Resumo
Os ovários desempenham papéis relevantes para o sistema reprodutivo, no qual a função exócrina (ou gametogênica) realiza a maturação e liberação do oócito para a fecundação e a função endócrina (ou esteroidogênica) afeta a síntese, secreção de hormônios e fatores de crescimento. Além disso, existe uma interação entre os fatores endócrinos, autócrinos e parácrinos, atuando em associação com o processo de desenvolvimento folicular e oocitário durante a vida reprodutiva da fêmea. O córtex, porção mais externa do ovário, representa a região funcional onde se localizam os folículos ovarianos e as estruturas lúteas, em diferentes estágios de desenvolvimento e/ou atresia. A região medular localiza-se mais internamente, na maioria das espécies, e sua principal função é nutrir e sustentar o ovário. Apesar da numerosa população folicular presente nos ovários, estabelecida durante a vida fetal, quase todos os folículos encontrados no pool de reserva ovariana, ou seja, 99,9%, não atingem a ovulação. Esses folículos passam por um processo de morte celular conhecido como atresia folicular, tornando o ovário um órgão de baixa produtividade. A elucidação dos mecanismos que regulam a foliculogênese, incluindo o processo de atresia, é importante para o melhor aproveitamento dos folículos na melhoria da eficiência reprodutiva de animais de produção.
The ovaries play roles relevant to the reproductive system, in which the exocrine (or gametogenic) function carries out the maturation and release of the oocyte for fertilization and the endocrine (or steroidogenic) function effects the synthesis and secretion of hormones and growth factors. In addition, there is an interaction between endocrine, autocrine and paracrine factors, acting in association with the follicular and oocyte development process during the female's reproductive life. The cortex, the outermost portion of the ovary, represents the functional region where the ovarian follicles and luteal structures are located, at different stages of development and/or atresia. The medullary region is located more internally, in most species, and its main function is to nourish and support the ovary. Despite the numerous follicular population present in the ovaries, established during fetal life, almost all follicles found in the ovarian reserve pool, i.e., 99.9%, do not reach ovulation. These follicles undergo a process of cell death known as follicular atresia, making the ovary a low-productivity organ. The elucidation of the mechanisms that regulate folliculogenesis, including the atresia process, is important for the better use of follicles in improving the reproductive efficiency of production animals.
Assuntos
Feminino , Animais , Bovinos , Atresia Folicular , Bovinos/embriologia , Folículo Ovariano , OogêneseResumo
The aim of this study was to evaluate the effect of Recombinant bovine somatotropin (rbST) on survival and diameter of bovine preantral ovarian follicles (PAOF) cultured in vitro. Ovaries were collected from adult cows and fragments of ovarian cortex were immediately fixed (non-cultured control) or cultured in vitro in α-MEM+ alone or containing 10, 50, 100 or 1,000ng/mL rbST. The fragments were processed for Classical Histology and Transmission Electron Microscopy. After one and seven days of culture, the percentage of normal follicles in the non-cultured control was superior (P< 0.05) to the follicles cultured in α-MEM+ alone or with different rbST concentrations. The oocyte and follicular mean diameter did not increase during the culture for one and seven days, both in media containing rbST and in the medium without this hormone. The only medium in which there was no reduction in follicular diameter with the time of culture was the medium without rbST. Ultrastructural damage in PAOF cultured in vitro was found. It is concluded that the use of rbST at different concentrations in in situ culture of bovine preantral follicles has no beneficial effects on survival and growth of bovine PAOF.(AU)
O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da somatotropina recombinante bovina (rbST) sobre a sobrevivência e o diâmetro de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) bovinos cultivados in vitro. Ovários foram coletados de vacas adultas e fragmentos do córtex ovariano foram imediatamente fixados (controle não cultivado) ou cultivados in vitro em α-MEM + sozinho ou contendo 10, 50, 100 ou 1.000ng/mL de rbST. Os fragmentos foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Após um e sete dias de cultivo, o percentual de folículos normais no controle não cultivado foi superior (P<0,05) aos cultivados em α-MEM + sozinho ou acrescido de diferentes concentrações de rbST. Os diâmetros médios oocitário e folicular não aumentaram durante o cultivo por um e sete dias, tanto nos meios contendo rbST, como no meio sem esse hormônio (α-MEM + ). O único meio em que não houve redução no diâmetro folicular com o tempo de cultivo foi o sem rbST. Verificaram-se ainda danos ultraestruturais em FOPA cultivados in vitro. Conclui-se que o uso de rbST em diferentes concentrações no cultivo in situ de folículos pré-antrais bovinos não tem efeitos benéficos na sobrevivência e no crescimento de FOPA bovinos.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos/embriologia , Hormônio do Crescimento , Folículo Ovariano/anatomia & histologia , Folículo Ovariano/efeitos dos fármacos , Técnicas In Vitro/veterináriaResumo
The aim of this study was to evaluate the effect of Recombinant bovine somatotropin (rbST) on survival and diameter of bovine preantral ovarian follicles (PAOF) cultured in vitro. Ovaries were collected from adult cows and fragments of ovarian cortex were immediately fixed (non-cultured control) or cultured in vitro in α-MEM+ alone or containing 10, 50, 100 or 1,000ng/mL rbST. The fragments were processed for Classical Histology and Transmission Electron Microscopy. After one and seven days of culture, the percentage of normal follicles in the non-cultured control was superior (P< 0.05) to the follicles cultured in α-MEM+ alone or with different rbST concentrations. The oocyte and follicular mean diameter did not increase during the culture for one and seven days, both in media containing rbST and in the medium without this hormone. The only medium in which there was no reduction in follicular diameter with the time of culture was the medium without rbST. Ultrastructural damage in PAOF cultured in vitro was found. It is concluded that the use of rbST at different concentrations in in situ culture of bovine preantral follicles has no beneficial effects on survival and growth of bovine PAOF.(AU)
O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da somatotropina recombinante bovina (rbST) sobre a sobrevivência e o diâmetro de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) bovinos cultivados in vitro. Ovários foram coletados de vacas adultas e fragmentos do córtex ovariano foram imediatamente fixados (controle não cultivado) ou cultivados in vitro em α-MEM + sozinho ou contendo 10, 50, 100 ou 1.000ng/mL de rbST. Os fragmentos foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Após um e sete dias de cultivo, o percentual de folículos normais no controle não cultivado foi superior (P<0,05) aos cultivados em α-MEM + sozinho ou acrescido de diferentes concentrações de rbST. Os diâmetros médios oocitário e folicular não aumentaram durante o cultivo por um e sete dias, tanto nos meios contendo rbST, como no meio sem esse hormônio (α-MEM + ). O único meio em que não houve redução no diâmetro folicular com o tempo de cultivo foi o sem rbST. Verificaram-se ainda danos ultraestruturais em FOPA cultivados in vitro. Conclui-se que o uso de rbST em diferentes concentrações no cultivo in situ de folículos pré-antrais bovinos não tem efeitos benéficos na sobrevivência e no crescimento de FOPA bovinos.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos/embriologia , Hormônio do Crescimento , Folículo Ovariano/anatomia & histologia , Folículo Ovariano/efeitos dos fármacos , Técnicas In Vitro/veterináriaResumo
A biodiversidade mundial tem sido consideravelmente reduzida nos últimos anos, principalmente devido as modificações antrópicas nos habitats. Como consequência, tem-se observado um rápido e contínuo declínio das espécies mamíferas silvestres. Nesse contexto, a biotécnica Ovário Artificial, surge como uma ferramenta para a conservação da biodiversidade, pois tem como objetivo a manipulação in vitro de oócitos inclusos em folículos préantrais visando o seu crescimento e maturação, além da preservação de oócitos por meio do resfriamento e/ou criopreservação, permitindo o fornecimento de milhares de oócitos, que poderão ser utilizados posteriormente. Este artigo de revisão descreve os aspectos gerais, importância e avanços do ovário artificial em animais silvestres.(AU)
The world biodiversity has declined in recent years, mainly due to anthropogenic changes in habitats. As consequence, a rapid and steady decline in wild mammalian species is observed. In this context, the "Artificial Ovary" biotechnology emerges as a tool for the biodiversity conservation, since its objective is the in vitro manipulation of oocytes enclosed in preantral follicles, aiming their growth and maturation, as well as their preservation by cooling and / or cryopreservation, allowing the supply of thousands of oocytes, which can be further used. This review describes the general aspects, importance and advances of the artificial ovary in wild animals.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Animais Selvagens/anatomia & histologia , Animais Selvagens/fisiologia , Ovário , Criopreservação/veterináriaResumo
A biodiversidade mundial tem sido consideravelmente reduzida nos últimos anos, principalmente devido as modificações antrópicas nos habitats. Como consequência, tem-se observado um rápido e contínuo declínio das espécies mamíferas silvestres. Nesse contexto, a biotécnica Ovário Artificial, surge como uma ferramenta para a conservação da biodiversidade, pois tem como objetivo a manipulação in vitro de oócitos inclusos em folículos préantrais visando o seu crescimento e maturação, além da preservação de oócitos por meio do resfriamento e/ou criopreservação, permitindo o fornecimento de milhares de oócitos, que poderão ser utilizados posteriormente. Este artigo de revisão descreve os aspectos gerais, importância e avanços do ovário artificial em animais silvestres.
The world biodiversity has declined in recent years, mainly due to anthropogenic changes in habitats. As consequence, a rapid and steady decline in wild mammalian species is observed. In this context, the "Artificial Ovary" biotechnology emerges as a tool for the biodiversity conservation, since its objective is the in vitro manipulation of oocytes enclosed in preantral follicles, aiming their growth and maturation, as well as their preservation by cooling and / or cryopreservation, allowing the supply of thousands of oocytes, which can be further used. This review describes the general aspects, importance and advances of the artificial ovary in wild animals.
Assuntos
Feminino , Animais , Animais Selvagens/anatomia & histologia , Animais Selvagens/fisiologia , Criopreservação/veterinária , OvárioResumo
A maioria dos oócitos imaturos nos ovários encontra-se armazenada nos folículos pré-antrais, sendo este a principal reserva ovariana. Entretanto, durante o desenvolvimento folicular uma pequena proporção (0,1%) destes folículos chega ao estágio pré-ovulatório sendo o restante eliminado por atresia. A tecnologia de cultivo folicular in vitro, denominada ovário artificial, representa uma excelente ferramenta para desvendar o controle da foliculogênese nos estágios iniciais de desenvolvimento, bem como poderá assegurar no futuro a utilização de um grande número de oócitos imaturos, previamente crescidos in vitro, em técnicas de reprodução assistida em humanos e em outras espécies, incluindo os ruminantes. Os melhores resultados da tecnologia do ovário artificial foram relatados em camundongos, com a produção de crias vivas a partir de folículos primordiais crescidos in vitro. Entretanto, em outras espécies, incluindo os ruminantes, os resultados têm sido restritos à produção de um pequeno e variável número de oócitos maturos e uma baixa taxa de produção de embriões após o cultivo in vitro de folículos secundários isolados. A presente revisão discute as aplicações, critérios para avaliação de eficiência, estado atual, limitações e perspectivas da tecnologia do ovário artificial em ruminantes, com ênfase nas espécies bovina, caprina e ovina.(AU)
Most immature oocytes in the ovaries are stored in the preantral follicles, which represent the main ovarian reserve. However, during follicular development, a small proportion (0.1%) of these follicles reaches the preovulatory stage, the rest being eliminated by atresia. The in vitro follicle culture technology, called artificial ovary, represents an excellent tool to understand the control of folliculogenesis in the early stages of development, as well as to ensure in the future the use of a large number of immature oocytes, previously grown in vitro, in assisted reproductive technologies in humans and other species, including ruminants. The best results from artificial ovary technology so far were reported in mice, with the production of live offspring from primordial follicles grown in vitro. However, in other species, including ruminants, the results have been limited to the production of a small and variable number of mature oocytes and a low rate of embryo production after in vitro culture of isolated secondary follicles. The present review discusses the applications, criteria for evaluating efficiency, current status, limitations and perspectives of artificial ovary technology in ruminants, with emphasis on bovine, caprine, and ovine species.(AU)
Assuntos
Animais , Oócitos , Técnicas Reprodutivas/veterinária , RuminantesResumo
A maioria dos oócitos imaturos nos ovários encontra-se armazenada nos folículos pré-antrais, sendo este a principal reserva ovariana. Entretanto, durante o desenvolvimento folicular uma pequena proporção (0,1%) destes folículos chega ao estágio pré-ovulatório sendo o restante eliminado por atresia. A tecnologia de cultivo folicular in vitro, denominada ovário artificial, representa uma excelente ferramenta para desvendar o controle da foliculogênese nos estágios iniciais de desenvolvimento, bem como poderá assegurar no futuro a utilização de um grande número de oócitos imaturos, previamente crescidos in vitro, em técnicas de reprodução assistida em humanos e em outras espécies, incluindo os ruminantes. Os melhores resultados da tecnologia do ovário artificial foram relatados em camundongos, com a produção de crias vivas a partir de folículos primordiais crescidos in vitro. Entretanto, em outras espécies, incluindo os ruminantes, os resultados têm sido restritos à produção de um pequeno e variável número de oócitos maturos e uma baixa taxa de produção de embriões após o cultivo in vitro de folículos secundários isolados. A presente revisão discute as aplicações, critérios para avaliação de eficiência, estado atual, limitações e perspectivas da tecnologia do ovário artificial em ruminantes, com ênfase nas espécies bovina, caprina e ovina.
Most immature oocytes in the ovaries are stored in the preantral follicles, which represent the main ovarian reserve. However, during follicular development, a small proportion (0.1%) of these follicles reaches the preovulatory stage, the rest being eliminated by atresia. The in vitro follicle culture technology, called artificial ovary, represents an excellent tool to understand the control of folliculogenesis in the early stages of development, as well as to ensure in the future the use of a large number of immature oocytes, previously grown in vitro, in assisted reproductive technologies in humans and other species, including ruminants. The best results from artificial ovary technology so far were reported in mice, with the production of live offspring from primordial follicles grown in vitro. However, in other species, including ruminants, the results have been limited to the production of a small and variable number of mature oocytes and a low rate of embryo production after in vitro culture of isolated secondary follicles. The present review discusses the applications, criteria for evaluating efficiency, current status, limitations and perspectives of artificial ovary technology in ruminants, with emphasis on bovine, caprine, and ovine species.
Assuntos
Animais , Oócitos , Ruminantes , Técnicas Reprodutivas/veterináriaResumo
The efficiency of a culture system is related to the elaboration and replacement of a medium with conditions suitable for follicular development. Recent investigations suggested that in vitro culture medium should be replaced after specific time periods in various species. However, the suitable interval for the exchange of in vitro culture medium has not yet been established in equine species. The objective of this investigation was to evaluate the effect of medium exchange intervals of 24 hours (T24) or 48 hours (T48) for in vitro culture of preantral follicles at 2 or 6 days. At the end of the culture period, the fragments were processed using classical histology. Equine preantral follicles were classified according to morphological integrity and developmental stage. Data analysis was performed using Fisher's test with a significance level of p<0.05. Out of a total of 399 follicles evaluated, 174 (43.6%) were primordial follicles, 225 (56.4%) were in development, and 63.76% were morphologically intact. In the in vitro culture performed over two days, there was no significant difference in relation to follicular integrity after medium replacement (p>0.05). Compared to the medium replacement at six days of culture, there was a statistically significant difference for T24 (68.9%, p<0.05). Therefore, we suggest changing the medium for equine species at 48 hours after the start of culture followed by subsequent daily replacements.(AU)
A eficiência de um sistema de cultivo está relacionada à elaboração e substituição do meio de cultivo com condições adequadas ao desenvolvimento folicular. Pesquisas recentes sugerem que o meio de cultivo in vitro deve ser substituído após períodos de tempo específicos para várias espécies. No entanto, o intervalo adequado para a troca de meio de cultivo in vitro ainda não foi estabelecido na espécie equina. O objetivo desta investigação foi avaliar o efeito de intervalos de troca média de 24 horas (T24) ou 48 horas (T48) para cultivo de folículos pré-antrais aos 2 ou 6 dias. No final do período de cultivo, os fragmentos foram processados usando histologia clássica. Os folículos pré-antrais equinos foram classificados de acordo com a integridade morfológica e o estágio de desenvolvimento. A análise dos dados foi realizada utilizando o teste de Fisher com um nível de significância de p<0,05. De um total de 399 folículos avaliados, 174 (43,6%) foram folículos primordiais, 225 (56,4%) estavam em desenvolvimento e 63,76% estavam morfologicamente intactos. No cultivo in vitro realizado ao longo de dois dias, não houve diferença significativa em relação à integridade folicular após a substituição do meio (p>0,05). Comparado com a substituição média aos seis dias de cultivo, houve diferença estatisticamente significativa para T24 (68,9%, p<0,05). Portanto, sugerimos alterar o meio para as espécies equinas às 48 horas após o início da cultura, seguindo as subsequentes substituições diárias.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Técnicas de Reprodução Assistida/veterinária , Folículo Ovariano/citologia , Folículo Ovariano/fisiologia , Cavalos/anatomia & histologia , Cavalos/embriologia , Cavalos/fisiologiaResumo
The efficiency of a culture system is related to the elaboration and replacement of a medium with conditions suitable for follicular development. Recent investigations suggested that in vitro culture medium should be replaced after specific time periods in various species. However, the suitable interval for the exchange of in vitro culture medium has not yet been established in equine species. The objective of this investigation was to evaluate the effect of medium exchange intervals of 24 hours (T24) or 48 hours (T48) for in vitro culture of preantral follicles at 2 or 6 days. At the end of the culture period, the fragments were processed using classical histology. Equine preantral follicles were classified according to morphological integrity and developmental stage. Data analysis was performed using Fisher's test with a significance level of p<0.05. Out of a total of 399 follicles evaluated, 174 (43.6%) were primordial follicles, 225 (56.4%) were in development, and 63.76% were morphologically intact. In the in vitro culture performed over two days, there was no significant difference in relation to follicular integrity after medium replacement (p>0.05). Compared to the medium replacement at six days of culture, there was a statistically significant difference for T24 (68.9%, p<0.05). Therefore, we suggest changing the medium for equine species at 48 hours after the start of culture followed by subsequent daily replacements.(AU)
A eficiência de um sistema de cultivo está relacionada à elaboração e substituição do meio de cultivo com condições adequadas ao desenvolvimento folicular. Pesquisas recentes sugerem que o meio de cultivo in vitro deve ser substituído após períodos de tempo específicos para várias espécies. No entanto, o intervalo adequado para a troca de meio de cultivo in vitro ainda não foi estabelecido na espécie equina. O objetivo desta investigação foi avaliar o efeito de intervalos de troca média de 24 horas (T24) ou 48 horas (T48) para cultivo de folículos pré-antrais aos 2 ou 6 dias. No final do período de cultivo, os fragmentos foram processados usando histologia clássica. Os folículos pré-antrais equinos foram classificados de acordo com a integridade morfológica e o estágio de desenvolvimento. A análise dos dados foi realizada utilizando o teste de Fisher com um nível de significância de p<0,05. De um total de 399 folículos avaliados, 174 (43,6%) foram folículos primordiais, 225 (56,4%) estavam em desenvolvimento e 63,76% estavam morfologicamente intactos. No cultivo in vitro realizado ao longo de dois dias, não houve diferença significativa em relação à integridade folicular após a substituição do meio (p>0,05). Comparado com a substituição média aos seis dias de cultivo, houve diferença estatisticamente significativa para T24 (68,9%, p<0,05). Portanto, sugerimos alterar o meio para as espécies equinas às 48 horas após o início da cultura, seguindo as subsequentes substituições diárias.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Técnicas de Reprodução Assistida/veterinária , Folículo Ovariano/citologia , Folículo Ovariano/fisiologia , Cavalos/anatomia & histologia , Cavalos/embriologia , Cavalos/fisiologiaResumo
O ovário dos mamíferos contem de milhares a milhões de oócitos imaturos, sendo a maioria (cerca de90%) inclusa nos folículos pré-antrais. Entretanto, in vivo a quase totalidade destes folículos será eliminada porum processo fisiológico denominado de atresia. Portanto, os principais objetivos da tecnologia do ovárioartificial são: 1- Resgatar os folículos pré-antrais dos ovários antes que eles se tornem atrésicos e 2- cultivar invitro estes folículos até a maturação, com o propósito de produzir oócitos aptos a serem utilizados para aprodução in vitro de embriões. Este artigo de revisão descreve as aplicações e estado da arte da tecnologia doovário artificial, bem como discute os principais resultados, limitações e perspectivas do cultivo in vitro defolículos pré-antrais, com ênfase nos pequenos ruminantes.(AU)
The mammalian ovary contains from thousands to millions of immature oocytes being most of them(approximately 90%) enclosed in preantral follicles. However, in vivo the vast majority of follicles will beeliminated by a physiological process named atresia. Therefore, the main goals of the artificial ovary technologyare: 1- to recover preantral follicles from the ovary before they become atretic and 2- in vitro culture thosefollicles up to maturation stages for the purpose of producing oocytes to be used for further in vitro embryoproduction. This review article describes the applications and state of art of the artificial ovary technology aswell as discusses the main results, limitations and prospects of in vitro follicle culture focus on small ruminants.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Biotecnologia/história , Biotecnologia/métodos , Biotecnologia/tendências , OvárioResumo
O ovário dos mamíferos contem de milhares a milhões de oócitos imaturos, sendo a maioria (cerca de90%) inclusa nos folículos pré-antrais. Entretanto, in vivo a quase totalidade destes folículos será eliminada porum processo fisiológico denominado de atresia. Portanto, os principais objetivos da tecnologia do ovárioartificial são: 1- Resgatar os folículos pré-antrais dos ovários antes que eles se tornem atrésicos e 2- cultivar invitro estes folículos até a maturação, com o propósito de produzir oócitos aptos a serem utilizados para aprodução in vitro de embriões. Este artigo de revisão descreve as aplicações e estado da arte da tecnologia doovário artificial, bem como discute os principais resultados, limitações e perspectivas do cultivo in vitro defolículos pré-antrais, com ênfase nos pequenos ruminantes.
The mammalian ovary contains from thousands to millions of immature oocytes being most of them(approximately 90%) enclosed in preantral follicles. However, in vivo the vast majority of follicles will beeliminated by a physiological process named atresia. Therefore, the main goals of the artificial ovary technologyare: 1- to recover preantral follicles from the ovary before they become atretic and 2- in vitro culture thosefollicles up to maturation stages for the purpose of producing oocytes to be used for further in vitro embryoproduction. This review article describes the applications and state of art of the artificial ovary technology aswell as discusses the main results, limitations and prospects of in vitro follicle culture focus on small ruminants.
Assuntos
Feminino , Animais , Biotecnologia/história , Biotecnologia/métodos , Biotecnologia/tendências , OvárioResumo
The aim of this study was to investigate the efficacy of the tissue fixatives Bouin, Carnoy and 10% Formaldehyde in equine ovarian fragments. Ovaries (n=4) from mares of mixed breeds were obtained at a local slaughterhouse and transported at 20 ºC in a thermo container. Immediately after collection, the ovaries were washed with a modified PBS solution (Cultilab®, Campinas-SP, Brazil) and divided into nine fragments with approximately 5x5x1 mm, removed from the parenchyma of each ovary. The ovarian fragments were then immersed in three different fixatives, Bouin (B) Carnoy (C) or 10% Formaldehyde (F) for 6, 12 or 24 hours. Each fragment was individually immersed in a 20 mL tube containing 20 times the volume of fixative solution. After this period, the fragments were held in 70% ethanol for 24 hours. Each procedure was performed in four replicates. For histological analysis, the specimens were dehydrated in increasing concentrations of alcohol, submitted to diaphanization in xylol and embedded in paraffin. Serial sections of 5 μm were made with the use of a rotating microtome (Leica® type, Wetzlar, Germany), followed by slide mounting and staining with periodic acid-Schiff (PAS) and hematoxylin. A total of 540 slides with 1,620 sections were evaluated, which contained 465 preantral follicles that were classified as normal or degenerated. Follicles were considered as degenerated when presented at least one of the following aspects: cytoplasm retraction, pyknotic nucleus, cytoplasmic vacuoles,displacement of granulosa cells and/or disruption of the basal membrane. A logistic regression test was used for statistical analysis, and differences were considered significant when P<0.05. The Carnoy fixative, when used for 24 hours, provided the best conditions of morphological integrity (53.3%; 32/60)compared to all others, and the use of Boiun for 24 hours was considered the worst treatment (19.1%; 9/47)[...](AU)
O objetivo deste estudo foi investigar a eficácia dos fixadores teciduais Bouin, Carnoy ou Formol 10% em fragmentos ovarianos equinos. Ovários (n=4) de éguas, sem raça definida, foram obtidos de abatedouro local e transportados em recipiente térmico a 20 ºC. Imediatamente após a coleta, os ovários foram lavados com solução de PBS modificado (Cultilab®, Campinas-SP, Brasil), e divididos em nove fragmentos com aproximadamente 5x5x1 mm, retirados do parênquima de cada ovário. Em seguida, os fragmentos ovarianos foram imersos em um dos três diferentes fixadores, Bouin (B), Carnoy (C) ou Formol 10% (F), por 6, 12 ou 24 horas. Cada fragmento foi acondicionado individualmente em um frasco contendo aproximadamente 20 vezes o volume da solução fixadora. Após este período, foram mantidos em álcool 70% por 24 horas. Para cada fixador e tempo foram realizadas quatro réplicas. No processamento histológico, os fragmentos foram desidratados em concentrações crescentes de álcool, diafanizados em xilol e incluídos em parafina. Em seguida, foram feitos cortes seriados de 5 ?m em micrótomo rotativo (Leica®, Wetzlar-Alemanha), seguidos da montagem de lâminas e coloração com ácido periódico de Schiff (PAS) e hematoxilina. Foram avaliadas 540 lâminas com 1.620 cortes histológicos, contendo 465 folículos pré-antrais que foram classificados como íntegros ou degenerados. A degeneração foi detectada pela presença de pelo menos um dos seguintes aspectos: retração docitoplasma, núcleo picnótico, vacúolos citoplasmáticos, deslocamento das células da granulosa e/ou rompimento da membrana basal. Um teste de regressão logística foi utilizado para a análise estatística, e as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. O fixador Carnoy utilizado por 24 horas proporcionou as melhores condições de integridade morfológica (53,3%; 32/60) em relação aos demais,sendo Boiun por 24 h o tratamento menos eficaz (19,1%; 9/47).[...](AU)
Assuntos
Animais , Equidae , Ovário/anatomia & histologia , Histologia , Fixadores/análiseResumo
The aim of this study was to investigate the effects of human follicle stimulating hormone (hFSH) on the in vitro culture of caprine preantral follicles. Fragments of goat ovarian cortex were cultured in ?-MEM+ supplemented with 0, 10, or 50 ng/mL hFSH for one or seven days. Small fragments of non-cultured and cultured ovarian tissue were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The statistical tests used in this study were Lilliefors, Cochran, and Tukeys (when significance was detected, PROC ANOVA, SAS was used). The results revealed a reduction in the percentage of normal follicles after one or seven days of culture under all treatment conditions. The rates of follicular survival were similar to each other, within each day of culture. The medium containing 10 ng/mL hFSH reduced the percentage of primordial follicles following culture for one and seven days and did not increase the percentage of developing follicles. The follicular diameter of ovarian tissue cultured in ?-MEM+ medium and medium supplemented with 10 ng/mL of hFSH did not change when compared with the control (non-cultured). The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured for seven days in medium containing 10 ng/mL hFSH. In conclusion, hFSH (10 ng/mL) is capable of promoting the activation of primordial follicles and maintaining the ultrastructural integrity of caprine preantral follicles cultured in vitro for seven days.(AU)
O objetivo desse estudo foi investigar os efeitos do FSH humano (hFSH) no cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos. Fragmentos do córtex ovariano de caprinos foram cultivados em ?-MEM+ suplementado com 0, 10, ou 50 ng/mL de hFSH por um ou sete dias. Pequenos fragmentos de tecido ovariano cultivado e não cultivados, foram processados por histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os testes estatísticos utilizados na pesquisa foram Lilliefors, Cochran, e Tukeys (caso significância - PROC ANOVA; SAS). Os resultados mostraram uma redução no percentual de folículos normais, após um ou sete dias de cultivo em todas as condições de tratamento. As taxas de sobrevivência folicular foram semelhantes entre si, dentro de cada dia de cultivo. O meio contendo 10 ng/mL de hFSH reduziu a percentagem de folículos primordiais no dia um e sete de cultivo, e não aumentou a percentagem dos folículos em desenvolvimento. O diâmetro folicular de tecido ovariano cultivado em meio ?-MEM+ e meio suplementado com 10 ng/mL de hFSH não alterou, quando comparado com o controle (não cultivado). As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados por sete dias em meio contendo 10 ng/mL de hFSH. Em conclusão, o hFSH (10 ng/mL) é capaz de promover a ativação de folículos primordiais e manter a integridade ultraestrutural de folículos préantrais caprinos cultivados in vitro por até sete dias.(AU)
Assuntos
Animais , Hormônio Foliculoestimulante , Técnicas In Vitro/veterinária , Ruminantes , Folículo OvarianoResumo
Os folículos pré-antrais constituem a principal reserva reprodutiva em fêmeas e são classificados em primordiais, de transição, primários e secundários. A criopreservação tem sido uma ferramenta promissora para a preservação da fertilidade feminina, principalmente em mulheres submetidas a tratamentos contra o câncer ou com problemas reprodutivos. Nesse tipo de abordagem, é de extrema importância a preservação da reserva folicular assim como a funcionalidade tecidual, pois posteriormente a reserva folicular poderá ser submetida a biotécnicas de reprodução assistida como cultivo in vitro e transplante. Diversos protocolos e substâncias são rotineiramente avaliados para o desenvolvimento do processo de criopreservação para posterior transplante. Dentre eles, o resveratrol possui ação antioxidante minimizando a produção de espécies reativas de oxigênio (EROS) durante a vitrificação e cultivo in vitro. Os recentes avanços em nanotecnologia expandiram suas possíveis aplicações na biomedicina, assim as nanoparticulas vem sendo utilizadas em tratamentos oncológicos como um carreador de fármacos. Outros estudos reportaram o desenvolvimento de diversas formulações de nanopartículas com potencial antioxidante, anti-inflammatório e antibiótico. Dessa forma, as nanopartículas têm demonstrado resultados promissores na criopreservação de sêmen e cultivo de folículos pré-antrais.
The preantral follicles constitute the female reproductive reserve and are classified as primordial, transitional, primary, and secondary. Cryopreservation has been a promising tool for the preservation of female fertility, especially in women undergoing cancer treatment or with reproductive problems. In this type of approach, it is extremely important to preserve the follicular reserve, as well as the functionality of the tissue, since the follicular reserve will be subjected to assisted reproductive techniques such as in vitro culture and transplantation. Several protocols and substances are routinely evaluated for the development of the cryopreservation process. Among them, resveratrol has antioxidant action, minimizing the production of ROS during vitrification and in vitro culture. Recent advances in nanotechnology have expanded its possible applications in biomedicine, therefore nanoparticles have been used in cancer treatments as a drug carrier. Other studies have reported the development of several nanoparticle formulations with antioxidant, anti-inflammatory and antibiotic potential. Thus, nanoparticles have shown promising results in cryopreservation of semen and in vitro culture of preantral follicles.
Resumo
The aim of this study was to investigate the effects of human follicle stimulating hormone (hFSH) on the in vitro culture of caprine preantral follicles. Fragments of goat ovarian cortex were cultured in ?-MEM+ supplemented with 0, 10, or 50 ng/mL hFSH for one or seven days. Small fragments of non-cultured and cultured ovarian tissue were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The statistical tests used in this study were Lilliefors, Cochran, and Tukeys (when significance was detected, PROC ANOVA, SAS was used). The results revealed a reduction in the percentage of normal follicles after one or seven days of culture under all treatment conditions. The rates of follicular survival were similar to each other, within each day of culture. The medium containing 10 ng/mL hFSH reduced the percentage of primordial follicles following culture for one and seven days and did not increase the percentage of developing follicles. The follicular diameter of ovarian tissue cultured in ?-MEM+ medium and medium supplemented with 10 ng/mL of hFSH did not change when compared with the control (non-cultured). The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured for seven days in medium containing 10 ng/mL hFSH. In conclusion, hFSH (10 ng/mL) is capable of promoting the activation of primordial follicles and maintaining the ultrastructural integrity of caprine preantral follicles cultured in vitro for seven days.
O objetivo desse estudo foi investigar os efeitos do FSH humano (hFSH) no cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos. Fragmentos do córtex ovariano de caprinos foram cultivados em ?-MEM+ suplementado com 0, 10, ou 50 ng/mL de hFSH por um ou sete dias. Pequenos fragmentos de tecido ovariano cultivado e não cultivados, foram processados por histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os testes estatísticos utilizados na pesquisa foram Lilliefors, Cochran, e Tukeys (caso significância - PROC ANOVA; SAS). Os resultados mostraram uma redução no percentual de folículos normais, após um ou sete dias de cultivo em todas as condições de tratamento. As taxas de sobrevivência folicular foram semelhantes entre si, dentro de cada dia de cultivo. O meio contendo 10 ng/mL de hFSH reduziu a percentagem de folículos primordiais no dia um e sete de cultivo, e não aumentou a percentagem dos folículos em desenvolvimento. O diâmetro folicular de tecido ovariano cultivado em meio ?-MEM+ e meio suplementado com 10 ng/mL de hFSH não alterou, quando comparado com o controle (não cultivado). As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados por sete dias em meio contendo 10 ng/mL de hFSH. Em conclusão, o hFSH (10 ng/mL) é capaz de promover a ativação de folículos primordiais e manter a integridade ultraestrutural de folículos préantrais caprinos cultivados in vitro por até sete dias.
Assuntos
Animais , Folículo Ovariano , Hormônio Foliculoestimulante , Ruminantes , Técnicas In Vitro/veterináriaResumo
O transplante de tecido ovariano é a principal alternativa para a retomada da função endócrina e reprodutiva em pacientes jovens candidatos ao tratamento quimioterápico. Resultados promissores e nascimentos até o momento foram alcançados. No entanto, um protocolo eficiente para transportar e enxertar o tecido ovariano ainda não está estabelecido. Portanto, o objetivo da presente tese foi investigar os principais fatores envolvidos nos procedimentos de conservação e enxerto, divididos em duas fases. A fase I teve como objetivo investigar o efeito dos sítios heterotópicos superficiais subcutâneo (SC) e intramuscular (IM) sobre a viabilidade tecidual, impacto sobre os folículos ovarianos e ao estroma, e favorecimento da revascularização após 7 ou 15 dias de transplante utilizando o modelo caprino. Uma porcentagem aumentada de folículos em desenvolvimento foi observada nos grupos enxertados (P< 0,05). Foi observada uma forte redução na densidade folicular e de células estromais, principalmente após 15 dias de transplante (P < 0,05). Proporções semelhantes de fibras colágenas tipo I foram observadas após 7 dias e de tipo III após 15 dias, independentemente do sítio. Além disso, a fragmentação do DNA tecidual foi semelhante após 15 dias de enxerto. Observaram-se associações positivas entre a densidade de células estromais e a deposição de fibras colágenas tipo I com a porcentagem de folículos normais nos grupos enxertados. Não foram encontradas diferenças entre a dinâmica vascular durante o período de enxertia. Concluiu-se que ambos os locais promovem taxa de desenvolvimento folicular semelhante, sugerindo que danos e alterações na composição do estroma são potenciais biomarcadores da viabilidade do enxerto. A fase II teve como objetivo avaliar o efeito da suplementação de VEGF ao meio de transporte de tecido ovariano bovino a 4º durante 24h. Para isso, tecidos ovarianos bovinos foram coletados e subdividos nos grupos (i) a fresco: controle fresco, transplante a fresco; (ii) resfriados: controle resfriado, resfriado e transplantado, e resfriado e cultivado; (iii) resfriados na presença de 50 ng/ml de VEGF: controle resfriado+, resfriado+ e transplantado, e resfriado+ e cultivado. Observou-se que o resfriamento com VEGF proporcionou maior porcentagem (P <0,05) de folículos morfológicos normais e o desenvolvimento de folículos após 7 dias de cultivo ou transplante em relação ao resfriamento sem suplementação. Além disso, tecidos ovarianos pré-incubados com VEGF após o transplante apresentaram maior sobrevivência folicular, desenvolvimento e densidade folicular e de células estromais quando comparados ao transplante fresco (P<0,05). Observou-se aumento da deposição de fibras de colágeno tipo I e redução de fibras de colágeno tipo III no tratamento resfriado com VEGF seguido de transplante em relação a todos os outros tratamentos (P< 0,05), exceto no transplante fresco. Além disso, uma imunoquantificação semelhante de PCNA foi encontrada entre tecidos ovarianos pré-incubados com VEGF após enxerto ou cultivo (P> 0,05) e menor que os outros tratamentos (P < 0,05). Concluiu-se que a presença de VEGF antes do transplante ou do cultivo in vitro pode favorecer a viabilidade das estruturas foliculares.
Ovarian tissue transplantation is the main alternative for the resumption of endocrine and reproductive function in young patients who are candidates for chemotherapy treatment. Promising results and births to date were achieved, however, an efficient protocol to transport and engraft the ovarian tissue still not stablished. Therefore, the aim of the present thesis was to investigate the main factors involved in conservation and engraftment procedures, divided in 2 phases. Phase I aimed to investigate the effect of subcutaneous (SC) and intramuscular (IM) superficial heterotopic sites on tissue viability, impact on ovarian follicles and stroma, and favoring revascularization after 7 or 15 days of transplantation using the model Goat model. An increased percentage of developing follicles was observed in grafted groups. A strong reduction in follicular and stromal cell density was observed, especially after 15 days of transplantation (P< 0.05). Similar proportions of collagen fibers type I was observed after 7 days and type III after 15 days, regardless of site. Also, DNA fragmentation was similar after 15 days of grafting. Positive associations were observed among stromal cell density and deposition of type I collagen fibers with the percentage of normal follicles in grafted groups. No differences were found among vascular dynamics during grafting period. It was concluded that both sites promote similar follicular development rate, suggesting that damage and changes in stromal composition are potential biomarkers of graft viability. Phase II aimed to evaluate the effect of supplementing VEGF to the transport medium of bovine ovarian tissue at 4º for 24h. For this, bovine ovarian tissues were collected and subdivided into groups (i) fresh: fresh control, fresh transplant; (ii) colds: control cold, cooled and transplanted, and cooled and cultivated; (iii) presence of 50 ng / ml of VEGF: control cooled +, cooled + and transplanted, and cooled + and cultured. It was observed that cooling with VEGF provided a higher percentage (P <0.05) of morphological normal follicles and the developmental rate after 7 days of in vitro culture or transplantation in relation to cooling without supplementation. In addition, ovarian tissues pre-incubated with VEGF after transplantation showed greater follicular survival, follicular and stromal cell development and density when compared to fresh transplantation (P <0.05). There was an increase in the deposition of type I collagen fibers and a reduction in type III collagen fibers in the cooled treatment+ VEGF followed by transplantation in relation to all other treatments (P <0.05), except for fresh transplantation. In addition, a similar immunoquantification of PCNA was found among ovarian tissues pre-incubated with VEGF after grafting or in vitro culture (P> 0.05) and lower than the other treatments (P <0.05). It was concluded that the presence of VEGF prior to transplantation or in vitro culture may favor the viability of follicular structures.
Resumo
The aim of this study was to investigate the interaction of human FSH (10ng/ml) with T4 (20ng/mL) on survival, activation and growth of preantral follicles cultured in vitro for 28 days. Fragments of non-cultured and cultured ovarian tissue were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The results showed a reduction in the survival rate in all the media tested (one to 28 days) when compared to the fresh control. However the treatment with T4/hFSH for seven days of culture maintained the rate similar to the control. The media tested by one and 28 days reduced the percentage of primordial follicles in all periods of culture. However, T4/hFSH on day one of culture remained similar to the fresh control. None of the media were able to keep the percentage of the developing follicles. It was observed that the follicular diameter in the medium with T4/hFSH remained similar to the fresh control. The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured for seven days in a medium supplemented with T4/hFSH. In conclusion, the medium with T4/hFSH is able to maintain the survival, promote the activation, and the ultrastructural integrity of caprine preantral follicles for until seven days.
O objetivo deste estudo foi investigar a interação do FSH humano (10 ng/mL) com T4 (20 ng/mL) na sobrevivência, ativação e crescimento de folículos pré-antrais cultivados in vitro, por um período de longa duração (28 dias). Fragmentos de tecido ovariano não cultivado e cultivados foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram uma redução na taxa de sobrevivência em todos os meios testados (um a 28 dias) quando comparado ao controle fresco. Entretanto, o tratamento com T4/hFSH por sete dias de cultivo resultou em taxa semelhante ao controle. Os meios testados por 28 dias reduziram o percentual de folículos primordiais em todos os períodos de cultivo. Contudo, T4/hFSH no dia um de cultivo manteve-se semelhante ao controle fresco. Nenhum dos meios foi capaz de manter o percentual dos folículos em desenvolvimento. Observou-se que o diâmetro folicular cultivado no meio com T4/hFSH manteve-se semelhante ao controle fresco. As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados por sete dias em meio suplementado com T4/hFSH. Em conclusão, o meio com T4/hFSH é capaz de manter a sobrevivência, promover a ativação e a integridade ultraestrutural de folículos pré-antrais caprinos, por até sete dias.
Assuntos
Animais , Hormônio Foliculoestimulante Humano/administração & dosagem , Ruminantes/embriologia , Tiroxina/administração & dosagem , Técnicas In Vitro/veterinária , Histologia/instrumentação , Métodos de Análise Laboratorial e de Campo , Taxa de SobrevidaResumo
The aim of this study was to investigate the interaction of human FSH (10ng/ml) with T4 (20ng/mL) on survival, activation and growth of preantral follicles cultured in vitro for 28 days. Fragments of non-cultured and cultured ovarian tissue were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The results showed a reduction in the survival rate in all the media tested (one to 28 days) when compared to the fresh control. However the treatment with T4/hFSH for seven days of culture maintained the rate similar to the control. The media tested by one and 28 days reduced the percentage of primordial follicles in all periods of culture. However, T4/hFSH on day one of culture remained similar to the fresh control. None of the media were able to keep the percentage of the developing follicles. It was observed that the follicular diameter in the medium with T4/hFSH remained similar to the fresh control. The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured for seven days in a medium supplemented with T4/hFSH. In conclusion, the medium with T4/hFSH is able to maintain the survival, promote the activation, and the ultrastructural integrity of caprine preantral follicles for until seven days.(AU)
O objetivo deste estudo foi investigar a interação do FSH humano (10 ng/mL) com T4 (20 ng/mL) na sobrevivência, ativação e crescimento de folículos pré-antrais cultivados in vitro, por um período de longa duração (28 dias). Fragmentos de tecido ovariano não cultivado e cultivados foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram uma redução na taxa de sobrevivência em todos os meios testados (um a 28 dias) quando comparado ao controle fresco. Entretanto, o tratamento com T4/hFSH por sete dias de cultivo resultou em taxa semelhante ao controle. Os meios testados por 28 dias reduziram o percentual de folículos primordiais em todos os períodos de cultivo. Contudo, T4/hFSH no dia um de cultivo manteve-se semelhante ao controle fresco. Nenhum dos meios foi capaz de manter o percentual dos folículos em desenvolvimento. Observou-se que o diâmetro folicular cultivado no meio com T4/hFSH manteve-se semelhante ao controle fresco. As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados por sete dias em meio suplementado com T4/hFSH. Em conclusão, o meio com T4/hFSH é capaz de manter a sobrevivência, promover a ativação e a integridade ultraestrutural de folículos pré-antrais caprinos, por até sete dias.(AU)
Assuntos
Animais , Hormônio Foliculoestimulante Humano/administração & dosagem , Tiroxina/administração & dosagem , Técnicas In Vitro/veterinária , Ruminantes/embriologia , Histologia/instrumentação , Taxa de Sobrevida , Métodos de Análise Laboratorial e de CampoResumo
The aim of this study was to investigate the interaction of human FSH (10ng/ml) with T4 (20ng/mL) on survival, activation and growth of preantral follicles cultured in vitro for 28 days. Fragments of non-cultured and cultured ovarian tissue were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The results showed a reduction in the survival rate in all the media tested (one to 28 days) when compared to the fresh control. However the treatment with T4/hFSH for seven days of culture maintained the rate similar to the control. The media tested by one and 28 days reduced the percentage of primordial follicles in all periods of culture. However, T4/hFSH on day one of culture remained similar to the fresh control. None of the media were able to keep the percentage of the developing follicles. It was observed that the follicular diameter in the medium with T4/hFSH remained similar to the fresh control. The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured for seven days in a medium supplemented with T4/hFSH. In conclusion, the medium with T4/hFSH is able to maintain the survival, promote the activation, and the ultrastructural integrity of caprine preantral follicles for until seven days.
O objetivo deste estudo foi investigar a interação do FSH humano (10 ng/mL) com T4 (20 ng/mL) na sobrevivência, ativação e crescimento de folículos pré-antrais cultivados in vitro, por um período de longa duração (28 dias). Fragmentos de tecido ovariano não cultivado e cultivados foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram uma redução na taxa de sobrevivência em todos os meios testados (um a 28 dias) quando comparado ao controle fresco. Entretanto, o tratamento com T4/hFSH por sete dias de cultivo resultou em taxa semelhante ao controle. Os meios testados por 28 dias reduziram o percentual de folículos primordiais em todos os períodos de cultivo. Contudo, T4/hFSH no dia um de cultivo manteve-se semelhante ao controle fresco. Nenhum dos meios foi capaz de manter o percentual dos folículos em desenvolvimento. Observou-se que o diâmetro folicular cultivado no meio com T4/hFSH manteve-se semelhante ao controle fresco. As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados por sete dias em meio suplementado com T4/hFSH. Em conclusão, o meio com T4/hFSH é capaz de manter a sobrevivência, promover a ativação e a integridade ultraestrutural de folículos pré-antrais caprinos, por até sete dias.
Resumo
Avaliação histomolecular da dimensão fractal e da remodelação da matriz extracelular durante o desenvolvimento ovariano A fisiologia reprodutiva de fêmeas mamíferas é distinta em decorrência de sua fase estral, formação dos gametas femininos e dos folículos ovarianos iniciada no período pré-natal. O aparecimento dos estágios pré-antrais no ovário tem padrão temporal espécie-específico. Em fêmeas de Bos taurus indicus, estudos já demonstraram que folículos primordiais, primários e secundários aparecem próximo aos 90, 120 e 150 dias de gestação, respectivamente. Embora os estudos foquem na remodelação da matriz extracelular (MEC) durante a formação e funcionalidade de ovários adultos, há escassez no entendimento sobre os mecanismos que controlam a formação dos folículos pré-antrais durante a gestação. O objetivo do estudo foi caracterizar o fenótipo histomolecular do remodelamento MEC através da dimensão fractal (DF), quantificação de colágeno e perfil de transcritos envolvidos com remodelação de MEC em ovários de fetos bovinos associados à temporalidade de formação dos folículos pré-antrais. Assim, a fim de investigar o remodelamento tecidual ao longo do desenvolvimento ovariano fetal, foi utilizado ovários de fetos para quantificar a DF, o colágeno total e a abundância relativa de mRNA de genes relacionados ao remodelamento da MEC (COL1A1, COL1A2, COL4A1, MMP2, MMP9, MMP14, TIMP1 e TIMP2). Para tanto, pares de ovários fetais foram obtidos de fêmeas Bos taurus indicus com 60, 90, 120 e 150 dias de gestação em matadouro, sendo um deles destinado à extração de RNA total e posterior investigação dos transcritos alvos e o outro para análise de colágeno total e DF. O presente estudo demonstrou que a partir dos 120 dias houve maior área de colágeno total no ovário fetal. Nas análises de coloração em hematoxilina eosina (HE), a DF foi menor aos 150 dias quando comparada aos 60 dias de gestação, todavia, apresentou padrão inverso na coloração de picrosirius. A expressão dos genes alvos da abundância relativa dos transcritos de mRNA para COL1A1, COL4A1, MMP2, MMP14, TIMP1 e TIMP2 foi maior aos 150 dias em comparação ao dia 60. Conclui-se que a dimensão fractal reflete às alterações morfológicas durante a organização estrutural do tecido ovariano fetal e que a expressão de genes relacionados ao remodelamento da MEC é modulada ao longo da gestação em ovários fetais bovinos.
Histomolecular evaluation of the fractal dimension and remodeling of the extracellular matrix during the ovarian development The reproductive physiology of female mammals is different due to their estrous phase, the formation of female gametes and ovarian follicles that started in the prenatal period. The appearance of preantral stages in the ovary has a species-specific temporal pattern. In females of Bos taurus indicus, studies have already shown that primordial, primary and secondary follicles appear close to 90, 120 and 150 days of gestation, respectively. Although studies have focused on remodeling the extracellular matrix (ECM) during the formation and functionality of adult ovaries, there is a lack of understanding about the mechanisms that control the formation of preantral follicles during pregnancy. The aim of the study was to characterize the histomolecular phenotype of ECM remodeling through the fractal dimension (FD), quantification of collagen and profile of transcripts involved with remodeling of ECM in ovaries of bovine fetuses associated with the temporality of formation of pre-antral follicles. Thus, in order to investigate tissue remodeling along fetal ovarian development, fetal ovaries were used to quantify FD, total collagen and relative mRNA abundance of genes related to ECM remodeling (COL1A1, COL1A2, COL4A1, MMP2, MMP9, MMP14, TIMP1 and TIMP2). For this purpose, pairs of fetal ovaries were obtained from Bos taurus indicus females at 60, 90, 120 and 150 days of gestation in a slaughterhouse, one of which was destined for the extraction of total RNA and further investigation of the target transcripts and the other for collagen analysis. total and FD. The present study demonstrated that after 120 days there was a greater area of total collagen in the fetal ovary. In the staining analyzes in hematoxylin eosin (HE), the FD was lower at 150 days when compared to 60 days of gestation, however, it presented an inverse pattern in the picrosirius staining. The expression of the target genes for the relative abundance of mRNA transcripts for COL1A1, COL4A1, MMP2, MMP14, TIMP1 and TIMP2 was greater at 150 days compared to day 60. It is concluded that the fractal dimension reflects the morphological changes during structural organization of fetal ovarian tissue and that the expression of genes related to ECM remodeling is modulated throughout pregnancy in fetal bovine ovaries.