STUDY OF THE REPRODUCTIVE PERFORMANCE AND THE IMMUNOLOGICAL RESPONSE IN ZEBRAFISH (DANIO RERIO) FED WITH BEE POLLEN SUPPLEMENTED DIETS

O pólen de abelha é um produto natural coletado das plantas pelas abelhas e armazenado na colmeia misturado principalmente com enzimas salivares. É uma rica fonte de vários nutrientes, por isso pode ser um excelente suplemento alimentar. Este produto tem sido descrito com múltiplas propriedades benéficas, como efeitos antimicrobianos, imunoestimulantes e antioxidantes, o que se reflete em possíveis características terapêuticas para diferentes situações patológicas. Tendo em vista que a dieta pode estar associada ao desempenho e reprodução dos animais, à modulação da microbiota e ser um fator potencial no desenvolvimento do câncer, este estudo teve como objetivo analisar se a adição de pólen apícola na dieta poderia influenciar na reprodução e imunidade do peixe-zebra. O Danio rerio é um peixe teleósteo tropical de água doce, amplamente utilizado como modelo experimental para estudar a complexa biologia dos vertebrados, pois permite fácil manipulação genética. A identificação dos mecanismos envolvidos nas respostas fisiológicas de peixes submetidos a tratamento complementar com pólen apícola pode fornecer informações importantes para a recomendação deste produto na dieta. O objetivo deste trabalho foi estudar a adição de pólen de abelha à dieta do peixe-zebra, focando seu efeito na reprodução, parâmetros de crescimento, modulação intestinal e resposta ao desenvolvimento tumoral. Os peixes-zebra adultos foram alimentados com diferentes dietas, três vezes ao dia, utilizando ração comercial, artêmia e pólen de abelha. Os peixes receberam as dietas por 60 dias e durante este período foram analisados semanalmente os seguintes parâmetros reprodutivos: número total de ovos, produção de ovos por fêmea, taxa de viabilidade embrionária, taxa de sobrevivência larval após exposição ao vírus da viremia. taxa de sobrevivência após exposição a Salmonellae enterica sorovar Typhimurium e análise do recrutamento de neutrófilos em larvas após lesão na cauda. Após isso, os peixes de cada tratamento foram analisados quanto ao ganho de peso e comprimento, e os intestinos foram coletados para avaliação da microbiota intestinal por meio de análise metagenômica, que permite identificar a diversidade bacteriana entre as amostras. Além disso, foram determinados os níveis de mRNA do gene que criptografa a proteína amilóide A (Saa) nos órgãos abdominais do peixe-zebra e intestinos separados, uma vez que essa proteína é produzida no intestino e no fígado e tem efeitos nas células imunes e algumas bactérias induzem fortemente sua produção. Após 120 dias de dieta, os peixes restantes de cada um dos tratamentos foram avaliados quanto ao crescimento tumoral após o procedimento de alotransplante com melanoma, uma forma muito agressiva de câncer de pele. Nossos resultados mostram que a suplementação de pólen de abelha falhou em melhorar a produção de ovos e a viabilidade embrionária na criação de peixe-zebra. Em contraste, descendentes de reprodutores alimentados com dietas suplementadas com pólen de abelha mostraram aumento da sobrevivência após o desafio do vírus e aumento da migração de neutrófilos para as feridas. Esses resultados indicam que o pólen de abelha pode influenciar a imunidade vertical através de importantes mecanismos relacionados à imunidade da prole em fases iniciais da vida. A dieta de pólen de abelha também revelou abundância microbiana intestinal diferente em nível de família, gênero e espécie em comparação com os peixes do grupo controle; e, inesperadamente, os peixes alimentados com pólen de abelha mostraram uma maior taxa de crescimento tumoral e tumores maiores. Embora alguns estudos atribuam atividades antitumorais ao pólen de abelha, principalmente em experimentos in vitro, nossos resultados mostram que essa relação deve ser questionada. Devido à sua composição variável, os efeitos causados pela ingestão de pólen de abelha necessitam de maiores investigações antes da recomendação, pois também podem variar entre diferentes espécies e estados fisiológicos.

Bee pollen is a natural product collected by bees from plants and stored in the hive mixed mainly with salivary enzymes. It is a rich source of various nutrients, so it can be an excellent dietary supplement. This product has been described with many beneficial properties, such as antimicrobial, immunostimulating and antioxidants effects, which reflects in possible therapeutic features for different pathological situations. As diet can be associated with animal performance and reproduction, microbiota modulation and potentially factor for cancer, this study aimed to analyze if dietary bee pollen addition could influence zebrafish parameters. The zebrafish Danio rerio is a teleost fish from tropical freshwater, widely used as an experimental model to study complex vertebrate biology using many genetic approaches. The identification of mechanisms involved in physiological responses of fish submitted to supplemental treatment with bee pollen can provide important information for the recommendation of this product in the diet of also other species. This work studied bee pollen addition to the zebrafish diet, focusing its effect on reproduction, growth parameters, intestinal modulation and response against tumor development. Adult zebrafish were fed with different diets, three times a day, using commercial feed, brine shrimp and bee pollen. The fish received the diets for 60 days and throughout this period were tested weekly for: total number of eggs, egg production per female, embryo viability rate (72hpf), larval survival rate after exposure to Spring Viramae of Carp virus, larval survival rate after exposure to Salmonella enterica serovar Typhimurium and analysis of neutrophil recruitment after tail wound. After this, fish from each treatment were analyzed for weight gain and increased length, and the intestines were collected to assess the intestinal microbiota through metagenomics analysis, which enables the identification of bacterial diversity between samples. Also, serum amyloid A (saa) transcript levels from abdominal organs and from separated intestines were analyzed, as the protein encoded by this gene has effects on immune cells and some intestinal bacteria strongly induce its production. After 120 days of diet, fish remaining from each of the treatments were evaluated for tumor growth after melanoma allotransplantation procedure, a very aggressive form of skin cancer. Our results show that bee pollen failed to improve egg production and embryo viability. Instead, the offspring of breeders fed with bee pollen diets showed longer survival upon virus exposure and higher neutrophil migration to wounds. These results indicate that bee pollen can influence vertical immunity through important mechanisms related to offspring immunity in the early stages. Bee pollen diet also revealed different gut microbial abundance at family, genus and species level compared with fish from control group; and, unexpectedly, fish fed with bee pollen showed higher tumor growth rate and larger tumor size. Although some studies attribute bee pollen with antitumor activities, mostly in vitro experiments, our results show that this link should be questioned. Due to its variable composition, the effects caused by bee pollen ingestion need deeper investigation before recommendation, as it can also vary between different species and physiological states.

Métodos de desmame de potros / Methods of weaning foals / Métodos de destete de potros

O desmame é um dos momentos mais estressantes da vida do cavalo. Há uma necessidade, do ponto de vista fisiológico e comportamental, da proximidade da mãe e do potro durante os primeiros meses de vida. Dentre todos os métodos, potros desmamados em grupos e na presença de éguas familiares a eles apresentaram o menor nível de estresse. O sistema imune do potro se desenvolve lentamente, sendo que o ideal é que a desmama ocorra entre 3 e 6 meses de idade. A capacidade de digerir fibra não é afetada pela desmama. O produtor deve estar atento ao declínio da qualidade de leite a fim de complementar as necessidades nutricionais do animal, caso necessário. O manejo nutricional também afeta negativa ou positivamente o estresse da desmama. A melhor época de desmamar o potro é a partir dos seis meses de idade com a presença de éguas não relacionadas, mas previamente conhecidas dos potros.

Weaning is one of the most stressful events in a horse's life. There is a need, in a physiological and behavioral point of view, of proximity of the mare and the foal during the first months of life. Amongst all weaning methods, weaning foals in groups with the presence of a non-related mare previously known to them is the least stressful method. The immune system of the foal develops slowly and the ideal time to wean a foal considering this is at 3 to 6 months of age. Fiber capacity is not affected by weaning. Studs must have attention to the decrease of milk quality in order to complement the nutrient requirements of the foal, if necessary. Feeding management also affects negatively or positively weaning stress. It was concluded, considering all factors presented, that the best time to wean a foal is from 6 months of age onwards with the presence of non-related mares previously known to the foals.

El destete es uno de los eventos más estresantes en la vida de un potrillo. Hay una necesidad fisiológica y conductual, de la proximidad de la yegua y el potro durante los primeros meses de vida. Entre todos los métodos, el menos estresante, es el destete en grupos de potros en conjunto con la presencia de yeguas conocida por ellos. El sistema inmunológico del potrillo se desarrolla lentamente y el momento ideal para destetar a un potro es desde los 3 a 6 meses de edad. La capacidad de digerir fibra no se ve afectada por el destete. Los productores deben estar atentos a la disminución de la calidad de la leche, para complementar los requerimientos nutricionales del animal, si fuese necesario. El manejo nutricional también afecta negativamente o positivamente el estrés del destete. En conclusión, considerando todos los factores antes mencionados, el mejor momento para destetar a un potro es a partir de los 6 meses de edad y con la presencia de yeguas no relacionadas, pero anteriormente conocidas por los potros.

A imunidade tumoral e a imunoterapia na clínica de pequenos animais: revisão de literatura / Tumor immunity and immunotherapy in the clinic of small animals: literature review / La inmunidad tumoral y la inmunoterapia en la clínica de pequenos animales: revisión de literatura

O sistema imune é capaz de identificar e eliminar as células anormais. Em algumas situações essas células escapam da vigilância imunológica do indivíduo e desencadeiam o câncer. Avanços nas pesquisas de interação das células neoplásicas e do sistema imune do hospedeiro possibilitaram uma maior compreensão a respeito dos antígenos tumorais e dos mecanismos de escape tumoral; como consequência iniciou-se uma busca por novas terapias antitumorais e métodos de prevenção. O presente trabalho, com base em revisão de literatura, tem como principal objetivo abordar a atuação do sistema imune frente a uma célula tumoral e os principais tipos de imunoterapia utilizados na medicina veterinária.(AU)

The immune system is able to identify and eliminate abnormal cells. In some situations these cells escape from individual immune surveillance and trigger cancer. Advances in research of interaction of cancer cells and host immune system enabled a greater understanding about the tumor antigens and tumor escapeme mechanisms. As a result, a search for new antitumor treatments and prevention methods started. The present work, based on literature review, has as main objective to approach the performance of the immune system against a tumor cell and the main types of immunotherapy used in veterinary medicine.(AU)

El sistema inmune es capaz de identificar y eliminar las células anormales. En algunas situaciones estas células escapan de la vigilancia inmunológica del individuo y desencadenan el cáncer. Avances en las investigaciones sobre la interacción de las células neoplásicas y del sistema inmune del huésped posibilitaron una mayor comprensión a el respeto de los antíqenos tumorales y de los mecanismos de escape tumoral; como consecuencia se inició uma búsqueda de nuevas terapias antitumorales y métodos de prevención. El presente trabajo, basado en la revisión de la literatura, tiene como principal objetivo abordar la actuación del sistema inmune frente a una célula tumoral y los principales tipos de inmunoterapia utilizados en la medicina veterinaria.(AU)

Métodos de desmame de potros / Methods of weaning foals / Métodos de destete de potros

O desmame é um dos momentos mais estressantes da vida do cavalo. Há uma necessidade, do ponto de vista fisiológico e comportamental, da proximidade da mãe e do potro durante os primeiros meses de vida. Dentre todos os métodos, potros desmamados em grupos e na presença de éguas familiares a eles apresentaram o menor nível de estresse. O sistema imune do potro se desenvolve lentamente, sendo que o ideal é que a desmama ocorra entre 3 e 6 meses de idade. A capacidade de digerir fibra não é afetada pela desmama. O produtor deve estar atento ao declínio da qualidade de leite a fim de complementar as necessidades nutricionais do animal, caso necessário. O manejo nutricional também afeta negativa ou positivamente o estresse da desmama. A melhor época de desmamar o potro é a partir dos seis meses de idade com a presença de éguas não relacionadas, mas previamente conhecidas dos potros.(AU)

Weaning is one of the most stressful events in a horse's life. There is a need, in a physiological and behavioral point of view, of proximity of the mare and the foal during the first months of life. Amongst all weaning methods, weaning foals in groups with the presence of a non-related mare previously known to them is the least stressful method. The immune system of the foal develops slowly and the ideal time to wean a foal considering this is at 3 to 6 months of age. Fiber capacity is not affected by weaning. Studs must have attention to the decrease of milk quality in order to complement the nutrient requirements of the foal, if necessary. Feeding management also affects negatively or positively weaning stress. It was concluded, considering all factors presented, that the best time to wean a foal is from 6 months of age onwards with the presence of non-related mares previously known to the foals.(AU)

El destete es uno de los eventos más estresantes en la vida de un potrillo. Hay una necesidad fisiológica y conductual, de la proximidad de la yegua y el potro durante los primeros meses de vida. Entre todos los métodos, el menos estresante, es el destete en grupos de potros en conjunto con la presencia de yeguas conocida por ellos. El sistema inmunológico del potrillo se desarrolla lentamente y el momento ideal para destetar a un potro es desde los 3 a 6 meses de edad. La capacidad de digerir fibra no se ve afectada por el destete. Los productores deben estar atentos a la disminución de la calidad de la leche, para complementar los requerimientos nutricionales del animal, si fuese necesario. El manejo nutricional también afecta negativamente o positivamente el estrés del destete. En conclusión, considerando todos los factores antes mencionados, el mejor momento para destetar a un potro es a partir de los 6 meses de edad y con la presencia de yeguas no relacionadas, pero anteriormente conocidas por los potros.(AU)

A imunidade tumoral e a imunoterapia na clínica de pequenos animais: revisão de literatura / Tumor immunity and immunotherapy in the clinic of small animals: literature review / La inmunidad tumoral y la inmunoterapia en la clínica de pequenos animales: revisión de literatura

O sistema imune é capaz de identificar e eliminar as células anormais. Em algumas situações essas células escapam da vigilância imunológica do indivíduo e desencadeiam o câncer. Avanços nas pesquisas de interação das células neoplásicas e do sistema imune do hospedeiro possibilitaram uma maior compreensão a respeito dos antígenos tumorais e dos mecanismos de escape tumoral; como consequência iniciou-se uma busca por novas terapias antitumorais e métodos de prevenção. O presente trabalho, com base em revisão de literatura, tem como principal objetivo abordar a atuação do sistema imune frente a uma célula tumoral e os principais tipos de imunoterapia utilizados na medicina veterinária.

The immune system is able to identify and eliminate abnormal cells. In some situations these cells escape from individual immune surveillance and trigger cancer. Advances in research of interaction of cancer cells and host immune system enabled a greater understanding about the tumor antigens and tumor escapeme mechanisms. As a result, a search for new antitumor treatments and prevention methods started. The present work, based on literature review, has as main objective to approach the performance of the immune system against a tumor cell and the main types of immunotherapy used in veterinary medicine.

El sistema inmune es capaz de identificar y eliminar las células anormales. En algunas situaciones estas células escapan de la vigilancia inmunológica del individuo y desencadenan el cáncer. Avances en las investigaciones sobre la interacción de las células neoplásicas y del sistema inmune del huésped posibilitaron una mayor comprensión a el respeto de los antíqenos tumorales y de los mecanismos de escape tumoral; como consecuencia se inició uma búsqueda de nuevas terapias antitumorales y métodos de prevención. El presente trabajo, basado en la revisión de la literatura, tiene como principal objetivo abordar la actuación del sistema inmune frente a una célula tumoral y los principales tipos de inmunoterapia utilizados en la medicina veterinaria.

Quimioterapia metronômica em cães e gatos – revisão de literatura / Metronomic chemotherapy in dogs and cats – a review / Quimioterapia metronómica en perros y gatos – revisión de la literatura

A quimioterapia metronômica representa uma recente opção terapêutica na oncologia veterinária. É caracterizada pelo uso contínuo de fármacos antineoplásicos em doses inferiores à dose máxima tolerada, administrados preferencialmente por via oral, a intervalos curtos e regulares. O controle da neoplasia é obtido mediante a exposição contínua das células tumorais aos fármacos citotóxicos, a inibição da angiogênese tumoral e modificações na imunologia tumoral. As vantagens dos protocolos metronômicos incluem baixa toxicidade, facilidade de administração, baixo custo e menores índices de resistência aos fármacos antineoplásicos. O objetivo desta revisão é descrever o mecanismo de ação, as indicações terapêuticas e os resultados de estudos relacionados à quimioterapia metronômica no tratamento de neoplasias em cães e gatos.

Metronomic chemotherapy represents a recent therapeutic option in human and veterinary oncology. It is characterized by continuous use of antineoplastic drugs at doses lower than the maximum tolerated dose, which are administered preferably orally and in close and regular intervals. Tumor control is obtained by continuous exposure of cancer cells to the drugs, inhibition of tumor angiogenesis and alterations in tumor immunology. The advantages of the metronomic protocols include low toxicity, easier administration, low cost and lower rates of resistance to antineoplastic drugs. The aim of this review is to describe the mechanism of action, indications and the results of studies related to metronomic chemotherapy in the treatment of cancer in dogs and cats.

La quimioterapia metronómica representa una alternativa terapéutica nueva en la oncología veterinaria. El tratamiento está caracterizado por el uso continuo de fármacos antineoplásicos a dosis inferiores a la dosis máxima tolerada, que son administrados principalmente por vía oral y a intervalos cortos y regulares. El control de la neoplasia se obtiene mediante la exposición continua de las células tumorales a los fármacos citotóxicos, por inhibición de la angiogénesis, y por modificaciones en la inmunología tumoral. Las ventajas de los protocolos metronómicos son la baja toxicidad, facilidad de administración, bajo costo e índices menores de resistencia a las drogas quimioterápicas. El objetivo de la presente revisión es describir el mecanismo de acción, las indicaciones terapéuticas y los resultados de los estudios relacionados con la quimioterapia metronómica en el tratamiento de neoplasias en perros y gatos.

Quimioterapia metronômica em cães e gatos revisão de literatura / Metronomic chemotherapy in dogs and cats a review / Quimioterapia metronómica en perros y gatos revisión de la literatura

A quimioterapia metronômica representa uma recente opção terapêutica na oncologia veterinária. É caracterizada pelo uso contínuo de fármacos antineoplásicos em doses inferiores à dose máxima tolerada, administrados preferencialmente por via oral, a intervalos curtos e regulares. O controle da neoplasia é obtido mediante a exposição contínua das células tumorais aos fármacos citotóxicos, a inibição da angiogênese tumoral e modificações na imunologia tumoral. As vantagens dos protocolos metronômicos incluem baixa toxicidade, facilidade de administração, baixo custo e menores índices de resistência aos fármacos antineoplásicos. O objetivo desta revisão é descrever o mecanismo de ação, as indicações terapêuticas e os resultados de estudos relacionados à quimioterapia metronômica no tratamento de neoplasias em cães e gatos.(AU)

Metronomic chemotherapy represents a recent therapeutic option in human and veterinary oncology. It is characterized by continuous use of antineoplastic drugs at doses lower than the maximum tolerated dose, which are administered preferably orally and in close and regular intervals. Tumor control is obtained by continuous exposure of cancer cells to the drugs, inhibition of tumor angiogenesis and alterations in tumor immunology. The advantages of the metronomic protocols include low toxicity, easier administration, low cost and lower rates of resistance to antineoplastic drugs. The aim of this review is to describe the mechanism of action, indications and the results of studies related to metronomic chemotherapy in the treatment of cancer in dogs and cats.(AU)

La quimioterapia metronómica representa una alternativa terapéutica nueva en la oncología veterinaria. El tratamiento está caracterizado por el uso continuo de fármacos antineoplásicos a dosis inferiores a la dosis máxima tolerada, que son administrados principalmente por vía oral y a intervalos cortos y regulares. El control de la neoplasia se obtiene mediante la exposición continua de las células tumorales a los fármacos citotóxicos, por inhibición de la angiogénesis, y por modificaciones en la inmunología tumoral. Las ventajas de los protocolos metronómicos son la baja toxicidad, facilidad de administración, bajo costo e índices menores de resistencia a las drogas quimioterápicas. El objetivo de la presente revisión es describir el mecanismo de acción, las indicaciones terapéuticas y los resultados de los estudios relacionados con la quimioterapia metronómica en el tratamiento de neoplasias en perros y gatos.(AU)

Imunologia tumoral como ferramenta na oncologia veterinária / Tumoral immunology as a tool for veterinary oncology / Inmunologìa tumoral como herramienta en la oncología veterinaria

A busca de métodos terapêuticos e profiláticos mais eficazes contra o câncer resultou em grande impacto no entendimento das bases imunológicas da oncologia. A descoberta dos antígenos tumorais e dos mecanismos de escape tumoral da vigilância imunológica revolucionaram a compreensão da atuação do sistema imune na gênese e desenvolvimento tumoral. As proteínas parecem ser a chave do processo tumoral, permitindo um melhor entendimento do sistema imune como um regulador final da sua origem, desenvolvimento e/ou destruição das neoplasias. Sendo assim, as proteínas tumorais oferecem uma via potencial para a compreensão dos mecanismos de interação e evasão celular, busca de novos marcadores tumorais, e a produção de uma imunoterapia eficaz e irrestrita. Esta revisão tem como objetivo principal discutir a atuação do sistema imune no desenvolvimento neoplásico no sentido de produzir protocolos de tratamento e prevenção eficientes como futuras ferramentas na oncologia veterinária.(AU)

The search for more effective therapeutic and prophylactic methods against cancer resulted in a great impact on the understanding of the immunological basis of oncology. The discovery of tumoral antigens and tumoral escape mechanisms from immunological surveillance revolutionized the comprehension of the role of the immune system on the tumoral genesis and its development. Proteins seem to be the key for the tumoral process, allowing a better understanding of the immune system as a final check point of the neoplasic beginning, development and/or destruction. Therefore, tumoral proteins provide a potential pathway for the comprehension of its interaction and cellular evasion mechanisms, the search for new tumoral markers, and the production of an effective and non-restricted immunotherapy. This review has as its main objective to discuss the role of the immune system regarding the neoplasic development towards the production of an effective therapy and prophylaxis protocols as future tools for veterinary oncology.(AU)

La búsqueda por métodos terapéuticos y profilácticos más eficazes contra el cáncer resultó en gran impacto en el entendimiento de las bases inmunológicas de la oncología. El descubrimiento de los antígenos tumorales y de los mecanismos de escape tumoral de la vigilancia inmunológica revolucionaron la comprensión de la actuación del sistema inmune y en el génesis y desarrollo tumoral. Las proteínas parecen ser la llave del proceso tumoral, permitiendo un mejor entendimiento del sistema inmune como un regulador final de su nacimiento, desarrollo y/o destrucción de las neoplasias. Así pues, las proteínas tumorales ofrecen un potencial camino para la comprensión de los mecanismos de interacción y evasión celular, búsqueda de nuevos marcadores tumorales, y la producción de una inmunoterapia eficaz y sin restricción. Esta revisión tiene como objetivo principal discutir la actuación del sistema inmune en el desarrollo neoplásico con objeto de producir protocolos de tratamiento y prevención eficientes como futuras herramientas en la oncología veterinaria.(AU)