CARACTERIZAÇÃO AMBIENTAL DO COMPLEXO DE ESPÉCIES Cryptococcus neoformans E C. gattii NO INTERIOR DO ESTADO DE SÃO PAULO, BRASIL

A criptococose é uma doença sistêmica causada pela inalação de basidiosporos desidratados de espécies patogênicas do gênero Cryptococcus presentes no ambiente. Os complexos espécies mais associados à doença são os complexos de espécies Cryptococcus neoformans e C. gattii. O complexo de espécies C. neoformans está associado a casos de criptococose em pacientes imunossuprimidos, sendo comumente isolados do solo e de fezes de aves. O complexo de espécies de C. gattii, por sua vez, afeta principalmente indivíduos imunocompetentes e geralmente é isolado em espécies de árvores nativas ou exóticas em estado de biodegradação. Este estudo teve como objetivo realizar o mapeamento ambiental de espécies patogênicas do gênero Cryptococcus em amostras ambientais arbóreas em locais públicos da cidade de Birigui, São Paulo. Para a coleta das amostras, foram selecionadas regiões com maior trânsito neste município. Após processamento, foram realizados testes morfo-fisiológicos, bioquímicos, teste de assimilação de carbono e nitrogênio e PCR URA5 e RFLP com dupla digestão enzimática para caracterização do complexo de espécies/espécie de Cryptococcus. Entre fevereiro de 2018 e março de 2019, foram coletadas 100 amostras de diferentes árvores em locais arborizados públicos. A porcentagem de colonização das árvores por C. gattii VGII foi de 5%, por C. neoformans VNIV de 1% e foram encontrados 6% de C. laurentii e 3% de C. albidus. Estes resultados sugerem a existência de micro-focos e diversidade de espécies patogênicas de Cryptococcus em algumas árvores dos ambientes investigados neste estudo.

Cryptococcosis is a systemic disease caused by the inhalation of dehydrated basidiospores of pathogenic species of Cryptococcus genus present in the environment. The two species complex associated with the disease are the Cryptococcus neoformans and C. gattii species complex. C. neoformans species complex are associated with cases of cryptococcosis in immunosuppressed patients, being commonly isolated from the soil and birds feces. C. gattii species complex affects mainly immunocompetent individuals and are often isolated in native or exotic tree species in some state of biodegradation. This study aimed to perform the environmental mapping of pathogenic species of the genus Cryptococcus in tree samples of public places of the city of Birigui, São Paulo. For collection, the samples were collected from regions with greater traffic in this city. After processing, morphophysiological, biochemical, carbon and nitrogen assimilation and URA5 PCR and RFLP with double enzymatic digestion tests were performed to characterize the Cryptococcus species/species complex. Between february 2018 and march 2019 was collected a total of 100 samples from different trees in public arborized locations. The percentage of tree colonization by the C. gattii VGII was 5%, for C. neoformans VNIV was 1% and was found 6% of C. laurentii and 3% of C. albidus species. These results obtained suggests that there are a micro-foci and diversity of pathogenic Cryptococcus species in some arboreal environment locations investigated in this study.

Optimization of lipids production by Cryptococcus laurentii 11 using cheese whey with molasses

This study aimed the optimization of culture condition and composition for production of Cryptococcus laurentii 11 biomass and lipids in cheese whey medium supplemented with sugarcane molasses. The optimization of pH, fermentation time, and molasses concentration according to a full factorial statistical experimental design was followed by a Plackett-Burman experimental design, which was used to determine whether the supplementation of the culture medium by yeast extract and inorganic salts could provide a further enhancement of lipids production. The following conditions and composition of the culture medium were found to optimize biomass and lipids production: 360 h fermentation, 6.5 pH and supplementation of (g L-1): 50 molasses, 0.5 yeast extract, 4 KH2PO4, 1 Na2HPO4, 0.75 MgSO4•7H2O and 0.002 ZnSO4•H2O. Additional supplementation with inorganic salts and yeast extract was essential to optimize the production, in terms of product concentration and productivity, of neutral lipids by C. laurentii 11. Under this optimized condition, the production of total lipids increased by 133% in relation to control experiment (from 1.27 to 2.96 g L-1). The total lipids indicated a predominant (86%) presence of neutral lipids with high content of 16- and 18- carbon-chain saturated and monosaturated fatty acids. This class of lipids is considered especially suitable for the production of biodiesel.

Comparison of primers for RAPD-PCR from environmental isolates of Cryptococcus neoformans, Cryptococcus albidus and Cryptococcus laurentii complex

Various organisms have been characterized by molecular methods, including fungi of the genus Cryptococcus. The purposes of this study were: to determine the discriminatory potential of the RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) primers, the pattern of similarity of the Cryptococcus species, and discuss their useful application in epidemiological studies. We analyzed 10 isolates of each specie/group: C. albidus, C. laurentii complex, C. neoformans var. grubii, all from environmental source, and two ATCC strains, C. neoformans var. grubii ATCC 90112, and C. neoformans var. neoformans ATCC 28957 by RAPD-PCR using the primers CAV1, CAV2, ZAP19, ZAP20, OPB11 and SEQ6. The primers showed a good discriminatory power, revealing important differences between them and between species; the SEQ6 primer discriminated a larger number of isolates of three species. Isolates of C. laurentii showed greater genetic diversity than other species revealed by all six primers. Isolates of C. neoformans were more homogeneous. Only the primer CAV2 showed no amplification of DNA bands for C. albidus. It was concluded that the use of limited number of carefully selected primers allowed the discrimination of different isolates, and some primers (e.g., CAV2 for C. albidus) may not to be applied to some species.

Cryptococcus spp. E ECTOPARASITOS ASSOCIADOS A POMBOS (Columba livia) EM HOSPITAIS, ESCOLAS, PRAÇAS, IGREJAS E PRÉDIOS ANTIGOS NA CIDADE DE SALVADOR, BAHIA

Objetivou-se neste estudo avaliar o risco da ocorrência de Cryptococcus spp. e ectoparasitos associados à presença de pombos (Columba livia) em hospitais, escolas, praças, igrejas e prédios antigos na cidade de Salvador, nordeste do Brasil. No período de 2015 a 2016, foram coletadas 851 amostras, sendo: de swab da cloaca de pombo (n= 229), material aderido às patas de pombo (n=26), fezes de pombos do ambiente (n= 315), poeira do interior de recintos (n=218) e detrito de árvores (n=63). Nos hospitais todos os tipos de amostras foram coletados o que variou para os demais locais de estudo. Os pombos foram capturados com rede, anilhados e coletadas amostras de cloaca e de resíduos de patas. Em três exemplares foram acoplados mini-GPSs. Foi realizada identificação fenotípica e bioquímica de Cryptococcus spp. O Risco Relativo [RR] de contaminação de Cryptococcus spp. foi calculado entre os locais com a presença de pombos e suas fezes em relação à poeira de recintos internos em hospitais e escolas, bem como, para locais com a presença de pombos e suas fezes em igrejas e prédios antigos em relação às praças. A positividade geral nas amostras foi de 15,0% (128/851), sendo 72,3% (99/137) de C. albidus, 17,5% (24/137) de C. laurentii, 10,2% (14/137) de C. neoformans, nove amostras apresentaram contaminação mista. Segundo os resultados de isolamento, as áreas externas dos hospitais apresentaram 3,6 vezes risco mais elevado de contaminação por Cryptococcus spp. em relação aos seus recintos internos (RR 3·6, 95% IC 1·5 - 7·4; p = 0·001). As igrejas e prédios antigos apresentaram duas vezes mais risco de contaminação em relação às praças (RR 20, 95% CI 10 39; p=0036). C. albidus e C. laurentii foram isolados em amostras de cloaca (56/229), patas de pombos (8/26) e detritos de árvores (2/63). C. neoformans (n=14) foi isolado apenas em amostras de fezes. Foram registradas infestações nosocomiais por Ornithonyssus bursa, Pseudolynchia canariensis e Peckia intermutans em um dos hospitais estudados, todas associadas à presença de Columba livia. Medidas estruturais são necessárias para evitar a permanência de pombos e a formação de seus ninhos, além de ações de educação no sentido de não alimentar essas aves e aprimorar o manejo do lixo em espaços públicos e nos hospitais, evitando a exposição das pessoas às contaminações e infestações associadas a Columba livia.

The objective of this study was to evaluate the risk of Cryptococcus spp. And ectoparasites associated with the presence of Columba livia pigeons in hospitals, schools, squares, churches and old buildings in the city of Salvador, northeastern Brazil. In the period from 2015 to 2016, 851 samples of pigeon cloaca swab (n = 229), material adhered to the pigeon paws (n=26), pigeon feces from the environment (n = 315), dust from the interior of rooms (n = 218) and detritus of trees (n=63). In the hospitals, all types of samples were collected, which varied for the other study sites. The pigeons were captured with net, ringed and collected samples of cloaca and paws. In three birds were coupled mini-GPS. Phenotypic and biochemical identification of Cryptococcus spp. The Relative Risk [RR] of contamination of Cryptococcus spp. Was calculated between sites with the presence of pigeons and their feces in relation to dust from interior of rooms in hospitals and schools, as well as for sites with pigeons and their feces in churches and old buildings in relation to squares. The overall positivity in the samples was 15.0% (128/851), with 72.3% (99/137) of C. albidus, 17.5% (24/137) of C. laurentii, 10.2% (14/137) of C. neoformans, nine samples showed mixed contamination. According to the isolation results, the external areas of the hospitals presented a 3.6 times higher risk of Cryptococcus spp. contamination in relation to its interior of rooms (RR 3 · 6, 95% CI 1 · 5 - 7 · 4, p = 0 · 001). Churches and old buildings had twice the risk of contamination compared to squares (RR 2 0, 95% CI 1 0 - 3 9, p = 0 036). C. albidus and C. laurentii were isolated in cloacal samples (56/229), pigeon paws (8/26) and tree debris (2/63). C. neoformans (n = 14) was isolated only in feces samples. Nosocomial infestations by Ornithonyssus bursa, Pseudolynchia canariensis and Peckia intermutans were recorded in one of the hospitals studied, all associated with the presence of Columba livia. Structural measures are necessary to prevent pigeons from permanence and nesting, as well as educational actions in order not to feed these birds and improve waste management in public spaces and hospitals, avoiding the exposure of people to the contamination and infestations associated with Columba livia.

Isolamento de Cryptococcus neoformans, C. gattii e C. laurentii de sistema nervoso central de cães na cidade do Rio de Janeiro, RJ, Brasil

A criptococose é uma micose sistêmica com caráter oportunista, que pode acometer homens e diferentes espécies animais, principalmente em casos de imunodepressão. A infecção pode ser adquirida através da inalação, e por via hematógena, tem a capacidade de atingir e colonizar o sistema nervoso central. Objetivando o isolamento da levedura Cryptococcus neoformans a partir de sistema nervoso central de cães e gatos, no Município do Rio de Janeiro, procederam-se coletas no Laboratório de Diagnóstico de Raiva do Instituto Municipal de Medicina Veterinária Jorge Vaitsman, Rio de Janeiro. A etapa de isolamento e identificação se deu no Laboratório de Leveduras Patogênicas e Ambientais da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (LLPA-UFRRJ). Obteve-se um total de duzentas e uma amostras, sendo 166 de cães e 35 de gatos, resultando em quatro isolamentos positivos para o gênero nas amostras provenientes de cães; sendo um de Cryptococcus laurentii, dois de Cryptococcus neoformans e um de Cryptococcus gattii. Com este trabalho, obteve-se o primeiro isolamento descrito de Cryptococcus laurentii de sistema nervoso central de cão.

Isolamento de Cryptococcus neoformans, C. gattii e C. laurentii de sistema nervoso central de cães na cidade do Rio de Janeiro, RJ, Brasil

A criptococose é uma micose sistêmica com caráter oportunista, que pode acometer homens e diferentes espécies animais, principalmente em casos de imunodepressão. A infecção pode ser adquirida através da inalação, e por via hematógena, tem a capacidade de atingir e colonizar o sistema nervoso central. Objetivando o isolamento da levedura Cryptococcus neoformans a partir de sistema nervoso central de cães e gatos, no Município do Rio de Janeiro, procederam-se coletas no Laboratório de Diagnóstico de Raiva do Instituto Municipal de Medicina Veterinária Jorge Vaitsman, Rio de Janeiro. A etapa de isolamento e identificação se deu no Laboratório de Leveduras Patogênicas e Ambientais da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (LLPA-UFRRJ). Obteve-se um total de duzentas e uma amostras, sendo 166 de cães e 35 de gatos, resultando em quatro isolamentos positivos para o gênero nas amostras provenientes de cães; sendo um de Cryptococcus laurentii, dois de Cryptococcus neoformans e um de Cryptococcus gattii. Com este trabalho, obteve-se o primeiro isolamento descrito de Cryptococcus laurentii de sistema nervoso central de cão.

Isolamento de Cryptococcus neoformans, C. gattii e C. laurentii de sistema nervoso central de cães na cidade do Rio de Janeiro, RJ, Brasil

A criptococose é uma micose sistêmica com caráter oportunista, que pode acometer homens e diferentes espécies animais, principalmente em casos de imunodepressão. A infecção pode ser adquirida através da inalação, e por via hematógena, tem a capacidade de atingir e colonizar o sistema nervoso central. Objetivando o isolamento da levedura Cryptococcus neoformans a partir de sistema nervoso central de cães e gatos, no Município do Rio de Janeiro, procederam-se coletas no Laboratório de Diagnóstico de Raiva do Instituto Municipal de Medicina Veterinária Jorge Vaitsman, Rio de Janeiro. A etapa de isolamento e identificação se deu no Laboratório de Leveduras Patogênicas e Ambientais da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (LLPA-UFRRJ). Obteve-se um total de duzentas e uma amostras, sendo 166 de cães e 35 de gatos, resultando em quatro isolamentos positivos para o gênero nas amostras provenientes de cães; sendo um de Cryptococcus laurentii, dois de Cryptococcus neoformans e um de Cryptococcus gattii. Com este trabalho, obteve-se o primeiro isolamento descrito de Cryptococcus laurentii de sistema nervoso central de cão.

Isolamento de Cryptococcus neoformans, C. gattii e C. laurentii de sistema nervoso central de cães na cidade do Rio de Janeiro, RJ, Brasil

A criptococose é uma micose sistêmica com caráter oportunista, que pode acometer homens e diferentes espécies animais, principalmente em casos de imunodepressão. A infecção pode ser adquirida através da inalação, e por via hematógena, tem a capacidade de atingir e colonizar o sistema nervoso central. Objetivando o isolamento da levedura Cryptococcus neoformans a partir de sistema nervoso central de cães e gatos, no Município do Rio de Janeiro, procederam-se coletas no Laboratório de Diagnóstico de Raiva do Instituto Municipal de Medicina Veterinária Jorge Vaitsman, Rio de Janeiro. A etapa de isolamento e identificação se deu no Laboratório de Leveduras Patogênicas e Ambientais da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (LLPA-UFRRJ). Obteve-se um total de duzentas e uma amostras, sendo 166 de cães e 35 de gatos, resultando em quatro isolamentos positivos para o gênero nas amostras provenientes de cães; sendo um de Cryptococcus laurentii, dois de Cryptococcus neoformans e um de Cryptococcus gattii. Com este trabalho, obteve-se o primeiro isolamento descrito de Cryptococcus laurentii de sistema nervoso central de cão.

Isolamento de Cryptococcus neoformans, C. gattii e C. laurentii de sistema nervoso central de cães na cidade do Rio de Janeiro, RJ, Brasil

A criptococose é uma micose sistêmica com caráter oportunista, que pode acometer homens e diferentes espécies animais, principalmente em casos de imunodepressão. A infecção pode ser adquirida através da inalação, e por via hematógena, tem a capacidade de atingir e colonizar o sistema nervoso central. Objetivando o isolamento da levedura Cryptococcus neoformans a partir de sistema nervoso central de cães e gatos, no Município do Rio de Janeiro, procederam-se coletas no Laboratório de Diagnóstico de Raiva do Instituto Municipal de Medicina Veterinária Jorge Vaitsman, Rio de Janeiro. A etapa de isolamento e identificação se deu no Laboratório de Leveduras Patogênicas e Ambientais da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (LLPA-UFRRJ). Obteve-se um total de duzentas e uma amostras, sendo 166 de cães e 35 de gatos, resultando em quatro isolamentos positivos para o gênero nas amostras provenientes de cães; sendo um de Cryptococcus laurentii, dois de Cryptococcus neoformans e um de Cryptococcus gattii. Com este trabalho, obteve-se o primeiro isolamento descrito de Cryptococcus laurentii de sistema nervoso central de cão.

Isolamento de Cryptococcus neoformans, C. gattii e C. laurentii de sistema nervoso central de cães na cidade do Rio de Janeiro, RJ, Brasil

A criptococose é uma micose sistêmica com caráter oportunista, que pode acometer homens e diferentes espécies animais, principalmente em casos de imunodepressão. A infecção pode ser adquirida através da inalação, e por via hematógena, tem a capacidade de atingir e colonizar o sistema nervoso central. Objetivando o isolamento da levedura Cryptococcus neoformans a partir de sistema nervoso central de cães e gatos, no Município do Rio de Janeiro, procederam-se coletas no Laboratório de Diagnóstico de Raiva do Instituto Municipal de Medicina Veterinária Jorge Vaitsman, Rio de Janeiro. A etapa de isolamento e identificação se deu no Laboratório de Leveduras Patogênicas e Ambientais da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (LLPA-UFRRJ). Obteve-se um total de duzentas e uma amostras, sendo 166 de cães e 35 de gatos, resultando em quatro isolamentos positivos para o gênero nas amostras provenientes de cães; sendo um de Cryptococcus laurentii, dois de Cryptococcus neoformans e um de Cryptococcus gattii. Com este trabalho, obteve-se o primeiro isolamento descrito de Cryptococcus laurentii de sistema nervoso central de cão.