Neoplasms in domestic hamsters in Southern Brazil: epidemiological and pathological aspects of 40 cases1 / Neoplasias em hamsters domésticos no Sul do Brasil: aspectos epidemiológicos e patológicos de 40 casos

Although neoplasms are commonly reported in domestic hamsters, retrospective studies approaching spontaneous tumors with data regarding epidemiological findings are scarce. The present study aimed to describe the epidemiological and pathological findings of 40 cases of tumors in domestic hamsters diagnosed in a veterinary pathology laboratory in Southern Brazil from 2002 to 2019. Chinese hamster (Cricetulus griseus) was the most commonly affected species (16/40), followed by Djungarian hamster (Phodopus sungorus, 11/40) and Syrian hamster (Mesocricetus auratus, 4/40). Among the cases, 57.5% were females (23/40), while 42.5% were males (17/40). The affected hamsters' median age was of 14-months old, with an age range of 8- to 36-months old. Twenty-four cases were assessed as anatomopathological samples (biopsies), while 16 were composed of carcasses submitted to postmortem examination, and, therefore, the neoplasm was related to the cause of death. The integumentary system was frequently affected (60%, 24/40), followed by the female reproductive tract (22.5%, 9/40), hematopoietic system (10%, 4/40), digestive tract (5%, 2/40), and endocrine system (2.5%, 1/40). The most frequent neoplasm was squamous cell carcinoma (35%, 14/40), mostly on the lip/nasal region (50%, 7/14). Other tumors included fibrosarcoma (10%, 4/40), lymphoma (10%, 4/40), mammary cystadenoma (10%, 4/40), apocrine sweat gland adenoma (7.5%, 3/40), hemangiosarcoma (5%, 2/40), leiomyosarcoma (5%, 2/40), and granulosa ovarian cell tumor (5%, 2/40). The five remaining cases occurred individually and were composed of hepatoid gland adenoma, solid thyroid carcinoma, cutaneous melanoma, ovarian teratoma, and cutaneous trichoblastoma. Neoplasms were identified as an important cause of death and major reason to perform biopsy in domestic hamsters in Southern Brazil.(AU)

Embora neoplasmas em hamsters domésticos sejam comumente relatados, estudos retrospectivos abordando neoplasias espontâneas e os dados epidemiológicos associados são escassos. O presente estudo teve o objetivo de descrever os principais achados epidemiológicos e patológicos de 40 casos de tumores em hamsters domésticos diagnosticados em um laboratório de patologia veterinária do Sul do Brasil de 2002 a 2019. A principal espécie acometida foi o hamster chinês (Cricetulus griseus, 16/40), seguido por hamster anão russo siberiano (Phodopus sungorus, 11/40) e hamster sírio (Mesocricetus auratus, 4/40). As fêmeas corresponderam a 57,5% dos casos (23/40), enquanto os machos representaram 42,5% (17/40). Foram afetados roedores com uma faixa etária de 8 a 36 meses de idade, e uma mediana de 14 meses. Do total de casos, 24 foram exames anatomopatológicos (biopsias) e 16 casos foram examinados através de necropsia e, portanto, relacionados com a causa da morte dos animais. O sistema tegumentar foi o mais frequentemente acometido (60%; 24/40), seguido pelo trato reprodutivo (22,5%; 9/40), sistema hematopoietico (10%; 4/40), trato digestório (5%; 2/40) e sistema endócrino (2,5%; 1/40). A neoplasia mais frequentemente diagnosticada foi o carcinoma de células escamosas (35%; 14/40), localizado principalmente em região labionasal (50%; 7/14). Outros tumores incluíram fibrossarcoma (10%; 4/40), linfoma (10%; 4/40), adenoma cístico de glândula mamária (10%; 4/40), adenoma de glândula sudorípara (7,5%; 3/40), hemangiossarcoma (5%; 2/40), leiomiossarcoma (5%; 2/40) e tumor de células da granulosa (5%; 2/40). Os outros cinco casos remanescentes ocorreram individualmente e eram compostos por adenoma de glândula hepatoide, carcinoma sólido de tireoide, melanoma cutâneo, teratoma ovariano e tricoblastoma cutâneo. Neoplasmas foram identificados como importantes causas de morte ou razões para realização de biopsia em hamsters domésticos no Sul do Brasil.(AU)

Neoplasms in domestic hamsters in Southern Brazil: epidemiological and pathological aspects of 40 cases1 / Neoplasias em hamsters domésticos no Sul do Brasil: aspectos epidemiológicos e patológicos de 40 casos

Although neoplasms are commonly reported in domestic hamsters, retrospective studies approaching spontaneous tumors with data regarding epidemiological findings are scarce. The present study aimed to describe the epidemiological and pathological findings of 40 cases of tumors in domestic hamsters diagnosed in a veterinary pathology laboratory in Southern Brazil from 2002 to 2019. Chinese hamster (Cricetulus griseus) was the most commonly affected species (16/40), followed by Djungarian hamster (Phodopus sungorus, 11/40) and Syrian hamster (Mesocricetus auratus, 4/40). Among the cases, 57.5% were females (23/40), while 42.5% were males (17/40). The affected hamsters' median age was of 14-months old, with an age range of 8- to 36-months old. Twenty-four cases were assessed as anatomopathological samples (biopsies), while 16 were composed of carcasses submitted to postmortem examination, and, therefore, the neoplasm was related to the cause of death. The integumentary system was frequently affected (60%, 24/40), followed by the female reproductive tract (22.5%, 9/40), hematopoietic system (10%, 4/40), digestive tract (5%, 2/40), and endocrine system (2.5%, 1/40). The most frequent neoplasm was squamous cell carcinoma (35%, 14/40), mostly on the lip/nasal region (50%, 7/14). Other tumors included fibrosarcoma (10%, 4/40), lymphoma (10%, 4/40), mammary cystadenoma (10%, 4/40), apocrine sweat gland adenoma (7.5%, 3/40), hemangiosarcoma (5%, 2/40), leiomyosarcoma (5%, 2/40), and granulosa ovarian cell tumor (5%, 2/40). The five remaining cases occurred individually and were composed of hepatoid gland adenoma, solid thyroid carcinoma, cutaneous melanoma, ovarian teratoma, and cutaneous trichoblastoma. Neoplasms were identified as an important cause of death and major reason to perform biopsy in domestic hamsters in Southern Brazil.(AU)

Embora neoplasmas em hamsters domésticos sejam comumente relatados, estudos retrospectivos abordando neoplasias espontâneas e os dados epidemiológicos associados são escassos. O presente estudo teve o objetivo de descrever os principais achados epidemiológicos e patológicos de 40 casos de tumores em hamsters domésticos diagnosticados em um laboratório de patologia veterinária do Sul do Brasil de 2002 a 2019. A principal espécie acometida foi o hamster chinês (Cricetulus griseus, 16/40), seguido por hamster anão russo siberiano (Phodopus sungorus, 11/40) e hamster sírio (Mesocricetus auratus, 4/40). As fêmeas corresponderam a 57,5% dos casos (23/40), enquanto os machos representaram 42,5% (17/40). Foram afetados roedores com uma faixa etária de 8 a 36 meses de idade, e uma mediana de 14 meses. Do total de casos, 24 foram exames anatomopatológicos (biopsias) e 16 casos foram examinados através de necropsia e, portanto, relacionados com a causa da morte dos animais. O sistema tegumentar foi o mais frequentemente acometido (60%; 24/40), seguido pelo trato reprodutivo (22,5%; 9/40), sistema hematopoietico (10%; 4/40), trato digestório (5%; 2/40) e sistema endócrino (2,5%; 1/40). A neoplasia mais frequentemente diagnosticada foi o carcinoma de células escamosas (35%; 14/40), localizado principalmente em região labionasal (50%; 7/14). Outros tumores incluíram fibrossarcoma (10%; 4/40), linfoma (10%; 4/40), adenoma cístico de glândula mamária (10%; 4/40), adenoma de glândula sudorípara (7,5%; 3/40), hemangiossarcoma (5%; 2/40), leiomiossarcoma (5%; 2/40) e tumor de células da granulosa (5%; 2/40). Os outros cinco casos remanescentes ocorreram individualmente e eram compostos por adenoma de glândula hepatoide, carcinoma sólido de tireoide, melanoma cutâneo, teratoma ovariano e tricoblastoma cutâneo. Neoplasmas foram identificados como importantes causas de morte ou razões para realização de biopsia em hamsters domésticos no Sul do Brasil.(AU)

Cross-protection between experimental anti-leptospirosis bacterins

We investigated the existence of cross-protection between two anti-leptospirosis monovalent experimental bacterins produced with two strains of Leptospira serogroup Pomona: Fromm strain of serovar Kennewicky, isolated from pigs in the United States, and strain GR6 of serovar Pomona isolated from pigs in Brazil. Both were added of aluminum hydroxide as an adjuvant. Experimental bacterins were tested with the hamster potency test in order to assess protection provided against the disease and against the establishment of kidney infection. Controls were polyvalent commercial vaccine produced with Leptospira strains isolated outside Brazil, which included a representative of Pomona serovar, or Sorensen solution added of aluminum hydroxide adjuvant. The challenge was performed with cross-strains of serogroup Pomona tested in accordance with international standards established for the potency test. After 21 days of the challenge, survivors were killed to evaluate the condition of Leptospira renal carrier. Experimental bacterins protected hamsters against homologous and heterologous strains, demonstrating the existence of cross-protection. The commercial vaccine protected the hamsters challenged with both strains, but there was a high proportion of animals diagnosed as renal carriers when the challenge was performed with strain GR6, isolated from pigs in Brazil.

AVALIAÇÃO DA INFECTIVIDADE E VIRULÊNCIA DE ESTIRPES AUTÓCTONES DE Leptospira spp. DOS SOROGRUPOS SEJROE E ICTEROHAEMORRHAGIAE EM HAMSTERS EXPERIMENTALMENTE INFECTADOS.

A leptospirose é uma doença infectocontagiosa de grande abrangência mundial. Os roedores, por serem a maior ordem na classificação dos mamíferos, são considerados o principal reservatório de Leptospira, particularmente àquelas do sorogrupo Icterohaemorrhagiae, eliminando tais bactérias pela urina e contaminando o ambiente externo. Entretanto, a leptospirose bovina é menos dependente de condições ambientais e é determinada por estirpes do sorogrupo Sejroe, comumente relacionado à esta infecção em ruminantes em todo o mundo. O objetivo foi avaliar as características de infectividade e virulência de estirpes autóctones de leptospiras dos sorogrupos Sejroe isoladas de ruminantes e do sorogrupo Icterohaemorrhagiae obtidas de caninos e capivaras no Brasil em hamsters experimentalmente infectados. Foram avaliadas 20 estirpes de leptospiras, sendo 12 do sorogrupo Sejroe e oito do sorogrupo Icterohaemorrhagiae. Cada isolado foi inoculado intraperitonealmente em uma hamster na concentração de 1×108 leptospiras/mL e passada quatro vezes in vivo para avaliação e ativação da virulência. Entre as estirpes Sejroe, sete infectaram hamsters sendo três estirpes letais in vivo e pertencentes a espécie L. santarosai sorovar Guaricura. Nenhuma estirpe do sorovar Hardjo mostrou-se infectante e/ou virulenta para hamsters. Do sorogrupo Icterohaemorrhagiae, três estirpes isoladas de cães foram infectantes e virulentas para hamsters, mas as cinco estirpes oriundas de capivaras não determinaram doença aguda em hamsters. O presente estudo demonstrou que, embora as estirpes de sorogrupos Sejroe e, principalmente, Icterohaemorrhagiae sejam frequentemente relatadas como virulentas em hamsters, nem todas foram agressivas. Foi verificada uma grande variação de infectividade e virulência das estirpes de leptospiras isoladas de diferentes espécies animais no Brasil. A avaliação permitiu a identificação da variação de virulência entre estirpes da mesma espécie e mesmo sorogrupo, além da identificação de estirpes do sv Guaricura virulentas no modelo experimental hamster o que permitirá a realização de testes de potência vacinal mais eficientes para a validação das vacinas contra leptospirose bovina em nosso território.

Leptospirosis is a highly contagious infectious disease worldwide. Rodents, being the largest order in the classification of mammals, are considered the main reservoir of Leptospira, particularly those of the Icterohaemorrhagiae serogroup, eliminating such bacteria through the urine and contaminating the environment. However, bovine leptospirosis is less dependent on environmental conditions and is determined by strains of the Sejroe serogroup, commonly related to this infection in ruminants around the world. The objective was to evaluate the infectivity and virulence characteristics of autochthonous strains of leptospiras from serogroups Sejroe isolated from ruminants and from serogroup Icterohaemorrhagiae obtained from canines and capybaras in Brazil in experimentally infected hamsters. Twenty strains of leptospires were evaluated, 12 of the serogroup Sejroe and eight from the serogroup Icterohaemorrhagiae. Each isolate was inoculated intraperitoneally in a hamster at a concentration of 1 × 108 leptospires / ml and passed four times in vivo for evaluation and activation of virulence. Among the Sejroe strains, seven infected hamsters being three lethal strains in vivo and belonging to L. santarosai sorovar Guaricura species. No strain of the Hardjo serovar proved to be infective and / or virulent for hamsters. From the Icterohaemorrhagiae serogroup, three strains isolated from dogs were infectious and virulent for hamsters, but the five strains from capybaras did not determine acute disease in hamsters. The present study demonstrated that although strains of Sejroe serogroups and mainly Ichterohaemorrhagiae are frequently reported as virulent in hamsters, not all strains were aggressive. A large variation of infectivity and virulence of leptospires strains isolated from different animal species in Brazil was observed. The evaluation allowed the identification of the virulence variation between strains of the same species and the same serogroup, as well as the discovery of virulent sv Guaricura strains in the experimental hamster model, which will allow more efficient vaccine power tests for the validation of vaccines against leptospirosis in our territory.

Controle da eficácia de bacterinas antileptospirose: relação entre os resultados dos testes de inibição de crescimento de leptospiras in vitro com os do desafio in vivo em hamsters / Efficacy of anti-leptospirosis bacterines. Relation between the results of the in vitro growth inhibition test and the potency test, in vivo, with challenge in hamsters

Foi efetuada a comparação em hamsters da proteção conferida e dos níveis de anticorpos induzidos por duas bacterinas comerciais antileptospirose. Os ensaios empregados foram o teste oficial de potência com desafio (TP), o ensaio proposto, teste de inibição de crescimento de leptospiras in vitro (ICLIV) e a soroaglutinação microscópica (SAM). O protocolo de imunização foi representado por duas aplicações individuais de 0,25 mL das bacterinas, puras ou de suas diluições geométricas de razão dois variando de 200 a 51.200 para a bacterina A e de 200 a 3.200 para a bacterina B, por via subcutânea com o intervalo de 15 dias. Decorridos 15 dias da segunda aplicação de vacina, um grupo de animais foi desafiado com 0,2 mL de cultivos de leptospiras, por indivíduo, respectivamente dos sorovares Canicola (bacterinas A e B) ou Kennewicki (bacterina A). Os números de doses infectantes empregados nos desafios foram de 100 e 631 respectivamente, para os sorovares Canicola e Kennewicki. Decorridos 21 dias do desafio, os grupos de animais utilizados nos testes de ICLIV e SAM foram sangrados e os seus soros foram reunidos em pools (n = 5). No TP, adotando-se os critérios internacionais, as bacterinas foram aprovadas. A comparação do desempenho das bacterinas para os sorovares adotados, segundo sua concentração, por meio das proporções de animais sobreviventes ao TP e a média dos títulos de anticorpos identificados no teste de ICLIV, indicou que um título igual ou superior a 0,77 log corresponde ao nível de aprovação da bacterina no TP(AU)

It was performed a comparison between the protection afforded in hamsters and the antibody levels induced by two commercial vaccines against leptospirosis. The assays used were the official challenge test (TP), the in vitro leptospires growth inhibition test (ICLIV) and microscopic agglutination test (MAT). The immunization protocol consisted of two single applications, 15 days from each other, of 0.25 mL of the bacterins, pure or its two-fold serial dilutions: 200 to 51,200 for bacterin A and 200 to 3.200 bacterin B, both of them administered subcutaneously. A group of animals was challenged, after 15 days from the second vaccine application, with 0.2 mL/animal of live leptospire cultures, with Canicola (bacterin A and B) or Kennewicki (bacterin A) serovars. The numbers of infective doses employed in the challenges were 100 and 631 for Canicola and Kennewicki serovars, respectively. After 15 days from the second vaccine dose the groups of animals used in ICLIV and SAM tests were bled and their sera were collected in pools (n = 5). In TP, adopting the criteria established by the Code Federal Regulation, both bacterins were approved. The comparison of the performance of the tested bacterins with the adopted serovars, according to its concentration, by the proportions of surviving animals to the challenge assay and the average of the neutralizing antibodies titers, established a neutralizing antibodies titer equal or higher than 0.77 log corresponding with the bacterin level of approval in the potency assay(AU)

Prospecção e avaliação de proteínas recombinantes para o desenvolvimento de uma vacina contra a leptospirose

Esta tese reúne os trabalhos referentes ao desenvolvimento de uma vacina recombinante contra a leptospirose bovina, uma zoonose bacteriana causada por membros patogênicos do gênero Leptospira. Primeiramente, é apresentada uma revisão bibliográfica sobre a doença, ressaltando os aspectos clínicos envolvidos e a prevalência do sorovar Hardjo como causador da leptospirose em bovinos. Depois, o processo relacionado à seleção de novos candidatos vacinais para o desenvolvimento de uma vacina recombinante é explorado. Dos cinco alvos proteicos previamente identificados e amplificados a partir do genoma de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni cepa Fiocruz L1-130, quatro (LIC11889, LIC10666, LIC10463 e LIC10498) foram expressos em sistema de expressão heteróloga em Escherichia coli e purificados, constituindo alvos potenciais para os ensaios de imunogenicidade e imunoproteção em modelo animal. Como hamsters (Mesocricetus auratus) são usados como modelo animal experimental para o estudo da leptospirose aguda, avaliamos os níveis de bilirrubina total, alanina aminotransferase e creatinina após infecção com cepa patogênica. Não foi encontrada diferença estatística significativa entre os valores encontrados para animais experimentalmente infectados quando comparados ao grupo imunizado com bacterina. Finalmente, descrevemos o uso das proteínas recombinantes rLIC11889 e rLIC10666 como preparação vacinal na imunização de hamsters. As proteínas foram capazes de proteger os animais desafiados com cepa homóloga virulenta da leptospirose letal.

This thesis combines the work related to the development of a recombinant vaccine against bovine leptospirosis, a bacterial zoonosis caused by pathogenic member of the genus Leptospira. Firstly, a literature review is presented on the disease, highlighting the clinical aspects and the prevalence of the serovar Hardjo as the cause of leptospirosis in cattle. Then, the process related to the selection of novel vaccine candidates for the development of a recombinant vaccine is explored. Of the five protein targets previously identified and amplified from the genome of Leptospira interrogans serovar Copenhageni strain Fiocruz L1-130, four (LIC11889, LIC10666, LIC10463 and LIC10498) were expressed in a heterologous expression system in Escherichia coli and purified, constituting potential targets for the immunogenicity and immunoprotection assays in the animal model. As hamsters (Mesocricetus auratus) are used as an experimental model for the study of acute leptospirosis, we evaluated levels of total bilirubin, alanine aminotransferase and creatinine after infection with a pathogenic strain. No statistically significant difference was found between the values for the experimentally infected animals when compared to the group immunized with bacterin. Finally, we describe the use of the recombinant proteins rLIC11889 and rLIC10666 as a vaccine preparation in the immunization of hamsters. Proteins were able to protect challenged animals with virulent homologous strain of lethal leptospirosis.

Perfil bioquímico dos animais de laboratório do biotério da Faculdade de Medicina da USP / / Biochemical profile of laboratory animals of the Medical School USP

Objetivo: Os parãmetros bioquímicos são utilizados em pesquisas cientificas, em conjunto com outros fatores, para análise dos resultados experimentais. Animais de laboratório criados em diferentes biotérios apresentam variações em seus valores devido a dieta, manejo, estado sanitário, idade, vias de coleta do sangue e outros interferentes. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi determinar o perfil bioquímico de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais criados pelo Centro de bioterismo da FMUSP. Materiais e Métodos: Foram utilizados 20 camundongos das linhagens isogênicas BALB/c e C57Bl/6 e da heterogênica Swiss; 40 ratos Wistar, 40 hamsters Golden e 40 coelhos New Zealand. Os exames realizados foram: uréia/BUN (Blood Urea Nitrogen), creatinina, proteínas totais, albumina e globulinas, ferro, fósforo, glicose, colesterol total e suas frações LDI (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (Very Low Density Lipoprotein), Bilirrubina total e frações (direta, indireta), cloretos, magnésio, triglicerides, Alt/AST (alanina aminotransferase, aspartato aminotransaminase), amônia, cálcio, ALP (fosfatase alcalina) e LDH (desidrogenase lática), determinados por fotocolorimetria semi-automática (Cobas Mira) e kits bioclin, Labtest e Byosystems. Resultados: Apresentados pelas médias e os erros padrões das concentrações de analitos, no plasma, agrupados por sexo. Conclusão: Foram determinados os perfis bioquímicos de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais do centro de Bioterismo da FMUSP, oferecendo uma ferramenta valiosa aos pesquisadores ao analisar seus resultados experimentais. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.

Objective: The biochemical parameters are used in scientific research in conjunction with other factors, to analyze the experimental results. Laboratory animals raised in different animal houses have variations in their values due to diet, management health status, age, the process of colecting blood and other interferences. Thus, the objective of this study was to created by conventional Bioterty Center FMUSP . Materials and Methods: We used 20 isogenic strains of mice BALB/6 and C57BL/6 and Swiss heterogeneous, 40 Wistat rats, 40 rabbits and 40 hamsters Golden New Zealand. The tests performed were: urea / BUN (Blood Urea Nitrogen), creatine, total protein, albumin and globulins, iron, phosphorus, glucose, total cholesterol and LDL (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (very Low Density Lipoprotein), total bilirubin and fractions (direct, indirect), chlondes, magnesium, triglucerides, ALT/AST (alanine aminotransferase, aspartate aminotransaminase), ammonium, calcium, ALP (alkaline phosphatase) and LDH (lactate denydrogenase), certain by semi-automatic spectrophotometer (Cobas Mira) and Bioclin kitas, and Labtest Biosystems. Results: Presented by the means and standard errors of the concentrations of analytes in plasma, grouped by sex. Conclusion: We determined the biochemical profiles of mice, rats, hamsters and rabbits conventional Biotery FMUSP Center, offering a valuable tool for researchers to analyze their experimental results. Certified No 251/11 CEAU HCFMUSP.

Triagem de Helicobacter spp. em fezes de roedores de laboratório através da técnica de PCR / / Screening for Helicobacter spp inrodent feces laboratory using PCR technique

Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5’ CTATGACGGGTATCCGGC 3' E R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' que amplificam um produto de 374 Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5’ CTATGACGGGTApb. Separados por eletroforese em gel de agarose, os produtos foram visualizados e fotodocumentados sob luz ultravioleta.A técnica de PCR possibilitou a detecção de camundongos positivos, sendo 18% da linhagem C57BL/6, 52% da linhagem BALB/c, 62% da linhagem Swiss. Em ratos da linhagem Wistar, foram detectados 28% de positividade e em hamster, 44%. Esses resultados sugerem que a técnica de PCR empregada foi eficaz para a triagem de Helicobacter spp em colônias de animais de laboratório. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.

This work aimed to optimize the screening of the bacterium Helicobacter spp in sanitary control program of laboratory animals, using the PCR (Polymerase Chain Reaction). Fifty stool samples from each strain or species: C57BL/6, BALB/c, Swiss, Hamster and Wistar rats were subjected to PCR using the primers F: 5’ CTATGACGGGTATCCGGC 3' and R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' that amplofy 374 bp product. Separated by agarose gel electrophoresis, products were visualized and photographed under ultraviolet light. The PCR technique allowed the detection of positive mice, 18% of C57BL/6, 52% of the strain BALB/c, 62% of Swiss strain. In Wistar rats were detected 28% ´possivity and hamster 44%. These results suggest that the PCR technique used was effective in screening for Helicobacter spp in colonies of laboratory animals. Certified CRAU Nº 251/11 HCFMUSP.

Triagem de Helicobacter spp. em fezes de roedores de laboratório através da técnica de PCR / / Screening for Helicobacter spp inrodent feces laboratory using PCR technique

Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5 CTATGACGGGTATCCGGC 3' E R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' que amplificam um produto de 374 Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5 CTATGACGGGTApb. Separados por eletroforese em gel de agarose, os produtos foram visualizados e fotodocumentados sob luz ultravioleta.A técnica de PCR possibilitou a detecção de camundongos positivos, sendo 18% da linhagem C57BL/6, 52% da linhagem BALB/c, 62% da linhagem Swiss. Em ratos da linhagem Wistar, foram detectados 28% de positividade e em hamster, 44%. Esses resultados sugerem que a técnica de PCR empregada foi eficaz para a triagem de Helicobacter spp em colônias de animais de laboratório. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP. (AU)

This work aimed to optimize the screening of the bacterium Helicobacter spp in sanitary control program of laboratory animals, using the PCR (Polymerase Chain Reaction). Fifty stool samples from each strain or species: C57BL/6, BALB/c, Swiss, Hamster and Wistar rats were subjected to PCR using the primers F: 5 CTATGACGGGTATCCGGC 3' and R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' that amplofy 374 bp product. Separated by agarose gel electrophoresis, products were visualized and photographed under ultraviolet light. The PCR technique allowed the detection of positive mice, 18% of C57BL/6, 52% of the strain BALB/c, 62% of Swiss strain. In Wistar rats were detected 28% ´possivity and hamster 44%. These results suggest that the PCR technique used was effective in screening for Helicobacter spp in colonies of laboratory animals. Certified CRAU Nº 251/11 HCFMUSP.(AU)

Perfil bioquímico dos animais de laboratório do biotério da Faculdade de Medicina da USP pt / / Biochemical profile of laboratory animals of the Medical School USP

Objetivo: Os parãmetros bioquímicos são utilizados em pesquisas cientificas, em conjunto com outros fatores, para análise dos resultados experimentais. Animais de laboratório criados em diferentes biotérios apresentam variações em seus valores devido a dieta, manejo, estado sanitário, idade, vias de coleta do sangue e outros interferentes. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi determinar o perfil bioquímico de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais criados pelo Centro de bioterismo da FMUSP. Materiais e Métodos: Foram utilizados 20 camundongos das linhagens isogênicas BALB/c e C57Bl/6 e da heterogênica Swiss; 40 ratos Wistar, 40 hamsters Golden e 40 coelhos New Zealand. Os exames realizados foram: uréia/BUN (Blood Urea Nitrogen), creatinina, proteínas totais, albumina e globulinas, ferro, fósforo, glicose, colesterol total e suas frações LDI (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (Very Low Density Lipoprotein), Bilirrubina total e frações (direta, indireta), cloretos, magnésio, triglicerides, Alt/AST (alanina aminotransferase, aspartato aminotransaminase), amônia, cálcio, ALP (fosfatase alcalina) e LDH (desidrogenase lática), determinados por fotocolorimetria semi-automática (Cobas Mira) e kits bioclin, Labtest e Byosystems. Resultados: Apresentados pelas médias e os erros padrões das concentrações de analitos, no plasma, agrupados por sexo. Conclusão: Foram determinados os perfis bioquímicos de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais do centro de Bioterismo da FMUSP, oferecendo uma ferramenta valiosa aos pesquisadores ao analisar seus resultados experimentais. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP. (AU)

Objective: The biochemical parameters are used in scientific research in conjunction with other factors, to analyze the experimental results. Laboratory animals raised in different animal houses have variations in their values due to diet, management health status, age, the process of colecting blood and other interferences. Thus, the objective of this study was to created by conventional Bioterty Center FMUSP . Materials and Methods: We used 20 isogenic strains of mice BALB/6 and C57BL/6 and Swiss heterogeneous, 40 Wistat rats, 40 rabbits and 40 hamsters Golden New Zealand. The tests performed were: urea / BUN (Blood Urea Nitrogen), creatine, total protein, albumin and globulins, iron, phosphorus, glucose, total cholesterol and LDL (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (very Low Density Lipoprotein), total bilirubin and fractions (direct, indirect), chlondes, magnesium, triglucerides, ALT/AST (alanine aminotransferase, aspartate aminotransaminase), ammonium, calcium, ALP (alkaline phosphatase) and LDH (lactate denydrogenase), certain by semi-automatic spectrophotometer (Cobas Mira) and Bioclin kitas, and Labtest Biosystems. Results: Presented by the means and standard errors of the concentrations of analytes in plasma, grouped by sex. Conclusion: We determined the biochemical profiles of mice, rats, hamsters and rabbits conventional Biotery FMUSP Center, offering a valuable tool for researchers to analyze their experimental results. Certified No 251/11 CEAU HCFMUSP.(AU)

Response activity of alveolar macrophages in pulmonary dysfunction caused by Leptospira infection

Leptopspirosis is a syndrome with different clinical manifestations including the most severe and often fatal forms of pulmonary disease of unknown etiology. Pulmonary injury during the inflammatory process has been associated with the excessive number of alveolar macrophages (AMs) and polymorphonuclear leukocytes stimulated in the lungs and with the production of reactive oxygen and nitrogen intermediates and other inflammatory mediators. The aim of the present work was to evaluate the cellular immune response of AMs or inflammatory cells of hamsters during leptospirosis. The activity of AMs was determined by measuring nitric oxide (NO) and protein production as well as inflammatory cell infiltration in bronchoalveolar lavage (BAL) fluid. Pulmonary activity during infection was monitored by measuring pH, pressure of oxygen (PaO2), and pressure of carbon dioxide (PaCO2) in blood samples. Cellular immune response and its role in the genesis of leptospirosis have been incriminated as the main causes of tissue and pulmonary injuries, which consequently lead to the pulmonary dysfunction in severe cases of leptospirosis. The present results show a low production of NO in both supernatant of alveolar macrophage culture and BAL. In the latter, protein production was high and constant, especially during acute infection. Total and differential cell count values were 2.5X10(6) on day 4; 7.3X10(6) on day 21; and 2.3X10(6) on day 28 after infection, with lymphocytes (84.04%) predominating over neutrophils (11.88%) and monocytes (4.07%). Arterial blood gas analysis showed pulmonary compromising along with the infectious process, as observed in parameter values (mean±SD) evidenced in the infected versus control group: PaO2 (60.47mmHg±8.7 vs. 90.09mmHg±9.18), PaCO2 (57.01mmHg±7.87 vs. 47.39mmHg±4.5) and pH (7.39±0.03 vs. 6.8±1.3). Results indicated that Leptospira infection in hamsters is a good experimental model to study leptospirosis. However, some of the immune parameters showed variations which might be associated with the animal species.

Emprego da reação em cadeia pela polimerase em tempo real para o controle de eficiência de bacterinas anti-leptospirose / Employment of real time polymerase chain reaction to control the efficiency of leptospirosis bacterins

A estirpe Fromm de Leptospira interrogans sorovar Kennewicki foi utilizada para produção de uma bacterina experimental anti-leptospirose. A extração do RNA total utilizado para transcrição reversa e quantificação dos antígenos LigA e LipL32 por PCR em Tempo Real, foi efetuada a partir de alíquotas colhidas das diluições da bacterina antes da sua inativação, as quais foram armazenadas à temperatura de -80ºC. O volume restante da bacterina foi inativado em banho-maria à 56ºC e mantido à temperatura de -20ºC para avaliação da sua potência em hamsters bem como da detecção e quantificação dos antígenos LigA e LipL32 em ensaios de ELISA Indireto e ELISA Sanduíche Indireto. Os resultados do ensaio de potência em hamsters demonstraram que a bacterina foi aprovada de acordo com as exigências dos padrões internacionais de qualidade até a diluição 1/6400, protegendo os hamters contra a infecção letal frente ao desafio com a diluição 10-6 (100 doses infectantes 50%/ 0,2mL). Os resultados das reações de Real Time PCR detectaram 3,2 x 103 e 2,3 x 101 cópias do mRNA que codifica a proteína LigA, na bacterina pura e diluída a 1:200, respectivamente. Apenas oito cópias do mRNA que codifica a proteína LipL32 foram detectadas na amostra de bacterina pura. Os ensaios com ELISA Indireto não detectaram a proteína LigA na amostra de bacterina inativada, mas demonstraram a detecção da proteína LipL32 até a diluição 1/1600 da bacterina. Os ensaios de ELISA Sanduíche Indireto apresentaram reações cruzadas nas placas controle, e, portanto seus resultados não puderam ser considerados nas análises. Os resultados da real time PCR não puderam ser correlacionados com o teste de potência em hamsters, mas os ensaios de ELISA Indireto para a proteína LipL32 demonstraram resultados condizentes com os apresentados pelo teste de potência em hamsters oferecendo uma possível alternativa in vitro para avaliação de potência de bacterinas anti-leptospirose

Leptospira interrogans serovar Kennewicki strain Fromm was used for the production of a experimental leptospirosis bacterin. The extraction of total RNA used for reverse transcription and quantification of the antigens LigA and LipL32 for Real Time PCR was performed from the aliquots harvested of bacterin dilutions before inactivation that were separated and maintained at -80ºC. The remaining volume of bacterin was inativated at 56ºC and maintained at -20ºC for the evaluation bacterin potency in hamsters and detection and quantification of LigA and LipL32 antigens by Indirect ELISA assay and Indirect Sandwich ELISA. The results of potency assay in hamsters demonstrated that the bacterin was approved by the international patterns of quality until dilution 1/6400, protecting the hamters against lethal infection challenge by the dilution 10-6 (100 infectious doses 50%/0,2 mL). The results of Real Time PCR detected 3,2 x 103 e 2,3 x 101 copies of mRNA that encodes the LigA protein, in samples of pure bacterin and diluted 1:200, respectively. Few eight copies of mRNA that encodes LipL32 protein were detected in pure bacterin samples. Indirect ELISA assays not detected LigA protein in inactivated bacterin samples, but demonstrated LipL32 protein detection until dilution 1:1600 of bacterin. Indirect Sandwich ELISA presented cross-reaction in control plates, so the results cannot be considerated in the analysis. The results of real time PCR cannot be correlated with the potency assay in hamsters but Indirect ELISA assay for protein LipL32 demonstrated that the results were suitable with the results presented by the potency assay in hamsters offering a possible in vitro alternative for the evaluation of leptospirosis bacterins potency

Potência de bacterinas anti-leptospirose canina comercializadas no Brasil: desafio efetuado com estirpes autóctones dos sorovares Canicola e Copenhageni / Potency of canine anti-leptospirosis bacterins marketed in Brazil: challenge effectuated with indigenous strains of the serovars Canicola and Copenhageni

Foi efetuada a avaliação comparativa da potência de vacinas anti-leptospirose canina comercializadas no Brasil, empregando no desafio estirpes de leptospiras dos sorovares Canicola e Copenhageni autoctones isoladas no Brasil. Foram comparadas nove bacterinas comerciais polivalentes produzidas para uso em cães, identificadas pelas letras A, B, C, D, E, F, G, H e I. O desafio foi efetuado com as estirpes L1-130 e LO4, respectivamente dos sorovares Copenhageni e Canicola tipificadas pela prova de anticorpos monoclonais. O protocolo adotado seguiu as normas técnicas americanas, 9 CFR 113.103 Leptospirose Canicola - 2006 . A dose infectante do sorovar Copenhageni empregada no desafio (5,4) foi inferior ao limite inferior estabelecido pela norma técnica (10) e a do sorovar Canicola foi de 10.000. Os animais foram observados por 21 dias consecutivos, contabilizando-se os que morreram por leptospirose. Ao final deste período, os sobreviventes foram submetidos à eutanásia por inalação de gás carbônico (câmara de CO2), e necropsiados para colheita dos rins e realização de cultivos destinados ao controle de infecção renal por leptospiras. Das nove vacinas avaliadas, sete foram reprovadas para os dois sorovares testados e duas foram aprovadas contra a doença clinica e infecção renal para o sorovar Canicola LO4, porém apenas contra a doença clínica para o sorovar Copenhageni L1-130. Os laboratórios fabricantes de bacterinas anti-leptospirose canina que estão sendo comercializadas no Brasil, necessitam rever a qualidade dos seus produtos no relativo a proteção contra a doença e infecção pelos sorovares Canicola e Copenhageni

A comparative evaluation of the potency of canine anti-leptospirosis bacterins marketed in Brazil was conducted using as the challenge strains the indigenous leptospires, serovars Canicola and Copenhageni, isolated in Brazil. There were compared nine commercial polyvalent bacterial vaccines produced for use in dogs, identified by the letters A, B, C, D, E, F, G, H and I. The challenge was performed with L1-130 and LO4 strains, respectively, of the serovars Copenhageni and Canicola, which have been typified by the monoclonal antibodies (MABs). The adopted protocol followed the American standard techniques, 9 CFR 113.103 Leptospirosis Canicola 2006. The infectious dose of the serovar Copenhageni used in the challenge (5.4) was inferior to the lower limit established by the technical standard (10) and that of the serovar Canicola was of 10,000. The animals (hamsters) were observed for 21 consecutive days, registering those died of leptospirosis. At the end of the observation period, the survivors were subdued to the euthanasia by inhalation of carbon gas (CO2 chamber), and necropsied, taking the kidneys for bacterial culturing for the evaluation of renal infection by leptospires. Among nine evaluated vaccines, seven failed for the two serovars tested and two were approved against the clinical disease and renal infection by the serovar Canicola LO4, however serovar Copenhageni L1-130 was effective only against manifestation of the clinical disease. The manufacturers of the canine anti-leptospirosis bacterial vaccines which are being marketed in Brazil need to revise the quality of their products in respect to the protection conferred against the disease and against the infection by the serovars Canicola and Copenhageni

Influência da via de inoculação sobre o estabelecimento e a evolução da leptospirose em hamsters (Mesocricetus auratus) experimentalmente infectados com Leptospira interrogans sorovar pomona / The influence of the route of inoculation on the development of the leptospiral infection in hamsters (Mesocricetus auratus) experimentally infected with Leptospira interrogans serovar pomona

Foi investigada a influência da via de inoculação sobre o estabelecimento e a evolução da leptospirose em hamsters (Mesocricetus auratus) experimentalmente infectados com Leptospira interrogans sorovar pomona. As vias de inoculação ensaiadas foram: intraperitoneal, subcutânea, oral, conjuntival e escarificação cutânea. O inóculo infeccioso foi constituído por uma cultura em meio de Fletcher, com 20 a 30 leptospiras por campo microscópio no aumento de 200 vezes. Os animais controle foram inoculados apenas com meio de Fletcher. Foram colhidas amostras de soro sanguíneo e fragmentos de rins na fase agônica da doença ou no 21º dia pós-infecção, quando todos os animais foram sacrificados. Para a pesquisa de leptospiras, foi feito o exame direto com microscopia óptica em campo escuro e cultivo em meio de Fletcher, pela técnica das diluições seriadas. A detecção de aglutininas anti-leptospiras foi realizada pela técnica de soroaglutinação microscópica. A instalação e evolução da leptospirose foram afetadas pela via de inoculação. A via oral foi a menos efetiva em estabelecer a infecção. Não foi observada associação estatística entre a freqüência de portadores e a via de inoculação. (AU)

The influence of the route of inoculation on the development of the leptospiral infection was investigated in 60 hamsters (Mesocricetus auratos) experimentally infected with Leptospira interrogans serovar pomona. The routes of inoculation were intraperitoneal, subcutaneous, oral, conjuntival and scrapped skin. All animals received the leptospiral inoculum cultivated in Fletcher's medium, with 20 to 30 leptospires per field under 200x magnification. The controls were inoculated only with Fletcher's medium. Samples of blood sera and the kidney fragments were collected in the agonic stage of the disease or at 21st experimental day, when all survivors were killed. The antibodies detection was done by the microscopic agglutination test and the bacteria detection by the dark field microscopic examination and culture in Fletcher's medium, by the tenfold dilutions technique. The presence and development of disease was affected by the route of infection. The oral route was the less effective for promoting the disease. There was no association between the frequency of carrier state and the route of infection. (AU)

Quantitative evaluation of mycobacterial concentration in organs and fluids of Experimentally infected hamster with Mycobacterium bovis, strain AN 5 / Avaliação quantitativa da concentração de micobactérias em órgãos e humores de hamster experimentalmente infectados com Mycobacterium bovis, estirpe AN 5

Tuberculosis in hamsters induced by intraperitoneal inoculation of Mycobacterium bovis strain AN 5 was described through bacteriological and histopathological examinations performed at I. 15, 29 and 45 days after infection. The bacterial growth was observed in spleen, kidneys, liver and lungs of those infected animals, inducing granulomatous lesions. One day after the inoculation spleen harboured more bacteria than any other examined organs and at 45 days after infection bacterial counts difference was detected only among the spleen and the kidney, with higher counts to the spleen. Two bacteremic phases were observed and the mycobacterium was always isolated from peritoneal fluid. The weight of those infected animals was markedly decreased due to disease and death occurred 50.6 days in average after the infection.

Descreve-se a tuberculose desencadeada pela inoculação intraperitoneal de 1.0 mg de Mycobacterium bovis (cepa AN 5) em hamsters através de exames bacteriológicos e histopatológicos, realizados 1, 15, 29 e 45 dias após a infecção. A bactéria se multiplicou no baço, rins, fígado e pulmões dos animais infectados, induzindo a formação de lesões granulomatosas. Um dia após a infecção o baço albergou um maior número de bactérias e 45 dias após a infecção houve diferença nas concentrações bacterianas apenas entre baço e rim, com um maior número de bactérias para o baço. Foram observadas duas fases de bacteremia e a micobactéria foi cultivada a partir do líquido peritoneal em todas as etapas do experimento. Os animais perderam peso em decorrência da doença e morreram em média 50.6 dias após a infecção.

Quantitative evaluation of tuberculosis evolution in hamsters submitted to an eight-week Trichlorfon treatment and infected with Mycobacterium bovis, strain AN5 / Avaliação quantitativa da evolução da tuberculose em hamsters tratados 8 semanas consecutivas com Triclorfon e infectados com Mycobacterium bovis, cepa AN5

The evolution of disease by intraperitoneal inoculation of Mycobacterium bovis (strain AN5) was evaluated in hamsters (Mesocricetus auratus) treated daily, from Monday to Friday, with 30 mg/kg of Trichlorfon given subcutaneously, for a period of 8 consecutive weeks. The criteria used for the evaluation were post infection survival time and quantitative cultures of mycobacteria from spleen, kidney, liver and lung taken at 1, 15, 29 and 45 days after inoculation.Histopathologic examinations were also performed at each scheduled time. Treated and control animals developed progressive disease. The results of quantitative cultures and survival time after inoculation were not influenced byTrichlorfon as related to the evolution of tuberculosis.

A evolução da doença causada pela inoculação intraperitoneal de Mycobacterium bovis (cepa AN5) foi avaliada em hamsters (Mesocrícetus auratus) tratados de segundas a sextas-feiras, com doses subcutâneas de 30 mg/kg de Triclorfon, por um período de 8 semanas consecutivas. Os critérios adotados para essa avaliação foram o tempo de sobrevivência após ainoculação e a quantificação do agente no baço, fígado, rim e pulmão colhidos aos 1, 15, 29 e 45 dias após a inoculação. Nessas oportunidades também foram realizados exames histopatológicos. Os animais do grupo tratado com Triclorfon e do grupo controle desenvolveram tuberculose progressiva. Os resultados da quantificação do agente nos órgãos examinados, e do tempo de sobrevivência após a inoculação, não mostraram qualquer influência da administração do Triclorfon.

Avaliação da virulência de isolados suínos de Mycobacterium avium no Brasil caracterizados pelo método de RFLP / Evaluation of virulence of swine Mycobacterium avium isolates in Brazil characterized by RFLP method

Dada a existência de quatro famílias molecularmente distintas de estirpes de Mycobacterium avium isoladas de suínos da região Sul do Brasil e a verificação de diferentes virulências em hamsters de um representante por família, o presente trabalho objetiva relacionar a virulência de isolados de M. avium aos seus perfis genéticos obtidos em experimentos de RFLP. Foram selecionados três representantes por família que foram inoculados pela via intraperitoneal em hamsters distribuídos em doze grupos (cada grupo recebeu uma estirpe diferente). Foi mantido um grupo controle que recebeu solução salina estéril pela mesma via. Após 16 dias da inoculação, os animais foram eutanasiados; os baços foram colhidos, pesados, macerados, suspendidos em solução salina estéril e diluídos. Cada uma das diluições foi semeada em duplicata em placas com meio de Petragnani, que foram incubadas a 37°C. Após 30 dias de incubação, foram realizadas as contagens de UFC e os resultados foram expressos em UFC de M. avium por grama de baço. As famílias genéticas apresentaram capacidade de virulência semelhante (p=0,49). As estirpes dentro das famílias PIG B e PIG D não apresentaram diferença na virulência (p=0,15 e p=0,87, respectivamente). Dentro da família PIG A, o isolado A52 foi mais virulento do que A1 e A162; a estirpe C122 se apresentou menos virulenta do que as estirpes C44 e C68 dentro da família PIG C. Independente das famílias, todos os isolados apresentaram diferenças na virulência. A estirpe A52 mostrou maior capacidade de virulência em relação às estirpes A1, A162, B72, C122, D242 e 243. Diferentes contagens de UFC significam diferentes capacidades de produzir infecção, ou seja, diferentes virulências. Concluiu-se que isolados de M. avium com diferentes perfis de RFLP podem apresentar diferentes virulências, independentemente de pertencerem a uma mesma família genética definida com base na similaridade dos padrões de RFLP; não houve diferença de virulência entre as quatro famílias genéticas de M. avium estruturadas com base na similaridade dos padrões de RFLP

Knowing the existence of four molecularly distinct families of Mycobacterium avium strains isolated from swine populations of Brazil Southern and the corroboration of diverse virulence in experimentally infected hamsters by one representative of each family, this work intend to establish relation between virulence of M. avium isolates and their genetic patterns obtained in prior RFLP analyses. We selected three representatives of each family, totalizing twelve strains, which were introduced by intraperitoneal route into hamsters distributed in twelve groups (each group received a different strain). A control group was maintained and received buffer solution by the same route. Sixteen days after the inoculation, animals were euthanized and their spleens were collected, weighted, triturated, suspended in buffer solution and then diluted. Two plates containing Petragnani medium were seeded with each dilution and were incubated at 37ºC. At the 30th day, the CFU counting was performed and the results were expressed in M. avium CFU/g of spleen. All genetic families presented similar capacity of virulence (p=0,49). Strains of PIG B and PIG D families presented similar virulence within their families (respectively, p=0,15 and p=0,87). Inside the PIG A family, strain A52 was more virulent than strains A1 and A162; the strain C122 presented the lowest virulence compared with the strains C44 and C68 within the PIG C family. All strains, independent of their family, presented diverse virulence. Strain A52 was more virulent than strains A1, A162, B72, C122, D242 and D243. Distinct counting of CFU means different capacity of producing infection, i.e. diverse virulence. We concluded that, independent fo the genetic family established by similarity of RFLP patterns, M. avium isolates with diverse RFLP profiles may present different virulence; there was not difference in virulence; among all of four M. avium genetic families structured according to the similarity of RFLP patterns

Effect of two ram sperm capacitating media on acrosome reaction and zona-free hamster oocyte penetration test / Efeito de dois meios de capacitação dos espermatozóides de carneiros na reação acrossômica e no teste de penetração em oócitos de hamster

An in vitro zona-free hamster oocyte penetration test was utilized in 24 trials in order to evaluate the capacitation media used for ram sperm. A pool of fresh semen was collected from three crossed breed rams. Two semen drops were washed by centrifugation and incubated in high ionic strength treatment (HIS) or in a defined medium with HEPES, on heat ewe serum and heparin. After the incubation to promote capacitation, simplified triple-stain technique was used to evaluate the spontaneous acrosome reaction of the capacitated sperm. Superovulation in 96 golden hamsters was induced by PMSG and hCG. The oocytes were treated with hyaluronidase and trypsin to remove, respectively, the cumulus cells and the zona pellucida. Oocytes and capacitated sperm were incubated during 3 hours for further penetration. Then, oocytes were fixed and stained, being evaluated under phase contrast microscope. No significant statistical difference (p >; 0.05) was found between media, concerning the penetration rate of the capacitated sperm and between number of sperm viable with acrosome reaction after the capacitation treatment using two different media. It was concluded that both media utilized were effective in capacitating ram sperm.

Foram realizados 24 experimentos de penetração de espermatozóides de carneiros em oócitos zona-free de hamster com a finalidade de avaliar dois diferentes meios de capacitação espermática. Foi feito um "pool" do sêmen fresco de três carneiros mestiços, submetido à lavagem por centrifugação para retirada do plasma seminal e incubação em meio altamente iônico (HIS) ou em meio quimicamente definido acrescido de HEPES, soro de ovelha no cio e heparina, a fim de promover a capacitação dos espermatozóides. Foram utilizadas 96 hamsters fêmeas, superovuladas com os hormônios PMSG e hCG, que forneceram 3.069 oócitos, (média de 31,97 oócitos por fêmea). Os oócitos foram tratados em meio TL-HEPES-PVA com hialuronidase, a fim de retirar as células do cumulus. A zona pelúcida foi retirada através de lavagem dos oócitos em meio TL-HEPES-PVA com tripsina. Em seguida, os oócitos foram colocados em placas de fertilização, às quais se adicionaram os espermatozóides capacitados, permanecendo em estufa de CO2 por 3 horas a 38,5ºC, para promover a penetração. A seguir, procedeu-se à fixação e coloração dos oócitos. Foram realizados experimentos de coloração dos espermatozóides capacitados pela técnica de tripla coloração simplificada. Não houve diferença estatisticamente significativa (p >; 0,05) entre os meios utilizados, no que diz respeito à taxa de penetração dos espermatozóides capacitados,

Differences in the acquired resistance of dogs, hamsters, and guinea pigs to repeated infestations with adult ticks Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) / Diferenças na resistência adquirida de cães, hamsters e cobaias a infestações repetidas por carrapatos Rhipicephalus sanguineus (Acari:Ixodidae) adultos

Tick-bite naive experimental groups of dogs, hamsters and guinea pigs were infested three times with adult ticks Rhipicephalus sanguineus and the acquired resistance, based on the variation of some biological parameters of the female tick was compared. The results showed that hamsters and mainly guinea pigs develop a very efficient immunity to this tick species as demonstrated by a very significant drop in the efficiency rate of female ticks in converting their food reservoir to eggs and larvae from the first to the second and third infestations. At the same time, dogs were unable to display such a resistance. Female tick performance was similar throughout the infestations in this host; there was even a tendency of improvement of the performance with the succession of infestations. These results underline the need of comparative studies on the acquired resistance to ticks involving natural and unnatural hosts as a way of putting in evidence defence mechanisms which might be altered or hidden in natural host - parasite relationships.

Grupos experimentais de cães, hamsters e cobaias sem contato anterior com carrapatos, sofreram três infestações consecutivas por carrapatos Rhipicephalus sanguineus adultos e a resistência adquirida comparada com base na variação de alguns dos parâmetros biológicos da fêmea do carrapato. Os resultados mostraram que hamsters e cobaias principalmente, desenvolvem uma reação imune muito eficiente a esta espécie de carrapato como demonstrado por uma queda altamente significativa na taxa de eficiência da fêmea em converter sua reserva alimentar em ovos e larvas da primeira para as segunda e terceira infestações. Já cães foram incapazes de desenvolver tal resistência. Neste hospedeiro a performance das fêmeas dos carrapatos foi similar durante todas as infestações, havendo até uma tendência de melhora com a sucessão das infestações. Estes resultados reforçam a necessidade de estudos comparativos sobre a resistência adquirida a carrapatos, envolvendo hospedeiros naturais e não naturais, como forma de colocar em evidência mecanismos de defesa que possam estar alterados ou ocultos em relações parasita-hospedeiro naturais.

An insight into the histopathology caused by the tick Rhipicephalus sanguineus (Acarina: Ixodidae) in the skin of previously infested, vaccinated or tick-bite naive dogs, guinea pigs and hamsters / Momento histopatológico na pele de cães, hamsters e cobaias sofrendo infestação experimental pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus pela primeira vez ou após vacinações ou infestações prévias

Dogs", guinea pigs" and hamsters local skin reaction to the attachment and feeding of the tick Rhipicephalus sanguineus were analysed under light microscopy. The hosts were either tick-bite naive, previously infested or vaccinated with crude unfed adult tick extract. Biopsies were taken at the end of each infestation. Changes common to every host, regardless of experimental group, included presence of tick or its mouthparts embedded in a cone of cementum at the surface of the skin, epidermal hyperplasia, hyperkeratosis and acanthosis, edema and copious inflammatory cell infiltration in the dermis, underneath the tick attachment site. Dogs in all experimental groups reacted with an almost exclusive PMN neutrophil accumulation, while guinea pigs showed a predominantly mononuclear cell infiltration in every experimental group. Hamsters suffering first infestations had a mainly neutrophilic infiltration, showed a predominantly mononuclear cell infiltration in response to multiple infestations, and when previously vaccinated this host had a predominantly eosinophilic infiltration. The persistence of PMN neutrophils in dogs suggest a control of the local immune inflammatory response by the tick. The predominantly eosinophilic infiltration in previously vaccinated hamsters might indicate that different immune mechanisms were triggered by infestation and vaccination.

Analisou-se, sob microscopia óptica, reação cutânea de cães, hamsters e cobaia à fixação e alimentação do carrapato Rhipicephalus sanguineus. Os hospedeiros empregados foram previamente infestados ou vacinados com extrato total de carrapato adulto não alimentado ou eram livres de contato anterior com o carrapato. Biópsias foram obtidas ao final de cada infestação. As alterações comuns a todos os hospedeiros, independente do grupo experimental, incluíram a presença de carrapato ou de suas peças bucais embutidos em um cone de cemento na superfície da pele, hiperplasia da epiderme, hiperqueratose e acantose, edema e infiltração celular inflamatória intensa na derme abaixo do ponto de fixação do carrapato. Os cães, em todos os grupos experimentais, reagiram com um acúmulo praticamente exclusivo de neutrófilos polimorfonucleares enquanto cobaias exibiram uma infiltração celular predominantemente mononuclear nas diversas condições experimentais. Hamsters sofrendo primeira infestação apresentaram uma infiltração predominantemente neutrofílica, infiltração predominantemente mononuclear em resposta a múltiplas infestações e, quando vacinados, uma infiltração preponderantemente eosinofílica. A persistência de neutrófilos nos cães sugere um controle local da resposta inflamatória imune pelo carrapato. A infiltração predominantemente eosinofílica em hamsters vacinados poderia indicar que m