Evaluation of galectins 1 and 3 expression in canine melanoma / Avaliação da expressão das galectinas 1 e 3 no melanoma canino

Canine melanoma is a frequently-occuring neoplasm in dogs and presents as malignant and highly metastatic in this context, studies that contribute to the understanding of the tumor microenvironment in melanoma include the role of galectins. Galectins are proteins of the family of animal lectins that display carbohydrate recognition domains. Galectin-1 and galectin-3 are associated with neoplastic transformation, neoplastic cell survival, angiogenesis, immune system evasion, and metastasis. The goal of this study was to establish a correlation between expression patterns of galectin-1 and galectin-3 and the different degrees of aggressiveness of canine melanoma, as well as to determine serum concentration of galectin-3 in dogs with melanoma. Galectin-1 and galectin-3 expression was analyzed by immunohistochemistry in 30 canine melanomas, six melanocytomas and nine metastatic lymph nodes from patients whose primary tumors were also processed and analyzed. Serum samples from 30 dogs were collected and galectin-3 concentration was determined by ELISA and compared to the samples of 10 healthy dogs. Canine melanoma samples expressed galectin-1 in the cytoplasm and presented a variable pattern of galectin-3 staining depending on melanoma aggressiveness. We observed a decrease in the percentage of cells with cytoplasmic galectin-3 immunolabeling simultaneous to the increased nuclear staining intensity, while there was also a decrease in the percent frequency of nuclear galectin-3 immunolabeled cells according to progression of melanoma, comparing the least to the most aggressive cases. Dogs with melanoma had increased serum levels of galectin-3 when compared to healthy animals, suggesting its potential biomarker of patients with melanoma.(AU)

O melanoma canino é uma neoplasia frequente em cães que apresenta um potencial maligno e metastático. Neste contexto, investigar o microambiente tumoral é fundamental para compreender os mecanismos intercelulares e intracelulares envolvidos no desenvolvimento e progressão da doença. Neste estudo, destacamos as galectinas, proteínas da família das lectinas animais que exibem domínios de reconhecimento à carboidratos; a galectina-1 e a galectina-3 estão associadas a transformação neoplásica, sobrevivência de células neoplásicas, angiogênese, evasão do sistema immune e desenvolvimento de metástases. O objetivo deste estudo foi determinar os padrões de expressão de galectina-1 e galectina-3 em diferentes graus de agressividade do melanoma canino, bem como dosar a concentração sérica de galectina-3 em cães com melanoma e comparar com cães saudáveis. A expressão de galectina-1 e galectina-3 foi analisada em 30 melanomas caninos, seis melanocitomas e nove linfonodos metastáticos. A galectina-3 sérica foi mensurada em 30 cães com melanoma e comparada a 10 cães saudáveis. No melanoma canino a expressão de galectina-1 foi citoplasmática e a expressão de galectina-3 foi variável de acordo com o grau de agressividade. Notou-se uma redução na porcentagem de células com imunomarcação de galectina-3 citoplasmática e um aumento simultâneo da intensidade de imunomarcação nuclear, enquanto houve também uma diminuição na frequência percentual de células com imunomarcação nuclear de acordo com a progressão do melanoma comparando-se os casos menos com os mais agressivos. Cães com melanoma apresentaram níveis séricos aumentados de galectina-3 quando comparados a animais saudáveis, mostrando seu uso potencial como biomarcador em pacientes com melanoma.(AU)

Evaluation of galectins 1 and 3 expression in canine melanoma / Avaliação da expressão das galectinas 1 e 3 no melanoma canino

Canine melanoma is a frequently-occuring neoplasm in dogs and presents as malignant and highly metastatic in this context, studies that contribute to the understanding of the tumor microenvironment in melanoma include the role of galectins. Galectins are proteins of the family of animal lectins that display carbohydrate recognition domains. Galectin-1 and galectin-3 are associated with neoplastic transformation, neoplastic cell survival, angiogenesis, immune system evasion, and metastasis. The goal of this study was to establish a correlation between expression patterns of galectin-1 and galectin-3 and the different degrees of aggressiveness of canine melanoma, as well as to determine serum concentration of galectin-3 in dogs with melanoma. Galectin-1 and galectin-3 expression was analyzed by immunohistochemistry in 30 canine melanomas, six melanocytomas and nine metastatic lymph nodes from patients whose primary tumors were also processed and analyzed. Serum samples from 30 dogs were collected and galectin-3 concentration was determined by ELISA and compared to the samples of 10 healthy dogs. Canine melanoma samples expressed galectin-1 in the cytoplasm and presented a variable pattern of galectin-3 staining depending on melanoma aggressiveness. We observed a decrease in the percentage of cells with cytoplasmic galectin-3 immunolabeling simultaneous to the increased nuclear staining intensity, while there was also a decrease in the percent frequency of nuclear galectin-3 immunolabeled cells according to progression of melanoma, comparing the least to the most aggressive cases. Dogs with melanoma had increased serum levels of galectin-3 when compared to healthy animals, suggesting its potential biomarker of patients with melanoma.(AU)

O melanoma canino é uma neoplasia frequente em cães que apresenta um potencial maligno e metastático. Neste contexto, investigar o microambiente tumoral é fundamental para compreender os mecanismos intercelulares e intracelulares envolvidos no desenvolvimento e progressão da doença. Neste estudo, destacamos as galectinas, proteínas da família das lectinas animais que exibem domínios de reconhecimento à carboidratos; a galectina-1 e a galectina-3 estão associadas a transformação neoplásica, sobrevivência de células neoplásicas, angiogênese, evasão do sistema immune e desenvolvimento de metástases. O objetivo deste estudo foi determinar os padrões de expressão de galectina-1 e galectina-3 em diferentes graus de agressividade do melanoma canino, bem como dosar a concentração sérica de galectina-3 em cães com melanoma e comparar com cães saudáveis. A expressão de galectina-1 e galectina-3 foi analisada em 30 melanomas caninos, seis melanocitomas e nove linfonodos metastáticos. A galectina-3 sérica foi mensurada em 30 cães com melanoma e comparada a 10 cães saudáveis. No melanoma canino a expressão de galectina-1 foi citoplasmática e a expressão de galectina-3 foi variável de acordo com o grau de agressividade. Notou-se uma redução na porcentagem de células com imunomarcação de galectina-3 citoplasmática e um aumento simultâneo da intensidade de imunomarcação nuclear, enquanto houve também uma diminuição na frequência percentual de células com imunomarcação nuclear de acordo com a progressão do melanoma comparando-se os casos menos com os mais agressivos. Cães com melanoma apresentaram níveis séricos aumentados de galectina-3 quando comparados a animais saudáveis, mostrando seu uso potencial como biomarcador em pacientes com melanoma.(AU)

CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL DA LECTINA DA ESPONJA MARINHA Chondrilla caribensis

Os organismos marinhos possuem uma grande diversidade química, sendo capazes de produzir inúmeros compostos diferentes. Dentre esses compostos estão as lectinas, proteínas ou glicoproteínas que apresentam ligação específica e reversível a carboidratos, porém não alteram as propriedades e nem estão envolvidas necessariamente ao metabolismo dos mesmos. O estudo das lectinas e de suas interações proteína-carboidrato são de grande importância, já que o padrão de glicosilação dos componentes celulares é influenciado por alterações fisiológicas, como a ocorrência de doenças. Já os estudos estruturais são relevantes para solucionar e entender o papel fisiológico dentro do organismo e avaliar seu potencial biotecnológico. Apesar dos estudos estruturais de lectinas terem sido impulsionados há muito tempo, poucas lectinas de esponjas possuem sua estrutura primária determinada e apenas uma tem sua estrutura tridimensional resolvida. O objetivo deste trabalho foi caracterizar estruturalmente uma lectina presente na esponja marinha Chondrilla caribensis e avaliar o potencial da mesma em diferentes atividades biológicas. A estrutura primária de CCL foi determinada por sobreposição de peptídeos sequenciados por espectrometria de massas. A sequência de aminoácidos da proteína consiste de 142 aminoácidos com massa molecular calculada de 15.443 Da. A lectina possui uma arquitetura de domínio do tipo galectina, família de lectinas ligantes a -galactosídeos, sendo esta família bastante difundida no reino animal. A sequência assinatura de domínio altamente conservado em galectinas foi identificada em CCL com algumas modificações observadas também em outras galectinas de esponjas. A estrutura tridimensional foi prevista e o local de ligação a carboidratos analisado por meio do docking molecular, onde CCL exibe uma estrutura típica das galectinas que consiste em um -sanduíche com duas -folhas antiparalelas. Os aminoácidos que fazem interações com os ligantes de CCL no sítio de ligação ao monossacarídeo são, na maioria, os mesmos conservados nesta família de lectinas. A função molecular, o processo biológico e a localização da proteína prevista, mostram que CCL é uma típica galectina podendo desempenhar várias funções diferentes tanto intracelular como extracelular. CCL é uma molécula com potencial antitumoral contra células de carcinoma de próstata e adenocarcinoma de mama, com baixa citotoxicidade contra células saudavéis, além de mostrar atividade leishmanicida com resultados bastante promissores.

The organisms have a great chemical diversity, being able to produce countless diferente compounds. Among these compounds are lectins, proteins or glycoproteins that have specific and reversible binding to carbohydrates, however they do not alter their properties and are not necessarily involved in their metabolismo. The study of lectins and their protein-carbohydrate interactions are of great importance, since the pattern of glycosylation of cellular components is influenced by physiological changes, such as the occurrence of diseases. Structural studies are relevant to solve and understand the physiological role within the organismo and to evaluate its biotechnological potential. Although structural studies of lectins have been promoted for a long time, few sponges lectins have their primary strucuture determined and only one of them has its three-dimensional structure resolved. The objective of this work was to structurally characterize the lectin presente in the marine sponge Chondrilla caribensis and to evaluate its potential in diferente biological activities. The primary structure of CCL was determined by mass spectrometry. The amino acid sequence of the protein consists of 142 amino acids with a calculated molecular mass of 15.443 Da. Lectin has a galectin-like domain architecture, a Family of -galactoside-binding lectins, and is very widespread in the animal kingdom. The signature sequence of highly conserved domain in galectins was identified in CCL with some modifications observed also in other sponge galectins. The three-dimensional structure was predicted and the carbohydrate binding site was analyzed using molecular docking, where CCL exhibits a typical galectin structure consisting of a -sandwich with two antiparallel -sheets. The amino acids that interact with the CCL ligands at the monosaccharide binding site are mostly the same conserved in this Family of lectins. The molecular function, the biological process and the location of the predicted protein, show that CCL is a typical galectin and can perform several diferente functions, both intracelular and extracelular. CCL is a molecule with antitumor potential against prostate carcinoma cells and breast adenocarcinoma, with low cytotoxicity against healthy cells, in addition to showing leishmanicidal activity with very promising results.

ESTRATÉGIAS NUTRICIONAIS E HORMONAIS EM PROTOCOLOS DE IATF SOBRE A TAXA DE CONCEPÇÃO DE VACAS DE CORTE CRIADAS NO BIOMA AMAZÔNIA

O presente trabalho tem como objetivo geral, avaliar possíveis efeitos de estratégias nutricionais e hormonais no incremento da taxa de concepção de vacas de corte submetidas a protocolos de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), criadas na região da Amazônia Legal. Foram desenvolvidos dois experimentos, nos quais, o experimento 1 avaliou o efeito da combinação de cianocobalamina com butafosfan no incremento da taxa de concepção de vacas de corte, criadas no sul do Pará. O segundo experimento, avaliou o efeito da suplementação no dia da inseminação artificial (IA) com Hormônio Liberador de Gonadotrofinas (GnRH) e Galectina-1 sobre a taxa de concepção de vacas de corte criadas na região norte do Estado do Tocantins. No experimento 1 foram utilizadas 170 vacas distribuídas em dois tratamentos (grupo tratado e grupo controle), e no experimento 2 foram utilizadas 158 vacas Nelore, multíparas, distribuídas em três tratamentos (T1-Galectina-1; T2-GnRH e T3-Controle). Todos os animais foram submetidos ao mesmo protocolo de IATF de três manejos. As variáveis avaliadas foram a manifestação do cio, o efeito de lote e dos tratamentos sobre a taxa de concepção dos animais. O diagnóstico de gestação foi realizado aos 30 dias pós-IA por meio de ultrassonografia transretal e os dados foram analisados via ANOVA através do PROC GLMNMIX do programa SAS (2009) com médias comparadas através do teste T de student com nível de significância de 5%. No experimento 1, a taxa de prenhez do grupo tratado foi 61,29% (57/93) e do controle foi de 45,45% (35/77) apresentando diferença significativa (P<0,05) entre os tratamentos. Sendo assim, a suplementação mineral injetável promoveu incremento na taxa de fertilidade dos animais tratados. No experimento 2, a taxa de concepção geral foi de 63%, e por grupo tratado a mesma foi maior no T2 (GnRH) com 70,97% (44/62), seguida do T3 (controle) que obteve 62,86% (22/35) e o T1 (Galectina-1) com 55,74% (34/61), havendo diferença estatística entre T2 e demais tratamentos. A utilização do GnRH no dia da IA promoveu aumento na taxa de concepção dos animais tratados. Conclui-se que a administração da combinação de fósforo orgânico e vitamina B12, bem como a adição de GnRH no dia da IA promoveu incrementos na taxa de concepção de vacas de corte submetidas a protocolos de IATF.

The present work has as general objective, to evaluate possible effects of nutritional and hormonal strategies in the increase of the conception rate of beef cows submitted to Fixed Time Artificial Insemination (IATF) protocols, created in the Legal Amazon region. Two experiments were developed, in which, experiment 1 evaluated the effect of the combination of cyanocobalamin with butafosfan in increasing the conception rate of beef cows, reared in southern Pará. The second experiment, evaluated the effect of supplementation on the day of insemination artificial (AI) with Gonadotropin Releasing Hormone (GnRH) and Galectin-1 on the conception rate of beef cows raised in the northern region of the State of Tocantins. In experiment 1, 170 cows distributed in two treatments (treated group and control group) were used, and in experiment 2, 158 multiparous Nellore cows, distributed in three treatments (T1-Galectin-1; T2-GnRH and T3-Control). All animals were submitted to the same IATF protocol of three managements. The variables evaluated were the manifestation of heat, the effect of batch and treatments on the animals' conception rate. The pregnancy diagnosis was made at 30 days post-AI by means of transrectal ultrasound and the data were analyzed via ANOVA using the PROC GLMNMIX of the SAS program (2009) with means compared using the Student's T test with a significance level of 5%. In experiment 1, the pregnancy rate of the treated group was 61.29% (57/93) and that of the control group was 45.45% (35/77), showing a significant difference (P <0.05) between treatments. Thus, injectable mineral supplementation promoted an increase in the fertility rate of the treated animals. In experiment 2, the general conception rate was 63%, and by treated group it was higher in T2 (GnRH) with 70.97% (44/62), followed by T3 (control) which obtained 62.86% (22/35) and T1 (Galectin-1) with 55.74% (34/61), with statistical difference between T2 and other treatments. The use of GnRH on the day of AI promoted an increase in the conception rate of the treated animals. It is concluded that the administration of the combination of organic phosphorus and vitamin B12, as well as the addition of GnRH on AI day promoted increases in the conception rate of beef cows submitted to IATF protocols.

Caracterização imuno-histoquímica da Galectina-3 como ferramenta prognóstica em melanomas orais caninos

Vargas, T.H.M., Pulz, L.H., Ferro, D., Sobral, R.A., Nishiya, A.T., Strefezzi, R.S. Caracterização imuno-histoquímica da Galectina-3 como ferramenta prognóstica em melanomas orais caninos Os melanomas correspondem a 7% de todas as neoplasias malignas em cães e são principalmente encontrados em cavidade oral e lábios, correspondendo a 33% dos tumores de boca, possuem um prognóstico ruim devido ao fato de serem diagnosticados tardiamente, por sua grande capacidade de invasão local e formação de metástases, além de altas taxas de recidiva após o tratamento cirúrgico. A Galectina-3 (Gal-3) é uma proteína responsável por diversas funções fisiológicas como adesão, apoptose, angiogênese, proliferação e diferenciação. Em medicina veterinária existem poucos estudos relacionando à expressão da Gal-3 com prognóstico e a progressão da neoplasia. Realizamos imuno-histoquímica para Gal-3 em 27 melanomas orais caninos que foram avaliados de maneira semiquantitativa e quantitativa, e comparamos os resultados obtidos com a sobrevida, outros marcadores prognósticos (Ki67, índice mitótico e atipia nuclear), expressão de proteínas relacionadas à apoptose (BCL2 e CASP3) e parâmetros histopatológicos (grau de pigmentação e tipo histológico). Detectamos alta expressão de Gal-3 em melanomas com maior sobrevida pós-cirúrgica e uma alta expressão nuclear de Gal-3 em melanomas com menor sobrevida pós-cirúrgica. Além disso, houve correlação entre as expressões de Gal-3 e BCL2, assim como entre atipia nuclear e sobrevida pós-cirúrgica. É sabido que a Gal-3 é capaz de formar heterodímeros com a BCL2 no citoplasma para atuar na evasão da morte por apoptose, impedindo a liberação da citocromo C. Já no núcleo, a Gal-3 induz à parada do ciclo celular, reduzindo a taxa da proliferação. Apesar do reduzido número amostral devido à dificuldade nos acompanhamentos clínicos nossos dados permitem sugerir que a Gal-3 é possui potencial para ser um marcador prognóstico de sobrevida em casos de melanomas orais caninos. Novos estudos devem ser realizados afim de confirmar nossas observações e elucidar o papel da Gal-3 nesta neoplasia.

Melanomas are almost 7% of all malignant neoplasms in dogs. They are mainly found in the oral cavity and lips, corresponding to 33% of tumors of the oral cavity. They carry a poor prognosis because of late diagnoses, local invasiveness, high metastatic and recurrence rates after surgical treatment. Galectin-3 (Gal-3) is a protein with a variety of biological roles such as in adhesion, apoptosis, angiogenesis, proliferation and differentiation. In veterinary medicine, there are few studies comparing the expression of Gal-3 with prognosis and tumor progression. We performed immunohistochemistry for Gal-3 in 27 canine oral melanomas and evaluated the immunolabelling both semi-quantitatively and quantitatively. The results were compared with survival, other prognostic markers (Ki67, mitotic index and nuclear atypia), expression of proteins related to apoptosis (BCL2 and CASP3) and histopathological parameters (degree of pigmentation and histological type). We detected higher expression of Gal-3 in cases of melanoma that presented longer post-surgical survival and a higher nuclear expression of Gal-3 in dogs with melanoma that had shorter post-surgical survival. In addition, there was correlation between the Gal-3 and BCL2 expressions, as well as between nuclear atypia and post-surgical survival. It is known that Gal-3 is able to form heterodimers with BCL2 in the cytoplasm leading to evasion of apoptosis, through preventing mitochondrial cytochrome C release. Nuclear Gal-3 induces the cell cycle arrest, reducing the proliferation rate. Despite the small sample size due to the difficulty in clinical follow-up, our data suggest that Gal-3 has the potential to be a prognostic marker for survival in cases of canine oral melanomas. Further studies should be performed to confirm our observations and elucidate the role of Gal-3 in this neoplasm.

Avaliação da expressão das galectinas no melanoma canino

O melanoma canino é uma neoplasia frequente em cães, tem um caráter maligno, invasivo, com potencial metastático e, neste contexto, estudos acerca do envolvimento das galectinas se justifica para ampliar o conhecimento do microambiente tumoral desta neoplasia. As galectinas são proteínas da família das lectinas animais que apresentam domínios de reconhecimento de carboidratos e podem estar localizadas no núcleo, no citoplasma, na superfície de células e secretadas em diversos tecidos. Acredita-se que principalmente a galectina-1 (gal-1) e a galectina-3 (gal-3) estejam associadas à transformação neoplásica, sobrevivência da célula neoplásica, angiogênese, evasão do sistema imune e formação de metástases. A gal-1 está principalmente relacionada com a transformação tumoral e evasão do sistema imune. A gal-3 está principalmente associada com a angiogênese, desenvolvimento de metástases pelo aumento da motilidade e adesão entre as células neoplásicas e adesão entre as células neoplásicas e o endotélio, além de contribuir para a evasão do sistema imune. O objetivo do estudo foi verificar o padrão de expressão de gal-1 e gal-3 nos diferentes graus de agressividade do melanoma canino, além de avaliar a concentração sérica de gal-3 e comparar com cães clinicamente saudáveis. Foram analisadas a expressão de gal-1 e gal-3 em 30 fragmentos de melanoma canino, seis fragmentos de melanocitoma e nove fragmentos de linfonodos metastáticos. Foi realizada a dosagem sérica de gal-3 em 30 cães com melanoma e comparada a 10 cães clinicamente saudáveis. O melanoma canino expressou gal-1 principalmente no citoplasma e expressou um padrão variável de gal-3 no citoplasma e no núcleo. Em relação à expressão de gal-3 observou-se que conforme a agressividade do melanoma houve diminuição da frequência de células com marcação citoplasmática e um aumento da intensidade de marcação nuclear com concomitante diminuição da frequência de células com marcação nuclear. Os cães com melanoma apresentaram aumento dos níveis séricos de gal-3 antes da exérese da neoplasia quando comparados aos animais clinicamente saudáveis, mostrando o seu potencial uso como biomarcador do melanoma.

Canine melanoma is a frequent neoplasm in dogs. It has a malignant, invasive and metastatic potential. In this context, studies about the involvement of galectins are justified to increase the knowledge of melanoma tumor microenvironment. Galectins are proteins of the animal lectins family, that display carbohydrate recognition domains and may be located in the nucleus, cytoplasm, cell surface, as well as secreted in various tissues. Galectin-1 (Gal-1) and galectin-3 (Gal-3) are associated with neoplastic transformation, neoplastic cell survival, angiogenesis, immune system evasion, and metastasis formation. Gal-1 is mainly related to tumor transformation and immune system evasion. Gal-3 is mainly associated with angiogenesis, development of metastasis by increased motility and adhesion between neoplastic cells and adhesion between neoplastic cells and endothelium, while contributing to the evasion of the immune system. The aim of the study was to ascertain the expression pattern of Gal-1 and Gal-3 in different severity degrees of canine melanoma, as well as to evaluate the serum concentration of Gal-3 and to compare with clinically healthy dogs. Gal-1 and Gal-3 expression was analyzed in 30 canine melanoma fragments, six melanocytoma fragments and nine fragments of metastatic lymph nodes. Serum Gal-3 was measured in 30 dogs with melanoma and compared to 10 clinically healthy dogs. Canine melanoma expressed Gal-1 primarily in the cytoplasm and presented a variable pattern of Gal-3 in the cytoplasm and nucleus. Regarding the expression of Gal-3, it was observed that according to melanoma severity, there was a decrease in the percent frequence of cells with cytoplasmic labeling and an increase in the nuclear marking intensity with concomitant decrease in the percent frequency of nuclear-labeled cells. Dogs with melanoma had increased serum levels of Gal-3 before the excision of the neoplasia when compared to the clinically healthy animals, showing its potential use as a melanoma biomarker.

"Função da galectina-1 na resistência do hospedeiro contra a infecção experimental por Neospora caninum"

Neospora caninum (Nc) é um protozoário Apicomplexa, parasita intracelular obrigatório, causador da neosporose, uma doença clínica indicada como uma das principais causas de aborto, morte neonatal e infertilidade em bovinos, representando um importante problema de saúde veterinária com grande impacto econômico no mundo todo. Galectina-1 (gal-1), uma proteína ligante de -galactosídeos, exibe diversas atividades biológicas em muitas doenças inflamatórias, mas nada foi descrito até o momento sobre a gal-1 na infecção por Nc. Este trabalho foi desenvolvido para avaliar o efeito da gal-1 (tanto endógena quanto exógena) na infecção experimental murina por N. caninum e o efeito da gal-1 exógena sobre a invasão celular de N. caninum em ensaios in vitro. Primeiramente, foram realizados ensaios para investigar a capacidade de ligação da gal-1 com taquizoítas de Nc e seu papel na invasão in vitro por Nc em diferentes modelos celulares. Nesses ensaios, gal-1 mostrou ligar-se aos taquizoítas de Nc via CRD (domínio de reconhecimento de carboidrato) de maneira dose-dependente. Tanto células VERO, quanto macrófagos e esplenócitos mostraram ser modelos eficazes para o estudo in vitro do processo de invasão e proliferação de Nc, porém, gal-1 não interfere no processo de invasão. Para os ensaios in vivo, camundongos C57BL/6 machos selvagens (WTgal-1+/+) e geneticamente deficientes de gal-1 (KOgal-1-/-) foram infectados com taquizoítas de Nc1-lacZ, por via intraperitoneal, e tratados com gal-1 exógena por 7 dias. Aos 5, 8 e 15 dias pós-infecção, foram avaliados diversos parâmetros imunológicos, como carga parasitária peritoneal e produção de óxido nítrico por células da cavidade peritoneal, perfil celular do peritônio e baço, produção de citocinas por células T, quantificação de anticorpos específicos anti-Nc e quantificação de citocinas nos sobrenadantes de cultura de células esplênicas. A ausência de galectina-1 endógena levou ao aumento da produção de óxido nítrico (NO), da população de macrófagos F4/80+ peritoneais e da secreção de IL-6. Porém, essa deficiência de gal-1 levou à redução da população de linfócitos T (CD4+ e CD8+) produtores de IFN- , diminuição da ativação de linfócitos B e da secreção de IFN- e IL-10. Com relação aos camundongos WTgal-1+/+, foi destacada a contribuição da gal-1 exógena para estimular a produção de NO, promover o aumento do número de células F4/80+, induzir a secreção de IFN- , IL-10, IL-4 e IL-6, além de aumentar a produção de IgG e IgM. Em animais KOgal-1-/-, em contrapartida, foi observado um efeito imunorregulatório dessa galectina exógena sobre a resposta à infecção, caracterizado pelo aumento da carga parasitária peritoneal e diminuição da população de macrófagos (F4/80+) produção de NO na cavidade peritoneal. Além disso, e em conformidade com o perfil regulatório da resposta, foi possível observar a diminuição da população de linfócitos TCD8+ produtores de IFN- e aumento das células T (CD4+ e CD8+) produtoras de IL-10 nos animais infectados e tratados, que corroborou com a secreção destas citocinas por células esplênicas. Com base nestes resultados, sugerimos que a gal-1 endógena medeia perfis imunológicos da resposta do hospedeiro, inibindo mecanismos efetores da resposta inata e estimulando a resposta adaptativa contra o parasita N. caninum e que a suplementação com gal-1 exógena gera uma imunorregulação na reposta do hospedeiro contra o parasita N. caninum. Nosso trabalho é pioneiro no estudo da interação da gal-1 na infecção com Nc e, embora seja um investigação inicial dos mecanismos imunológicos envolvidos nesse processo, sugere uma ação da gal-1 na modulação da resposta imunológica contra N. caninum.

Neospora caninum (Nc) is an apicomplexa protozoan, an obligate intracellular parasite that causes neosporosis, a clinical disease indicated as one of the main causes of abortion, neonatal death and infertility in cattle, representing an important veterinary health problem with great economic impact worldwide. Galectin-1 (gal-1), a -galactosidase binding protein, exhibits several biological activities in many inflammatory diseases. This work was aimed to evaluating the effect of gal-1 (both endogenous and exogenous) on N. caninum infection and the effect of exogenous gal-1 on the in vitro cellular invasion of N. caninum. Firstly, assays were developed to investigate the binding capacity of gal-1 with Nc tachyzoites and the role of this lectin in in vitro invasion process by Nc. Different cell models were used and VERO cells, macrophages and splenocytes proved to be effective models for the study of the Nc invasion and proliferation process. However, although galectin-1 has the ability to bind to Nc via CRD in a dose-dependent manner, this lectin does not interfere with the invasion process. For the in vivo assays, wild-type (WTgal-1+/+) and genetically deficient gal-1 mice (KOgal-1-/-) were intraperitoneally infected with Nc1-lacZ tachyzoites and treated with gal-1 for 7 days. At 5, 8 and 15 days post infection, various immunological parameters were evaluated, such as peritoneal parasite load and nitric oxide production by peritoneal cells, peritoneal and spleen cell profile, cytokine production by T cells, quantification of specific anti-Nc and quantification of cytokines in splenic cell culture supernatants. The absence of endogenous galectin-1 led to increased nitric oxide, peritoneal F4/80+ macrophage population and IL-6 secretion. However, gal-1 deficiency decreased the population of T cells (CD4+ and CD8+) producing IFN-, the B lymphocyte activation and the secretion of IFN- and IL-10. With respect to WTgal-1+/+ mice, we can highlight a contribution of exogenous gal-1 to stimulating NO production, promoting the increase of F4/80+ cells, inducing the secretion of IFN-, IL-10, IL-4 and IL-6, in addition to increasing the production of IgG and IgM. In contrast, an immunoregulatory effect of this galectin in response to infection was observed in the KOgal-1-/- animals. It was observed an increased peritoneal parasite burden, decreased macrophage (F4/80+) population and NO production by these cells in the peritoneal cavity. In addition, in agreement with the regulatory profile of the response, it was observed a decrease of the CD8+ T cells population producing IFN- and increased T cells (CD4+ and CD8+) producing IL-10, which corroborated with the secretion of these cytokines by the splenic cells. Based on these results, we suggest that endogenous gal-1 mediates immunological profiles of host response by inhibiting innate effector mechanisms and stimulating an adaptive response against N. caninum. Furthermore, exogenous gal-1 immunoregulate the host immune response against the parasite. Our work is a pioneer in studying the interaction of gal-1 in Nc infection and, although it is an initial investigation of the immunological mechanisms, our data suggests role of gal-1 in the modulation of the immune response against N. caninum.