Experimental infection of BALB/c mice with felid alphaherpesvirus 1 / Infecção experimental de camundongos BALB/c com alphaherpesvírus felino tipo 1

Felid alphaherpesvirus type 1 (FHV-1) is an important cause of respiratory and ocular diseases in cats worldwide. Mice have been widely used to study the pathogenesis of several human and animal viruses, especially herpesviruses. This study aimed to verify whether BALB/c mice are susceptible to FHV-1 infection. The animals were intranasally inoculated with FHV-1 and their clinical signs were observed from 3 days postinfection (dpi). At 10 dpi, the animals were euthanized and the lungs, liver, spleen, and kidneys were collected for histopathological examination and quantitative polymerase chain reaction. The results showed that mice were infected with FHV-1 and reproduced several features of the disease observed in its natural host. Histological lesions and viral DNA were found in all sampled tissues, with a higher frequency of FHV-1 DNA copies detected in the lungs. All mice were seroconverted to FHV-1 at 7 dpi. To our knowledge, this is the first report of experimental infection of BALB/c mice with FHV-1. Our findings demonstrate that this murine model can contribute to understanding of FHV-1 pathogenesis and may be useful for trials against this virus.(AU)

O herpesvírus felino tipo 1 (FHV-1) é um importante agente causador de doença respiratória e ocular em gatos em todo o mundo. Camundongos têm sido amplamente utilizados para estudar a patogenia de diversos vírus humanos e animais, especialmente os herpesvírus. O objetivo deste estudo foi verificar se camundongos BALB/c poderiam ser suscetíveis a infecção pelo FHV-1. Os animais foram inoculados com FHV-1 intranasalmente e sinais clínicos foram observados a partir do dia 3 após a infecção (dpi). Após dez dias da inoculação, os animais foram eutanasiados e os pulmões, fígado, baço e rins foram coletados para exame histopatológico e PCR quantitativo (qPCR). Os resultados mostraram que os camundongos foram infectados com o FHV-1 e reproduziram várias características da doença que são observadas em seu hospedeiro natural. Lesões histológicas e DNA viral foram detectadas em todos os tecidos amostrados, com maior frequência de DNA do FHV-1 nos pulmões. Todos os camundongos soroconverteram para FHV-1 aos 7 dpi. Para nosso conhecimento, este estudo é o primeiro relato de infecção experimental de camundongos BALB/c com FHV-1. Nossos resultados demonstraram que esse camundongo pode contribuir para o entendimento da patogenia do FHV-1 e pode ser um modelo útil para ensaios contra esse vírus.(AU)

Feline herpesvirus 1 viral load related to environmental factors in sheltered cats / Relação entre carga viral de herpesvirus felino 1 e fatores causadores de estresse em felinos de abrigo

Shelter environment stress factors are related to FHV-1 viral reactivation. However, comparisons between conjunctival viral load and environmental factors have not been commonly evaluated. The aim of this study was to correlate FHV-1 viral load in domestic cats with and without clinical signs of conjunctivitis to shelter design in order to use FHV-1 viral load as a parameter of “health management”. Cats from four different shelters underwent an ophthalmological examination. Samples were collected by rolling a DNA/RNAse-free cytobrush over the ventral conjunctival fornix and were stored in 1.5 mL sterile microtubes in 500 μL of Eagles minimum essential medium and kept at 4 ºC. Molecular procedures were performed up to 48 hours after collection. Different routines regarding new arrivals were directly related to FHV-1 viral load. Shelters where new arrivals occurred on daily basis had the highest viral load (2.69x108 copies/µL), while those shelters where new arrivals had not occurred in the few months prior to the beginning of the study had the lowest rate (1.63x103 copies/µL). Environmental factors directly influenced FHV-1 DNA viral load. This study highlighted the need to improve the management approach in the animal shelter environment to reduce stressful situations responsible for FHV-1 reactivation and higher viral load quantification.(AU)

No ambiente do abrigo encontram-se fatores que geram estresse nos animais que ali residem. Esses fatores acabam por provocar a reativação do FHV-1. No entanto, comparações entre carga viral conjuntival e fatores ambientais não foram ainda avaliadas. Objetivo deste estudo foi correlacionar a carga viral de FHV-1 em felinos domésticos com e sem sinais clínicos de conjuntivite com as características dos abrigos. Assim, pode-se usar carga viral de FHV-1 como parâmetro de sanidade. Todos os gatos foram submetidos a exame clínico oftalmológico. Amostras foram coletadas com uso de escova citológica, acondicionadas em microtubos estéreis de 1,5mL contendo 500 μL de meio Eagle essencial mínimo e mantidas em 4 ºC. Análises moleculares foram realizadas no prazo de 48 horas após coleta. A rotina de entrada de novos animais estava diretamente relacionada a carga viral de FHV-1. Abrigos com entrada diária apresentaram carga viral maior (2.69x108 cópias/µL), do que abrigo onde novos animais não chegaram nos meses que antecederam a coleta (1.63x103 cópias/µL). Fatores ambientais influenciam diretamente carga viral de FHV-1. Esse estudo evidencia a necessidade de aprimorar o sistema de manejo dos abrigos de forma a reduzir situações de estresse responsáveis pela reativação de FHV-1 e consequente aumento na carga viral.(AU)

HERPESVIRUS FELINO 1: DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DE DNA VIRAL EM GATOS DE ABRIGO

A conjuntivite felina é a enfermidade mais frequente nos locais de grandes concentrações populacionais como abrigos e gatis. Herpesvirus felino 1 (FHV-1) é o microrganismo mais associado aos casos de conjuntivite em felinos. O diagnóstico laboratorial é essencial para o estabelecimento de um controle adequado e recentemente vem sendo realizado por meio de técnicas moleculares. O objetivo desse estudo foi realizar a determinação da carga viral de FHV-1 por meio de PCR em tempo real ou PCR quantitativa (qPCR) em amostras conjuntivais e de cavidade oral de felinos com e sem sintomatologia ocular oriundos de diferentes modelos de abrigo e correlacionar a carga viral com a gravidade dos sinais clínicos e com a estrutura física dos abrigos. Esse estudo se deu com amostras de 70 gatos entre dois e dez meses de idade (41 sintomáticos e 29 assintomáticos). Quatro abrigos foram visitados. Cada animal foi cadastrado em uma ficha clínica própria. Todos os animais foram examinados pela mesma médica veterinária. Os sinais oftalmológicos e de orofaringe foram categorizados de acordo com a gravidade dos sinais clínicos. As amostras de secreção conjuntival e orofaríngea foram coletadas separadamente, com o uso de escova citobrush®. O genoma viral foi extraído e foram realizados ensaios de qPCR utilizando sistema de sondas de hidrólise TaqMan® e curva padrão sintética. O uso da curva padrão sintética para FHV-1 foi implementada nesse estudo. FHV-1 foi detectado em igual proporção em animais sintomáticos e assintomáticos (90%) mas houve diferença estatística (P<0,05) entre as cargas virais dos animais sintomáticos e dos assintomáticos. Cargas virais mais altas de FHV-1 foram relacionadas a animais sintomáticos e nesses, os escores associados aos sinais clínicos mais graves apresentaram maiores cargas virais. A comparação da carga viral com relação a características dos abrigos mostrou ser estatisticamente significante (P<0,05). Maior carga viral foi observada no abrigo com alta densidade populacional, alta rotatividade de animais e circulação de ar inadequada no ambiente. A correlação entre as cargas virais obtidas de amostras de região ocular com amostras da região orofaríngea foi alta (r²=0,889), sugerindo que essa região é um importante sítio de excreção e transmissão de FHV-1

Feline conjunctivis is a common disease in places of great population concentrations such as shelters. Feline herpesvirus 1 (FHV-1) is the most frequently microorganism associated with cases of conjunctivitis in felines. Laboratory diagnosis is essential for the establishment of appropriate control of the disease, Recently, molecular diagnosis are more commonly used as diagnostic methods.The objective of this study was to determine FHV-1 viral load by real-time PCR or quantitative PCR (qPCR) in conjunctival and oral cavity samples of felines with and without conjunctivitis from different shelters models and correlate viral load with conunctivitis severity and shelters characteristics. This study was carried out with samples of 70 cats between two and ten months of age (41 symptomatics and 29 asymptomatics). Four different shelters were visited. Each animal was registered on its own clinical file. All animals underwent a clinical and ophthalmological examination by the same veterinarian. Ophthalmologic and oropharyngeal signs were categorized according to the severity of clinical signs. Conjunctiva and oropharyngeal secretion samples were collected separately using a cytobrush®. The viral genome was extracted and qPCR assays were performed using TaqMan® hydrolysis probes system and synthetic standard curve. The use of synthetic curve for FHV-1 methodology was implemented in this study. FHV-1 was detected in the same proportion in symptomatic and asymptomatic animals (90%) but there was statistical difference (P <0.05) between the viral loads of symptomatic and asymptomatic animals. Higher viral loads of FHV-1 were related to symptomatic animals and in these, scores associated with more severe clinical signs had higher viral loads. The comparison of the viral load with some shelter charactheristics were statistically significant (P <0.05). The highest viral load was observed in shelter with high population density, high turnover of animals and inadequate circulation of air in the environment. The correlation between the viral loads obtained from ocular region samples and samples from the oropharyngeal region was high (r²=0,889), suggesting that this region is an important site of excretion and transmission of FHV-1. Vaccinated and unvaccinated animals have statistically different viral loads (P <0.05). Lower viral loads are found in vaccinated animals.

Doenças nasais e paranasais crônicas em felinos domésticos - estudo prospectivo

As doenças que afetam cronicamente o trato respiratório superior representam um problema frequente na clínica de felinos mundialmente e podem caracterizar um importante desafio diagnóstico e terapêutico. Os gatos com doenças nasais e paranasais crônicas normalmente apresentam espirros, secreção nasal, estertor respiratório e, às vezes, deformidades faciais. Esses sintomas são comuns a uma variedade de etiologias. A rinossinusite crônica idiopática (RSCI) e as neoplasias nasais são as mais frequentemente relatadas. As rinites fúngicas, pólipos nasofaríngeos, corpos estranhos nasais, estenose nasofaríngea e doenças periodontais são menos frequentes, porém importantes causas de doenças nasais em gatos. O objetivo desse estudo é realizar uma investigação para determinar a prevalência de causas etiológicas de gatos que apresentem doenças nasais e paranasais, e também comparar dados do histórico, sinais clínicos e achados radiográficos entre eles. Os gatos que apresentaram sinais de doenças do trato respiratório superior foram selecionados para coleta de dados, exame físico completo, cultura nasal bacteriológica e micológica, sorologia para Cryptococcus spp., exame radiográfico de crânio, rinoscopia e/ou rinotomia, análise histopatológica, imuno-histoquímica para FHV-1 e FCV e também PCR para Mycoplasma spp. Trinta e sete (37) gatos foram incluídos no estudo. Vinte e um (56,8%) tinham RSCI, nove (24,3%) neoplasias, três (8,1%) rinites fúngicas [Criptococose (2), Esporotricose (1)], três (8,1%) alterações estruturais [corpo estranho (1), fístula oronasal (1) e palato mole alongado (1)] e um (2,7%) pólipo nasofaríngeo. Os sinais clínicos mais comuns foram espirros (94,6%), secreção nasal (91,9%) e estertor respiratório (89,2%). Os exames radiográficos revelaram alterações de opacificação da cavidade nasal (93,9%), mais comum bilateral (66,7%), perda de definição dos ossos turbinados (84,8%) e opacificação aumentada de seios frontais (72,7%), mais frequentemente bilateral (66,7%). As associações estatísticas foram significativas entre os gatos com RSCI e o estilo de vida de casas multi-cat, secreção nasal mucopurulenta e presença de maior opacificação bilateral de seios frontais. Os gatos diagnosticados com outras doenças, que não a RSCI, tiveram associação significativa com diminuição de apetite, secreção nasal sanguinolenta, deformidades faciais e desvio de septo. A PCR para Mycoplasma spp. foi positiva em apenas um caso de RSCI e todos os gatos com RSCI tiveram resultados negativos para a análise imuno-histoquímica para FHV-1 e FCV.

Diseases that affect chronically the feline upper respiratory tract represent a frequent problem in feline practice worldwide and may characterize a substantial diagnostic and therapeutic challenge. Cats with chronic nasal and paranasal disease usually are presented with sneezing, nasal discharge, stertorous breathing and sometimes facial deformities. These symptoms are common for a variety of underlying etiologies. Idiopathic chronic rhinosinusitis (ICRS) and nasal neoplasia are the most frequently reported. Fungal rhinitis, nasopharyngeal polyps, nasal foreign bodies, nasopharyngeal stenosis and periodontal diseases are less frequently found, but are also important causes of chronic nasal diseases in cats. The objective of this study is to pursue an investigation and determine the prevalence of etiological causes for cats presenting chronic nasal and paranasal disease and also compare data from history, clinical signs and radiologic findings between them. Cats presenting upper respiratory tract disease signs were selected to perform full patient data collection, thorough physical exam, nasal bacterial and mycological cultures, Cryptococcus spp. serology, skull radiographs, rhinoscopy and/or rhinotomy, histopathological analysis, FHV-1 and FCV immunohistochemistry analysis and Mycoplasma spp. PCR. Thirty-seven (37) cats were included. Twenty-one (56.8%) had idiopathic chronic rhinosinusitis (ICRS), 9 (24.3%) neoplasia, 3 (8.1%) fungal rhinitis [Cryptococcosis (2), Sporotrichosis (1)], 3 (8.1%) had structural changes [foreign body (1), oronasal fistula (1) and elongated soft palate (1)] and 1 (2.7%) nasopharyngeal polyp. The most common signs were sneezing (94.6%), nasal discharge (91.9%) and stertorous breathing (89.2%). Skull radiographs revealed mostly bilateral (66.7%) nasal cavity opacity (93.9%), turbinate bones detail loss (84.8%) and increased frontal sinus opacity (72.7%), which was more bilateral (66.7%). Significant statistical association were made with ICRS and multicat household lifestyle, mucopurulent discharge and increased bilateral frontal sinus opacity in radiographs. Cats with diagnosed diseases other than ICRS, had significant increased prevalence of appetite loss, sanguineous discharge, facial deformities and nasal septum deviation on radiographs. Mycoplasma PCR was positive in only one case of ICRS and all 21 cases of ICRS had negative results for FHV-1 and FCV IHC analysis.

Isolation and identification of feline calicivirus and feline herpesvirus in Southern Brazil

Feline calicivirus (FCV) and feline herpesvirus type 1 (FHV-1) are the two primary causes of upper respiratory tract disease in cats. The aim of this study was to demonstrate the distribution of FCV and FHV-1 among the feline population of several counties in Rio Grande do Sul State, Brazil. To this end, conjunctival and nasal swabs were collected from 302 cats from different locations, including households, breeding catteries, veterinary clinics, animal hospitals and experimental research facilities. The samples were collected between July 2006 to June 2009. The virus isolation was performed in CRFK cells and, subsequently, the identification was confirmed by PCR. FCV, FHV-1, or both were isolated from 55 cats from 28 different locations. FCV alone was isolated from 52.7% (29/55) of the animals that tested positively, FHV-1 alone was isolated from 38.2% (21/55) of the animals that tested positively, and co-infection were detected in 9.1% (5/55) of the animals that tested positively. Virus detection was more prevalent in cats that were less than 1 year old, among animals that shared a living space with other cats, and females. FCV and FHV-1 were isolated from vaccinated cats. In addition, both viruses were isolated from cats that showed no signs of disease. The results suggest that a carrier state is common for both viruses in the evaluated population. A search for other causes of respiratory disease in that population is necessary; and further studies relating to the molecular characterization of viruses and vaccine efficacy are also necessary.

Detecção de Herpesvírus Felino do tipo 1 e Chlamydia felis em gatil de superpopulação em São Paulo / Detection of Herpesvirus Feline type 1 and Chlamydia telis in thecattery of overpopulation in São Paulo city / Deteccion de Herpesvirus Felino tipo 1 y Chlamydia telis en un criaderocon sobrepoblación en la ciudad deSão Paulo

Dentre os principais agentes causadores do complexo respiratório dos felinos tem-se o Herpesvírus felino tipo 1 (FHV-1) e a Chlamydia telis. Esta é a principal enfermidade causadora de surtos em abrigos de felinos. Avaliou-se 39 felinos de uma população oscilante em torno de 200 indivíduos, encontrou-se alta ocorrência tanto de FHV-1 como de C. telis. Dentre os fatores de risco que favoreciam a propagação da infecção,foram detectados as baixas condições sanitárias e nutricionais oferecida aos animais. Todos animais do estudo não possuíam raça definida e eram provenientes de resgate de vias públicas, 100% dos animais deste gatil apresentava sinais clínicos do complexo respiratório dos felinos e tanto a morbidade quanto a mortalidade eram elevadas.(AU)

Among the main causes of respiratory complex feline has Herpesvirus feline type 1 (FHV-1)and Chlamydia telis. This is the main disease causing outbreaks in felines shelters. It was evaluated 39 cats from an oscillating population of around 200 individuais, it was found a high rate of both FHV-1 asC. telis. Risk factors favoring the spread of infection were low health and nutritional conditions offered to animais. Ali animais in the study lacked breed and came from rescue roads, 100% of the animais of this cattery presented clinical signs of respiratory complex feline and both morbidity and mortality were high.(AU)

Entre los principales patógenos que causan el complejo respiratorio felino se encuentran el Herpesvirus felino tipo 1 (FHV-1) y la Chlamydia telis. Esta es la principal enfermedad que causa brotes en refugios de felinos, por tanto, en este trabajo fueron evaluados 39 gatos de una población de aproximadamente 200 individuos, encontrán dose una alta ocurrencia de FHV-1 y C. telis. Los factores de riesgo que favorecieron a la propagación de la infección fueron las bajas condiciones sanitarias y nutricionales de los animales. Todos los individuos de este criadero fueron rescatados de las vías públicas, eran de raza desconocida, presentaban signos clínicos dei complejo respiratorio felino y una alta tasa de morbilidad y mortalidad.(AU)

Detecção de Herpesvírus Felino do tipo 1 e Chlamydia felis em gatil de superpopulação em São Paulo / Detection of Herpesvirus Feline type 1 and Chlamydia telis in thecattery of overpopulation in São Paulo city / Deteccion de Herpesvirus Felino tipo 1 y Chlamydia telis en un criaderocon sobrepoblación en la ciudad deSão Paulo

Dentre os principais agentes causadores do complexo respiratório dos felinos tem-se o Herpesvírus felino tipo 1 (FHV-1) e a Chlamydia telis. Esta é a principal enfermidade causadora de surtos em abrigos de felinos. Avaliou-se 39 felinos de uma população oscilante em torno de 200 indivíduos, encontrou-se alta ocorrência tanto de FHV-1 como de C. telis. Dentre os fatores de risco que favoreciam a propagação da infecção,foram detectados as baixas condições sanitárias e nutricionais oferecida aos animais. Todos animais do estudo não possuíam raça definida e eram provenientes de resgate de vias públicas, 100% dos animais deste gatil apresentava sinais clínicos do complexo respiratório dos felinos e tanto a morbidade quanto a mortalidade eram elevadas.

Among the main causes of respiratory complex feline has Herpesvirus feline type 1 (FHV-1)and Chlamydia telis. This is the main disease causing outbreaks in felines shelters. It was evaluated 39 cats from an oscillating population of around 200 individuais, it was found a high rate of both FHV-1 asC. telis. Risk factors favoring the spread of infection were low health and nutritional conditions offered to animais. Ali animais in the study lacked breed and came from rescue roads, 100% of the animais of this cattery presented clinical signs of respiratory complex feline and both morbidity and mortality were high.

Entre los principales patógenos que causan el complejo respiratorio felino se encuentran el Herpesvirus felino tipo 1 (FHV-1) y la Chlamydia telis. Esta es la principal enfermedad que causa brotes en refugios de felinos, por tanto, en este trabajo fueron evaluados 39 gatos de una población de aproximadamente 200 individuos, encontrán dose una alta ocurrencia de FHV-1 y C. telis. Los factores de riesgo que favorecieron a la propagación de la infección fueron las bajas condiciones sanitarias y nutricionales de los animales. Todos los individuos de este criadero fueron rescatados de las vías públicas, eran de raza desconocida, presentaban signos clínicos dei complejo respiratorio felino y una alta tasa de morbilidad y mortalidad.