First report of nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in German Shepherds in Southern Brazil / Primeiro relato da mutação nt230(del4) no gene MDR1 em Pastores Alemães no Sul do Brasil

The P-glycoprotein (P-gp) is a transmembrane protein encoded by the MDR1 gene that functions as a biological barrier by extruding toxins and xenobiotics out of cells. The MDR1 gene can carry a mutation called nt230(del4), which is a deletion of four base pairs resulting in the formation of a non-functional protein that may predispose to severe toxicosis, as observed in dogs with sensitivity to ivermectin. Several breeds have been described as carriers of the mutation, including German Shepherds (GS). However, the presence of the mutant allele in this breed has not been described in Brazil. This study aimed to determine the genotypic and allelic frequency of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS from Southern Brazil. Blood samples were collected from 79 GS in the state of Rio Grande do Sul and genotype for the MDR1 gene was performed. Seventy-eight (98.7%) dogs were dominant homozygous genotype (wild) and one (1.3%) was heterozygous. This study showed that there is a low frequency (0.6%) of the mutant allele while the frequency of the wild allele is high (99.4%) in this specific population. This is the first report of the presence of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS in Brazil. This information is important for breeders to prevent dissemination of the mutant allele in the national breeding population and international exchange of animals for breeding; for owners and veterinarians to be aware when dispensing and administering medications for GS dogs in Brazil.(

A Glicoproteína-P é uma proteína transmembrana codificada pelo gene MDR1 que atua como uma barreira fisiológica através da extrusão de toxinas e xenobióticos para fora das células. O gene MDR1 pode carregar uma mutação chamada nt230(del4) que é uma deleção de quatro pares de bases, resultando na formação de uma proteína não-funcional que pode predispor à toxicoses graves, como as observadas em cães sensíveis à ivermectina. Diversas raças de cães foram descritas como portadoras da mutação nt230(del4), incluindo Pastores Alemães (PA). Entretanto, a presença do alelo mutante nessa raça não foi descrita em cães no Brasil. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência genotípica e alélica da mutação nt230(del4) em PA no sul do Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 79 PA no estado do Rio Grande do Sul e o genótipo dos cães para o gene MDR1 realizado. Setenta e oito (98.7%) cães foram homozigotos dominantes (selvagem) e um (1.3%) tinha genótipo heterozigoto. A frequência do alelo mutante foi baixa (0.6%), enquanto a frequência do alelo selvagem foi alta (99.4%) nesta população. Este é o primeiro relato da presença desta mutação nt230(del4) no gene MDR1 em PA no Brasil. Esta informação é importante para criadores a fim de prevenir a disseminação do alelo mutante na população de criadores da raça no Brasil e programas internacionais de troca de animais para criação, para tutores e veterinários estarem conscientes quando prescreverem e administrarem medicações para cães PA no Brasil.

First report of nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in German Shepherds in Southern Brazil / Primeiro relato da mutação nt230(del4) no gene MDR1 em Pastores Alemães no Sul do Brasil

ABSTRACT: The P-glycoprotein (P-gp) is a transmembrane protein encoded by the MDR1 gene that functions as a biological barrier by extruding toxins and xenobiotics out of cells. The MDR1 gene can carry a mutation called nt230(del4), which is a deletion of four base pairs resulting in the formation of a non-functional protein that may predispose to severe toxicosis, as observed in dogs with sensitivity to ivermectin. Several breeds have been described as carriers of the mutation, including German Shepherds (GS). However, the presence of the mutant allele in this breed has not been described in Brazil. This study aimed to determine the genotypic and allelic frequency of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS from Southern Brazil. Blood samples were collected from 79 GS in the state of Rio Grande do Sul and genotype for the MDR1 gene was performed. Seventy-eight (98.7%) dogs were dominant homozygous genotype (wild) and one (1.3%) was heterozygous. This study showed that there is a low frequency (0.6%) of the mutant allele while the frequency of the wild allele is high (99.4%) in this specific population. This is the first report of the presence of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS in Brazil. This information is important for breeders to prevent dissemination of the mutant allele in the national breeding population and international exchange of animals for breeding; for owners and veterinarians to be aware when dispensing and administering medications for GS dogs in Brazil.

RESUMO: A Glicoproteína-P é uma proteína transmembrana codificada pelo gene MDR1 que atua como uma barreira fisiológica através da extrusão de toxinas e xenobióticos para fora das células. O gene MDR1 pode carregar uma mutação chamada nt230(del4) que é uma deleção de quatro pares de bases, resultando na formação de uma proteína não-funcional que pode predispor à toxicoses graves, como as observadas em cães sensíveis à ivermectina. Diversas raças de cães foram descritas como portadoras da mutação nt230(del4), incluindo Pastores Alemães (PA). Entretanto, a presença do alelo mutante nessa raça não foi descrita em cães no Brasil. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência genotípica e alélica da mutação nt230(del4) em PA no sul do Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 79 PA no estado do Rio Grande do Sul e o genótipo dos cães para o gene MDR1 realizado. Setenta e oito (98.7%) cães foram homozigotos dominantes (selvagem) e um (1.3%) tinha genótipo heterozigoto. A frequência do alelo mutante foi baixa (0.6%), enquanto a frequência do alelo selvagem foi alta (99.4%) nesta população. Este é o primeiro relato da presença desta mutação nt230(del4) no gene MDR1 em PA no Brasil. Esta informação é importante para criadores a fim de prevenir a disseminação do alelo mutante na população de criadores da raça no Brasil e programas internacionais de troca de animais para criação, para tutores e veterinários estarem conscientes quando prescreverem e administrarem medicações para cães PA no Brasil.

First report of nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in German Shepherds in Southern Brazil / Primeiro relato da mutação nt230(del4) no gene MDR1 em Pastores Alemães no Sul do Brasil

The P-glycoprotein (P-gp) is a transmembrane protein encoded by the MDR1 gene that functions as a biological barrier by extruding toxins and xenobiotics out of cells. The MDR1 gene can carry a mutation called nt230(del4), which is a deletion of four base pairs resulting in the formation of a non-functional protein that may predispose to severe toxicosis, as observed in dogs with sensitivity to ivermectin. Several breeds have been described as carriers of the mutation, including German Shepherds (GS). However, the presence of the mutant allele in this breed has not been described in Brazil. This study aimed to determine the genotypic and allelic frequency of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS from Southern Brazil. Blood samples were collected from 79 GS in the state of Rio Grande do Sul and genotype for the MDR1 gene was performed. Seventy-eight (98.7%) dogs were dominant homozygous genotype (wild) and one (1.3%) was heterozygous. This study showed that there is a low frequency (0.6%) of the mutant allele while the frequency of the wild allele is high (99.4%) in this specific population. This is the first report of the presence of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS in Brazil. This information is important for breeders to prevent dissemination of the mutant allele in the national breeding population and international exchange of animals for breeding; for owners and veterinarians to be aware when dispensing and administering medications for GS dogs in Brazil.((AU)

A Glicoproteína-P é uma proteína transmembrana codificada pelo gene MDR1 que atua como uma barreira fisiológica através da extrusão de toxinas e xenobióticos para fora das células. O gene MDR1 pode carregar uma mutação chamada nt230(del4) que é uma deleção de quatro pares de bases, resultando na formação de uma proteína não-funcional que pode predispor à toxicoses graves, como as observadas em cães sensíveis à ivermectina. Diversas raças de cães foram descritas como portadoras da mutação nt230(del4), incluindo Pastores Alemães (PA). Entretanto, a presença do alelo mutante nessa raça não foi descrita em cães no Brasil. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência genotípica e alélica da mutação nt230(del4) em PA no sul do Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 79 PA no estado do Rio Grande do Sul e o genótipo dos cães para o gene MDR1 realizado. Setenta e oito (98.7%) cães foram homozigotos dominantes (selvagem) e um (1.3%) tinha genótipo heterozigoto. A frequência do alelo mutante foi baixa (0.6%), enquanto a frequência do alelo selvagem foi alta (99.4%) nesta população. Este é o primeiro relato da presença desta mutação nt230(del4) no gene MDR1 em PA no Brasil. Esta informação é importante para criadores a fim de prevenir a disseminação do alelo mutante na população de criadores da raça no Brasil e programas internacionais de troca de animais para criação, para tutores e veterinários estarem conscientes quando prescreverem e administrarem medicações para cães PA no Brasil.(AU)

Prevalence and molecular characterization of Cryptosporidium spp. in Père Davids deer (Elaphurus davidianus) in Jiangsu, China / Prevalência e caracterização molecular de Cryptosporidium spp. no cervo de Père David (Elaphurus davidianus) em Jiangsu, China

Cryptosporidium is a zoonotic parasite that causes diarrhea in a broad range of animals, including deer. Little is known about the prevalence and genotype of Cryptosporidium spp. in Père Davids deer. In this study, 137 fecal samples from Père Davids deer were collected between July 2017 and August 2018 in the Dafeng Reserve and analyzed for Cryptosporidium spp. by nested-PCR based on the small subunit ribosomal RNA (SSU rRNA) gene, followed by sequence analyses to determine the species. The 60 kDa glycoprotein (gp60) gene was used to characterize Cryptosporidium spp. Among 137 samples, 2 (1.46%) were positive for Cryptosporidium spp. according to SSU rRNA gene sequencing results. Both samples belonged to the Cryptosporidium deer genotype, with two nucleotide deletions and one nucleotide substitution. The prevalence data and molecular characterization of this study provide basic knowledge for controlling and preventing Cryptosporidium infections in Père Davids deer in this area.(AU)

Cryptosporidium é um parasita zoonótico que causa diarreia em uma ampla gama de animais, incluindo veados. Pouco se sabe sobre a prevalência e o genótipo de Cryptosporidium spp. no cervo de Père David. Neste estudo, 137 amostras fecais do cervo de Père David foram coletadas entre julho de 2017 e agosto de 2018, na Reserva Dafeng, e analisadas para Cryptosporidium spp. por nested-PCR baseado no gene do RNA ribossômico da subunidade pequena (SSU rRNA), seguido de análises de sequências para determinar as espécies. O gene da glicoproteína de 60 kDa (gp60) foi utilizado para caracterizar Cryptosporidium spp. Dentre as 137 amostras, 2 (1,46%) foram positivas para Cryptosporidium spp. de acordo com os resultados do sequenciamento gênico de SSU rRNA. Ambas as amostras pertenciam ao genótipo do cervo Cryptosporidium, com duas deleções nucleotídicas e uma substituição nucleotídica. Os dados de prevalência e a caracterização molecular deste estudo fornecem conhecimentos básicos para controlar e prevenir infecções por Cryptosporidium nos cervos de Père David nessa.(AU)

Serum concentrations of acute phase proteins in goats and ewes with naturally acquired Staphylococcus aureus mastitis / Concentração de proteínas de fase aguda em cabras e ovelhas com mastite de ocorrência natural causada por Staphylococcus aureus

Serum protein concentrations, including acute phase proteins (APPs), of goats and ewes with naturally acquired Sthaphylococcus aureus mastitis were determined by means of SDS-PAGE electrophoresis to evaluate the relevance of these APPs as biomarkers of the disease in these species. Fifteen healthy goats and 5 goats with naturally acquired staphylococci mastitis, as well as fifteen healthy ewes and 5 ewes with staphylococci mastitis were submitted to daily blood sampling during 7 days. In goats, an increase of 570%, 125%, 621%, and 279% in serum concentrations of ceruloplasmin, fibrinogen, haptoglobin and α1-acid glycoprotein, respectively, was observed. In sheep the increase in serum concentrations of ceruloplasmin, fibrinogen, haptoglobin and α1-acid glycoprotein was of 337%, 90%, 461%, and 225%, respectively. Our results indicate that these APPs have considerable potencial as early and sensible biomarkers of mastitis caused by S. aureus in goats and sheep.(AU)

O proteinograma, incluindo proteínas de fase aguda (PFAs), de cabras e ovelhas com mastite de origem natural causada por Staphylococcus aureus, foi determinado por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) a fim de avaliar a importância destas PFAs como biomarcadores da enfermidade nestas espécies. Amostras de sangue foram colhidas diariamente de cinco cabras e cinco ovelhas com mastite estafilocócica naturalmente adquirida, bem como de quinze cabras e quinzes ovelhas saudáveis durante 6 dias consecutivos. Nas fêmeas caprinas, foi verificado aumento dos teores séricos de ceruloplasmina (570%), fibrinogênio (125%), haptoglobina (621%), e α1-glicoproteína ácida (279%). Nas fêmeas ovinas as concentrações de ceruloplasmina, fibrinogênio, haptoglobina e α1-glicoproteína ácida elevaram-se em 337%, 90,9%, 461% e 225%, respectivamente. Os resultados permitem inferir que estas PFAs são marcadores sensíveis e precoces de mastite causada por S. aureus em cabras e ovelhas.(AU)

Evaluation of recombinant Cryptosporidium hominis GP60 protein and anti-GP60 chicken polyclonal IgY for research and diagnostic purposes / Avaliação da proteína recombinante GP60 de Cryptosporidium hominis e da IgY policlonal anti-GP60 recombinante para uso em pesquisa e diagnóstico

In this study, a method for expressing Cryptosporidium hominis GP60 glycoprotein in Escherichia coli for production of polyclonal anti-GP60 IgY in chickens was developed aiming future studies concerning the diagnosis, prevention and treatment of cryptosporidiosis. The full-length nucleotide sequence of the C. hominis gp60 gene was codon-optimized for expression in E. coli and was synthesized in pET28-a vector. Subcloning was performed on several different strains of BL21 E. coli. Temperature, time and inducer IPTG concentration assays were also performed and analyzed using SDS-PAGE. The optimal conditions were observed at a temperature of 37 °C, with overnight incubation and 1 mM of IPTG. Purification was performed by means of affinity chromatography using the AKTA Pure chromatography system and the Hi-Trap HP column (GE Healthcare). The recombinant protein GP60 (rGP60) thus generated was used to immunize laying hens owing the production of polyclonal IgY. Western blot and indirect immunofluorescence showed that the polyclonal antibody was capable of binding to rGP60 and to Cryptosporidium parvum sporozoites, respectively. The rGP60 and the IgY anti-rGP60 generated in this study may be used as templates for research and for the development of diagnostic methods for cryptosporidiosis.(AU)

Neste trabalho, foi desenvolvido um método de expressão da glicoproteína GP60 de Cryptosporidium hominis em Escherichia coli visando produzir anticorpos IgY anti-GP60 em galinhas para utilização em estudos futuros com os objetivos de diagnóstico, prevenção e tratamento da criptosporidiose. A sequência completa de nucleotídeos do gene gp60 de C. hominis foi códon-otimizada para expressão em E. coli e sintetizada no vetor pET28-a. A subclonagem foi realizada em várias estirpes diferentes de E. coli BL21. Os ensaios de concentração do indutor IPTG, temperatura e tempo foram realizados e analisados por SDS-PAGE. As condições ótimas de expressão foram observadas em temperatura de 37 °C, incubação durante a noite e 1 mM de IPTG. A purificação da proteína foi realizada por cromatografia de afinidade utilizando o sistema de cromatografia AKTA Pure e a coluna Hi-Trap HP (GE Healthcare). A proteína recombinante GP60 (rGP60) foi utilizada para imunizar galinhas poedeiras para produzir IgY policlonal anti-rGP60. Verificou-se por Western blot e por imunofluorescência indireta que o anticorpo policlonal apresentou reatividade com a rGP60 e com esporozoítos de Cryptosporidium parvum, respectivamente. A rGP60 e a IgY anti-rGP60 geradas neste estudo podem ser utilizadas como modelos para o desenvolvimento de ensaios para pesquisa e diagnóstico da criptosporidiose.(AU)

Serum concentrations of acute phase proteins in goats and ewes with naturally acquired Staphylococcus aureus mastitis / Concentração de proteínas de fase aguda em cabras e ovelhas com mastite de ocorrência natural causada por Staphylococcus aureus

Serum protein concentrations, including acute phase proteins (APPs), of goats and ewes with naturally acquired Sthaphylococcus aureus mastitis were determined by means of SDS-PAGE electrophoresis to evaluate the relevance of these APPs as biomarkers of the disease in these species. Fifteen healthy goats and 5 goats with naturally acquired staphylococci mastitis, as well as fifteen healthy ewes and 5 ewes with staphylococci mastitis were submitted to daily blood sampling during 7 days. In goats, an increase of 570%, 125%, 621%, and 279% in serum concentrations of ceruloplasmin, fibrinogen, haptoglobin and α1-acid glycoprotein, respectively, was observed. In sheep the increase in serum concentrations of ceruloplasmin, fibrinogen, haptoglobin and α1-acid glycoprotein was of 337%, 90%, 461%, and 225%, respectively. Our results indicate that these APPs have considerable potencial as early and sensible biomarkers of mastitis caused by S. aureus in goats and sheep.(AU)

O proteinograma, incluindo proteínas de fase aguda (PFAs), de cabras e ovelhas com mastite de origem natural causada por Staphylococcus aureus, foi determinado por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) a fim de avaliar a importância destas PFAs como biomarcadores da enfermidade nestas espécies. Amostras de sangue foram colhidas diariamente de cinco cabras e cinco ovelhas com mastite estafilocócica naturalmente adquirida, bem como de quinze cabras e quinzes ovelhas saudáveis durante 6 dias consecutivos. Nas fêmeas caprinas, foi verificado aumento dos teores séricos de ceruloplasmina (570%), fibrinogênio (125%), haptoglobina (621%), e α1-glicoproteína ácida (279%). Nas fêmeas ovinas as concentrações de ceruloplasmina, fibrinogênio, haptoglobina e α1-glicoproteína ácida elevaram-se em 337%, 90,9%, 461% e 225%, respectivamente. Os resultados permitem inferir que estas PFAs são marcadores sensíveis e precoces de mastite causada por S. aureus em cabras e ovelhas.(AU)

Proteinograma sérico de éguas com placentite ascendente e seus respectivos neonatos: dados preliminares / Serum protein concentrationin mares with ascending placentitis and their newborns: preliminary data

Este estudo teve por objetivo estabelecer o proteinograma sérico em éguas com placentite induzida e em seus respectivos neonatos. Foram coletadas amostras de sangue das éguas em oito momentos diferentes e dos potros em quatro momentos. Para obtenção da concentração das frações proteicas, utilizou-se eletroforese em gel de acrilaminada contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). No método utilizado, foram observadas 23 bandas proteicas, cujos pesos moleculares variaram de 16KDa a 245KDa, sendo possível a identificação das seguintes frações: 175KDa, 102KDa, 83KDa, 63KDa, 50KDa, 41KDa, 39KDa e 28KDa. De todas as bandas proteicas encontradas, somente as de 39KDa e 41KDa apresentaram alteração na cinética nos momentos avaliados. De acordo com a solução marcadora, pode-se sugerir que essas proteínas seriam alfa1-glicoproteína ácida (39KDa) e haptoglobina (41KDa). A concentração de imunoglobulinas nos potros apresentou aumento significativo a partir das 12 horas de nascimento. Não está elucidado se estes níveis refletem a persistência do processo inflamatório placentário ou se são alterações fisiológicas do periparto. Não foram observadas alterações na cinética das proteínas nos potros nas primeiras 48 horas.(AU)

The aim of this paper was to identify the serum acute phase protein concentration in mares with induced placentitis and their neonates. Blood samples were collected from the mares in 8 different moments, and from the foals, in 4 moments. To obtain the concentration of protein fractions acrilaminada gel electrophoresis in sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) was used. In the used method 23 protein bands whose molecular weights ranged from 16kDa to 245kDa were observed, it is possible to identify the following fractions: 175kDa, 102kDa, 83kDa, 63kDa, 50kDa, 41kDa, 39kDa and 28kDa. Of all the protein bands found only the 39KDa and 41KDa have changes in the kinetics in the evaluated times. According to the marker solution, we would suggest that these proteins are alfa1-acid glycoprotein (39kDa) and haptoglobin (41kDa). The concentration of immunoglobulins in foals increased significantly from 12 hours of birth.(AU)

Proteinograma sérico de éguas com placentite ascendente e seus respectivos neonatos: dados preliminares / Serum protein concentrationin mares with ascending placentitis and their newborns: preliminary data

Este estudo teve por objetivo estabelecer o proteinograma sérico em éguas com placentite induzida e em seus respectivos neonatos. Foram coletadas amostras de sangue das éguas em oito momentos diferentes e dos potros em quatro momentos. Para obtenção da concentração das frações proteicas, utilizou-se eletroforese em gel de acrilaminada contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). No método utilizado, foram observadas 23 bandas proteicas, cujos pesos moleculares variaram de 16KDa a 245KDa, sendo possível a identificação das seguintes frações: 175KDa, 102KDa, 83KDa, 63KDa, 50KDa, 41KDa, 39KDa e 28KDa. De todas as bandas proteicas encontradas, somente as de 39KDa e 41KDa apresentaram alteração na cinética nos momentos avaliados. De acordo com a solução marcadora, pode-se sugerir que essas proteínas seriam alfa1-glicoproteína ácida (39KDa) e haptoglobina (41KDa). A concentração de imunoglobulinas nos potros apresentou aumento significativo a partir das 12 horas de nascimento. Não está elucidado se estes níveis refletem a persistência do processo inflamatório placentário ou se são alterações fisiológicas do periparto. Não foram observadas alterações na cinética das proteínas nos potros nas primeiras 48 horas.(AU)

The aim of this paper was to identify the serum acute phase protein concentration in mares with induced placentitis and their neonates. Blood samples were collected from the mares in 8 different moments, and from the foals, in 4 moments. To obtain the concentration of protein fractions acrilaminada gel electrophoresis in sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) was used. In the used method 23 protein bands whose molecular weights ranged from 16kDa to 245kDa were observed, it is possible to identify the following fractions: 175kDa, 102kDa, 83kDa, 63kDa, 50kDa, 41kDa, 39kDa and 28kDa. Of all the protein bands found only the 39KDa and 41KDa have changes in the kinetics in the evaluated times. According to the marker solution, we would suggest that these proteins are alfa1-acid glycoprotein (39kDa) and haptoglobin (41kDa). The concentration of immunoglobulins in foals increased significantly from 12 hours of birth.(AU)

Molecular epidemiology of rabies virus isolated of herbivores from Brazilian Amazon / Epidemiologia molecular de vírus da raiva isolados de herbívoros procedentes da Amazônia brasileira

Rabies virus samples (n = 17) A1 to A3 exhibit a similar composition and geographic distribution. Diverse composition of remaining groups of N and G gene is attributable to different sequences used in the alignments for each genomic region. Glycoprotein amino acid sequence showed molecular markers in sub-lineages A2, A3, A4 and A7. This information provides a better comprehension of molecular epidemiology of rabies, starting with the knowledge of viral lineages circulating in the Brazilian Amazon.(AU)

Amostras do vírus da raiva (n = 17) isoladas de bovinos (n = 11), equinos (n = 4) e bubalinos (n = 2) procedentes do Pará (n = 7), Tocantins (n = 6) e Rondônia (n = 4) foram submetidas à técnica de RT-PCR para amplificação parcial dos genes da Nucleoproteína (N) e Glicoproteína (G). As sequências nucleotídicas obtidas foram analisadas pelo método de reconstrução filogenética Neighbor-Joining com o modelo evolutivo Kimura 2-parâmetros. Todas as 17 amostras pertenceram ao cluster A, que se encontrou na linhagem associado com morcego hematófago Desmodus rotundus. A análise filogenética baseada nos genes N e G, sugere a presença de cinco sublinhagens (A1-A5) e sete sublinhagens (A1-A7), respectivamente. Quando se compara ambas as filogenias, as sublinhagens A1 até A3 mostram composição e distribuição geográfica concordante, já a diversidade observada na composição das sublinhagens restantes é atribuída ao uso de sequências de diferentes alinhamentos. A glicoproteína mostrou marcadores moleculares nas sublinhagens A2, A3, A4 e A7, o que fornece elementos para melhor compreensão da epidemiologia molecular da raiva das linhagens circulantes na Amazônia Brasileira.(AU)

AVALIAÇÃO CITOTÓXICA DA MAMMEA A/BB EM LINHAGENS DE CÉLULAS DE GLIOMA

COSTA, I. B. Avaliação citotoxica da mammea A/BB em linhagens de células de glioma. 2019. 80 p. Dissertação (Mestre em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Salvador, 2019. O glioblastoma é a forma mais agressiva dentre os gliomas os recursos terapêuticos disponíveis são limitados e envolvem ressecção cirúrgica, radioterapia e quimioterapia. Nesse ínterim, a busca por alternativas farmacológicas mais eficazes e menos agressivas coloca a mammea A/BB em análise. Esse metabólito vegetal é encontrado na casca das raízes da família botânica Calophyllaceae, do gênero Kielmeyera. Objetiva-se a partir da realização deste estudo avaliar o potencial citotóxico da mammea A/BB em células de glioblastoma humano U251 e de glioma de rato C6. A ação farmacológica da mammea A/BB foi testada em ambas linhagens, por meio dos ensaios de viabilidade celular por MTT, teste de migração, quantificação de cariopicnose e da expressão de glicoproteína-p. Analisou-se também o efeito da droga em células normais astrocitárias de rato e uma comparação da viabilidade celular entre a droga teste e o quimioterápico de primeira linha, a temozolomida. Os experimentos desenvolvidos indicaram que as linhagens U251 e C6 apresentaram, em todas as amostras analisadas, uma sensibilidade concentração dependente à mammea A/BB e resistência à temozolomida no intervalo de concentração de 2 M a 200 M. As concentrações de 27 ± 2,31M e 56,85 ± 14,17 M da mammea A/BB foram capazes de inibir a população celular em 50% nas linhagens U251 e C6, respectivamente, bem como o potencial migratório das referidas linhagens. A droga teste não apresenta ação citotóxica em células astrocitárias de rato. Foram encontrados núcleos picnóticos em maior quantidade no tratamento com a mammea A/BB quando comparado com as condições controle e DMSO. A mammea A/BB não apresentou diferença significativa na indução da expressão da glicoproteína P. Os resultados obtidos indicam uma ação farmacológica potencial na indução da citotoxicidade da droga nas tipologias celulares tumorais e não citotóxica nas células normais avaliadas.

COSTA, I. B. Cytotoxic evaluation of the mammea A/BB to glioma cells. 2019. 80 p. MSc Thesis (Mestre em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Salvador, 2019. Glioblastoma is the most aggressive form of gliomas and the available therapeutic resources are limited and involve surgical resection, radiotherapy and chemotherapy. The search for more effective and less aggressive pharmacological alternatives places mammea A/BB under analysis. This plant metabolite is found in the bark of roots of the botanical family Calophyllaceae, of the genus Kielmeyera. The objective of this study was to evaluate the cytotoxic potential of mammea A/BB in human glioblastoma U251 and C6 rat glioma cells. The pharmacological action of mammea A/BB was tested in both strains by cell viability assays by MTT, migration test, cariopnosis quantification and p-glycoprotein expression.The effect of the drug on normal murine astrocytic cells and a comparison of cell viability between the test drug and the first-line chemotherapy, temozolomide, were also analyzed. The experiments showed that the U251 and C6 cell lines had a concentration dependent sensitivity to mammae A/BB and resistance to temozolomide in the concentration range of 2 M to 200 M in all the analyzed samples. The concentrations of 27 ± 2.31 M and 56.85 ± 14.17 M of mammea A/BB were able to inhibit the cell population in 50% in the lines U251 and C6, respectively, as well as the migratory potential of these lines. The test drug shows no cytotoxic action on murine astrocyte cells. Pinocytic nuclei were found in greater quantity in the treatment with mammea A/BB when compared to the control and DMSO conditions. Mammea A/BB showed no significant difference in the induction of P-glycoprotein expression. The results indicate a potential pharmacological action in the induction of cytotoxicity of the drug in tumor cell types and non-cytotoxic in the normal cells evaluated.

P-glycoprotein and MRP1 expression in tissues from dogs with visceral leishmaniasis / Expressão da glicoproteína-P e MRP1 em tecidos de cães com leishmaniose visceral

P-Glycoprotein (P-gp) and multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) are efflux pumps responsible for the MDR phenotype (multidrug resistance). In this work, we will investigate the immunohistochemical expression of P-gp and MRP1 in 24 tissue samples from dogs with Leishmania infantum (syn. L. chagasi) and evaluate whether canine visceral leishmaniasis (CVL) induces MDR in dogs. The expectation is that the results obtained from this research may offer prospects for a safer and more effective therapeutic approach for this disease. Findings illustrated that the expression of P-gp in CVL affected tissue samples (p<0.05) was greater than those of the control group, with the exception of skin tissue samples which did not differ. However, only the adrenal gland samples affected by LVC expressed significantly more MRP1 (p<0.05) than the control group. The expressions of P-gp and MRP1 were lower (p<0.05) in LVC positive spleen and skin samples in comparison with other tissues. These results suggest that the lack of a parasitological cure could be due to the high expression of P-gp and MRP1 in the liver, adrenal glands, and kidneys, which block the action of parasitacidal drugs recommended in treatment.

Glicoproteína-P (gp-P) e proteína de resistência a múltiplas drogas (MRP1) são bombas de efluxo responsáveis pelo fenótipo MDR (resistência a múltiplas drogas). Neste trabalho, investigamos a expressão por imuno-histoquímica da gp-P e MRP1 em amostras de tecidos de 24 cães com Leishmania infantum (syn. L. chagasi), e avaliamos se a leishmaniose visceral canina (LVC) induz a MDR em cães, tendo a expectativa de que os resultados obtidos possam oferecer perspectivas de uma abordagem terapêutica mais segura e eficaz nesta doença. Os resultados mostraram que a expressão da gp-P nas amostras de cães com LVC foi maior (p<0,05) em todos os tecidos em comparação ao grupo controle, com exceção da pele, que não diferiu. Entretanto, apenas as glândulas adrenais nas amostras LVC, em comparação as controle, expressaram significativamente mais MRP1 (p<0,05). As expressões de gp-P e MRP1 foram menores (p<0,05) no baço e pele das amostras LVC positivas, em comparação aos demais tecidos. Os resultados sugerem que a falha da cura parasitológica poderia ser devido à alta expressão da gp-P e MRP1 no fígado, adrenal e rins, por impedir a ação parasiticida dos fármacos recomendados no tratamento.

Phylogenetic analysis of rabies virus isolated from herbivores in Minas Gerais and São Paulo border (2000-2009), Brazil / Análise filogenética de isolados do vírus da raiva de herbívoros na fronteira de Minas Gerais e São Paulo (2000-2009), Brasil

Rabies transmitted by the hematophagous bat Desmodus rotundus represents a public health concern and a burden for the Brazilian livestock industry. Current evidence suggests that rabies occurrence is related to landscape characteristics, topography, hydrography, animal production systems and land use. However, a few studies have analyzed the possible connections among geographic factors and the molecular diversity of the rabies virus, furthering the understanding of the spatial and temporal dynamics of outbreaks. A study reported that the latest rabies epizootics in herbivores reported in the eastern region of São Paulo (close to the Minas Gerais border) occurred in two epidemic waves; the first was before 1998, and the other occurred after 1999. Using this evidence, the aim of the present study was to analyze cases of rabies in herbivores in the southern region of Minas Gerais (2000-2009) and their possible relationship with the aforementioned epidemics, considering the geographic characteristics of the region. Partial sequences of glycoprotein (539 nt) and nucleoprotein genes (414 nt) were obtained from 31 rabies virus isolates from herbivores. A phylogenetic tree was proposed for each genomic region using the Neighbor joining method, fixing the Kimura 2-parameter evolution model with a bootstrap level of 1,000 replications. Genetic sublineages were plotted on maps, considering rabies risk areas for herbivores in São Paulo, as well as topographic characteristics and hydrographic basins, to visualize any apparent distribution pattern influenced by those features. The phylogenetic trees had concordant topologies, suggesting a possible common origin for rabies outbreaks in herbivores along the SP/MG border, surrounding the less elevated portions of the Serra da Mantiqueira and along the hydrographic basins of Piracicaba/Jaguarí, Paranaíba do Sul, Grande, Pardo and Mogi-Guaçu rivers.The co-circulation of several viral lineages was observed in some municipalities, possibly due to an overlapping of rabies outbreaks. Inferred protein sequences of both genes showed synonymous mutations, except among residues 20 to 200, corresponding to the external domain of the glycoprotein. This information prompted cooperation among the animal health services of both states to reinforce rabies control in the border area.(AU)

A raiva transmitida por morcegos hematófagos da espécie Desmodus rotundus representa uma preocupação de saúde pública e causa de importantes prejuízos para a pecuária brasileira. A evidência atual sugere que a ocorrência de raiva está relacionada às características da paisagem, topografia, hidrografia, sistemas de produção animal e usos da terra. Contudo, existem poucos estudos que analisem as possíveis conexões entre fatores geográficos e a diversidade molecular do vírus da raiva, permitindo a compreensão da dinâmica espacial e temporal dos focos de raiva. Um desses trabalhos estabeleceu que a última epizootia de raiva dos herbívoros registrada no leste do estado de São Paulo (na fronteira com Minas Gerais), aconteceu em duas ondas epidêmicas, sendo a primeira em 1998 e, em 1999, a segunda. Considerando esta evidência, o intuito do presente estudo foi analisar casos de raiva em herbívoros na região sudeste de Minas Gerais (2000-2009) e sua possível relação com a epidemia previamente mencionada, incluindo as características geográficas da região. Foram obtidas sequencias parciais dos genes da glicoproteína (539 nt) e da nucleoproteína (414 nt) a partir de 31 isolados de vírus da raiva procedentes de herbívoros. Foi proposta uma árvore filogenética para cada região genômica usando o método de Neighbor joining, fixando o modelo evolutivo Kimura 2 - parâmetros com um nível de bootstrap de 1000 replicações. As sublinhagens genéticas foram localizadas sobre mapas, considerando as áreas de risco para raiva dos herbívoros em São Paulo, assim como as características topográficas e bacias hidrográficas com o intuito de visualizar qualquer padrão aparente de distribuição segundo essas características. As duas árvores filogenéticas mostraram topologias concordantes, sugerindo uma possível origem comum para os surtos que aconteceram ao longo da fronteira SP/MG, ao redor das porções menos elevadas da Serra da Mantiqueira e acompanhando as bacias hidrográficas dos rios Piracicaba/Jaguarí, Paranaíba do Sul, Grande, Pardo e Mogi-Guaçu. Foi possível observar circulação de varias linhagens virais simultaneamente em alguns municípios, possivelmente por causa de sobreposição de surtos. As sequencias de proteína inferidas a partir dos dois genes mostraram mutações sinônimas, excetuando aquelas encontradas entre os resíduos 20 a 200, correspondentes ao domínio externo da glicoproteína. Esta informação salienta a importância da cooperação entre as autoridades sanitárias de ambos os estados para reforçar o programa de controle da doença nas áreas limítrofes.(AU)

P-glycoprotein and MRP1 expression in tissues from dogs with visceral leishmaniasis / Expressão da glicoproteína-P e MRP1 em tecidos de cães com leishmaniose visceral

P-Glycoprotein (P-gp) and multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) are efflux pumps responsible for the MDR phenotype (multidrug resistance). In this work, we will investigate the immunohistochemical expression of P-gp and MRP1 in 24 tissue samples from dogs with Leishmania infantum (syn. L. chagasi) and evaluate whether canine visceral leishmaniasis (CVL) induces MDR in dogs. The expectation is that the results obtained from this research may offer prospects for a safer and more effective therapeutic approach for this disease. Findings illustrated that the expression of P-gp in CVL affected tissue samples (p<0.05) was greater than those of the control group, with the exception of skin tissue samples which did not differ. However, only the adrenal gland samples affected by LVC expressed significantly more MRP1 (p<0.05) than the control group. The expressions of P-gp and MRP1 were lower (p<0.05) in LVC positive spleen and skin samples in comparison with other tissues. These results suggest that the lack of a parasitological cure could be due to the high expression of P-gp and MRP1 in the liver, adrenal glands, and kidneys, which block the action of parasitacidal drugs recommended in treatment.(AU)

Glicoproteína-P (gp-P) e proteína de resistência a múltiplas drogas (MRP1) são bombas de efluxo responsáveis pelo fenótipo MDR (resistência a múltiplas drogas). Neste trabalho, investigamos a expressão por imuno-histoquímica da gp-P e MRP1 em amostras de tecidos de 24 cães com Leishmania infantum (syn. L. chagasi), e avaliamos se a leishmaniose visceral canina (LVC) induz a MDR em cães, tendo a expectativa de que os resultados obtidos possam oferecer perspectivas de uma abordagem terapêutica mais segura e eficaz nesta doença. Os resultados mostraram que a expressão da gp-P nas amostras de cães com LVC foi maior (p<0,05) em todos os tecidos em comparação ao grupo controle, com exceção da pele, que não diferiu. Entretanto, apenas as glândulas adrenais nas amostras LVC, em comparação as controle, expressaram significativamente mais MRP1 (p<0,05). As expressões de gp-P e MRP1 foram menores (p<0,05) no baço e pele das amostras LVC positivas, em comparação aos demais tecidos. Os resultados sugerem que a falha da cura parasitológica poderia ser devido à alta expressão da gp-P e MRP1 no fígado, adrenal e rins, por impedir a ação parasiticida dos fármacos recomendados no tratamento.(AU)

PERFIL DAS PROTEÍNAS DE FASE AGUDA EM GATOS COM DOENÇA DO TRATO URINÁRIO INFERIOR OBSTRUTIVA

A doença do trato urinário inferior em felinos (DTUIF) apresenta diversos fatores etiológicos, sendo a forma obstrutiva a mais grave. As proteínas de fase aguda (PFAs) são biomarcadores utilizados para avaliar processos inflamatórios sistêmicos. A Alfa-1 Glicoproteína Ácida e o Amilóide A Sérico são PFAs positivas e major, o fibrinogênio é PFA minor e a albumina é negativa em gatos. O objetivo deste estudo é determinar as concentrações séricas das proteínas de fase aguda, Amilóide A sérico, Alfa-1 Glicoproteína Ácida, fibrinogênio e albumina e utilizá-las como biomarcadores de inflamação no monitoramento do processo inflamatório de gatos com doença do trato urinário inferior obstrutiva. Foram avaliados 25 gatos, machos, sem predileção de raça e idade, divididos em dois grupos experimentais, GC - grupo controle com oito gatos hígidos e GO - grupo obstruído com 17 gatos diagnosticados com DTUIF obstrutiva. Foram coletadas amostras para determinação das PFAs, bioquímica sérica, urinálise e UP/C nos M0, M12, M24 e M48 no GO e no GC somente no primeiro momento. As determinações das PFAs foram realizadas com os kits de ELISA para SAA, Kit Cat Serum Amyloid A Elisa (LIFE-SAA-8) e AGP, Kit Cat Alpha-1-Acid Glycoprotein Elisa (LIFE-AGP-8), ambos marca: Life Diagnostics®. No M0 houve correlações positivas de SAA, AGP e fibrinogênio com ureia e creatinina e correlação negativa de albumina com hematúria, SAA e potássio. No M48, houve correlações positivas entre SAA e AGP, AGP e ureia, fibrinogênio com ureia, creatinina, AGP e SAA. Além disso, observou-se correlação negativa de albumina com ureia e creatinina. As PFAs SAA, AGP, fibrinogênio e albumina podem ser utilizadas como biomarcadores da inflamação sistêmica e no monitoramento do tratamento clínico de gatos com doença do trato urinário inferior obstrutiva.

The Feline Lower Urinary Tract Disease (FLUTD) presents several etiologic factors, with the obstructive form representing the most severe. The acute phase proteins (APPs) are biomarkers used to evaluate systemic inflammatory processes. In cats, Alpha-1-Acid Glycoprotein and Serum Amyloid A are major positive APPs, fibrinogen is a minor APP and albumin is a negative APP. This study aims at determining the serum concentrations of acute phase proteins Serum Amyloid A, Alpha-1-Acid Glycoprotein, fibrinogen and albumin, in addition of using them as biomarkers of inflammation during the monitoring of the inflammatory processes of cats with obstructive feline lower urinary tract disease. A total of 25 male cats were recruited for the study irrespective of breed and age, and were divided into two experimental groups: the control group (CG), comprised of eight healthy cats; and the obstruction group (OG), comprised of 17 cats diagnosed with obstructive FLUTD. Samples were collected for APP analysis, serum biochemical assay, urinalysis and UP/C determination at M0, M12, M24 and M48 in the OG, and at M0 in the CG. The concentrations of the APPs were determined using commercially-available ELISA kits for SAA (Kit Cat Serum Amyloid A Elisa, LIFE-SAA-8) and AGP (Kit Cat Alpha-1-Acid Glycoprotein Elisa, LIFE-AGP-8) (Life Diagnostics®). At M0, there were positive correlations of SAA, AGP and fibrinogen with urea and creatinine, as well as negative correlations between albumin and hematuria, and SAA and potassium. At M48, there were positive correlations between SAA and AGP, AGP and urea, fibrinogen and urea, fibrinogen and creatinine, fibrinogen and AGP, and fibrinogen and SAA. In addition, there was a negative correlation of albumin with urea and creatinine. SAA, AGP, fibrinogen and albumin may be used as biomarkers of inflammatory process in cats with obstructive FLUTD, aiding in the monitoring of the treatment.

Expression of P-glycoprotein, multidrug resistance-associated protein, glutathione-S-transferase pi and p53 in canine transmissible venereal tumor / Expressão da glicoproteína-P, proteína associada à múltiplas drogas, glutationa-S-transferase pi e p53 no tumor venéreo transmissível canino

The overexpression of proteins P-glycoprotein (P-gp), multidrug resistance-associated protein (MRP1), mutant p53, and the enzyme glutathione-S-transferase (GSTpi) are related to resistance to chemotherapy in neoplasms. This study evaluated the expression of these markers by immunohistochemistry in two groups of canine TVT, without history of prior chemotherapy (TVT1, n=9) and in TVTs presented unsatisfactory clinical response to vincristine sulfate (TVT2, n=5). The percentage of specimens positively stained for P-gp, MRP1, GSTpi and p53 were, respectively 88.8%, 0%, 44.5% and 22.2% in TVT1 and 80%, 0%, 80% and 0% in TVT2. In TVT1, one specimen presented positive expression for three markers and four specimens for two markers. In TVT2, three specimens expressed P-gp and GSTpi. In conclusion, the canine TVTs studied expressed the four markers evaluated, but just P-gp and GSTpi were significantly expressed, mainly at cytoplasm and cytoplasm and nuclei, respectively, either before chemotherapy as after vincristine sulfate exposure. Future studies are needed to demonstrate the function of these two markers in conferring multidrug resistance (MDR) or predict the response to chemotherapy in canine TVT.(AU)

A superexpressão das proteínas glicoproteína-P (Gp-P), proteína associada à resistência à múltiplas drogas 1 (MRP1) e p53 mutante e a enzima glutationa-S-transferase pi (GSTpi) está relacionada com resistência à quimioterapia em neoplasias humanas e caninas. Este estudo avaliou a expressão, por meio da imuno-histoquímica desses marcadores em espécimes de TVT caninos sem histórico de quimioterapia prévia (TVT1, n=9) e em TVT caninos que apresentaram resposta clínica insatisfatória ao sulfato de vincristina (TVT2, n=5). A porcentagem de espécimes positivos para Gp-P, MRP1, GSTpi e p53 foram, respectivamente 88,8%, 0%, 44,5% e 22,2% no grupo TVT1 e 80%, 0%, 80% e 0% no grupo TVT2. No TVT1, um espécime apresentou expressão positiva para três marcadores e quatro para dois marcadores. No TVT2, três espécimes expressaram a Gp-P e GSTpi. Em conclusão, os TVTs caninos estudados expressaram os quatro marcadores avaliados, no entanto apenas a Gp-P e GSTpi foram significativamente expressas, principalmente no citoplasmas e no citoplasma e no núcleo, respectivamente, tanto antes da quimioterapia quanto após à exposição ao sulfato de vincristina. Estudos futuros são necessários para demonstrar a função desses dois marcadores em conferir resistência à multiplas drogas (RMD) ou predizer a resposta a quimioterapia no TVT canino.(AU)

Proteinograma sérico, com ênfase em proteínas de fase aguda, de bovinos sadios e bovinos portadores de enfermidade aguda de ocorrência natural / Serum proteinogram emphasizing acute phase proteins from healthy and acute naturally occurring diseased cattle

Nas últimas décadas, as proteínas de fase aguda (PFAs) tornaram-se biomarcadores de escolha em medicina humana para identificação e monitoração de doenças. Não há razão para imaginar que tais pesquisas clínicas não sejam igualmente úteis na medicina veterinária. Com o objetivo de verificar a importância das PFAs como biomarcadores de doenças inflamatórias em bovinos, determinou-se o proteinograma sérico, por meio da técnica de eletroforese SDS-PAGE, com interesse especial nas PFAs. Foram utilizados 30 animais, distribuídos em dois grupos: 15 bovinos sadios e 15 bovinos doentes (cinco com mastite estafilocócica, cinco com fotossensibilização e cinco com onfaloflebite). Os animais foram submetidos a colheitas diárias de sangue durante sete dias, enquanto internados no Hospital Veterinário da Unesp, Campus de Jaboticabal. Ceruloplasmina e haptoglobina apresentaram elevação significativa em animais acometidos por mastite, fotossensibilização e onfaloflebite (275,17% e 343,71%; 175,17% e 230,19%; 114,47% e 144,47%, respectivamente). A α1-glicoproteína ácida foi um bom biomarcador apenas em animais com mastite e fotossensibilização, elevando, respectivamente, suas concentrações séricas em 198,14% e 145,89%. Fibrinogênio mostrou-se um indicador confiável apenas em bovinos com mastite, com elevação de 146,5% em relação ao grupo sadio. Ficou clara a diferença na responsividade de distintas PFAs frente a diferentes estímulos inflamatórios. Ceruloplasmina e haptoglobina foram biomarcadores mais sensíveis e, portanto, mais confiáveis entre as PFAs estudadas nessa espécie.(AU)

Over the last few decades acute phase proteins (APP) have become the biomarkers of choice in human medicine to identify and monitor inflammation and infection. There is no reason to suppose that clinical investigations in veterinary medicine would not be equally assisted by APP assays. Aiming to verify the importance of APPs as biomarkers of inflammatory diseases in domestic cattle, serum protein profiles, especially APPs, were determined through the SDS-PAGE electrophoresis technique. Thirty animals were allotted in two groups: 15 healthy cattle and 15 clinically ill cattle (5 with staphylococcal mastitis, 5 with photosensitization and 5 with onphalophlebitis). All animals were submitted to daily blood sampling during 7 days, while interned in the Veterinarian Hospital from UNESP, Jaboticabal campus. Ceruloplasmin and haptoglobin were significantly elevated in animals with mastitis, photosensitization and onphalophlebitis (275.17% and 343.71%; 175.17% and 230.19%; 114.47% and 144.47%, respectively). α1-acid glycoprotein behaved as a good biomarker only in animals with mastitis and photosensitization, elevating respectively 198.14% and 145.89% of their serum levels. Fibrinogen was a reliable indicator only in animals undergoing mastitis, with a raise of 146.5%. The diverse responsiveness of different APP under distinct inflammatory stimuli was clear. Ceruloplasmin and haptoglobin were more sensible and, therefore, reliable biomarkers to the diseases studied in this species.(AU)

Avaliação da associação vincristina-ivermectina no tratamento do tumor venéreo transmissível canino

O tumor venéreo transmissível (TVT) é uma doença neoplásica de células redondas que afeta principalmente o sistema genital de cães. A vincristina é considerada a droga de primeira escolha no tratamento, no entanto, nos últimos anos, vários casos de resistência foram relatados, bem como múltiplos efeitos colaterais causados por essa droga. Portanto, o uso de novos medicamentos ou novas combinações tem sido estudado, como a associação de vincristina e ivermectina (que é um fármaco que funciona como um inibidor da glicoproteína-P), buscando reduzir os efeitos colaterais da vincristina. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência da combinação de vincristina e ivermectina no tratamento de cães naturalmente infectados com TVT. Também avaliamos a duração do tratamento, o número de aplicações de quimioterapia e os efeitos colaterais causados por este protocolo quimioterápico. Quarenta e um cães naturalmente infectados pelo TVT foram tratados no HOSPMEV-UFBA durante um período de 19 meses. Dentro destes quarenta e um, realizamos um estudo experimental com vinte animais. Foram alocados dez cães em dois grupos, aleatoriamente: o grupo controle (G-Vin) (n = 10) foi tratado apenas com vincristina a cada sete dias na dose de 0,5 mg / m² IV, e o grupo experimental (G-Iv/Vin) (n = 10) foi tratado com vincristina em a mesma dosagem e intervalo, juntamente com ivermectina SC, em torno de 24-48 horas antes da administração de vincristina, a cada quinze dias. Todos os cães foram acompanhados semanalmente por exame clínico, hemograma completo e análise citológica até o desaparecimento do tumor. No G-Vin 3 (3/10) dos cães apresentavam tumor do tipo linfocitoide, 2 (2/10) apresentavam tumor do tipo misto e 5 (5/10) apresentavam tumor do tipo plasmocitoides; no G-Iv/Vin 1 (1/10) apresentou tumor tipo linfocitoide, 3 (3/10) do tipo misto e 6 (6/10) do tipo plasmocitóide. Não houve diferença entre o tempo do tratamento entre os dois grupos (p = 0,48) e as doses necessárias de vincristina para remissão total do tumor (p = 0,80). No entanto, em cães do G-Vin, houve uma queda significativa nos valores de leucócitos totais quando comparados antes e após o tratamento, o que não ocorreu com os cães do G-Iv/Vin. Concluímos que existem benefícios terapêuticos da associação da ivermectina à vincristina para o tratamento do TVT, uma vez que houve redução da citotoxicidade do protocolo com a associação dos dois fármacos, não comprometendo o sucesso do tratamento. Sugerimos novos estudos, com maior número de animais, avaliar diferença estatística entre os grupos.

The transmissible venereal tumor (TVT) is a round cells neoplastic disease that mostly affects the genital system of dogs. Vincristine is considered the first-line drug in the treatment, however in recent years, several cases of resistance have been reported, as well as multiple side-effects caused by this drug. Therefore, the use of new medications or new combinations have been studied, such as the association of vincristine and ivermectin (which is a drug that works as a P-glycoprotein inhibitor), seeking to reduce vincristine side-effects. The aim of this study was to evaluate the efficiency of the combination of vincristine and ivermectin in the treatment of dogs naturally infected with TVT. We also assessed, the treatment length, the number of chemotherapy applications and the side effects caused by this chemotherapy protocol. Forty-one dogs naturally infected by TVT were treated at HOSPMEV-UFBA during a 19-month period. Within these forty-one, we conducted an experimental study with twenty animals. We allocated ten dogs in two groups, randomly: the control group (G-Vin) (n=10) was treated only with vincristine every seven days at a dose of 0.5 mg / m² IV, whether the experimental group (G-Iv/Vin) (n=10) was treated with vincristine at the same dosage and interval along with ivermectin IM, around 24-48 hours prior to vincristine administration, every fifteen days. All dogs were followed weekly by clinical examination, complete blood count and cytological analysis until tumor disappearance. In the G-Vin 3 (3/10) dogs presented lymphocyte type tumor, 2 (2/10) presented mixed type tumor and 5 (5/10) presented plasmacytoid type tumor; in the G-Iv/Vin 1 (1/10) presented lymphocyte type tumor, 3 (3/10) of the mixed type and 6 (6/10) of the plasmacytoid type. There was no difference between treatment length between the two groups (p = 0.48) and the required doses of vincristine to total tumor remission (p = 0.80). However, in dogs from the G-Vin, there was a significant drop in total leukocyte values when comparing before and after the treatment, which did not occur with the dogs from the G-Iv/Vin. We concluded that there are therapeutic benefits of associating ivermectin with vincristine for TVT treatment, since there was a reduction of the cytotoxicity of the protocol with the association of the two drugs, not jeopardizing the success of the treatment. We suggest further studies, with a greater number of animals, evaluate statistical difference between groups.

PADRONIZAÇÃO E AVALIAÇÃO DE UM ELISA (DIVA) PARA DIAGNÓSTICO DA LARINGOTRAQUEÍTE INFECCIOSA DAS AVES

A laringotraqueíte infecciosa das aves (LTI) é uma doença do trato respiratório, altamente contagiosa, de grande importância por causar perdas econômicas relevante na indústria avícola em todo o mundo. O agente responsável é o Gallid herpesvirus tipo 1 (GaHV 1), responsável pela LTI. O sistema respiratório é o local de predileção para replicação viral. O diagnóstico sorológico da LTI pode ser feito por diferentes testes, conforme preconiza a Organização Mundial de Saúde Animal (OIE), os testes para o diagnóstico da LTI são: Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA), Soroneutralização e ELISA. O ELISA apresenta a vantagem de ser de leitura automatizada e oferecer facilidades para testar grande número de soros. Com isso objetivou-se a padronização e avaliação de um teste ELISA capaz de distinguir os animais naturalmente infectados dos vacinados com vacinas vetorizadas (DIVA) contra o vírus da LTI. Foi utilizado proteína recombinantes do GaHV 1 a gErec para uso em testes ELISA. O teste foi realizado com o antígeno diluído 1:1.600, soros 1:50 e conjugado Anti-galinha IgY 1:100.000. O ponto de corte, a sensibilidade (SeD) e especificidade (SpD) diagnósticas do ELISAgErec foram determinados por meio da análise da curva ROC (Receiver Operating Characteristic), considerando, como verdadeiros positivos, 81 soros de aves de área endêmica não vacinadas para LTI e testados com resultado positivo em um ELISA indireto comercial; os soros considerados verdadeiros negativos (n = 181) foram originários de Granjas de Matrizes Certificadas, livres da LTI, monitoradas para pesquisa de anticorpos contra o VLTI, empregando IDGA comercial. A proteína recombinante gE do VLTI expressa em Escherichia coli quando empregada no ELISA gE DIVA resultou em um teste de elevada especificidade e considerável sensibilidade.

Avian Infectious laryngotracheitis (LTI) is a highly contagious respiratory tract disease of great importance for causing significant economic losses in the poultry industry around the world. The agent responsible is Gallid herpesvirus type 1 (GaHV 1), responsible for LTI. The respiratory system is the predilection for viral replication. The serological diagnosis of LTI can be made by different tests, as recommended by the World Organization for Animal Health (OIE), the tests for the diagnosis of LTI are: Immunodiffusion in Agar Gel (IDGA), Seroneutralization and ELISA. The ELISA has the advantage of being automated reading and offers facilities for testing a large number of sera. The objective was to standardize and evaluate an ELISA test capable of distinguishing naturally infected animals from those vaccinated with vectorized vaccines (DIVA) against the LTI virus. Recombinant proteins from GaHV 1 to gErec were used for use in ELISA tests. The test was performed with antigen diluted 1: 1.600, 1:50 sera and IgY 1: 100.000 Anti-chicken conjugate. The cut-off point, sensitivity (SeD) and diagnostic specificity (SpD) of the ELISAgErec were determined by means of the Receiver Operating Characteristic (ROC) curve analysis, considering 81 sera from non-vaccinated endemic area birds as positive for LTI and tested with positive result in a commercial ELISA; the sera considered as true negative (n = 181) originated from LTI-free Certified Matrix Farms, monitored for VLTI antibody screening using commercial IDGA. The recombinant gE protein of VLTI expressed in Escherichia coli when used in the gE DIVA ELISA resulted in a test of high specificity and considerable sensitivity.

AVALIAÇÃO DOS PARÂMETROS INFLAMATÓRIOS CLÍNICOS E BIOQUÍMICOS EM CÃES COM DISPLASIA COXOFEMORAL

A displasia coxofemoral (DCF) é uma patologia do desenvolvimento que afeta a cabeça do fêmur e o acetábulo, possui uma etiologia complexa que acomete uma significativa parcela dos animais domésticos. É uma doença biomecânica na qual a instabilidade do quadril nos cães jovens altera a concentração de forças no fêmur e acetábulo em crescimento, afetando o desenvolvimento ósseo e resultando em conformação articular anormal, frouxidão articular e doença articular degenerativa secundária. O estudo objetiva-se avaliar a resposta inflamatória na articulação coxofemoral em cães com displasia coxofemoral afim de realizar uma comparação entre achados laboratoriais do líquido sinovial: contagem de células nucleadas e seu diferencial: células mononucleadas e polimorfonucleadas, análise das proteínas de fase aguda: 1- glicoproteína ácida, proteína C reativa e o volume de hemossedimentação, com os achados radiográficos da articulação coxofemoral em cães com Displasia Coxofemoral sintomáticos e assintomáticos. Foram avaliados 30 cães no experimento, dispostos em 3 grupos experimentais. O primeiro grupo reuniu 10 animais hígidos (Grupo controle - GC), o segundo 10 animais com displasia coxofemoral sintomático (Grupo 1 G1) e o terceiro 10 animais com displasia coxofemoral sem sintomatologia (Grupo 2 - G2). Observou-se um aumento significativo da VHS no grupo sintomático, corroborando com a hipótese de que em animais com sinais clínicos da doença apresentam inflamação na articulação coxofemoral. A VHS é útil na avaliação do processo inflamatório em cães sintomáticos, indicando um processo inflamatório agudo. Já a mensuração de AGP e PCR por imunoturbidimetria não conferem resultados plausíveis de inflamação nas osteoartroses de cães displásicos, tornando-se um biomarcador ineficaz para o monitoramento da doença. Sugere novos estudos de outros biomarcadores inflamatório para a doença estudada.

Hip dysplasia (HD) is a developmental pathology that affects the head of the femur and the acetabulum. It has a complex etiology that affects a significant portion of domestic animals. It is a biomechanical disease in which hip instability in young dogs alters the concentration of forces in the growing femur and acetabulum, affecting bone development and resulting in abnormal joint conformation, joint laxity and secondary degenerative joint disease. The present study aims to evaluate the inflammatory response in the hip joint in dogs with hip dysplasia in order to compare laboratory findings of the synovial fluid: nucleated cell count and its differential: mononuclear and polymorphonucleated cells, analysis of acute phase proteins: 1 - acid glycoprotein, C reactive protein and the volume of erythrocyte sedimentation, with the radiographic findings of the hip joint in dogs with symptomatic and asymptomatic Hip Dysplasia. We evaluated 30 dogs in the experiment, arranged in 3 experimental groups. The first group included 10 healthy animals (Control Group - GC), the second group included 10 animals with symptomatic hip dysplasia (Group 1 - G1) and the third group included 10 animals with hip dysplasia without symptomatology (Group 2 - G2). We have observed a significant increase in ESR in the symptomatic group, corroborating the hypothesis that animals with clinical signs of the disease present inflammation in the hip joint. ESR is useful in evaluating the inflammatory process in symptomatic dogs, indicating an acute inflammatory process. However, the measurement of AGP and CRP by immunoturbidimetry does not confer plausible results of inflammation in the osteoarthrosis of dysplastic dogs, which means it is an ineffective biomarker for the monitoring of the disease. Further studies of other inflammatory biomarkers for the studied disease are suggested.