Desenvolvimento de embriões de camundongas após manutenção em diferentes soluções de manipulação / Development of mice embryos after maintenance in different manipulation solutions

Avaliou-se a eficácia de duas soluções de manipulação (SM) de embriões de camundongas nos estádios de blastocisto inicial (Bin), mórula compacta grau I (McI) e II (McII), distribuídos aleatoriamente em três tratamentos (T), de acordo com a solução de manutenção. No T1 usou-se PBS modificado (controle); no T2, SME e no T3, SME enriquecida. Os embriões foram mantidos durante quatro horas na solução de manutenção e posteriormente classificados quanto ao estádio de desenvolvimento e à qualidade embrionária. Logo após, foram cultivados em meio TCM 199 e classificados novamente quanto ao estádio de desenvolvimento e à qualidade embrionária. A taxa de desenvolvimento dos embriões após manutenção por quatro horas em solução de manipulação foi menor (P<0,05) nos embriões do controle, comparada à de embriões do SME e SME enriquecida, diferença esta não observada (P>0,05) após o cultivo in vitro. Os embriões McII do T3 tiveram maior desenvolvimento (P<0,05) em relação aos embriões do T1 e T2, indicando o efeito benéfico do enriquecimento da solução SME. Conclui-se que as soluções de manipulação SME e SME enriquecida influenciaram beneficamente o desenvolvimento de embriões.(AU)

The effect of embryo manipulation solution followed by in vitro culture in mice embryos was studied. The embryos at early blastocyst (Bin), and compact morula grades I (McI) and II (McII) were randomly assigned into three treatments. T1 used modified PBS (control), T2 used EMS, and T3 used EMS supplemented. In each treatment, the embryos were kept in manipulation solution for four hours. Finishing the manipulation period, the embryos were classified according the development stage and quality. Following, the embryos were cultured in TCM 199. After the culture period, the embryos were evaluated according to quality and development stage. The development rate for Bin, McI, and McII after maintenance for four hours in manipulation solution was lower for control embryo (P>0.05) as compared to EMS and EMS supplemented embryos. After in vitro culture, no differences (P>0.05) on embryo development rate among control, EMS, and EMS supplemented were observed. Moreover, McII from EMS supplemented had a higher development (P<0.05) (93 percent) as compared to control (82.5 percent) and EMS (83.9 percent), suggesting a beneficial effect of EMS supplemented. EMS and EMS supplemented embryos had a positive effect on embryo development, showing higher embryo development than those in PBS solution.(AU)

XENOTRANSPLANTE OVARIANO DE GATAS DOMESTICAS EM CAMUNDONGAS C57BL/6 SCID E SUA RESPOSTA A GONODOTROFINA CARIONICA EQUINA

Xenotransplante ovariano é uma técnica reprodutiva auxiliar que permite a conservação do germoplasma de espécies de alto valor zootécnico ou em perigo de extinção. O uso de gonadotrofinas exógenas auxilia no desenvolvimento desses tecidos xenotransplantados e na obtenção de folículos viáveis para produção in vitro de embriões (PIVE), entretanto esse uso não foi relatado em xenotransplante de ovários de gatas com fêmeas C57BL/6 SCID como receptora. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi avaliar a resposta do xenotransplante ovariano de gata doméstica à gonadotrofina coriônica equina (eCG) quando transplantados em fêmeas C57BL/6 SCID. Para tanto, fragmentos de córtex ovariano de gatas domésticas foram transplantados sob a cápsula renal de quinze camundongas C57BL/6 SCID após ovariectomia bilateral. Ao final de 45 dias, as fêmeas foram divididas em dois grupos e aquelas que não receberam indução hormonal (eCG ) foram eutanasiadas no momento da indução. As fêmeas que receberam indução hormonal (eCG +) foram eutanasiadas 48h após. Todos os tecidos colhidos foram levados para processamento histológico. As proporções entre os diferentes folículos ovarianos foram comparadas pelo teste de qui-quadrado. A análise morfométrica dos folículos foi comparada entre os grupos experimentais pelo teste de Tukey (folículos primordial, primário e secundário) e Kruskal-Wallis (folículo antral). Macroscopicamente foi possível observar um baixo número (16%) de folículos antrais com mais de 1mm nos transplantes tratados com eCG. Na análise microscópica, folículos de todas as categorias foram observados nos transplantes e todos apresentaram morfologia e morfometria normais para a espécie estudada (Felis catus), sendo, porém observado folículos primordiais e primários maiores naqueles transplantes eCG +. Houve uma redução nas porcentagens de folículos primordiais e aumento nas categorias subsequentes, principalmente nas de folículos antrais do grupo eCG +, sendo essa condição caracterizada como Follicular Right Shift (FRS). Folículos luteinizados também foram observados nos transplantes tratados com eCG. Dessa maneira, conclui-se que o tratamento com eCG foi eficaz em se tratando de desenvolvimento folicular, mas não apresentou boa resposta superovulatória.

Ovarian xenografting is an auxiliary reproductive technique that allows the conservation of germplasm of high value livestock or endangered species. The use of exogenous gonadotropins assists in developing these xenografted tissues and obtaining viable follicles for in vitro embryo production (IVEP), however this use has not been reported in xenograftings of cats ovaries with C57BL/6 SCID female mice as recipients. Thus, the aim of this study was to evaluate the response of xenografting of domestic cat ovaries to equine chorionic gonadotropin (eCG) when grafted into C57BL/6 SCID female mice. Therefore, domestic cats ovarian cortex fragments were grafted under the kidney capsule of fifteen C57BL/6 SCID mice after bilateral ovariectomy. At the end of 45 days, the female mice were divided into two groups and those who did not receive hormone induction (eCG ) were euthanized at the time of induction. Females who received hormonal induction (eCG +) were euthanized after 48 hours. All collected tissues were taken for histologic processing. The proportions between the different ovarian follicles were compared by the chi-square test. The morphometric analysis of the follicles were compared between the experimental groups by the Tukey test (primordial follicles, primary and secondary) and Kruskal-Wallis (antral follicles). Macroscopically, it was possible to observe a low number (16%) of antral follicles with more than 1mm in transplants treated with eCG. In the microscopic analysis, follicles from all categories were observed in transplants and all had normal morphology and morphometry for the studied species (Felis catus), being however observed larger primordial and primary follicles in those eCG + transplants. There was a decrease in primordial follicles percentages and an increase in subsequent categories, mainly in antral follicles of eCG + group, and this condition is proposed here characterized as Follicular Right Shift (FRS). Luteinized follicles were also observed in transplants treated with eCG. Thus, it is concluded that the treatment with eCG is effective when it comes to follicular development, but it did not show a good superovulatory response.