The influence of season, environment, sex, and body mass on biochemical profile of the freshwater turtle Phrynops geoffroanus (Schweigger, 1812) / [Influência da estação, do ambiente, do sexo e da massa corporal no perfil bioquímico do cágado Phrynops geoffroanus (Schweigger, 1812)]

We analyzed the influence of the season, the environment, and the sex, as well as the relation of body mass (BM) in the serum albumin (ALB), aspartate aminotransferase (AST), creatinine (C), creatine kinase (CK), phosphorus (P), total calcium (tCa), total protein (TP), urea (U), uric acid (UA), calcium:phosphorus ratio (Ca:P), and the globulin value (GV) of thirty individuals of Phrynops geoffroanus of the urban area of Cuiabá, Mato Grosso, Brazil. The modeling of biochemical parameters was performed using the Generalized Additive Models for Location, Scale and Shape (GAMLSS) to verify the influence of variables considered in this study on each of the biochemical parameters analyzed. The season influenced AST, CK, C, tCa, Ca:P and UA. The environment influenced tCa, Ca:P, U and UA. On the other hand, CK, tCa, P, Ca:P and U differed significantly between males and females. Regarding the BM, a relationship of this variable was observed with CK, C, tCa, P, U, UA and Ca:P. We concluded that the season, environment, sex, and body mass can influence the biochemical parameters of P. geoffroanus, and these factors should be routinely considered in the interpretation of laboratory results.

Analisou-se a influência da estação, do ambiente e do sexo, assim como a relação da massa corporal (BM) nos níveis sorológicos de albumina (ALB), aspartato aminotransferase (AST), creatinina (C), creatina quinase (CK), fósforo (P), cálcio total (tCa), sólidos totais (TS), ureia (U), ácido úrico (UA), relação cálcio:fósforo (Ca:P), e do valor da globulina (GV) de Phrynops geoffroanus da área urbana de Cuiabá, Mato Grosso, Brasil. A modelagem dos parâmetros bioquímicos foi realizada utilizando-se os modelos aditivos generalizados para locação, escala e forma (GAMLSS) para verificar a influência das variáveis consideradas neste estudo em cada um dos parâmetros bioquímicos analisados. A estação sazonal influenciou os níveis de AST, CK, C, tCa, Ca:P e UA. O ambiente foi capaz de influenciar tCa, Ca:P, U e UA. Por outro lado, CK, tCa, P, Ca:P e U diferiram significativamente entre machos e fêmeas. Em relação à BM, observou-se relação dessa variável com CK, C, tCa, P, U, UA e Ca:P. Concluiu-se que a estação sazonal, o ambiente, o sexo e a massa corporal são capazes de influenciar os parâmetros bioquímicos de P. geoffroanus e que esses fatores devem ser rotineiramente considerados na interpretação dos resultados laboratoriais.

Caracterização Demográfica, Dimorfismo Sexual, Morfometria e Biologia Reprodutiva de Phrynops geoffroanus (Schweigger, 1812) em duas áreas de Caatinga, Nordeste do Brasil

Este trabalho teve o objetivo de caracterizar demograficamente e morfometricamente uma população do cágado Phrynops geoffroanus, bem como, avaliar seu ciclo reprodutivo em áreas de Caatinga do nordeste brasileiro. Duas áreas do estado da Paraíba foram selecionadas para a coleta de indivíduos: RPPN Fazenda Tamanduá foi utilizada para estudar a demografia de uma população em um reservatório temporário; trecho do rio Piranhas-Açú para avaliar o ciclo reprodutivo desses animais. As análises utilizando os indivíduos capturados indicam que não existe diferenças na proporção sexual na população amostrada, bem como, que esta é composta principalmente por indivíduos adultos; e que não existe uma relação significativa entre a quantidade de animais capturados e a quantidade de chuva durante o período amostrado. Quanto a reprodução desta espécie em áreas de caatinga, os indivíduos coletados um trecho do Rio Piranhas-Açu (entre os Estados da Paraíba e Rio Grande do Norte) mostraram que existe um forte dimorfismo sexual, sendo baseada principalmente no maior tamanho das fêmeas. Análises histológicas das gônadas revelaram que fêmeas e machos de P. geoffroanus reproduzem continuamente na área estudada, sem mostrar relação com a precipitação histórica registrada para a região. Este padrão é aqui, identificado pela primeira vez em áreas semiáridas para esta espécie, diferentemente do que é esperado para espécies de ambiente tropicais, onde a pluviosidade é o principal fator ambiental regulador das atividades reprodutivas nos Testudines.

This work aimed to demographically and morphometrically characterize a population of Phrynops geoffroanus, as well as to evaluate the reproductive cycle in two areas of Caatinga do Sertão da Paraíba. The first chapter was conducted in an area of Caatinga in the Northern Depression of the State of Paraíba, at RPPN Fazenda Tamanduá. Individuals captured by hand or by pit were measured and weighed. Size and weight were compared between sexes and methods of capture using a MANOVA. Sex ratio was compared between capture methods using Pearson's Chi-square test. Population density and biomass were calculated. The number of animals captured was grouped into three shifts and compared. Throughout the year, 113 individuals were captured in the reservoir, with a population of 43.4% males, 47.8% females and 8.8% juveniles, with a density of at least 41.8 individuals / ha and biomass of 33,05kg/ha. There is no significant relationship between the number of animals captured and the amount of rain during the sampled period. Due mainly to the ephemerality of the aquatic environments of the Caatinga and to the unpredictability of the rains of this biome, the populations of aquatic species present great population variations and in their biological activities. Further studies are needed to fill several gaps in the knowledge of the natural history of Caatinga turtles. The second chapter aimed to describe the reproductive cycle of Phrynops geoffroanus in a semi-arid area of Northeastern Brazil and was carried out in one section of the Piranhas-Açu River, between the States of Paraíba and Rio Grande do Norte, through active search and pit traps. The collections were monthly, between November 2018 and October 2019. The individuals were weighed, measured and sacrificed. For females, the length and width of all eggs found in the oviduct were measured, in addition to the two largest ovarian follicles. For males, testicle length and width were measured to calculate their volume using the ellipsoid formula. Testicles and epididymides were prepared for conventional histological study. 32 females and 41 males were collected throughout the sampling period. There is sexual dimorphism in weight, CCL, CCW, MCL, MCW, AAP, MPL, MPW and TL. The frequencies of reproductive females and males of P. geoffroanus showed no relation to the historical precipitation recorded for the study area. Sexually mature females were recorded over most of the sampled months. The simultaneous presence of vitellogenic follicles and eggs in the oviduct in some females, suggests the production of at least two litters per reproductive season. The average number of eggs per litter was 11.14. In males, only the density of sperm was influenced by precipitation. Animals with few sperm were found in the testicles, explaining this difference in density, but with a lot of sperm in the epididymis. The presence of females with vitellogenic follicles and the presence of males with sperm throughout the year, allows to infer that reproduction of this species in the sampled area is not influenced by rain.

TÉCNICA CIRÚRGICA DE CELIOTOMIA TRANSPLASTRÃO COMO MÉTODO DA OBTENÇÃO DE AMOSTRAS BIOLÓGICAS EM Phrynops geoffroanus (TESTUDINES:CHELIDAE) DE VIDA LIVRE

A eutrofização nos sistemas aquáticos é umas das alterações mais frequentes e é caracterizada pela liberação antrópica de nutrientes através do despejo de efluentes e aterros. Outra causa de alteração frequente se dá ao uso de pesticidas, herbicidas e fertilizantes no solo, que acabam sendo lixiviados para cursos dágua. O uso de bioindicadores é fundamental tanto para avaliar a situação e as tendências de contaminação em uma ampla escala geográfica e temporal, quanto para avaliar a exposição e os efeitos críticos, porém muitas vezes demanda a eutanásia de espécimes. Répteis podem servir como excelentes bioindicadores, pois muitas espécies são generalistas ocupando diferentes níveis tróficos, têm vida longa, e ocorrem em uma variedade de habitats. Este trabalho propõe realizar biópsia da musculatura esquelética, gordura e fígado de indivíduos de Phrynopsgeoffroanus procedentes de ambiente natural. Foi realizado o acesso cirúrgico da cavidade celomática via transplastrão, evitando a eutanásia para remoção de amostras de tecidos biológicos. Oito fêmeas adultas foram submetidas a cirurgia de celiotomiatransplastrão, com abertura completa do plastrão na região central epigástrica. Foram coletados fragmentos de gordura, musculatura esquelética e fígado. No período pós-operatório todos os animais reestabeleceram capacidade locomotora e tiveram cicatrização plena da membrana celomática em 180 dias. Três animais foram a óbito devido disputas por alimento. Ao final de 545 dias, cinco animais foram devolvidos para o ambiente lacustre, demostrando que a coleta de material biológico para análise de contaminantes inorgânicos pode ser feita mediante acesso cirúrgico, porém o tempo de cicatrização da membrana celomática recuperação plena da função locomotora demanda um longo período de reabilitação.

Eutrophication in aquatic systems is one of the most frequent alterations and is characterized by the anthropic release of nutrients through effluents and landfills. Another cause of frequent change is the use of pesticides, herbicides and fertilizers in the soil, which end up being leached into watercourses. The use of bioindicators is critical both to assess the status and trends of contamination on a broad geographical and temporal scale, as well as to assess exposure and critical effects, but often requires euthanasia of specimens. Reptiles can serve as excellent bioindicators because many species are generalists occupying different trophic levels, have long life, and occur in a variety of habitats. This work proposes to perform a biopsy of the skeletal, fat and liver musculature of Phrynops geoffroanus individuals from the natural environment. Surgical access of the celoma cavity via transplast was performed, avoiding euthanasia for removal of biological tissue samples. Eight adult females were submitted to transplast celiotomy surgery, with full opening of the plastron in the central epigastric region. Fragments of fat, skeletal muscle and liver were collected. In the postoperative period all the animals reestablished locomotor capacity and had full cicatrization of the celomática membrane in 180 days. Three animals were killed due to disputes over food. At the end of 545 days, five animals were returned to the lacustrine environment, demonstrating that the collection of biological material for the analysis of inorganic contaminants can be done through surgical access, but the cicatrization time of the celomatous membrane full recovery of the locomotor function demands a long period of rehabilitation.

INVESTIGAÇÃO DE HEMOSPORÍDEOS E HEMOGREGARINAS (APICOMPLEXA) EM Podocnemis expansa E Phrynops geoffroanus

Testudines atuam como hospedeiros intermediários para hemogregarinas (Haemogregarina spp. e Hemolivia spp.) e hemosporídeos (Haemoproteus spp. e Haemocystidium spp.). Esses hemoprotozoários pertencentes ao Filo Apicomplexa são parasitas heteroxenos que afetam principalmente hemácias. Sua presença, intracitoplasmática, em extensões sanguíneas de répteis, pode ser eventualmente observada. A identificação morfológica não é suficiente para a classificação de espécie, sendo recomendada a utilização de métodos moleculares. Com o objetivo de pesquisar a presença de hemogregarinas e hemosporídeos em Phrynops geoffroanus (cágados-de-barbicha) e Podocnemis expansa (tartarugas-da-Amazônia) ambos de vida livre, foram utilizados métodos morfológicos e moleculares. Nas extensões sanguíneas coradas e em cortes histológicos (de fígado, pulmão, baço e coração de P. geoffroanus) foi investigada a presença de hemoparasitas. A partir de amostras de sangue e de tecidos foi realizada a pesquisa de material genômico de hemoparasitas por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (cPCR), com base nos genes 18S rRNA (hemogregarinas) e Citocromo b (hemosporídeos). Em extensões sanguíneas de 100% (7/7) de P. expansa foram observadas estruturas sugestivas para hemogregarinas. Observou-se amplificação de fragmentos baseados no gene 18S rRNA para 100% (7/7) de P. expansa. As análises filogenéticas de Máxima Verossimilhança (MV) e Bayesiana foram obtidas de sequências de amostras sanguíneas de P. expansa. Tais sequências agruparam-se em um clado monofilético e posicionaram-se em um ramo próximo às sequências do gênero Haemogregarina obtidas de testudines aquáticos da América do Norte, Ásia, Europa e África. Tal situação instiga a investigação molecular de mais sequências de hemogregarinas, provenientes de testudines aquáticos de países sul americanos geograficamente próximos, a fim de colaborar na afirmação mais robusta do surgimento de um novo clado do gênero Hemogregarina.

Testudines act as intermediate hosts for hemogregarines (Haemogregarina spp. and Hemolivia spp.) and hemosporidia (Haemoproteus spp. and Haemocystidium spp.). These haemoprotozoans belongs to the phylum Apicomplexa are heteroxenous parasites that affect erythrocytes. Their presence in reptiles blood extensions can eventually be observed. Morphological identification is not enough for the classification, so molecular methods are recommended. In order to investigate the presence of hemogregarines and hemosporidia in free-living Phrynops geoffroanus (geoffroys side-necked turtle) and Podocnemis expansa (giant Amazon turtle), morphological and molecular methods were used. The presence of hemoparasites was investigated at stained blood smears and histological slides (liver, lung, spleen and heart from P. geoffroanus). Genomic material of hemoparasites was detected by Polymerase Chain Reaction (cPCR), based on the 18S rRNA genes (hemogregarines) and Cytochrome b genes (hemosporidia). Hemogregarines-like structures were observed in stained blood smears from 100% (7/7) P. expansa. Amplification of fragments based on 18S rRNA gene was observed at 100% (7/7) P. expansa samples. Maximum Likelihood and Bayesian phylogenetic analyzes were obtained from sequences from P. expansa blood samples. These sequences were grouped into a monophyletic clade and clustered close Haemogregarina genus sequences, obtained from fresh water turtles from North America, Asia, Europe and Africa. This situation put forward molecular investigation of more sequences of hemogregarines from freshwater turtles from geographically close South American countries, with the view to collaborate in a robust affirmation of the emergence of a new clade of the genus Hemogregarina.