Padronização de um ELISA indireto a partir da utilização de uma proteína de superfície do vírus da anemia infecciosa equina como antígeno para o diagnóstico dessa enfermidade / Standardization of an indirect ELISA using a surface protein of the equine infectious anemia virus as an antigen for the diagnosis of this disease

A anemia infecciosa equina é uma importante enfermidade que acomete os equídeos em todo o mundo, se apresentando de forma aguda, crônica e assintomática causando grandes prejuízos para a economia tanto para criadores que vivem do trabalho desses animais quantos aos criadores que investem no melhoramento das raças, impedindo o acesso ao mercado tanto nacional quanto internacional. O Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento considera o IDGA como teste oficial para diagnóstico dessa enfermidade, porém essa técnica é demorada e muita vez acaba sendo subjetiva, dependendo da experiencia particular de cada Laboratorista. Além de não conseguir detectar animais no início da infecção. Logo, a necessidade de se buscar novas técnicas como o ELISA indireto que aperfeiçoem o tempo de análise dos resultados, facilita a automação e obtém resultados confiáveis. O estudo realizado teve como objetivo padronizar uma técnica de ELISA indireto utilizando uma proteína de envelope viral GP90 como antígeno para diagnóstico da anemia infecciosa equina. Avaliando o desempenho do teste a partir da sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivo e negativo. Os valores obtidos foram: 91,11%, 93,33%, 91,11% e 93,33% respectivamente. Concluiu-se que o teste apresenta bom desempenho, além da possibilidade de detectar amimais positivos no início da infecção.

Equine infectious anemia is an important disease that affects horses all over the world, presenting in an acute, chronic and asymptomatic way, causing great damage to the economy, both for breeders who live off the work of these animals and for breeders who invest in the improvement of breeds, preventing access to both national and international markets. The Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply considers AGID to be the official test for diagnosing this disease, but this technique takes time and often ends up being subjective, depending on the particular experience of each laboratory worker. In addition to not being able to detect animals at the beginning of the infection. Therefore, the need to seek new techniques such as indirect ELISA that improve the time of analysis of results, facilitate automation and obtain reliable results. The aim of this study was to standardize an indirect ELISA technique using a GP90 viral envelope protein as an antigen for the diagnosis of equine infectious anemia. Evaluating test performance based on sensitivity, specificity and positive and negative predictive values. The values obtained were 91.11%, 93.33%, 91.11 and 93.33 respectively. It was concluded that the test performs well, in addition to the possibility of detecting positive animals at the beginning of the infection.

Evaluation of the use of dry blood spots for progesterone determination in ewes / Avaliação do uso de manchas secas de sangue para dosagem de progesterona em ovinos

The use of dried blood spots on filter paper has been shown to be a practical alternative in several studies with humans and animals, enabling a simple means of storing and transporting viable blood samples for various laboratory analyses. However, its applicability in the measurement of progesterone in animals is scarce. Thus, the objective of this study was to evaluate the feasibility of using dried blood spots for the measurement of progesterone in sheep. In total, 38 blood samples from 6 sheep were dripped onto filter paper, and the remainder of each sample was separated into serum. The progesterone levels in the serum samples and in the dry drops were measured by enzyme immunoassay and subsequently correlated. The levels of progesterone in the serum and dry spots showed a high correlation between the matrices (R2 = 0.9694). In conclusion, this study demonstrated the feasibility of using samples of dried sheep blood spots for the measurement of progesterone, and the storage and transport technique can be applied in the field.

O uso de manchas secas de sangue em papel filtro tem se demonstrado uma alternativa prática em vários estudos com humanos e animais, possibilitando um meio simples de armazenamento e transporte de amostras de sangue viáveis para várias análises laboratoriais. Entretanto, sua aplicabilidade na dosagem de progesterona em animais é escassa. Deste modo, o objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade do uso de manchas secas de sangue para a dosagem de progesterona em ovinos. Assim, 38 amostras de sangue de 6 ovelhas foram gotejadas em papel filtro e o restante de cada amostra foi separado o soro. Os níveis de progesterona nas amostras de soro e nas gotas secas foram mensurados por enzimaimunoensaio e posteriormente correlacionados. Os níveis de progesterona no soro e nas manchas secas apresentaram uma alta correlação entre as matrizes (R2=0,9694). Em conclusão, este estudo demonstrou a viabilidade do uso de amostras de manchas secas de sangue de ovino para a dosagem de progesterona, podendo a técnica de armazenamento e transporte ser aplicada a campo.

Results of a sample-to-cutoff ratio using Abbott Architect rHTLV-I/II assay allow to predict detection of HTLV-1 and HTLV-2 proviral DNA by real-time PCR / Resultados da razão sinal da amostra sobre o cutoff da reação no ensaio Abbott Architect rHTLV-I/II permite prever a detecção de DNA proviral por PCR em tempo real

The present study aims to correlate the sample-to-cutoff ratios (S/CO) distributions of reactive results for HTLV-1/2 antibodies with the detection of proviral DNA in a population of blood donor candidates. It was carried out a retrospective data search of 632 HTLV-1/2 reactive samples, submitted to confirmatory testing from January 2015 to December 2019. Serological screening was performed by chemiluminescent microparticle immunoassay Architect rHTLV-I/II, whereas confirmatory testing was performed by in-house real-time polymerase chain reaction method. 496 out of 632 samples (78%) had undetectable HTLV-1/2 proviral DNA and 136 (22%) had detectable proviral DNA. HTLV infection was not confirmed in any individual for whom the S/CO ratio value was <4, and proviral DNA detection rates gradually escalated as S/CO ratio values increased. The sensitivity and predictive positive value found for the Architect rHTLV-I/II was 100% and 22%, respectively. The receiver operating characteristic (ROC) curve analysis showed that the optimal S/CO ratio value for predicting the presence of HTLV-1/2 was 18.11. High S/CO ratios were more associated with the detection of proviral DNA. The S/CO ratio value <4 suggests excluding true HTLV infection and the risk of blood transmission (AU).

O estudo tem como objetivo correlacionar às distribuições das razões sample-to-cutoff (S/CO) de resultados reagentes para anticorpos HTLV-1/2 com a detecção de DNA proviral em uma população de candidatos à doação de sangue. Realizou-se uma busca retrospectiva de dados de 632 amostras reagentes para HTLV-1/2 submetidas à testagem confirmatória entre janeiro de 2015 a dezembro de 2019. A triagem sorológica foi realizada pelo imunoensaio quimioluminescente de micropartículas Architect rHTLV-I/II, enquanto o teste confirmatório foi realizado pelo método de PCR em tempo real in-house. 496 de 632 amostras (78%) apresentaram DNA proviral indetectável e 136 (22%) apresentaram DNA proviral detectável. A infecção por HTLV não foi confirmada em nenhum indivíduo com valor de S/CO <4 e as taxas de detecção de DNA proviral escalonaram gradualmente à medida que as razões S/CO aumentaram. A sensibilidade e valor preditivo positivo encontrados para o Architect rHTLV-I/II foram 100% e 22%, respectivamente. Utilizando análise de curva ROC, o valor de razão S/CO ideal para predizer a presença de DNA proviral foi de 18,11. Razões S/CO elevadas foram mais associadas à detecção de DNA proviral. Em suma, o valor de S/CO <4 sugere a exclusão de infecção por HTLV e o risco de transmissão pelo sangue (AU).

Epidemiological and clinical aspects of snakebites in the upper Juruá River region, western Brazilian Amazonia / Aspectos clínicos e epidemiológicos de acidentes ofídicos na região do Alto Juruá, oeste da Amazônia brasileira

This study addresses the clinical and epidemiological aspects of envenoming cases resulting from snakebites treated at a hospital in Cruzeiro do Sul, in the upper Juruá River region, western Brazilian Amazonia. The specific identity of snakes that caused the envenomings was inferred (a) from the diagnosis of patient symptoms and signs upon hospital admission, (b) by enzyme immunoassay for detection of Bothrops atrox and Lachesis muta venom from serum samples taken from patients before antivenom therapy, or (c) by direct identification of the snake, when it was brought along to the hospital or photographed. There were 133 snakebites (76.2 cases per 100,000 inhabitants) registered during one year (July 2017 to June 2018). Most snakebites (88.7%) were caused by Bothrops spp., and the rest by non-venomous snakes or dry bites. Snakebites tended to occur more often during the rainy season, coinciding with the period of greater reproductive activity of the snakes and greater availability of their prey. In addition, the increase in the water level of rivers and lakes during the rainy season tends to concentrate snakes in dry places and, thus, to increase encounters with humans. Information campaigns on prevention and first aid, specially among the most vulnerable groups (indigenous people, farmers, and children and teenagers in rural areas), and the importance of using protective equipment (boots, leggings, leather gloves) in certain high risk activities (e.g. agriculture and extractivism in forests) are fundamental for the reduction of snakebite morbidity.(AU)

Este estudo aborda os aspectos clínicos e epidemiológicos dos envenenamentos ofídicos tratados em um hospital em Cruzeiro do Sul, Acre, resultantes de acidentes que ocorreram na região do Alto Juruá, no oeste da Amazônia brasileira. A identidade específica das serpentes que causaram os envenenamentos foi inferida (a) pelos sinais e sintomas apresentados pelo paciente na admissão hospitalar, (b) por imunoensaio enzimático para detecção de veneno de Bothrops atrox e Lachesis muta em amostras de soro retiradas de pacientes antes da soroterapia, e (c) pela identificação direta da serpente, quando esta foi levada para o hospital ou fotografada. Houve 133 casos (76,2 casos por 100.000 habitantes) de acidentes ofídicos registrados durante um ano (julho 2017 a junho 2018). A maioria das picadas de serpentes (88,7%) foi causada por Bothrops spp., e o restante por espécies não peçonhentas ou picadas secas. Os acidentes ofídicos tenderam a ocorrer com maior frequência durante a estação chuvosa, coincidindo com o período de maior atividade reprodutiva das serpentes e maior disponibilidade de suas presas. Além disso, o aumento dos níveis de rios e lagos pode fazer com que esses animais procurem locais mais secos, aumentando a frequência de encontro com seres humanos. Campanhas educativas sobre prevenção e primeiros socorros, principalmente entre os grupos mais vulneráveis (indígenas, agricultores, crianças e adolescentes em áreas rurais), e sobre a importância da utilização de equipamentos de proteção (botas, perneiras, luvas de couro) em determinadas atividades de maior risco (e.g., agricultura e extrativismo em florestas), são fundamentais para reduzir a morbidade de picadas de serpentes.(AU)

Anticorpos policlonais para o imunodiagnóstico de vírus bovino / Polyclonal antibodies for the immunodiagnostic of bovine viruses

O objetivo do estudo foi produzir anticorpos policlonais para vírus bovino e testar a reatividade em imunoensaios como imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. Como imunógeno utilizou-se cepas e/ou isolados dos herpesvírus bovino tipo 1, 2 e 5 (BoHV-1, BoHV-2 e BoHV-5), vírus da diarreia viral bovina (BVDV), vírus respiratório sincicial bovino (BRSV), vírus da língua azul (BTV) e vírus vaccina (VACV) amplificados em cultivo celular. Os coelhos foram imunizados em intervalos regulares e o soro hiperimune produzido foi utilizado como anticorpo primário nos imunoensaios. A diluição de trabalho para cada antissoro foi determinada por diluição seriada limitante e variaram entre 1:800 e 1:51.200. As maiores diluições foram observadas para imunoperoxidase, quando comparadas com a imunofluorescência e slot blot. Diluições menores que 1:800 foram associadas com aumento de reações inespecíficas. Os antissoros anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV e -BRSV reagiram frente a isolados heterólogos em ensaios de imunofluorescência e imunoperoxidase. Conclui-se que os antissoros produzidos possuem elevadas concentrações de anticorpos específicos para os vírus e é uma alternativa para a utilização em imunoensaios.

The objective of the study was to produce polyclonal antibodies to bovine viruses and to test the reactivity in immunoassays such as immunofluorescence, immunoperoxidase and slot blot. Bovine viral diarrhea virus (BVDV), bovine respiratory syncytial virus (BRSV), bovine herpesvirus type 1, 2 and 5 (BoHV-1, BoHV-2 and BoHV-5) blue tongue virus (BTV) and vaccinia virus (VACV) were amplified in cell culture and used to immunize rabbits. Animals were immunized at regular intervals and the hyper immune serum produced was used as primary antibody in the immunoassays. The working dilution for each antiserum was determined by limiting serial dilution and varied from 1: 800 to 1: 51,200. The highest dilutions were observed for immunoperoxidase, when compared with immunofluorescence and slot blot. Dilutions lower than 1:800 were associated with the presence of nonspecific reactions. Anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV and -BRSV antisera reacted against heterologous isolates in immunofluorescence and immunoperoxidase assays. It is concluded that the produced polyclonal antibodies have high concentrations of virus-specific antibodies and are an alternative for use in immunoassays.

Anticorpos policlonais para o imunodiagnóstico de vírus bovino / Polyclonal antibodies for the immunodiagnostic of bovine viruses

O objetivo do estudo foi produzir anticorpos policlonais para vírus bovino e testar a reatividade em imunoensaios como imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. Como imunógeno utilizou-se cepas e/ou isolados dos herpesvírus bovino tipo 1, 2 e 5 (BoHV-1, BoHV-2 e BoHV-5), vírus da diarreia viral bovina (BVDV), vírus respiratório sincicial bovino (BRSV), vírus da língua azul (BTV) e vírus vaccina (VACV) amplificados em cultivo celular. Os coelhos foram imunizados em intervalos regulares e o soro hiperimune produzido foi utilizado como anticorpo primário nos imunoensaios. A diluição de trabalho para cada antissoro foi determinada por diluição seriada limitante e variaram entre 1:800 e 1:51.200. As maiores diluições foram observadas para imunoperoxidase, quando comparadas com a imunofluorescência e slot blot. Diluições menores que 1:800 foram associadas com aumento de reações inespecíficas. Os antissoros anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV e -BRSV reagiram frente a isolados heterólogos em ensaios de imunofluorescência e imunoperoxidase. Conclui-se que os antissoros produzidos possuem elevadas concentrações de anticorpos específicos para os vírus e é uma alternativa para a utilização em imunoensaios.(AU)

The objective of the study was to produce polyclonal antibodies to bovine viruses and to test the reactivity in immunoassays such as immunofluorescence, immunoperoxidase and slot blot. Bovine viral diarrhea virus (BVDV), bovine respiratory syncytial virus (BRSV), bovine herpesvirus type 1, 2 and 5 (BoHV-1, BoHV-2 and BoHV-5) blue tongue virus (BTV) and vaccinia virus (VACV) were amplified in cell culture and used to immunize rabbits. Animals were immunized at regular intervals and the hyper immune serum produced was used as primary antibody in the immunoassays. The working dilution for each antiserum was determined by limiting serial dilution and varied from 1: 800 to 1: 51,200. The highest dilutions were observed for immunoperoxidase, when compared with immunofluorescence and slot blot. Dilutions lower than 1:800 were associated with the presence of nonspecific reactions. Anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV and -BRSV antisera reacted against heterologous isolates in immunofluorescence and immunoperoxidase assays. It is concluded that the produced polyclonal antibodies have high concentrations of virus-specific antibodies and are an alternative for use in immunoassays.(AU)

Proteinograma e concentração sérica de IgG em potros, do nascimento aos trinta dias de vida, tratados com plasma / Proteinogram and serum IgG concentration in newborn foals up to thirty days of life treated with plasma

Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma e concentrações séricas de IgG (após a padronização de teste ELISA) em potros do nascimento aos trinta dias de idade, antes e depois de mamarem colostro e serem tratados com plasma por via intravenosa. Foram utilizados 20 potros e suas respectivas mães, além de quatro animais doadores de plasma. Foram colhidas amostras de sangue dos potros em cinco momentos, logo após o nascimento e antes de mamar colostro (M1), dez horas após nascimento (M2), 24 horas após nascimento e previamente administração do plasma sanguíneo (M3), 48 horas de vida e 24 horas após administração do plasma sanguíneo (M4), e 30 dias após nascimento (M5). Foram colhidos sangue e colostro das éguas progenitoras no momento do parto. A concentração de proteína total (PT) e albumina foram determinadas em analisador bioquímico, a concentração de PT também foi avaliada em refratômetro manual. O fracionamento proteico foi realizado utilizando eletroforese em gel de agarose. A densidade do colostro foi avaliada com colostrômetros de refração BRIX e de densidade específica. A concentração de IgG total de todas as amostras foi determinada por teste ELISA. Com o sistema de ELISA aqui proposto foi possível determinar concentrações de IgG em amostras de soro, plasma e colostro equino com adequada repetibilidade. A média ± desvio padrão da concentração sérica de IgG dos potros ao nascer, foi de 15±8mg/dL, com dez horas de vida foi de 2.408±608mg/dL, se manteve em níveis semelhantes até 48 horas (2.364±784mg/dL) e diminuíram significativamente aos 30 dias de vida (1.414±586mg/dL). A concentração sérica e colostral de IgG nas éguas foi de 1.746±505mg/dL e 7.714±2.619mg/dL, respectivamente. A concentração plasmática de IgG dos doadores de plasma foi de 2.026±148mg/dL. Houve correlação positiva entre as concentrações séricas de IgG e PT (r=0,69 para refratômetro e r=0,76 para bioquímico), GT (r=0,81) e gamaglobulina (r=0,85). Dez horas após o nascimento foi possível verificar a transferência de imunidade passiva, possibilitando adotar medidas profiláticas e/ou terapêuticas em haras de criação de cavalos. Considerando que a proteína total, globulinas totais e fração γ-globulina apresentam correlação com IgG, estas determinações são úteis para monitorar os potros após mamarem o colostro. Um litro de plasma administrado às 24 horas de vida não foi suficiente para aumentar as concentrações séricas de IgG, 24 horas após transfusão, em potros com adequada transferência de imunidade passiva.(AU)

The aim of this study was to evaluate serum protein and serum IgG concentrations (after a direct enzyme immunoassay test ELISA optimization) in newborns foals from birth to thirty days of life before and after colostrum consumption and intravenous treatment with plasma. Twenty foals and their respective progenitors as well as four plasma donor's horses were used. Blood samples were obtained from newborn foals at five time points, immediately after birth and before colostrum intake (M1), ten hours after birth (M2), 24 hours after birth and prior administration of blood plasma (M3), 48 hours after birth and 24 hours after plasma administration (M4), and 30 days after birth (M5). Blood and colostrum samples were collected from the progenitor mares immediately postpartum. Concentration of total protein (TP) and albumin were determined using a biochemical analyzer. The TP concentration was also measured by refractometer. Fractions of total serum protein were separated using agarose gel electrophoresis. Colostrum density was evaluated using BRIX refractometer and specific density colostrometer. Total IgG concentration was determined by an enzyme-linked immunosorbent assay. With the ELISA system proposed here it was possible to determine IgG concentrations in serum, plasma, and equine colostrum samples with adequate repeatability. Serum IgG concentration in foals at birth was 15±8mg/dL (mean ± standard deviation) raising at ten hours (2,408±608mg/dL) and remaining at similar levels up to 48 hours of life (2,364±784mg/dL), and decreasing significantly at 30 days of age (1,414±586mg/dL). Serum and colostrum IgG concentrations of mares were 1,746±505mg/dL and 7,714±2,619mg/dL, respectively. The plasma IgG concentrations from donor mares were 2,026±148mg/dL. Total protein, total globulins, and γ-globulin fraction showed correlation with IgG. Ten hours post birth was an adequate time to verify the transfer of passive immunity, allowing to adoption prophylactic and/or therapeutic measures in a horse farms. One liter of plasma administered at 24 hours of life was not sufficient to raise serum IgG concentrations in foals without passive immunity transfer failure.(AU)

Proteinograma e concentração sérica de IgG em potros, do nascimento aos trinta dias de vida, tratados com plasma / Proteinogram and serum IgG concentration in newborn foals up to thirty days of life treated with plasma

Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma e concentrações séricas de IgG (após a padronização de teste ELISA) em potros do nascimento aos trinta dias de idade, antes e depois de mamarem colostro e serem tratados com plasma por via intravenosa. Foram utilizados 20 potros e suas respectivas mães, além de quatro animais doadores de plasma. Foram colhidas amostras de sangue dos potros em cinco momentos, logo após o nascimento e antes de mamar colostro (M1), dez horas após nascimento (M2), 24 horas após nascimento e previamente administração do plasma sanguíneo (M3), 48 horas de vida e 24 horas após administração do plasma sanguíneo (M4), e 30 dias após nascimento (M5). Foram colhidos sangue e colostro das éguas progenitoras no momento do parto. A concentração de proteína total (PT) e albumina foram determinadas em analisador bioquímico, a concentração de PT também foi avaliada em refratômetro manual. O fracionamento proteico foi realizado utilizando eletroforese em gel de agarose. A densidade do colostro foi avaliada com colostrômetros de refração BRIX e de densidade específica. A concentração de IgG total de todas as amostras foi determinada por teste ELISA. Com o sistema de ELISA aqui proposto foi possível determinar concentrações de IgG em amostras de soro, plasma e colostro equino com adequada repetibilidade. A média ± desvio padrão da concentração sérica de IgG dos potros ao nascer, foi de 15±8mg/dL, com dez horas de vida foi de 2.408±608mg/dL, se manteve em níveis semelhantes até 48 horas (2.364±784mg/dL) e diminuíram significativamente aos 30 dias de vida (1.414±586mg/dL). A concentração sérica e colostral de IgG nas éguas foi de 1.746±505mg/dL e 7.714±2.619mg/dL, respectivamente. A concentração plasmática de IgG dos doadores de plasma foi de 2.026±148mg/dL. Houve correlação positiva entre as concentrações séricas de IgG e PT (r=0,69 para refratômetro e r=0,76...(AU)

The aim of this study was to evaluate serum protein and serum IgG concentrations (after a direct enzyme immunoassay test ELISA optimization) in newborns foals from birth to thirty days of life before and after colostrum consumption and intravenous treatment with plasma. Twenty foals and their respective progenitors as well as four plasma donor's horses were used. Blood samples were obtained from newborn foals at five time points, immediately after birth and before colostrum intake (M1), ten hours after birth (M2), 24 hours after birth and prior administration of blood plasma (M3), 48 hours after birth and 24 hours after plasma administration (M4), and 30 days after birth (M5). Blood and colostrum samples were collected from the progenitor mares immediately postpartum. Concentration of total protein (TP) and albumin were determined using a biochemical analyzer. The TP concentration was also measured by refractometer. Fractions of total serum protein were separated using agarose gel electrophoresis. Colostrum density was evaluated using BRIX refractometer and specific density colostrometer. Total IgG concentration was determined by an enzyme-linked immunosorbent assay. With the ELISA system proposed here it was possible to determine IgG concentrations in serum, plasma, and equine colostrum samples with adequate repeatability. Serum IgG concentration in foals at birth was 15±8mg/dL (mean ± standard deviation) raising at ten hours (2,408±608mg/dL) and remaining at similar levels up to 48 hours of life (2,364±784mg/dL), and decreasing significantly at 30 days of age (1,414±586mg/dL). Serum and colostrum IgG concentrations of mares were 1,746±505mg/dL and 7,714±2,619mg/dL, respectively. The plasma IgG concentrations from donor mares were 2,026±148mg/dL. Total protein...(AU)

Proteinograma e concentração sérica de IgG em potros, do nascimento aos trinta dias de vida, tratados com plasma

ABSTRACT: The aim of this study was to evaluate serum protein and serum IgG concentrations (after a direct enzyme immunoassay test ELISA optimization) in newborns foals from birth to thirty days of life before and after colostrum consumption and intravenous treatment with plasma. Twenty foals and their respective progenitors as well as four plasma donors horses were used. Blood samples were obtained from newborn foals at five time points, immediately after birth and before colostrum intake (M1), ten hours after birth (M2), 24 hours after birth and prior administration of blood plasma (M3), 48 hours after birth and 24 hours after plasma administration (M4), and 30 days after birth (M5). Blood and colostrum samples were collected from the progenitor mares immediately postpartum. Concentration of total protein (TP) and albumin were determined using a biochemical analyzer. The TP concentration was also measured by refractometer. Fractions of total serum protein were separated using agarose gel electrophoresis. Colostrum density was evaluated using BRIX refractometer and specific density colostrometer. Total IgG concentration was determined by an enzyme-linked immunosorbent assay. With the ELISA system proposed here it was possible to determine IgG concentrations in serum, plasma, and equine colostrum samples with adequate repeatability. Serum IgG concentration in foals at birth was 15±8mg/dL (mean ± standard deviation) raising at ten hours (2,408±608mg/dL) and remaining at similar levels up to 48 hours of life (2,364±784mg/dL), and decreasing significantly at 30 days of age (1,414±586mg/dL). Serum and colostrum IgG concentrations of mares were 1,746±505mg/dL and 7,714±2,619mg/dL, respectively. The plasma IgG concentrations from donor mares were 2,026±148mg/dL. Total protein, total globulins, and -globulin fraction showed correlation with IgG. Ten hours post birth was an adequate time to verify the transfer of passive immunity, allowing to adoption prophylactic and/or therapeutic measures in a horse farms. One liter of plasma administered at 24 hours of life was not sufficient to raise serum IgG concentrations in foals without passive immunity transfer failure.

RESUMO: Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma e concentrações séricas de IgG (após a padronização de teste ELISA) em potros do nascimento aos trinta dias de idade, antes e depois de mamarem colostro e serem tratados com plasma por via intravenosa. Foram utilizados 20 potros e suas respectivas mães, além de quatro animais doadores de plasma. Foram colhidas amostras de sangue dos potros em cinco momentos, logo após o nascimento e antes de mamar colostro (M1), dez horas após nascimento (M2), 24 horas após nascimento e previamente administração do plasma sanguíneo (M3), 48 horas de vida e 24 horas após administração do plasma sanguíneo (M4), e 30 dias após nascimento (M5). Foram colhidos sangue e colostro das éguas progenitoras no momento do parto. A concentração de proteína total (PT) e albumina foram determinadas em analisador bioquímico, a concentração de PT também foi avaliada em refratômetro manual. O fracionamento proteico foi realizado utilizando eletroforese em gel de agarose. A densidade do colostro foi avaliada com colostrômetros de refração BRIX e de densidade específica. A concentração de IgG total de todas as amostras foi determinada por teste ELISA. Com o sistema de ELISA aqui proposto foi possível determinar concentrações de IgG em amostras de soro, plasma e colostro equino com adequada repetibilidade. A média ± desvio padrão da concentração sérica de IgG dos potros ao nascer, foi de 15±8mg/dL, com dez horas de vida foi de 2.408±608mg/dL, se manteve em níveis semelhantes até 48 horas (2.364±784mg/dL) e diminuíram significativamente aos 30 dias de vida (1.414±586mg/dL). A concentração sérica e colostral de IgG nas éguas foi de 1.746±505mg/dL e 7.714±2.619mg/dL, respectivamente. A concentração plasmática de IgG dos doadores de plasma foi de 2.026±148mg/dL. Houve correlação positiva entre as concentrações séricas de IgG e PT (r=0,69 para refratômetro e r=0,76 para bioquímico), GT (r=0,81) e gamaglobulina (r=0,85). Dez horas após o nascimento foi possível verificar a transferência de imunidade passiva, possibilitando adotar medidas profiláticas e/ou terapêuticas em haras de criação de cavalos. Considerando que a proteína total, globulinas totais e fração -globulina apresentam correlação com IgG, estas determinações são úteis para monitorar os potros após mamarem o colostro. Um litro de plasma administrado às 24 horas de vida não foi suficiente para aumentar as concentrações séricas de IgG, 24 horas após transfusão, em potros com adequada transferência de imunidade passiva.

Bovine Respiratory Disease (BRD) complex as a signal for Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) presence in the herd

Background: Infections are caused by Bovine Viral Diarrhea Virus and still continue to be a worldwide plague in cattle industry. It is responsible for sudden death syndromes in adult cattle with high mortality rates, abortions, acute gastrointestinal and respiratory diseases. The BVDV infection occurs in early pregnancy (40-142 days), in immunosuppressed females or cows results in 100% of persistently infected (PI) calves that are seronegative and asymptomatic at birth. Evidences suggests that BVDV contributes to BRD complex potentiating secondary infections caused by Mannheimia haemolytica e Pasteurella multocida due to its immunosuppressive action. However, the farmers have often associated the respiratory syndrome with other infectious agents. This paper reports the attendance of dairy calves manifesting clinical signs of bronchopneumonia, which led to the screening of the persistently infected animals to control of the BVDV infection in the herd. Materials, Methods & Results: During the technical assistance, ten calves manifesting bronchopneumonia were selected to trans-tracheal lavage (TL) in order to identify possible infectious agents. Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) detected the presence of BVDV in two heifers. Pasteurella multocida was the unique bacterial agent isolated from TL (5/10, 50%). These data motivated the technical team and [...](AU)

Bovine Respiratory Disease (BRD) complex as a signal for Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) presence in the herd

Background: Infections are caused by Bovine Viral Diarrhea Virus and still continue to be a worldwide plague in cattle industry. It is responsible for sudden death syndromes in adult cattle with high mortality rates, abortions, acute gastrointestinal and respiratory diseases. The BVDV infection occurs in early pregnancy (40-142 days), in immunosuppressed females or cows results in 100% of persistently infected (PI) calves that are seronegative and asymptomatic at birth. Evidences suggests that BVDV contributes to BRD complex potentiating secondary infections caused by Mannheimia haemolytica e Pasteurella multocida due to its immunosuppressive action. However, the farmers have often associated the respiratory syndrome with other infectious agents. This paper reports the attendance of dairy calves manifesting clinical signs of bronchopneumonia, which led to the screening of the persistently infected animals to control of the BVDV infection in the herd. Materials, Methods & Results: During the technical assistance, ten calves manifesting bronchopneumonia were selected to trans-tracheal lavage (TL) in order to identify possible infectious agents. Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) detected the presence of BVDV in two heifers. Pasteurella multocida was the unique bacterial agent isolated from TL (5/10, 50%). These data motivated the technical team and [...]

Bovine Respiratory Disease (BRD) Complex as a Signal for Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) Presence in the Herd

Background: Infections are caused by Bovine Viral Diarrhea Virus and still continue to be a worldwide plague in cattle industry. It is responsible for sudden death syndromes in adult cattle with high mortality rates, abortions, acute gastrointestinal and respiratory diseases. The BVDV infection occurs in early pregnancy (40-142 days), in immunosuppressed females or cows results in 100% of persistently infected (PI) calves that are seronegative and asymptomatic at birth. Evidences suggests that BVDV contributes to BRD complex potentiating secondary infections caused by Mannheimia haemolytica e Pasteurella multocida due to its immunosuppressive action. However, the farmers have often associated the respiratory syndrome with other infectious agents. This paper reports the attendance of dairy calves manifesting clinical signs of bronchopneumonia, which led to the screening of the persistently infected animals to control of the BVDV infection in the herd.Materials, Methods & Results: During the technical assistance, ten calves manifesting bronchopneumonia were selected to trans-tracheal lavage (TL) in order to identify possible infectious agents. Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) detected the presence of BVDV in two heifers. Pasteurella multocida was the unique bacterial agent isolated from TL (5/10, 50%). These data motivated the technical team and produc

Development of an ELISA for detection of serum antibodies against bovine leukemia virus / Desenvolvimento de um ELISA para a detecção de anticorpos séricos contra o vírus da leucose bovina

The Enzootic bovine leucosis is a chronic disease that causes economic losses to cattle. The detection of infected animals is an important step to control the disease. Therefore, this study aimed to investigate the prevalence of the virus in the Alto Uruguai Catarinense (Brazil) region and in parallel develop an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) able to discriminate serologically positive and negative animals for bovine leukemia virus (BLV). For ELISA standardization, antigen and serum controls block titrations were performed. Then, 289 bovine serum samples collected from 42 dairy herds were analyzed. The results obtained were compared with Agar Gel Immunodiffusion (AGID). The comparative analysis concluded that the developed ELISA showed a satisfactory performance and was able to discriminate between infected and uninfected animals. Although the sensitivity (80.2%) and specificity (71.2%) of the test showed lower values than those found in previous studies using commercial kits or in-house assays, the ELISA developed can be associated with IDGA as a screening test, in order to reduce the number of false negatives. The prevalence of antibodies against BLV found was 31% for AGID and 45% for ELISA. From 42 properties, 47.6% had at least one positive animal in the ELISA. These results indicate that bovine leukosis is widespread in dairy herds of the region analyzed. Therefore, the test developed could be used as an initial screening tool, thus contributing to the serological monitoring of the herd.

A leucose enzoótica bovina é uma enfermidade crônica que acarreta prejuízos econômicos ao produtor. Detectar a presença de animais infectados é uma etapa importante no controle desta doença. Portanto, neste trabalho procurou-se investigar a prevalência do vírus na região do Alto Uruguai Catarinense e, paralelamente, desenvolver um ensaio imunoenzimático (ELISA) capaz de discriminar animais sorologicamente positivos e negativos para o vírus da leucose bovina (BLV). Para a padronização do ELISA foram realizadas titulações em bloco do antígeno e de amostras de soros controles. Em seguida, foram analisadas 289 amostras de soro bovino, colhidas em 42 rebanhos leiteiros. Os resultados obtidos foram comparados aos da imunodifusão em gel de ágar (IDGA). A análise dos critérios de comparação permitiu concluir que o ELISA desenvolvido apresentou um desempenho satisfatório e foi capaz de discriminar animais infectados e não infectados. Embora os valores de sensibilidade (80,2%) e especificidade (71,2%) do teste tenham sido menores aos relatados em estudos utilizando kits comerciais ou testes in house, o ELISA desenvolvido pode ser associado à IDGA como teste de triagem, visando diminuir o número de falso-negativos. A prevalência de anticorpos contra o BLV na população amostrada foi de 31% para a IDGA e 45% para o ELISA. Das propriedades, 20 (47,6%) possuíam ao menos um animal positivo no ELISA. Estes dados indicam que a leucose enzoótica bovina (LEB) está amplamente disseminada nos rebanhos leiteiros da região. Portanto, o teste desenvolvido pode servir como uma ferramenta de triagem inicial, contribuindo desta maneira para o monitoramento sorológico do rebanho.

Development of an ELISA for detection of serum antibodies against bovine leukemia virus / Desenvolvimento de um ELISA para a detecção de anticorpos séricos contra o vírus da leucose bovina

The Enzootic bovine leucosis is a chronic disease that causes economic losses to cattle. The detection of infected animals is an important step to control the disease. Therefore, this study aimed to investigate the prevalence of the virus in the Alto Uruguai Catarinense (Brazil) region and in parallel develop an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) able to discriminate serologically positive and negative animals for bovine leukemia virus (BLV). For ELISA standardization, antigen and serum controls block titrations were performed. Then, 289 bovine serum samples collected from 42 dairy herds were analyzed. The results obtained were compared with Agar Gel Immunodiffusion (AGID). The comparative analysis concluded that the developed ELISA showed a satisfactory performance and was able to discriminate between infected and uninfected animals. Although the sensitivity (80.2%) and specificity (71.2%) of the test showed lower values than those found in previous studies using commercial kits or in-house assays, the ELISA developed can be associated with IDGA as a screening test, in order to reduce the number of false negatives. The prevalence of antibodies against BLV found was 31% for AGID and 45% for ELISA. From 42 properties, 47.6% had at least one positive animal in the ELISA. These results indicate that bovine leukosis is widespread in dairy herds of the region analyzed. Therefore, the test developed could be used as an initial screening tool, thus contributing to the serological monitoring of the herd.(AU)

A leucose enzoótica bovina é uma enfermidade crônica que acarreta prejuízos econômicos ao produtor. Detectar a presença de animais infectados é uma etapa importante no controle desta doença. Portanto, neste trabalho procurou-se investigar a prevalência do vírus na região do Alto Uruguai Catarinense e, paralelamente, desenvolver um ensaio imunoenzimático (ELISA) capaz de discriminar animais sorologicamente positivos e negativos para o vírus da leucose bovina (BLV). Para a padronização do ELISA foram realizadas titulações em bloco do antígeno e de amostras de soros controles. Em seguida, foram analisadas 289 amostras de soro bovino, colhidas em 42 rebanhos leiteiros. Os resultados obtidos foram comparados aos da imunodifusão em gel de ágar (IDGA). A análise dos critérios de comparação permitiu concluir que o ELISA desenvolvido apresentou um desempenho satisfatório e foi capaz de discriminar animais infectados e não infectados. Embora os valores de sensibilidade (80,2%) e especificidade (71,2%) do teste tenham sido menores aos relatados em estudos utilizando kits comerciais ou testes in house, o ELISA desenvolvido pode ser associado à IDGA como teste de triagem, visando diminuir o número de falso-negativos. A prevalência de anticorpos contra o BLV na população amostrada foi de 31% para a IDGA e 45% para o ELISA. Das propriedades, 20 (47,6%) possuíam ao menos um animal positivo no ELISA. Estes dados indicam que a leucose enzoótica bovina (LEB) está amplamente disseminada nos rebanhos leiteiros da região. Portanto, o teste desenvolvido pode servir como uma ferramenta de triagem inicial, contribuindo desta maneira para o monitoramento sorológico do rebanho.(AU)

PADRONIZAÇÃO DE ENSAIO ELISA IN HOUSE PARA DIAGNÓSTICO DE LEISHMANIOSE EM EQUINOS E CANINOS

As leishmanioses são doenças causadas pelo protozoário Leishmania spp. e estão distribuídas globalmente. Na América do Sul, o Brasil concentra o maior número de casos de leishmaniose visceral e cutânea em humanos. No estado do Rio Grande do Sul, na região da fronteira Oeste, é descrita a presença do flebotomíneo vetor e, também, a infecção em humanos, caninos e equinos. O cão doméstico é o principal reservatório nas zonas urbanas, entretanto, a participação dos equinos na manutenção do parasito vem sendo discutida. Diferentes técnicas diagnósticas estão disponíveis para identificação tanto do agente quanto da resposta imunológica do indivíduo. O teste de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) permite a identificação da resposta imune por meio da ligação antígeno anticorpo. Em 2011, foi definido como teste confirmatório para Leishmaniose visceral canina (LVC) pelo Ministério da Saúde. Tendo em vista a importância da Leishmaniose em cães no município de Uruguaiana e, a necessidade de estudos referentes à manutenção da doença e possíveis reservatórios, o presente trabalho teve por objetivo a padronização de um protocolo in house de ELISA indireto para detecção de resposta imunológica contra Leishmania spp. nas espécies canina e equina, bem como a avaliação sorológica de amostras provenientes dos municípios de Uruguaiana e Barra do Quaraí-RS. Inicialmente, foram padronizados os protocolos para o cultivo de Leishmania no laboratório. As cepas de Leishmania infantum, espécie utilizada como antígeno, foram disponibilizadas pela FRIOCRUZ/RJ. A fixação do antígeno foi realizada utilizando as formas promastigotas do parasito, sendo que, a concentração de 10ug/ml demonstrou melhores resultados. O protocolo de ELISA utilizado para as espécies equina e canina foram iguais. O teste das diluições do anticorpo primário variou entre as espécies: para equinos foram utilizadas as concentrações 1/100, 1/200, 1/400, 1/800 e 1/1000; e para caninos 1/100, 1/400 e 1/800. As concentrações de anticorpo secundário utilizadas nos testes foram de: 1/5000 e 1/10000 para equinos e caninos. Após a padronização, foram realizados os testes sorológicos em amostras provenientes de caninos e equinos dos municípios de Barra do Quaraí e Uruguaiana. Foram testados 51 cães e 159 equinos. Dentre os 51 caninos testados, 17 (33%) foram positivos na técnica de ELISA sendo que, 16 destes foram também positivos no teste imunocromatográfico DPP®. Referente aos equinos testados, 159 animais, 16 (10%) foram positivos no ELISA. Com isso, pode-se concluir que, foi possível a padronização de um protocolo de ELISA indireto in house para diagnóstico da leishmaniose em equinos e caninos e, a presença de animais positivos demonstra que há circulação da doença na população estudada.

Leishmaniasis are diseases caused by the protozoan Leishmania spp. and are distributed globally. In South America, Brazil concentrates the most significant number of visceral and cutaneous leishmaniasis cases in humans. In the western border of the state of Rio Grande do Sul, Brazil, there are reports about sandflies (the vectors) and the infection in humans, canines, and horses. The domestic dog is the main reservoir in urban areas; however, there is a discussion about horses' participation in the maintenance of the parasite. Several diagnostic techniques are available to identify both the agent and the individual's immune response. The ELISA test (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) allows identifying the immune response through antibody-antigen binding. In 2011, it was defined as a confirmatory test for canine visceral Leishmaniasis (LVC) by the Ministry of Health. Given the importance of Leishmaniasis in dogs in the municipality of Uruguaiana and the need for studies regarding the maintenance of the disease and possible reservoirs, the present work aimed to standardize an in house indirect ELISA protocol to detect an immune response against Leishmania spp. in canine and equine species, as well as the serological evaluation of samples from the municipalities of Uruguaiana and Barra do Quaraí-RS. Initially, protocols for the cultivation of Leishmania in the laboratory were standardized. The strains of Leishmania infantum, a species used as an antigen, were made available by FRIOCRUZ / RJ. Antigen fixation was performed using the parasite's promastigote forms, and the concentration of 10ug/ml demonstrated the best results. The ELISA protocol used for equine and canine species was the same. The test of the dilutions of the primary antibody varied between species: for horses, the concentrations 1/100, 1/200, 1/400, 1/800, and 1/1000 were used; and 1/100, 1/400, and 1/800 for canines. The secondary antibody concentrations used in the tests were: 1/5000 and 1/10000 for horses and canines. After standardization, serological tests were carried out on samples from canines and horses from the municipalities of Barra do Quaraí and Uruguaiana. Testes englobed 51 dogs and 159 horses. Among the 51 canines tested, 17 (33%) were positive in the ELISA technique, 16 of which were also positive in the DPP® immunochromatographic test. Regarding the tested horses, 159 animals, 16 (10%) were positive in the ELISA. With this, it was possible to conclude that it was possible to standardize an indirect ELISA protocol in house to diagnose Leishmaniasis in horses and canines. The presence of positive animals demonstrates that the disease is occurring in the studied population.

Characterization of an IgM-like immunoglobulin from silver catfish (Rhamdia quelen) serum and its use for the production of polyclonal antibodies and development of immunoassays / Caracterização de imunoglobulina similar a IgM em soros de jundiás (Rhamdia quelen) e sua utilização para a produção de soro policlonal e desenvolvimento de imunoensaios

Knowledge on fish immunoglobulin (Ig) characteristics and the availability of monoclonal or polyclonal antibodies to fish Igs are essential to evaluate the humoral immune response and the Ig distribution on leukocyte cells. We demonstrated that silver catfish serum Ig is composed of one immunodominant H chain with approximately 75k Da and one L chain with approximately 28 kDa, similar to human IgM. Rabbit polyclonal antibodies to the catfish IgM-like Ig recognized both the H and L chain and were useful in developing an indirect ELISA to measure the production of antibodies in fish immunized with bovine serum albumin. Dot blot and western blot cross-reactivity studies indicated a wide degree of epitope sharing amongst Ig from several Siluriformes and Characiformes fish indigenous to Brazilian rivers. In these fish species, polyclonal antibodies reacted mostly with the H chain. The results presented here are central to the development of tools and strategies to investigate the antibody production to inoculated antigens and tissue distribution of Ig molecules in native fish species. Furthermore, because of the wide range of cross-reactivity, polyclonal antibodies to silver catfish IgM-like Ig might be used to develop immunoassays to measure the humoral immune response in other fish species.(AU)

Informações sobre as características das imunoglobulinas (Ig) de peixes e a disponibilidade de anticorpos mono ou policlonais são essenciais para avaliar a resposta imune humoral e a distribuição leucocitária de Igs. Nesse trabalho nós demonstramos que a Ig do soro de jundiás é composta por uma cadeia pesada (H) imunodominante, de aproximadamente 75kDA e de uma cadeia leve (L) de aproximadamente 28 kDa, similar à IgM humana. Anticorpos policlonais produzidos contra a Ig do jundiá reconheceram a cadeia H e L e permitiram o desenvolvimento de um ELISA indireto para mensurar a produção de anticorpos em peixes imunizados com albumina sérica bovina. Estudos de reatividade cruzada, por meio de Dot blot e western blot, indicaram um alto grau de compartilhamento de epitopos entre as Igs de diversos peixes Siluriformes e Caraciformes nativos do Brazil. Nestas espécies de peixes, os anticorpos policlonais reconheceram principalmente a cadeia H. Os resultados deste estudo são fundamentais para o desenvolvimento de ferramentas e estratégias para investigar a produção de anticorpos subsequente à imunização e a distribuição tecidual de Igs em peixes nativos. Além disso, devido ao compartilhamento de epitopos entre as espécies de peixes avaliadas, os anticorpos policlonais anti Ig do jundiá poderão ser usados para desenvolver ensaios imunoenzimáticos para avaliar a resposta imune humoral nestas espécies.(AU)

Characterization of an IgM-like immunoglobulin from silver catfish (Rhamdia quelen) serum and its use for the production of polyclonal antibodies and development of immunoassays / Caracterização de imunoglobulina similar a IgM em soros de jundiás (Rhamdia quelen) e sua utilização para a produção de soro policlonal e desenvolvimento de imunoensaios

Knowledge on fish immunoglobulin (Ig) characteristics and the availability of monoclonal or polyclonal antibodies to fish Igs are essential to evaluate the humoral immune response and the Ig distribution on leukocyte cells. We demonstrated that silver catfish serum Ig is composed of one immunodominant H chain with approximately 75k Da and one L chain with approximately 28 kDa, similar to human IgM. Rabbit polyclonal antibodies to the catfish IgM-like Ig recognized both the H and L chain and were useful in developing an indirect ELISA to measure the production of antibodies in fish immunized with bovine serum albumin. Dot blot and western blot cross-reactivity studies indicated a wide degree of epitope sharing amongst Ig from several Siluriformes and Characiformes fish indigenous to Brazilian rivers. In these fish species, polyclonal antibodies reacted mostly with the H chain. The results presented here are central to the development of tools and strategies to investigate the antibody production to inoculated antigens and tissue distribution of Ig molecules in native fish species. Furthermore, because of the wide range of cross-reactivity, polyclonal antibodies to silver catfish IgM-like Ig might be used to develop immunoassays to measure the humoral immune response in other fish species.(AU)

Informações sobre as características das imunoglobulinas (Ig) de peixes e a disponibilidade de anticorpos mono ou policlonais são essenciais para avaliar a resposta imune humoral e a distribuição leucocitária de Igs. Nesse trabalho nós demonstramos que a Ig do soro de jundiás é composta por uma cadeia pesada (H) imunodominante, de aproximadamente 75kDA e de uma cadeia leve (L) de aproximadamente 28 kDa, similar à IgM humana. Anticorpos policlonais produzidos contra a Ig do jundiá reconheceram a cadeia H e L e permitiram o desenvolvimento de um ELISA indireto para mensurar a produção de anticorpos em peixes imunizados com albumina sérica bovina. Estudos de reatividade cruzada, por meio de Dot blot e western blot, indicaram um alto grau de compartilhamento de epitopos entre as Igs de diversos peixes Siluriformes e Caraciformes nativos do Brazil. Nestas espécies de peixes, os anticorpos policlonais reconheceram principalmente a cadeia H. Os resultados deste estudo são fundamentais para o desenvolvimento de ferramentas e estratégias para investigar a produção de anticorpos subsequente à imunização e a distribuição tecidual de Igs em peixes nativos. Além disso, devido ao compartilhamento de epitopos entre as espécies de peixes avaliadas, os anticorpos policlonais anti Ig do jundiá poderão ser usados para desenvolver ensaios imunoenzimáticos para avaliar a resposta imune humoral nestas espécies.(AU)

Importância e metodologias para mensuração dos esteroides sexuais em ruminantes / Importance and methodologies to measure sexual steroids progesterone and estradiol in ruminants

As dosagens dos esteroides sexuais, como progesterona e estradiol, pela sua importância, foram econtinuam sendo largamente utilizadas nas pesquisas em reprodução animal, nos estudos de fisiologia, patologiae biotecnologia reprodutiva. Vários métodos para quantificação desses esteroides foram desenvolvidos, porémcada metodologia analítica possui vantagens e limitações. O radioimunoensaio é o mais amplamente utilizado,pela sua eficiência e aplicabilidade em diversas espécies, mas tem como principal desvantagem o envolvimentode material radioativo. A preocupação nesse setor, aliada às exigências das legislações nacionais e internacionaisem questões ambientais, tem aumentado a necessidade do desenvolvimento de novas técnicas sem a utilização dematerial radioativo. Uma possibilidade que se apresenta é a tecnologia xMAP-Multiplex®. Esta tecnologiaapresenta vantagens sobre o radioimunoensaio, como ausência de radioatividade e detecção simultânea dehormônios, promovendo a diminuição do tempo gasto para dosagem e menor custo por amostra dosada. Porém,ainda sem estudos na endocrinologia reprodutiva de animais domésticos, torna-se necessária avaliá-la e validá-lapara cada espécie.(AU)

Quantifications of sexual steroids, such as progesterone and estradiol, because of their importance,have been widely used in many researches of animal´s reproduction to study reproductive physiology, pathologyand biotechnology. Several methods to quantify these steroids have been developed, but each analyticalmethodology has advantages and limitations. Radioimmunoassay is the most widely used method because of itsefficiency and applicability in several species, but it has as major disadvantage the use of radioactive material.These concerns added to the requirements of national and international´s legislations about environmentaltopics have increased the need to develop new techniques without the use of radioactive material. One newpossibility is the xMAP-Multiplex® technology. This technology offers advantages over radioimmunoassay, suchas absence of radioactivity and simultaneous detection of hormones, which decreases the time taken to quantifythem and lower price for each quantified sample. Although, there are no studies at reproductive endocrinologyat domestic animals and it is necessary to evaluate and validate it for each specie.(AU)

Importância e metodologias para mensuração dos esteroides sexuais em ruminantes / Importance and methodologies to measure sexual steroids progesterone and estradiol in ruminants

As dosagens dos esteroides sexuais, como progesterona e estradiol, pela sua importância, foram econtinuam sendo largamente utilizadas nas pesquisas em reprodução animal, nos estudos de fisiologia, patologiae biotecnologia reprodutiva. Vários métodos para quantificação desses esteroides foram desenvolvidos, porémcada metodologia analítica possui vantagens e limitações. O radioimunoensaio é o mais amplamente utilizado,pela sua eficiência e aplicabilidade em diversas espécies, mas tem como principal desvantagem o envolvimentode material radioativo. A preocupação nesse setor, aliada às exigências das legislações nacionais e internacionaisem questões ambientais, tem aumentado a necessidade do desenvolvimento de novas técnicas sem a utilização dematerial radioativo. Uma possibilidade que se apresenta é a tecnologia xMAP-Multiplex®. Esta tecnologiaapresenta vantagens sobre o radioimunoensaio, como ausência de radioatividade e detecção simultânea dehormônios, promovendo a diminuição do tempo gasto para dosagem e menor custo por amostra dosada. Porém,ainda sem estudos na endocrinologia reprodutiva de animais domésticos, torna-se necessária avaliá-la e validá-lapara cada espécie.

Quantifications of sexual steroids, such as progesterone and estradiol, because of their importance,have been widely used in many researches of animal´s reproduction to study reproductive physiology, pathologyand biotechnology. Several methods to quantify these steroids have been developed, but each analyticalmethodology has advantages and limitations. Radioimmunoassay is the most widely used method because of itsefficiency and applicability in several species, but it has as major disadvantage the use of radioactive material.These concerns added to the requirements of national and international´s legislations about environmentaltopics have increased the need to develop new techniques without the use of radioactive material. One newpossibility is the xMAP-Multiplex® technology. This technology offers advantages over radioimmunoassay, suchas absence of radioactivity and simultaneous detection of hormones, which decreases the time taken to quantifythem and lower price for each quantified sample. Although, there are no studies at reproductive endocrinologyat domestic animals and it is necessary to evaluate and validate it for each specie.

Fecal cortisol metabolites as indicators of stress in crab-eating-fox (Cerdocyoun thous) in captivity / Metabolitos fecais de cortisol como indicadores de estresse em cachorro-do-mato (Cerdocyoun thous) em cativeiro

Blood samples collection is a common method in biological research using domestic animals. However, most blood sampling techniques are complicated and highly invasive and may therefore not be appropriate for wildlife animals in research concerning stress. Thus, a non-invasive method to measure steroid hormones is critically needed. The first goal of this study was to determine how glucocorticoids concentrations are impacted by translocation and reproductive activity in crab-eating-fox (Cerdocyoun thous) in captivity. The physiological relevance of fecal glucocorticoid metabolites was further validated by demonstrating: (1) The translocation of a male to a females enclosure resulted in a 3.5-fold increase compared to baseline concentrations, (2) changes in adrenocortical activity, as reflected in concentrations of fecal cortisol metabolites during reproduction, gestation and lactation in females foxes, indicating that social interactions resulted in large increases of fecal glucocorticoids metabolites during the reproductive season. From these findings we conclude that fecal samples can be used for the non-invasive assessment of adrenocortical status in crab-eating-fox.(AU)

Coleta de sangue é um método comumente utilizado na pesquisa com animais domésticos. Entretanto, a técnica de coleta de sangue torna-se complicada e altamente invasiva em animais selvagens devido ao estresse, tornando-a inapropriada para pesquisa. Dessa maneira, métodos não invasivos utilizados na mensuração de hormonios tornam-se necessários. O principal objetivo deste estudo foi determinar como as concentrações de glucocorticoides atuam durante a translocação e a atividade reprodutiva de cachorro-do-mato (Cerdocyoun thous) em cativeiro. A relevância fisiológica da análise de metabolitos fecais de glucocorticoides pôde ser validada pela demonstração de que: (1) A translocação de machos para o recinto de fêmeas resultou em um aumento de 3.5 vezes comparado a concentrações basais; (2) mudanças na atividade adrenocortical, como reflexo das concentrações de metabolitos de cortisol fecal durante a reprodução, gestação e lactação em femeas de cachorro-do-mato (Cerdocyoun thous), indicaram que interações sociais resultaram em aumento de glucocorticoides fecais durante a época reprodutiva. Com estas constatações podemos concluir que amostras fecais podem ser usadas para acesso não invasivo da atividade adrenocortical em cachorro-do-mato (Cerdocyoun thous).(AU)