Evaluation of thymic lymphocyte loss of broiler using Digital Analysis of the Lymphoid Depletion System (ADDL) / Avaliação de perda de linfócitos do timo em frangos usando análise digital do sistema de depleção linfóide (ADDL)

The thymus is a lymphoid organ and usually evaluated for the degree of lymphocyte loss with subjective histological techniques. This study aimed to adapt and to apply of the digital analysis of the lymphoid depletion system (ADDL) in the thymus in order to obtain a more accurate analysis. Glucocorticoid was used to induce immunosuppression in 55 broilers at 21 days of age; other 15 broilers were the control group. After euthanasia of the broilers, postmortem examination was made. Both thymic chains were collected and six lobes were selected for histological examination of the degree of lymphocyte depletion (scores 1 to 5) and for submission to all stages of processing by the ADDL system. The artificial constructed neural networks (ANN) obtained 94.03% of correct classifications. In conclusion, it was possible to adopt objective criteria to evaluate thymic lymphoid depletion with the ADDL system.(AU)

O timo é um órgão linfóide, que é normalmente avaliado para o grau de perda de linfócitos a partir de técnicas histológicas subjetivas. Este trabalho teve como objetivo a adaptação e aplicação do sistema de análise digital de depleção linfóide (ADDL) para o timo, a fim de tornar sua análise mais acurada. Glicocorticóides foram utilizados a fim de induzir imunossupressão em 55 aves de 21 dias de idade. Outras 15 aves formaram o grupo controle. Posteriormente, para cada um dos aves, realizou-se a eutanásia e necropsia. Ambas as cadeias do timo foram coletadas e foram selecionadas seis lóbulos para processamento histológico, análise quanto ao grau de depleção linfocitária (escores de 1-5) e submissão a todas as fases do processamento pelo sistema ADDL. Observou-se que a rede neural artificial (RNA) construída obteve 94,03% de classificações corretas. Em conclusão, foi possível adotar critérios objetivos para avaliar a depleção linfóide tímica utilizando o sistema ADDL.(AU)

Evaluation of thymic lymphocyte loss of broiler using Digital Analysis of the Lymphoid Depletion System (ADDL) / Avaliação de perda de linfócitos do timo em frangos usando análise digital do sistema de depleção linfóide (ADDL)

The thymus is a lymphoid organ and usually evaluated for the degree of lymphocyte loss with subjective histological techniques. This study aimed to adapt and to apply of the digital analysis of the lymphoid depletion system (ADDL) in the thymus in order to obtain a more accurate analysis. Glucocorticoid was used to induce immunosuppression in 55 broilers at 21 days of age; other 15 broilers were the control group. After euthanasia of the broilers, postmortem examination was made. Both thymic chains were collected and six lobes were selected for histological examination of the degree of lymphocyte depletion (scores 1 to 5) and for submission to all stages of processing by the ADDL system. The artificial constructed neural networks (ANN) obtained 94.03% of correct classifications. In conclusion, it was possible to adopt objective criteria to evaluate thymic lymphoid depletion with the ADDL system.(AU)

O timo é um órgão linfóide, que é normalmente avaliado para o grau de perda de linfócitos a partir de técnicas histológicas subjetivas. Este trabalho teve como objetivo a adaptação e aplicação do sistema de análise digital de depleção linfóide (ADDL) para o timo, a fim de tornar sua análise mais acurada. Glicocorticóides foram utilizados a fim de induzir imunossupressão em 55 aves de 21 dias de idade. Outras 15 aves formaram o grupo controle. Posteriormente, para cada um dos aves, realizou-se a eutanásia e necropsia. Ambas as cadeias do timo foram coletadas e foram selecionadas seis lóbulos para processamento histológico, análise quanto ao grau de depleção linfocitária (escores de 1-5) e submissão a todas as fases do processamento pelo sistema ADDL. Observou-se que a rede neural artificial (RNA) construída obteve 94,03% de classificações corretas. Em conclusão, foi possível adotar critérios objetivos para avaliar a depleção linfóide tímica utilizando o sistema ADDL.(AU)

AVALIAÇÃO DOS EFEITOS DA DEXAMETASONA EM ÓRGÃOS DO SISTEMA IMUNE- TIMO E BURSA DE FABRICIUS- E EM JEJUNO DE FRANGOS

A integridade do sistema imune e do trato gastrointestinal está diretamente relacionada à sanidade das aves e ao desempenho zootécnico. Com intenção de melhor compreender estes sistemas e sua interação, o presente estudo foi desenvolvido. O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos da dexametasona nos órgãos linfoides - timo e bursa de Fabricius (BF) - e nas estruturas do jejuno, relacionando-os entre si e ao peso final dos animais. Para tal, foram utilizadas 33 amostras de BF, timo e intestinos, os quais foram processados histologicamente e corados com H&E. As lâminas de BF e de timo foram avaliadas por pelo menos dois histopatologistas, sendo utilizada a moda para determinar o escore de depleção de cada amostra. Foram obtidas fotomicrografias digitais de dez vilosidades por jejuno, nas quais mensuraram-se o comprimento e a largura de vilo e a profundidade de uma cripta associada, a altura de núcleo de enterócito, o comprimento de núcleo e a altura de microvilosidade. As medições foram realizadas no Software Motic 2.0®. Após, foram aplicados testes estatísticos paramétricos, utilizando o Software SPSS e o Software JMP-SAS. Observou-se a média de 4,20g nas BF de aves controles, ao passo que em animais submetidos à dexametasona a média 0,74g (p<0,05). O peso relativo (PR) médio das BF controles foi de 0,26%, já em tratados o PR médio foi de 0,06%. Nos controles, a moda do escore de depleção das BF foi 1 e média 1,38. Por outro lado, BF de tratados apresentaram moda 3 e média 2,65 (p<0,05). Nos controles foi observada a média de peso do timo de 17,18g e PR de 1,08%. Já nos tratados a média foi de 6,3g (p<0,05) e PR de 0,57%. A média dos escores de depleção de timos das aves controles foi de 1,63 e moda de 2. Já nos animais tratados a média foi de 3,56 e moda de 3. Nas avaliações realizadas no intestino não houve significância estatística em profundidade de criptas, espessura de parede, tamanho de núcleo e microvilosidades (p>0,05). Intestinos de aves controles apresentaram comprimento em média 1366,4µm maiores e largura de vilosidades em média 58,4µm maiores que aves submetidas a tratamento (p<0,05). Aves tratadas obtiveram ganho de peso de 15,3% uma semana após o tratamento, enquanto aves controles apresentaram ganho de peso de 26,7% no mesmo período. Entre o peso do timo e o peso da BF obteve-se correlação de 93,1% e coeficiente de regressão (r 2 ) de 86,7%. Da mesma forma, entre o peso do timo e o peso da ave foi visto um r 2 de 86,4%. Já entre o peso de BF e peso da ave foi observado r 2 de 71,8%. Por outro lado, os parâmetros avaliados nos intestinos não apresentaram correlações consideráveis. O comprimento de vilosidade obteve correlação com peso de timo próximo a 50% e r 2 de 22,5%. Neste estudo foi possível avaliar os efeitos imunodepressores da dexametasona em timo e BF e nas estruturas do jejuno. Houve redução do ganho de peso das aves com a inoculação de dexametasona. Foi possível estabelecer relações entre sistema imune e peso final da ave e entre comprimento de vilos e peso do timo..

The integrity of the immune system and gastrointestinal tract are directly related to the health of birds and livestock performance. Intending to better understand those systems and their interaction, the current study was developed. The aim of this study was to evaluate the effects of dexamethasone in lymphoid organs thymus and bursa of Fabricius (BF) and in jejunum structures, linking the relationship between those structures, and to the final poultry weight. In this study, 33 samples of BF and intestines were histologically processed and stained with H&E. BF and thymus slides were evaluated by at least two histopathologists. Mode was used to determine the depletion score for each sample. Digital photomicrographs of ten jejunum villi were obtained, in which the length and width of villi were measured, as well as depth of an associated crypt, height of core enterocyte, core length and size of microvilli. Measurements were performed in the Software Motic 2.0®. Then, parametric statistical tests were applied using SPSS Software and JPM-SAS Software. The mean weight of control BF was 4,20g. Dexamethasone-treated group BF mean weight was 0,74g (p<0,05). Average relative weight (RW) of control BF was 0,26%, while in treated group, average RW was 0,06%. In control BF, depletion score mode was 1 and average was 1,38. On the other hand, treated poultry BF presented mode 3 and average 2,65 (P<0,05). Thymus average weight in control group was 17,18g and RW around 1,08%. In treated group, the average was 6,3g (P<0,05) and RW 0,57%. Average depletion score in control poultry thymus was 1,63, with mode 2. In treated animals, average was 3,56 and the mode was 3. Assessment of jejunum measures showed no statistical difference in crypt depth, wall length, core size and microvilli (p>0,05). Control poultry intestines showed, in average, 1366,4µm larger length, and 58,4µm higher mean width villi than poultry submitted to treatment (p<0,05). Treated poultry obtained 15,3% of weight gain in one week after finished the treatment, while control poultry presented 26,7% of weight gain in the same period. Between thymus weight and BF weight we obtained 93,1% correlation and regression coefficient (r2) of 86,7%. Likewise, between thymus weight and poultry weight the r2 was 86,4%. Among BF weight and poultry weight, we observed r2 of 71,8%. On the other hand, the parameters evaluated in the intestines sh owed no significant correlation. Length of villi and thymus weight presented correlation close to 50% and r2 of 22.5%. In this study, it was possible to evaluate the immunosuppressive effects of dexamethasone in thymus, BF and jejunum structures. There was reduction in weight gain in poultry treated with dexamethasone. It was possible to correlate lymphoid depletion and final weight of poultry. Correlation between villi length and thymus weight was also demonstrated.

Imunoexpressões pulmonar e esplênica das citocinas IL-12, TGF-β e TNF-α e das proteínas Lisozima e S-100 em Pontoporia blainvillei (Gervais e d\'Orbigny, 1844) (Mammalia, Cetacea) / Pulmonary and splenic immunoexpression of IL-12, TGF-β and TNF-α cytokines and S-100 and Lysozyme proteins in Pontoporia blainvillei (Gervais e d\'Orbigny, 1844) (Mammalia, Cetacea)

Compreender a função das diferentes proteínas e citocinas durante a vigência de alterações inflamatórias pode contribuir para um melhor conhecimento do sistema imunológico dos mamíferos marinhos e sua relação com os processos patológicos. A toninha, Pontoporia blainvillei, é um cetáceo costeiro e o único golfinho brasileiro considerado ameaçado de extinção devido às atividades antrópicas. O objetivo desse trabalho foi avaliar as imunoexpressões das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e proteínas S-100 e lisozima em amostras pulmonares e esplênicas de 34 espécimes de P. blainvillei. Com base nas alterações histopatológicas, os animais foram divididos em dois grupos: G1 (n = 8) - animais sem doença inflamatória pulmonar; G2 (n = 26) - animais com doenças inflamatórias pulmonares. Os fragmentos de pulmão e baço foram processados de acordo com os protocolos de rotina. A padronização das reações de imuno-histoquímica e análise morfométrica foram realizadas conforme procedimentos descritos na literatura. Os nossos dados demonstram que as P. blainvillei pertencentes ao G2 apresentam imunoexpressão pulmonar das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e proteínas S-100 e lisozima significativamente maior que os animais do G1. Tais resultados corroboram os dados disponíveis na literatura, indicando que a P. blainvillei apresenta citocinas com funções semelhantes às encontradas em outros mamíferos.Evidenciamos também, que as P. blainvillei pertencentes ao G2 não apresentam imunoexpressão esplênica das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e da proteína lisozima significativamente maior que os animais do G1. Estudos mais detalhados, incluindo aqueles relacionados com os métodos utilizados, são necessários para a adequada compreensão destes resultados. E finalmente, apesar de tratar-se de dados ainda preliminares, observou-se uma possível associação entre elevadas concentrações de organoclorados no tecido adiposo subcutâneo de parcela dos exemplares de P. blainvillei estudados na presente investigação e a ocorrência de depleção linfóide esplênica nestes animais. Tais dados ratificam a importância do desenvolvimento de análise mais detalhada sobre estes tópicos em futuras investigações científicas

The understanding of the role of different proteins and cytokines during the inflammatory diseases could lead to better knowledge of the marine mammal immune system and its relation to pathological process. Franciscana dolphin, Pontoporia blainvillei, is a coastal cetacean and the only Brazilian dolphin considered threatened with extinction, due to the human activities. The aim of the current study was to investigate the immunoexpression of TGF-β, TNF-α and IL-12 cytokines, and S-100 and Lysozyme proteins in pulmonary and splenic samples of 34 Pontoporia blainvillei. Based on histopathological examination, the animals were divided in two groups: G1 (n = 8) animals without pulmonary inflammatory disease; G2 (n = 26) animals with pulmonary inflammatory diseases. Fragments of lung and spleen were processed according to routine protocols. The immunohistochemistry and morphometric procedures were tested and optimized according to proceedings described in literature. Our results showed that P. blainvillei from G2 presented significant increase in the pulmonary immunoexpression of TGF-β, TNF-α and IL-12 cytokines, and S-100 and Lysozyme proteins in comparison with animals from G1. These results are according to the literature and suggest that P. blainvillei presents same cytokines observed in other mammals. We evidenced also that the P. blainvillei belonging to the G2 did not show splenic immunoexpression to TGF-β, TNF-α and IL- 12 cytokines and Lysozyme protein significantly higher than animals from G1. Further studies, including those related to the methods used, are necessary for the proper understanding of these results. And finally, although these are still preliminary data, we observed a possible association between high concentrations of organochlorines in subcutaneous adipose tissue of a portion of P. blainvillei studied in this research and the occurrence of splenic lymphoid depletion in these animals. These data confirm the importance of developing more detailed analysis on these topics in future scientific investigations