06) and physical integrity (48.06 % ± 8.99). We conclude that the protocol used for semen cryopreservation is feasible for use in the Criollo breed, because it has motility above 30 % post-freezing semen parameters, wich is the recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.(AU)

Características seminais pós-descongelamento em garanhões da raça crioula / Post-thaw seminal characteristics of Criollo breed stallions

Este trabalho teve como objetivo avaliar as características seminais de garanhões da raça Crioula após o processo de criopreservação utilizando o BotuCrio® . Foram utilizados 24 garanhões alojados nas proximidades de Porto Alegre, RS, Brasil. As análises do sêmen foram realizadas pré e pósdescongelamento através do sistema Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision®. Somente foram utilizadas amostras com motilidade total ≥ 60 % e vigor ≥ 3, estas foram envasadas em palhetas de 0,5 ml, dispostas horizontalmente a 5ºC durante 20 minutos. Após colocadas a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido durante 20 minutos. Sendo finalmente imersas em nitrogênio líquido, após descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos. Os valores médios e desvios padrões das variáveis pós-descongelamento foram: motilidade total (52,85 % ± 7,27); motilidade progressiva (31,15 % ± 10,21); motilidade rápida (4,78 % ± 5,37); motilidade local (22,44 % ± 8,68); velocidade curvilinear (97,67 μm/s ± 35,25); velocidade em linha reta (35,33 μm/s ± 15,29); velocidade da trajetória média (44,99 μm/s ± 17,98); linearidade (0,3 % ± 0,15); BCF (2,5 Hz ± 1,7); ALH (0,35 μm ± 0,3); integridade funcional da membrana (42,73 % ± 7,06) e integridade estrutural da membrana (48,06 % ± 8,99). Concluímos que o protocolo utilizando diluente BotuCrio® é viável para criopreservação do sêmen de cavalos da raça Crioula, pois garante motilidade acima de 30 % pós-descongelamento que é recomendado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.

The aim of this study was to evaluate seminal characteristics of Criollo breed stallions, after cryopreservation process using the BotuCrio®. One ejaculate from twenty-four stallions located near to Porto Alegre, RS, Brazil were used. Semen analysis were performed pre and post-freezing through the Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision® system. Only samples with total motility ≥ 60 % and vigor ≥ 3 were used. The samples were placed in 0.5 ml straws, arranged horizontally at 5ºC for 20 minutes. Then, 6 cm above the level of liquid nitrogen in vapor for 20 minutes. Finally, being immersed in liquid nitrogen, the samples thawed in a water bath at 37ºC for 30 seconds. Mean values and standard deviations of post-freeze variables were: total motility (52.85 % ± 7.27); progressive motility (31.15 % ± 10.21); rapid motility (4.78 % ± 5.37); local motility (22.44 % ± 8.68); Curvilinear Velocity (97.67 μm/s ± 35.25); Straight Line Velocity (35.33 μm/s ± 15.29); Average Path Velocity (44.99 μm/s ± 17.98); Linearity (0.3 % ± 0.15); BCF (2.5 Hz ± 1.7); ALH (0.35 μm ± 0.3) functional integrity (42.73 % ± 7.06) and physical integrity (48.06 % ± 8.99). We conclude that the protocol used for semen cryopreservation is feasible for use in the Criollo breed, because it has motility above 30 % post-freezing semen parameters, wich is the recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.

DIFERENTES ASSOCIAÇÕES ENTRE TROLOX® E ÁCIDO DOCOSAHEXAENOICO NA CONGELAÇÃO E REFRIGERAÇÃO DE SÊMEN DE GARANHÕES DA RAÇA MANGALARGA MARCHADOR

Objetivou-se avaliar o efeito de diferentes concentrações de ácido docosahexaenoico (DHA), isolado ou associado a diferentes concentrações de Trolox® na congelação e refrigeração de sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador. No primeiro experimento foram congelados 16 ejaculados para testar o efeito dos seguintes diluidores: D1) BotuCrio® (BC; controle); D2) BC + 50 ngmL-1 de DHA + 30 µM de Trolox® (BCDHA30T); D3) BC + 50 ngmL-1 de DHA + 40 µM de Trolox® (BCDHA40T); D4) BC + 50 ngmL-1 de DHA + 50 µM de Trolox® (BCDHA50T). Os diluidores testados preservaram igualmente vários parâmetros de movimento espermático, o percentual de hiperativos, a integridade funcional, a integridade da cromatina, a atividade mitocondrial alta e intermediária e a peroxidação lipídica (P>0,05). Embora, tenha sido observada superioridade do diluidor BCDHA40T sobre o diluidor controle em preservar a velocidade curvilinear, a velocidade linear progressiva e a velocidade média do trajeto (P<0,05). Houve menor percentual de móveis nas amostras criopreservadas em BCDHA30T do que no diluidor controle (P<0,05). Houve menor percentual de espermatozoides com membrana estruturalmente íntegra nas amostras criopreservadas em BCDHA50T do que o diluidor controle (P<0,05). No segundo experimento foram congelados 12 ejaculados para testar o efeito dos seguintes diluidores: D1) BotuCrio® (BC; controle); D2) BC + 30 ngmL-1 de DHA (BC30DHA); D3) BC + 40 µM de Trolox® (BC40T); D4) BC40T + 50 ngmL-1 de DHA (BC40T50DHA); D5) BC40T + 70 ngmL-1 de DHA (BC40T70DHA); D6) BC40T + 90 ngmL-1 de DHA (BC40T90DHA). Os diluidores testados preservaram de forma semelhante vários parâmetros de movimento espermático, a integridade estrutural e funcional das membranas espermáticas, a integridade da cromatina, a atividade mitocondrial alta e intermediária (P>0,05). O percentual de espermatozoides móveis e com velocidade linear progressiva e média do trajeto foi maior nas amostras criopreservadas no diluidor controle e BC30DHA do que nos diluidores contendo BC40T adicionados de DHA (P<0,05). No terceiro experimento foram refrigerados dez ejaculados para testar o efeito dos seguintes diluidores: D1) BotuSêmen® (BS; controle); D2) BS + 30 ngmL-1 de DHA (BS30DHA); D3) BS30DHA + 40 µM de Trolox® (BS30DHA40T); D4) BS + 50 ngmL-1 de DHA (BS50DHA); D5) BS50DHA + 40 µM de Trolox® (BS50DHA40T). Após 48 horas de refrigeração a 5oC foram avaliados vários parâmetros de viabilidade espermática e foi possível perceber que todos os diluidores testados preservaram igualmente vários parâmetros de movimento espermático e integridade estrutural e funcional das membranas espermáticas (P>0,05). No entanto, o BS50DHA foi superior ao BS30DHA40T em preservar a velocidade curvilinera e linear progressiva e foi superior ao BS30DHA40T e BS50DHA40T em preservar a velocidade média do trajeto e o índex de oscilação (P<0,05). Nenhum diluidor proposto maximizou o efeito do diluidor controle nas condições experimentais aqui testadas. A adição de Trolox® em diluidores contendo DHA só foi eficiente em melhorar os parâmetros de velocidade espermática no primeiro experimento. Não é necessário o uso de Trolox® para controlar a lipoperoxidação em diluidor contendo DHA.

The objective of this study was to evaluate the effect of different concentrations of docosahexaenoic acid (DHA), isolated or associated with different concentrations of Trolox® on the freezing and cooling of semen from Mangalarga Marchador stallions. In the first experiment, 16 ejaculates were frozen to test the effect of the following extenders: D1) BotuCrio® (BC; control); D2) BC + 50 ngmL-1 DHA + 30 M Trolox® (BCDHA30T); D3) BC + 50 ngmL-1 DHA + 40 M Trolox® (BCDHA40T); D4) BC + 50 ngmL-1 DHA + 50 M Trolox® (BCDHA50T). The extenders tested also preserved several parameters of spermatic movement, the percentage of hyperactive, functional integrity, chromatin integrity, high and intermediate mitochondrial activity and lipid peroxidation (P>0.05). Although, it was observed superiority of the extender BCDHA40T on the control extender in preserving curvilinear velocity, progressive linear velocity and average path velocity (P<0.05). There was lower percentage of motility in the cryopreserved samples in BCDHA30T than in the control extenders (P<0.05). There was a lower percentage of spermatozoa with structurally intact membrane in the cryopreserved samples in BCDHA50T than the control extenders (P<0.05). In the second experiment, 12 ejaculates were frozen to test the effect of the following extenders: D1) BotuCrio® (BC; control); D2) BC + 30 ngmL-1 DHA (BC30DHA); D3) BC + 40 M Trolox® (BC40T); D4) BC40T + 50 ngmL-1 DHA (BC40T50DHA); D5) BC40T + 70 ngmL-1 DHA (BC40T70DHA); D6) BC40T + 90 ngmL-1 DHA (BC40T90DHA). The extenders tested similarly preserved several parameters of sperm movement, structural and functional integrity of sperm membranes, chromatin integrity, high and intermediate mitochondrial activity (P>0.05). The percentage of moving spermatozoa with progressive and average linear velocity of the trajectory was higher in the cryopreserved samples in the control extenders and BC30DHA than in the extenders containing BC40T added DHA (P<0.05). In the third experiment, ten ejaculates were refrigerated to test the effect of the following extenders: D1) BotuSêmen® (BS; control); D2) BS + 30 ngmL-1 DHA (BS30DHA); D3) BS30DHA + 40 M Trolox® (BS30DHA40T); D4) BS + 50 ngmL-1 DHA (BS50DHA); D5) BS50DHA + 40 M Trolox® (BS50DHA40T). After 48 hours of cooling at 5ºC, several parameters of sperm viability were evaluated and it was possible to observe that all the extenders tested also preserved several parameters of sperm movement and structural and functional integrity of the spermatic membranes (P>0.05). However, the BS50DHA was superior to the BS30DHA40T in preserving the curvilinear and linear progressive velocity and was superior to the BS30DHA40T and BS50DHA40T in preserving the average path velocity and the oscillation index (P<0.05). No proposed extenders maximized the effect of the control extenders under the experimental conditions tested herein. The addition of Trolox® in extenders containing DHA was only efficient in improving the sperm velocity parameters in the first experiment. Trolox® is not required to control lipoperoxidation in extenders containing DHA.