Accelerated ageing test and enzymatic expression in the evaluation of kale seed quality / Teste de envelhecimento acelerado e expressão enzimática na avaliação da qualidade de sementes de couve

The demand for high-quality vegetable seeds and the production of vigorous seedlings has increased in recent years, as these characteristics are determining factors of production success. Vegetables are growing in national importance, and kale stands out as an important source of income for small farmers. The objective of this study was to adapt the traditional accelerated aging test methodology with a saturated NaCl solution of kale seeds and evaluate the enzymatic activity after the vigour test. Six batches of kale seeds were used, and the moisture content, weight of one thousand seeds, first germination count, germination, germination speed index, emergence, initial stand, and emergence velocity index were determined. In the accelerated ageing test, the seeds were submitted to the traditional accelerated ageing test method and the accelerated ageing test method with a saturated NaCl solution for ageing periods of 0, 24, 48, 72, and 96 hours. Electrophoretic analysis of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and alcohol dehydrogenase (ADH) isoenzymes was also performed. The accelerated ageing test, using the traditional method for 72 hours at 41 °C, is adequate for evaluating the physiological potential of kale seeds. The isoenzymatic analyses of SOD, CAT, and ADH demonstrate that the biochemical markers are efficient at differentiating kale seeds after accelerated ageing.(AU)

A demanda por sementes de hortaliças com alta qualidade e a obtenção de mudas vigorosas tem aumentado nos últimos anos, pois estas características constituem fatores determinantes do êxito da produção. As hortaliças têm uma importância nacional crescente, dentre elas se destaca a couve, por ser importante fonte de renda para pequenos agricultores. Objetivou-se adequar a metodologia do teste de envelhecimento acelerado tradicional e com solução saturada de NaCl em sementes de couve e avaliar a atividade enzimática após o teste de vigor. Foram utilizados seis lotes de sementes de couve e determinouse o grau de umidade, peso de mil sementes, primeira contagem de germinação, germinação, índice de velocidade de germinação, emergência, estande inicial e índice de velocidade de emergência. No teste de envelhecimento acelerado, as sementes foram submetidas ao método tradicional e com solução saturada de NaCl, por períodos de 0; 24; 48; 72 e 96 horas. Realizou-se também a análise eletroforética das isoenzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e álcool desidrogenase (ADH). O teste de envelhecimento acelerado, utilizando o método tradicional na combinação de 72 horas a 41 °C é adequado para avaliar o potencial fisiológico de sementes de couve. As análises isoenzimáticas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e álcool desidrogenase (ADH) demonstram que os marcadores bioquímicos são eficientes e promissores na diferenciação de sementes de couve após o envelhecimento acelerado.(AU)

Distribution of Meloidogyne species in carrot in Brazil / Distribuição de espécies de Meloidogyne em cenoura no Brasil

Root-knot nematodes (RKN - Meloidogyne spp.) are one of the most serious threats to carrot production worldwide. In Brazil, carrots are grown throughout the year, and economic losses due to RKN are reported. Since little is known on the distribution of RKN species in carrot fields in Brazil, we collected plant and soil samples from 35 fields across six states. Based on the morphology of perineal patterns, esterase phenotypes and species-specific PCR, three Meloidogyne species were identified: 60% of the fields were infested with Meloidogyne incognita, M. javanica was reported in 42.9% of the areas, whereas M. hapla was detected in 17.1% of carrot fields. Mixed populations were reported in 20% of the areas with a predominance of M. incognita + M. javanica. The combination of morphological, biochemical, and molecular techniques is a useful approach to identify RKN species.(AU)

Os nematoides-das-galhas (RKN - Meloidogyne spp.) são uma das mais sérias ameaças à produção de cenoura no mundo. No Brasil, as cenouras são cultivadas ao longo do ano, e as perdas econômicas devido à RKN são frequentemente relatadas. Como pouco se sabe sobre a distribuição de espécies RKN em campos de cenoura no Brasil, coletamos amostras de plantas e solo de 35 campos em seis estados. Baseado na morfologia do padrão perineal, fenótipos de esterase e/ou PCR espécie-específica, três espécies de Meloidogyne foram identificadas: 60% dos campos estavam infestados por Meloidogyne incognita, M. javanica foi encontrada em 42,9% das áreas, enquanto M. hapla foi detectada em 17,1% dos campos de cenoura. Populações mistas foram encontradas em 20% das áreas, com predominância de M. incognita + M. javanica. A combinação de técnicas morfológicas, bioquímicas e moleculares é uma abordagem útil para identificar espécies de RKN.(AU)

Aplicação de silício no solo: efeito na expressão enzimática de sementes oriundas de plantas de arroz sob estresse salino / Application of silicon to the soil: effect on enzymatic expression in rice seed produced under salt stress

A utilização de silício pode acarretar em aumento da capacidade biológica da planta em resistir às condições adversas do meio ambiente. Diante disso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a expressão isoenzimática de sementes oriundas de plantas cultivadas com aplicação de cinza da casca de arroz, via solo, sob estresse salino. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, em esquema fatorial A x B (Fator A- Cinco doses de cinza da casca de arroz aplicada via solo: 0; 500; 1000; 1500 e 2000 kg ha-¹; Fator B- Três concentrações salinas: 0, 4 e 8 mM), com quatro repetições. Foram realizados os testes de primeira contagem de germinação e germinação, e expressão dos sistemas isoenzimáticos glutamato oxaloacetato transaminase, álcool desidrogenase, glutamato desidrogenase e sorbitol. Variações nos quatro sistemas eletroforéticos analisados podem estar associados ao estresse salino causado durante o crescimento e desenvolvimento de plantas de arroz. O sistema isoenzimático glutamato oxaloacetato transaminase é uma ferramenta complementar à avaliação do potencial fisiológico de sementes de arroz.

The silicon utilization may result in the increased biological ability of the plants to withstand the harsh conditions of the environment. In this sense, the study aimed to evaluate the effect of the application of rice husk ash to the soil in rice plants under salt stress on isoenzymes expression. The experimental design was a randomized block in factorial A x B (Factor A- Five doses of rice husk ash applied to soil: 0.0, 500, 1000, 1500, and 2000 kg ha-¹, Factor B- Three salt concentrations: 0, 4, and 8 mM), with four replications. Tests were the first count of germination and germination, and expression of isozyme systems glutamate oxaloacetate transaminase, alcohol dehydrogenase, glutamate dehydrogenase, and sorbitol. Variations in the all analyzed electrophoretic systems may be associated with salt stress caused during the growth and development of rice plants. The isoenzyme system glutamate oxaloacetate transaminase is a complementary tool to assess the physiological rice seed quality.

Aplicação de silício no solo: efeito na expressão enzimática de sementes oriundas de plantas de arroz sob estresse salino / Application of silicon to the soil: effect on enzymatic expression in rice seed produced under salt stress

A utilização de silício pode acarretar em aumento da capacidade biológica da planta em resistir às condições adversas do meio ambiente. Diante disso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a expressão isoenzimática de sementes oriundas de plantas cultivadas com aplicação de cinza da casca de arroz, via solo, sob estresse salino. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, em esquema fatorial A x B (Fator A- Cinco doses de cinza da casca de arroz aplicada via solo: 0; 500; 1000; 1500 e 2000 kg ha-¹; Fator B- Três concentrações salinas: 0, 4 e 8 mM), com quatro repetições. Foram realizados os testes de primeira contagem de germinação e germinação, e expressão dos sistemas isoenzimáticos glutamato oxaloacetato transaminase, álcool desidrogenase, glutamato desidrogenase e sorbitol. Variações nos quatro sistemas eletroforéticos analisados podem estar associados ao estresse salino causado durante o crescimento e desenvolvimento de plantas de arroz. O sistema isoenzimático glutamato oxaloacetato transaminase é uma ferramenta complementar à avaliação do potencial fisiológico de sementes de arroz.(AU)

The silicon utilization may result in the increased biological ability of the plants to withstand the harsh conditions of the environment. In this sense, the study aimed to evaluate the effect of the application of rice husk ash to the soil in rice plants under salt stress on isoenzymes expression. The experimental design was a randomized block in factorial A x B (Factor A- Five doses of rice husk ash applied to soil: 0.0, 500, 1000, 1500, and 2000 kg ha-¹, Factor B- Three salt concentrations: 0, 4, and 8 mM), with four replications. Tests were the first count of germination and germination, and expression of isozyme systems glutamate oxaloacetate transaminase, alcohol dehydrogenase, glutamate dehydrogenase, and sorbitol. Variations in the all analyzed electrophoretic systems may be associated with salt stress caused during the growth and development of rice plants. The isoenzyme system glutamate oxaloacetate transaminase is a complementary tool to assess the physiological rice seed quality.(AU)

Genetic Analysis of Izoenzymes Polymorphisms in Silkworm (Bombyx mori L. ) Strains / Análise genética de polimorfismos bioquímicos em linhagens do bicho da seda (Bombyx mori L. )

This work carried out to evaluates the polymorhism in the silkworm of different lineages using the isoenzymes electrophoresis to detect biochemical markers and to investigate the genetics of populations for those lineages. They were used as samples individual extracts of silk glands of second day old larvas of the fifth instar, originating from seven Japanese lineages and eight pure Chinese lineages maintained by the Cocamar-Cooperativa Agroindustrial de Maringل. The isozymes acid phosphatase (ACP), alkaline phosphatase (AKP) and carbonic anhydrase (CA) they were submitted to the electrophoresis in starch gels 14%. The esterases (EST) were analyzed in polyacrylamide gels to 10% and stained with and â-naphtyl acetate. The total of 21 loci was detected, and 04 (19.05%) they are polymorphic, Est-11, Acp, Akp, Ca. The fixation index (Fis) for the analyzed isozymes it was 0.0751, indicating excess of homozygotes. The value of Fst (0.6128) it shows that the lineages are well differentiated. The dendrogram obtained with the values of genetic distance didn"t separate the Chinese and Japanese lineages analyzed totally. That preliminary evaluation of the lineages of B. mori shows that they present genetic material that it can be used in breeding programs that have the purpose of producing hybrid for silk production.(AU)

Este trabalho teve como objetivo avaliar o polimorfismo em lagartas do bicho-da-seda de diferentes linhagens utilizando a eletroforese de isoenzimas para detectar marcadores bioquيmicos e investigar a genética de populaçُes para essas linhagens. Foram utilizados como amostras extratos individuais de glândulas sericيgenas de lagartas do segundo dia da quinta idade, de sete linhagens japonesas e oito linhagens chinesas puras mantidas pela Cocamar-Cooperativa Agroindustrial de Maringل. As isozimas fosfatase لcida (ACP), fosfatase alcalina (AKP) e anidrase carbônica (CA) foram avaliadas por meio de eletroforese em géis de amido de milho a 14%. As esterases (EST) foram analisadas por meio de eletroforese vertical em géis de poliacrilamida a 10% e coloraçمo com ل e â-naftil acetato. Foram observados 21 locos, dentre os quais quatro (19.05%) sمo polimَrficos, Est-11, Acp, Akp, Ca. O يndice de fixaçمo (Fis) para as isozimas analisadas foi 0.0751, indicando excesso de homozigotos. O valor de Fst (0.6128) permite sugerir que as linhagens estمo bem diferenciadas. O dendograma obtido a partir dos valores de distância genética nمo separou totalmente as linhagens chinesas e japonesas analisadas. Essa avaliaçمo preliminar das linhagens de B. mori mostra que elas apresentam material genético que pode ser utilizado em programas de cruzamentos que tenham a finalidade de produzir hيbridos para prara produção de seda.(AU)

Comparative electrophoretic profile of proteins and esterases in healthy silkworm larvae (Bombyx mori Lineu, 1758) and infected with nucleopolyhedrovirus / Perfil eletroforético comparativo de proteínas e esterases em lagartas de bicho da seda (Bombyx mori Lineu, 1758) saudáveis e infectadas por nucleopoliedrovírus

Total proteins and esterases from silk gland extracts of Bombyx mori silkworm were characterized and compared with electrophoretic profiles of prepared extracts with silkworm glands infected with nucleopolyhedrovirus (BmNPV). SDS-PAGE (7%) gels was used for the total proteins, and 10% native PAGE for esterases. In the silk glands extracts of healthy silkworms, it was observed seven protein zones with molecular weight varying between 10 kDa (P1) and 60 kDa (P7). In the infected silkworms, a new zone named P8 (90 kDa) was also detected. Esterases activity at 5th instar larvae underwent changes after the infection with BmNPV, since there was a reduction (EST-6 and EST-7) and an increase (EST-8) in the intensity of the regions of esterases activity, and specificity of EST-9 to -naphthyl acetate. Those alterations observed in the expression of genes after the infection with the nucleoplyhedrovirus can be used as markers to detect infections in B. mori.(AU)

Nesse estudo foram identificadas e comparadas as alteraçُes das proteيnas totais e esterases em extratos de glândula sericيgena de lagartas de Bombyx mori sadias e infectadas por nucleopoliedrovيrus (BmNPV), empregando eletroforese SDS-PAGE com géis a 7% para proteيnas totais, e PAGE a 10% para esterases. Nos extratos de glândulas sericيgenas de lagartas saudلveis, foram observadas sete regiُes proteicas com peso molecular que variam entre 10 kDa (P1) a 60 kDa (P7). Naquelas infectadas pelo BmNPV, uma nova regiمo denominada de P8 (90 kDa) foi detectada. A atividade das esterases no 5؛ instar larval sofreu alteraçُes apَs a infecçمo pelo BmNPV porque houve reduçمo (EST-6 e EST-7) e aumento (EST-8) na intensidade das regiُes de atividade de esterases; e especificidade da EST-9 com o substrato -naftil acetato. Essas alteraçُes na expressمo gênica, apَs a infecçمo pelo nucleopoliedrovيrus, poderمo ser utilizadas como marcadores para detecçمo da infecçمo em B. mori.(AU)

Genetic variability of wild and captivity populations of Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) / Variabilidade genética de populações selvagens e de cativeiro de Colossoma macropomum (Cuvier, 1818)

Tambaqui (Colossoma macropomum) is among the most important fish species of the Amazon and one of the most cultivated in Brazil. In the present work we have evaluated the genetic variability of wild and captivity populations of C. macropomum. Enzymatic markers were used to estimate the genetic variability of 41 specimens from a wild group; and 30, 33 and 45 from three captivity groups, which came from Pentecostes (Ceará State), Jaboticabal (São Paulo State) and Itacoatiara (Amazonas State), respectively. Nine isoenzymic systems were used to evaluate the genetic variability of these populations. Using zimogram data we obtained the polymorphism level, allele number, allelic frequency, observed and expected heterozigosity, Wright F statistics (FIS, FST), genetic distance, level of similarity and group analysis. The isoenzymic data showed that, from the nine systems, six presented polymorphic loci (Fbp-2, G6pdh-2, G6pdh-3, Pgi-1, Pgi-2 and Pgm-1). The populations from Pentecostes and Jaboticabal presented loss of genetic variability and low heterozigosity, compared to the wild population and to the artificial population acquired at Itacoatiara fish farm. Based on these results and on fish farmer information we could consider the population from Itacoatiara as recently derived from a wild population. Concluding, we suggest that the artificial populations of tambaqui, which contain animals originated from this funding population at Pentecostes, should be renewed with the introduction of a new group of individuals with genetic variability equivalent to the wild population.

O tambaqui é uma espécie de peixe bastante importante na região amazônica e uma das espécies mais cultivadas no Brasil. O objetivo deste trabalho foi avaliar a variabilidade genética do Colossoma macropomum de cativeiro e selvagem, utilizando marcadores isoenzimáticos. Utilizamos 41 indivíduos de uma população da natureza e 30, 33 e 45 de populações de cativeiro de Pentecoste, Jaboticabal e Itacoatiara, respectivamente. Nove sistemas isoenzimáticos foram utilizados para verificar a variabilidade genética do tambaqui, bem como os níveis de polimorfismos, números de alelos, freqüências alélicas, heterozigosidade observada e esperada, estatística F de Wright (FIS e FST), distância e similaridade genética, e análise de agrupamento. Das nove isoenzimas analisadas apenas seis sistemas apresentaram polimorfismo (Fbp-2, G6pdh-2, G6pdh-3, Pgi-1, Pgi-2 and Pgm-1). Verificamos que as populações de Pentecostes e Jaboticabal estão com falta de heterozigotos e apresentam-se estruturadas geneticamente em relação às populações de Itacoatiara e da Natureza que apresentam excesso de heterozigotos e não são estruturadas. Concluímos que os indivíduos de Itacoatiara são provenientes de populações selvagens e sugerimos que se realize uma renovação dos plantéis de tambaqui de Pentecostes e Jaboticabal, com o intuito de recuperar a variabilidade genética perdida.

Enzyme expression in indica and japonica rice cultivars under saline stress / Expressão de enzimas em cultivares de arroz indica e japonica sob estresse salino

The southern State of Rio Grande do Sul (RS) is the main rice producer in Brazil with a 60% participation of the national production and 86% participation of the region. Rice culture irrigation system is done by flooding, which leads to soil salinization, a major environmental constraint to production since it alters the plants' metabolism exposed to this type of stress. The indica cultivar, widely used in RS, has a higher sensitivity to salinity when compared to that of the japonica cultivar in other physiological aspects. Current research analyzes enzymes expression involved in salt-subjected indica and japonica rice cultivars' respiration. Oryza sativa L. spp. japonica S.Kato (BRS Bojuru, IAS 12-9 Formosa and Goyakuman) and Oryza sativa L. spp. indica S. Kato (BRS Taim-7, BRS Atalanta and BRS Querencia) were the cultivars employed. Seedlings were transferred to 15 L basins containing 50% Hoagland nutrient solution increased by 0, 25, 50, 75 and 100 mM NaCl, and collected at 14, 28 and 42 days after transfer (DAT). Plant tissues were macerated and placed in eppendorf tubes with Scandálios extractor solution. Electrophoresis was performed in 7% of the polyacrylamide gels in vertical vats. Bands were revealed for the following enzymes systems: esterase, alcohol dehydrogenase, phosphoglucoisomerase, malate dehydrogenase, malic enzyme and alpha amylase. The enzymes expression was greater in subspecies japonica, with more intense bands in proportion to salinity increase. Results show that enzyme systems are involved in the salinity defense mechanisms in O. sativa spp. japonica cultivar.

O Estado do Rio Grande do Sul (RS) destaca-se como principal produtor de arroz, participando com 60% da produção nacional e 86% da regional. O sistema de irrigação da cultura é por inundação, que induz o solo à salinização, um dos maiores limitadores ambientais à produção, alterando o metabolismo da plantas expostas a este tipo de estresse. As cultivares indicas amplamente utilizadas no RS demonstram maior suscetibilidade à salinidade quando comparadas às japonicas em outros aspectos fisiológicos. O objetivo da pesquisa foi analisar a expressão de enzimas envolvidas na respiração de cultivares de arroz, indica e japonica, submetidas à salinidade. Foram utilizadas cultivares de Oryza sativa L. spp. japonica S. Kato (BRS Bojuru, IAS 12-9 Formosa e Goyakuman) e de Oryza sativa L. spp. indica S. Kato (BRS-7 Taim, BRS Querência e BRS Atalanta). As plântulas foram transferidas para bacias de 15 L, contendo solução nutritiva de Hoagland meia força acrescida de 0, 25, 50, 75 e 100 mM de NaCl. A coleta foi aos 14, 28 e 42 dias. Os tecidos vegetais foram macerados e colocados em tubos eppendorf com solução extratora de Scandálios. A eletroforese foi realizada em géis de poliacrilamida 7% em cubas eletroforéticas verticais. As bandas foram reveladas para os sistemas enzimáticos esterase, álcool desidrogenase, fosfoglico isomerase, malato desidrogenase, enzima málica e alfa amilase. A expressão das enzimas foi maior na subespécie japonica, com bandas mais intensas conforme o aumento da salinidade. Conclui-se que tais sistemas enzimáticos estejam envolvidos em mecanismos de tolerância ao estresse salino nas cultivares de O. sativa spp. japonica.

Padronização da técnica de eletroforese de isoenzimas para certificação de linhagens celulares / Standardization of isoenzymes electrophoresis technique for cell lines certification

A comprovação da espécie de origem é um dos itens da certificação de linhagens celulares, que pode ser feita por meio de técnica de eletroforese de isoenzimas. Com o objetivo de padronizar essa técnica, o grupo de estudo do Núcleo de Cultura de Células do IAL utilizou extratos celulares de diferentes espécies animais, que foram submetidos à eletroforese horizontal ou vertical em géis de poliacrilamida ou agarose, 100 V e4 oC. A revelação das bandas para a enzima glicose 6-fosfato desidrogenase foi realizada com o auxílio de sais de tetrazólio. Observou-se a presença de uma única banda para cada linhagem celular testada, com os padrões de migração esperados para as diferentes espécies utilizadas, com exceção da linhagem bovina MDBK, que não apresentou uma das bandas, provavelmente em função de menor expressão dessa enzima. Após a avaliação dos resultados obtidos com os diferentes sistemas de eletroforese e géis testados, optou-se pelo uso de eletroforese horizontal em géis de agarose a 2. A padronização e a implantação dessa técnica permitirão que o laboratório forneça linhagens celulares com o devido controle de qualidade.(AU)

Clonal characterization of Streptococcus mutans strains by multilocus enzyme electrophoresis

Twenty-one Streptococcus mutans strains were clustered by Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE). Six isoenzymes showed strong infra-specific discriminatory power (M1P, MPI, PLP, NSP, GOT, and LAP). MLEE is a robust technique that may be used to explore clonal diversity of S. mutans isolates in epidemiological surveys.

Vinte e uma cepas de Streptococcus mutans foram agrupadas pela eletroforese de enzimas codificadas por multilocus (MLEE). Seis isoenzimas apresentaram forte poder discriminatório (M1P, MPI, PLP, NSP, GOT e LAP). A MLEE é uma técnica robusta que pode ser empregada no estudo da diversidade clonal de cepas de S. mutans, em estudos epidemiológicos.

Differentiation and genetic variability in natural populations of Anopheles (N.) triannulatus (Neiva& Pinto, 1922) of Brazilian Amazonia

Populations of Anopheles triannulatus from Macapá (AP), Aripuanã (MT), Ji-Paraná (RO), and Manaus-Janauari Lake (AM) were studied using 16 enzymatic loci. The results of the isozyme analysis showed that the population of Macapá presented higher polymorphism (56.3%). The lowest variability was observed in the population of Manaus (p = 25.0; Ho = 0.077 ± 0.046). The results of Wright's F statistics showed unbalance due to excess of homozygotes (Fis > Fst), denoting a certain intrapopulational differentiation. Although the populations are genetically very close (D = 0.003 - 0.052), the dendrogram separates the populations in two groups: Macapá separated from that of Manaus, Ji-Paraná, and Aripuanã. This result may suggest a reduction in the genic flow, which possibly had some influence in the substructuration of the populations.

Populações de Anopheles triannulatus procedentes de Macapá (AP), Aripuanã (MT), Ji-Paraná (RO) e Manaus-Lago Janauari (AM) foram estudadas utilizando-se 16 locos enzimáticos. Os resultados mostraram maior polimorfismo (56,3%) na população de Macapá. A menor variabilidade foi verificada na população de Manaus (p = 25,0; Ho = 0,077 ± 0,046). Os resultados das estatísticas F de Wright mostraram desequilíbrio decorrente de excesso de homozigotos (Fis > Fst), denotando certa diferenciação intrapopulacional. Embora as populações sejam geneticamente muito próximas (D = 0,003 - 0,052), o dendrograma separa as populações em dois grupos: Macapá separado de Manaus, Ji-Paraná e Aripuanã. Isto pode ser indicativo de redução no fluxo gênico, que possivelmente influenciou a subestruturação das populações.

Esterases no exame da estrutura populacional de Camu-camu (Myrciaria dubia (Kunth) McVaugh-Myrtaceae)

Two enzymatic systems (esterase and esterase-D), analysed by using the starch gel electrophoresis technique on plant young leaves cultivated in the higher land (terra firme), from seeds of camu-camu, Myrciaria dubia (Kunth) McVaugh-Myrtaceae obtained from three natural population samples (Iquitos, Boa Vista and Uatumã), revealed 6 loci: Est-1, Est-2, Est-3, Est-4, Est-D1 and Est-D2. Two of the six gene loci presently examined (Est-3 and Est-D2) showed to be polymorphic, so they happen to be valuable for characterizing the species population structure. The polymorphism patterns shown in the Est-3 and Est-D2 loci of camu-camu, are typical of monomeric and dimeric enzymes, respectively. The locus Est-3 showed a huge genetic imbalance within and among the population samples examined, due to an excessive observed numbers of heterozygote plants compared to their expected numbers. The locus Est-D2 showed an exclusive polymorphism for the alleles Est-D2¹, Est-D2² and Est-D2³, and a good genetic balance in the Uatumã population sample. On account of that, among all gene loci investigated here, Est-D2 seems to be the most suitable locus for identifying and delimiting camu-camu probable stocks. Hence, this locus has to be present in the list of the isoenzymatic markers for future research on the species population genetics in the Amazon region. Data on allelic frequency distribution, genetic distance and genetic variation estimates on the 6 esterase loci investigated, were effective for demonstrating genetic differences among the surveyed species population samples. The highest values of mean heterozigozity (0.1353); proportion of polimorphic loci (0.33) and average number of alleles per locus (1.33) revealed in the Uatumã population sample, are due to the presence of an extra polymorphic locus (Est-D2) when compared with other surveyed samples.

Dois sistemas enzimáticos (esterase e esterase-D), analisados pela técnica de eletroforese em gel de amido, em folhas jovens de plantas cultivadas em terra firme, de sementes provenientes de três amostras de populações naturais de camu-camu, Myrciaria dubia (Kunth) McVaugh-Myrtaceae, procedentes de Iquitos, Boa Vista e Uatumã, revelaram a presença de 6 locos: Est-1, Est-2, Est-3, Est-4, Est-D1 e Est-D2. Dois dos seis locos gênicos examinados no presente estudo (Est-3 e Est-D2) mostraram-se polimórficos, sendo desse modo considerados valiosos no estudo de caracterização da estrutura populacional da espécie. Os padrões de polimorfismo revelados nos locos Est-3 e Est-D2 de camu-camu, são típicos de enzimas monoméricas e diméricas, respectivamente. O loco Est-3 apresentou um grande desbalanço genético dentro e entre as amostras populacionais examinadas, devido ao excessivo número observado de plantas heterozigóticas em relação ao número esperado. O loco Est-D2 apresentou um polimorfismo exclusivo para os alelos Est-D2¹,Est-D2² e Est-D2³, e um bom balanço genético na amostra populacional de Uatumã. Em função disso, dentre os demais locos gênicos aqui investigados, o loco Est-D2 parece ser o mais adequado para identificação e delimitação de prováveis estoques de camu-camu. Portanto, recomenda-se que esse loco esteja presente na lista dos marcadores isoenzimáticos a serem usados em futuras prospecções sobre genética populacional dessa espécie na região amazônica. Dados sobre a distribuição das freqüências alélicas, estimativas das distâncias genéticas, e estimativas de variação genética nos 6 locos de esterases examinados, foram eficazes na demonstração de diferenças genéticas entre as amostras populacionais examinadas da espécie. Os maiores valores de heterozigozidade média (0,1353); proporção de locos polimórficos (0,33) e número médio de alelos por loco (1,33) revelados na amostra populacional de Uatumã, devem-se ao fato dessa amostra ter apresentado um loco polimórfico a mais (Est-D2), em relação as demais amostras investigadas.

Electrophoretic analysis of 11 enzymes in natural populations ofroot, 1926 (diptera: culicidae) in the amazon region

Of eleven proteins analyzed in four Amazonian populations, the esterases showed the greatest variation, with five activity zones. EST1, EST2 and EST5 showed variation in each of the populations studied. EST1 and EST2 are each controlled by two, and EST5 by four, codomi-nant alleles. LAP presented six activity zones, with codominant variation in LAP5and LAP6.ocGPDH was monomorphic with one activity band on starch gel and two on polyacrylamide gel. 1DH presented two activity zones, with variation in the IDHl region. PGM had a single activity zone, with variation in all populations. The Ariquemes populations showed five alleles and the other populations three, all of then codominant. Three activity zones with two codominant alleles were observed for ODH. Aldehyde Oxidase showed two activity zones, with variation in AOl only in the Ariquemes and Porto Velho/Samuel populations. 6-PGDH showed only one activity zone and variation only in the Ariquemes population. The remaing systems - XDH, G-6-PDH and GDH. was monomorphic.

Dos 11 sistemas protéicos analisados, em quatro populações da Amazônia, as esterases foram as que apresentaram maior variação, com cinco zonas de atividade. EST1, EST2, e EST5 mostraram variação genética determinada em todas populações estudadas, sendo que as duas primeiras são resultantes do controle de dois alelos e a EST5 de quatro, todos codominantes. A LAP consiste de seis zonas de atividade e com variação apenas nos loci LAP5e LAP6,ambos codominantes. A GPDH mostrou-se monomórfica com uma zona de atividade em gel de amido e duas em poliacrilamida. A IDH apresentou duas zonas de atividade, com variação na região da IDH1. A PGM consiste de uma única zona de atividade e com variação em todas as populações estudadas. A população de Ariquemes revelou cinco alelos e as demais três, todos codominantes. Para a ODH, foram observadas três zonas de atividade com dois alelos codominantes. A enzima AO apresentou duas zonas de atividade, sendo que a AOl mostrou-se variável apenas em Ariquemes e Porto Velho/Samuel. 6-PGDH possui apenas uma zona de atividade e variação apenas em Ariquemes. Os demais sistemas - XDH, G-6-PDH e GDH - mostraram-se monomórficos.

Aperfeiçoamento da técnica de eletroforese para análise isoenzimática de clones de seringueira (Hevea sp.)1

This study aimed at optimizing techniques for preparing clonal leaflet extracts and identifying buffers and migration conditions so as to achieve better resolution of electrophoretic patterns in rubber tree clones. Twenty-five enzymatic systems in eleven gel and electrode buffers were tested. Similar electrophoretic profiles were obtained from extracts of clones in different phenological stages, in samples submitted to different centrifugation conditions and in plants from the same clone. Extracts from liophylized leaflets showed the same electrophoretic resolution as nonliophylized leaflets after two days for Adh, Pgi, 6Pgdh, Lap-1, Skd, Acp, Mdh-1, ß-Glu, Pgm and Idh. Got and Est electrophoretic patterns were well resolved only in fresh leaflets extracts. The other enzymes studied did not show a good electrophoretic resolution. Employing different types of substrates, nine regions of esterase activity were observed under the conditions used, although genetic variation has been characterized for only three loci in the clones analysed. Est-7 phenotypes observed using naphtyl-esters were similar to patterns found using L-benzoyl--naphtylamide assubstrate, suggesting that this esterase is an endopeptidase. The use of fluorogenic substrates allows the detection of a new electrophoretic Acp variant in Hevea nitida and another Glu variant in Hevea rigidifolia leaflet extracts.

Este estudo foi conduzido no sentido de otimizar as técnicas de preparo de extratos de folíolos e identificar tampões e condições de corrida que proporcionassem uma boa definição dos perfis eletroforéticos de clones de seringueira. Foram testados 25 diferentes sistemas enzimáticos utilizando-se onze sistemas tamponantes. Não foram encontradas diferenças na qualidade dos zimogramas obtidos nos diferentes estádios fenológicos analisados, em amostras submetidas a diferentes condições de centrifugação e nas diferentes plantas de um mesmo clone. Extratos de folíolos liofilizados apresentaram resolução semelhante para Adh, Pgi, 6Pgdh, Lap-1, Skdh, Acp, Mdh, ßGlu, Pgm e Idh que homogenados de folíolos não liofilizados preparados até 2 dias pós-coleta. Os padrões de Got e Est apresentaram boa nitidez somente em extratos de folíolos frescos. As demais enzimas não apresentaram resolução satisfatória. Com o uso de diferentes substratos, foi possível detectar nove regiões de atividade esterásica nas condições empregadas, embora variação genética tenha sido caracterizada para apenas três locos nos clones analisados. Os fenótipos observados para esterase-7 utilizando-se ésteres derivados de naftol foram semelhantes aos padrões encontrados utilizando L-benzoil-ßnaftilamida como substrato, indicando que esta esterase seja, provavelmente, uma en-dopeptidase. A utilização de substratos fluorogênicos permitiu ainda a detecção de uma variante eletroforética de Acp em Hevea nítida e uma variante de ßGlu em Hevea rigidifolia.

Aperfeiçoamento da técnica de eletroforese para análise isoenzimática de clones de seringueira (Hevea sp.)1

This study aimed at optimizing techniques for preparing clonal leaflet extracts and identifying buffers and migration conditions so as to achieve better resolution of electrophoretic patterns in rubber tree clones. Twenty-five enzymatic systems in eleven gel and electrode buffers were tested. Similar electrophoretic profiles were obtained from extracts of clones in different phenological stages, in samples submitted to different centrifugation conditions and in plants from the same clone. Extracts from liophylized leaflets showed the same electrophoretic resolution as nonliophylized leaflets after two days for Adh, Pgi, 6Pgdh, Lap-1, Skd, Acp, Mdh-1, ß-Glu, Pgm and Idh. Got and Est electrophoretic patterns were well resolved only in fresh leaflets extracts. The other enzymes studied did not show a good electrophoretic resolution. Employing different types of substrates, nine regions of esterase activity were observed under the conditions used, although genetic variation has been characterized for only three loci in the clones analysed. Est-7 phenotypes observed using naphtyl-esters were similar to patterns found using L-benzoyl--naphtylamide assubstrate, suggesting that this esterase is an endopeptidase. The use of fluorogenic substrates allows the detection of a new electrophoretic Acp variant in Hevea nitida and another Glu variant in Hevea rigidifolia leaflet extracts.

Este estudo foi conduzido no sentido de otimizar as técnicas de preparo de extratos de folíolos e identificar tampões e condições de corrida que proporcionassem uma boa definição dos perfis eletroforéticos de clones de seringueira. Foram testados 25 diferentes sistemas enzimáticos utilizando-se onze sistemas tamponantes. Não foram encontradas diferenças na qualidade dos zimogramas obtidos nos diferentes estádios fenológicos analisados, em amostras submetidas a diferentes condições de centrifugação e nas diferentes plantas de um mesmo clone. Extratos de folíolos liofilizados apresentaram resolução semelhante para Adh, Pgi, 6Pgdh, Lap-1, Skdh, Acp, Mdh, ßGlu, Pgm e Idh que homogenados de folíolos não liofilizados preparados até 2 dias pós-coleta. Os padrões de Got e Est apresentaram boa nitidez somente em extratos de folíolos frescos. As demais enzimas não apresentaram resolução satisfatória. Com o uso de diferentes substratos, foi possível detectar nove regiões de atividade esterásica nas condições empregadas, embora variação genética tenha sido caracterizada para apenas três locos nos clones analisados. Os fenótipos observados para esterase-7 utilizando-se ésteres derivados de naftol foram semelhantes aos padrões encontrados utilizando L-benzoil-ßnaftilamida como substrato, indicando que esta esterase seja, provavelmente, uma en-dopeptidase. A utilização de substratos fluorogênicos permitiu ainda a detecção de uma variante eletroforética de Acp em Hevea nítida e uma variante de ßGlu em Hevea rigidifolia.

ELECTROPHORETIC ANALYSIS OF 11 ENZYMES IN NATURAL POPULATIONS OFROOT, 1926 (DIPTERA: CULICIDAE) IN THE AMAZON REGION

Of eleven proteins analyzed in four Amazonian populations, the esterases showed the greatest variation, with five activity zones. EST1, EST2 and EST5 showed variation in each of the populations studied. EST1 and EST2 are each controlled by two, and EST5 by four, codomi-nant alleles. LAP presented six activity zones, with codominant variation in LAP5and LAP6.ocGPDH was monomorphic with one activity band on starch gel and two on polyacrylamide gel. 1DH presented two activity zones, with variation in the IDHl region. PGM had a single activity zone, with variation in all populations. The Ariquemes populations showed five alleles and the other populations three, all of then codominant. Three activity zones with two codominant alleles were observed for ODH. Aldehyde Oxidase showed two activity zones, with variation in AOl only in the Ariquemes and Porto Velho/Samuel populations. 6-PGDH showed only one activity zone and variation only in the Ariquemes population. The remaing systems - XDH, G-6-PDH and GDH. was monomorphic.

Dos 11 sistemas protéicos analisados, em quatro populações da Amazônia, as esterases foram as que apresentaram maior variação, com cinco zonas de atividade. EST1, EST2, e EST5 mostraram variação genética determinada em todas populações estudadas, sendo que as duas primeiras são resultantes do controle de dois alelos e a EST5 de quatro, todos codominantes. A LAP consiste de seis zonas de atividade e com variação apenas nos loci LAP5e LAP6,ambos codominantes. A GPDH mostrou-se monomórfica com uma zona de atividade em gel de amido e duas em poliacrilamida. A IDH apresentou duas zonas de atividade, com variação na região da IDH1. A PGM consiste de uma única zona de atividade e com variação em todas as populações estudadas. A população de Ariquemes revelou cinco alelos e as demais três, todos codominantes. Para a ODH, foram observadas três zonas de atividade com dois alelos codominantes. A enzima AO apresentou duas zonas de atividade, sendo que a AOl mostrou-se variável apenas em Ariquemes e Porto Velho/Samuel. 6-PGDH possui apenas uma zona de atividade e variação apenas em Ariquemes. Os demais sistemas - XDH, G-6-PDH e GDH - mostraram-se monomórficos.

Caracterização bioquímica de cultivares de cana-de-açúcar (Saccharum spp.): isoenzimas, proteína solúvel e valor brix

In the present work the isoenzyme profiles of the enzymes esterase and peroxidase, the level of total soluble protein and the soluble solids (sucrose) were determined of the following sugarcane (Saccharum spp.) cultivare: NA 56-79; IAC 52-150; IAC 64-257; SP 70-1143; SP 71-3146; SP 71-3149; SP 71-1406; SP 71-6163; SP 71-61-68 and SP 71-799. Esterase isoenzymes showed a specific electrophoretic pattern for each one of the cultivare, while the peroxidase allowed to arrange the cultivare in groups, each one with a specific electrophoretic pattern. The isoenzymes of both esterase and peroxidase were constant in a given cultivar. Total soluble protein levels and soluble solids (sucrose, Brix value) varied among the cultivare. Statistical analysis showed that these biochemical parameters are useful for the characterization of the cultivare under study.

No presente trabalho foram determinados o perfil isoenzimático diferencial de esterase e peroxidase, a proteína total solúvel e os sólidos solúveis (sacarose) em graus brix, de 10 cultivares de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) atualmente cultivados no Brasil. Os cultivares estudados foram: NA 56-79, IAC 52-150, IAC 64-257, SP 70-1143, SP 71-3146, SP 71-3149, SP 71-1406, SP 71-6163, SP 71-61-68 e SP 71-799. Com os dados obtidos foi possível comprovar o valor taxonômico das características bioquímicas que representam uma inovação em taxonomia de cana-de-açúcar no Brasil. As isoenzimas de esterase apresentaram um padrão eletroforético específico para cada cultivar estudado, enquanto que as isoenzimas de peroxidase só permitiram agrupar os cultivares por apresentarem o mesmo padrão eletroforético para cada grupo formado. Tanto as isoenzimas de esterase como peroxidase apresentaram-se constantes em um mesmo cultivar. Os sólidos solúveis (sacarose) em Graus Brix e a determinação da proteína solúvel, mesmo sendo pouco variáveis, apresentaram-se úteis para a caracterização dos cultivares estudados.

Padrões ontogenéticos das Esterases, Leucina Aminopeptidase e X-Glicerofosfato Desidrogenase em Anopheles (Nyssorhynchus) Albitarsis lynch-arribálzaga, 1878 (Diptera: Culicidae)

Modifications in genetic expression were observed in the esterase, leucine aminopeptidase and x-glycerophosphate dehydrogenase systems during ontogenetic development of Anopheles albitarsis. The esterase revealed four regions of activity. Esterase 1 was detected in 4th stage larvae and in pupae. Esterase 2 and 4 were present during all stages of development and esterase 3 appeared mainly in larvae and rarely in pupae. Four regions of activity were also observed in leucine aminopeptidase during ontogeny. The LAP1 and LAP2 were characteristic of larvae and LAP3 was present only in pupae and adults. LAP4 was detected in all three stages, x-glycerophosphate dehydrogenase presented one activity band whose intensity increased with development.

Modificações na expressão gênica foram observadas nos sistemas esterase, leucina aminopeptidase e x-glicerofosfato desidrogenase, durante o desenvolvimento ontogenético de Anopheles albitarsis. A esterase revelou quatro regiões de atividade, sendo a esterase 1 detectada apenas em larvas de 4º estádio velhas e em pupas, as esterases 2 e 4 foram presentes durante todo o desenvolvimento, e a esterase 3 revelou-se praticamente apenas em larvas e raríssimas vezes em pupas. Também foram observadas quatro regiões de atividade na leucina aminopeptidase, durante a ontogenia. As LAP1 c LAP2 foram características de larvas, a LAP3 esteve presente somente em pupas e adultos e a LAP4 foi detectada nos três diferentes estágios. Uma única região foi observada para a x-glicerofosfato desidrogenase e a intensidade de sua atividade cresce à medida que se aproxima o estágio adulto.

Padrões ontogenéticos das Esterases, Leucina Aminopeptidase e X-Glicerofosfato Desidrogenase em Anopheles (Nyssorhynchus) Albitarsis lynch-arribálzaga, 1878 (Diptera: Culicidae)

Modifications in genetic expression were observed in the esterase, leucine aminopeptidase and x-glycerophosphate dehydrogenase systems during ontogenetic development of Anopheles albitarsis. The esterase revealed four regions of activity. Esterase 1 was detected in 4th stage larvae and in pupae. Esterase 2 and 4 were present during all stages of development and esterase 3 appeared mainly in larvae and rarely in pupae. Four regions of activity were also observed in leucine aminopeptidase during ontogeny. The LAP1 and LAP2 were characteristic of larvae and LAP3 was present only in pupae and adults. LAP4 was detected in all three stages, x-glycerophosphate dehydrogenase presented one activity band whose intensity increased with development.

Modificações na expressão gênica foram observadas nos sistemas esterase, leucina aminopeptidase e x-glicerofosfato desidrogenase, durante o desenvolvimento ontogenético de Anopheles albitarsis. A esterase revelou quatro regiões de atividade, sendo a esterase 1 detectada apenas em larvas de 4º estádio velhas e em pupas, as esterases 2 e 4 foram presentes durante todo o desenvolvimento, e a esterase 3 revelou-se praticamente apenas em larvas e raríssimas vezes em pupas. Também foram observadas quatro regiões de atividade na leucina aminopeptidase, durante a ontogenia. As LAP1 c LAP2 foram características de larvas, a LAP3 esteve presente somente em pupas e adultos e a LAP4 foi detectada nos três diferentes estágios. Uma única região foi observada para a x-glicerofosfato desidrogenase e a intensidade de sua atividade cresce à medida que se aproxima o estágio adulto.

Caracterização bioquímica de cultivares de cana-de-açúcar (Saccharum spp.): isoenzimas, proteína solúvel e valor brix

In the present work the isoenzyme profiles of the enzymes esterase and peroxidase, the level of total soluble protein and the soluble solids (sucrose) were determined of the following sugarcane (Saccharum spp.) cultivare: NA 56-79; IAC 52-150; IAC 64-257; SP 70-1143; SP 71-3146; SP 71-3149; SP 71-1406; SP 71-6163; SP 71-61-68 and SP 71-799. Esterase isoenzymes showed a specific electrophoretic pattern for each one of the cultivare, while the peroxidase allowed to arrange the cultivare in groups, each one with a specific electrophoretic pattern. The isoenzymes of both esterase and peroxidase were constant in a given cultivar. Total soluble protein levels and soluble solids (sucrose, Brix value) varied among the cultivare. Statistical analysis showed that these biochemical parameters are useful for the characterization of the cultivare under study.

No presente trabalho foram determinados o perfil isoenzimático diferencial de esterase e peroxidase, a proteína total solúvel e os sólidos solúveis (sacarose) em graus brix, de 10 cultivares de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) atualmente cultivados no Brasil. Os cultivares estudados foram: NA 56-79, IAC 52-150, IAC 64-257, SP 70-1143, SP 71-3146, SP 71-3149, SP 71-1406, SP 71-6163, SP 71-61-68 e SP 71-799. Com os dados obtidos foi possível comprovar o valor taxonômico das características bioquímicas que representam uma inovação em taxonomia de cana-de-açúcar no Brasil. As isoenzimas de esterase apresentaram um padrão eletroforético específico para cada cultivar estudado, enquanto que as isoenzimas de peroxidase só permitiram agrupar os cultivares por apresentarem o mesmo padrão eletroforético para cada grupo formado. Tanto as isoenzimas de esterase como peroxidase apresentaram-se constantes em um mesmo cultivar. Os sólidos solúveis (sacarose) em Graus Brix e a determinação da proteína solúvel, mesmo sendo pouco variáveis, apresentaram-se úteis para a caracterização dos cultivares estudados.