Pathogenic bacteria load and safety of retail marine fish / Carga de bactérias patogênicas e segurança de peixes marinhos de varejo

This study was conducted to determine the pathogenic bacteria load of 14 species of marine fish obtained from two suppliers (in Bitlis city, Turkey), which provide fish for fish markets, and to reveal the safety of the marine fish in terms of microbiological quality. The counts of total mesophilic aerobic bacteria (TMAB), Staphylococcus aureus, and Escherichia coli, the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes were determined in anchovy, horse mackerel, salmon, red mullet, gilthead seabream, bonito, pilchard, common sole, sand smelt, axillary seabream, seabass, Mediterranean horse mackerel, bluefish, and garpike. It was determined that common sole, axillary seabream, seabass, bluefish and Mediterranean horse mackerel obtained from both suppliers were unacceptable in terms of the counts of TMAB. Twenty-four samples exceeded the critical limit of S. aureus and all the samples were unacceptable according to the critical limit of E. coli. While L. monocytogenes was isolated from 50.0% of the samples, Salmonella spp. was isolated from 39.3% of the samples. These results showed that the pathogenic bacteria load of the analyzed marine fish was quite high and they were unsafe in terms of microbiological quality.

Este estudo foi realizado para determinar a carga de bactérias patogênicas de 14 espécies de peixes marinhos obtidos de dois fornecedores (na cidade de Bitlis, Turquia), que fornecem peixes para mercados de peixes, e para revelar a segurança do peixe marinho em termos de qualidade microbiológica. As contagens de bactérias aeróbias mesófilas totais (TMAB), Staphylococcus aureus e Escherichia coli, a presença de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes foram determinados em anchova, carapau, salmão, salmonete, dourada, bonito, sardinha, linguado, cheirado, dourada-axilar, robalo, carapau-do-mediterrâneo, anchova e garpike. Foi determinado que o linguado, o dourada-axilar, o robalo, a anchova e o carapau-do-mediterrâneo obtidos de ambos os fornecedores eram inaceitáveis nas contagens do TMAB. Vinte e quatro amostras excederam o limite crítico de S. aureus, e todas as amostras foram inaceitáveis de acordo com o limite crítico de E. coli. Enquanto L. monocytogenes foi isolada em 50.0% das amostras, Salmonella spp. foi isolado de 39.3% das amostras. Esses resultados mostraram que a carga de bactérias patogênicas dos peixes marinhos analisados era bastante alta e eles eram inseguros em termos de qualidade microbiológica.

Lactobacillus acidophilus reduces Listeria monocytogenes infection by inhibiting mitogen-activated protein kinase genes in growing rabbits

We aimed to investigate the effect of Lactobacillus acidophilus ACCC11073 on the growth performance, oxidation, inflammation, and mitogen-activated protein kinase (MAPK) family genes of rabbits infected with Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) using antibiotic enrofloxacin hydrochloride (EH) as a reference. There were four treatments including negative control, positive control with L. monocytogenes infection on the first day of feeding trial (PC), PC + EH at 40 mg kg−1, and PC + L. acidophilus at 108 CFU kg−1 of diet using 240 weaned growing rabbits. The results showed that L. monocytogenes infection worsened growth performance of rabbits, whereas EH or L. acidophilus supplementation partially recovered body weight gain, but did not reach the levels of the negative control. Listeria acidophilus and EH decreased L. monocytogenes loads in caecum, liver, spleen, and lymph node, serum oxidative markers including diamine oxidase, malondialdehyde, and protein carbonyl, serum IL-1ß, IL-6, and TNF-α. The decreased effects of EH on IL-1ß and TNF-α were more pronounced than that of the probiotic. Treatments EH and probiotic also de-regulated the mRNA levels of MAPK1, 3, 6, and 14. Listeria acidophilus exhibits a similar effect to EH against L. monocytogenes in rabbits, and the regulation on inflammatory process is via MAPK family genes. The results suggest that L. acidophilus can be used as a feed additive against L. monocytogenes infection.(AU)

In vitro detection of pathogenic Listeria monocytogenes from food sources by conventional, molecular and cell culture method

Among current in vitro methods for identification of pathogenic Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) rely on growth in culture media, followed by isolation, and biochemical and serological identification. Now PCR (Polymerase Chain Reaction) has been used for the rapid, sensitive and specific detection of pathogenic L. monocytogenes. The pathogenicity of the organism is highly correlated with haemolytic factor known as listeriolysin O (LLO). A total of 400 samples from meat and 250 samples from raw milk and their products were collected from various local dairy farms, dairy units and butcheries in Bareilly, India. Pure isolates of L. monocytogenes obtained after enrichment in Buffered Listeria enrichment broth (BLEB) followed by plating onto Listeria oxford agar. The DNA extracted from pure isolates and used for the detection of bacterial pathogen. The oligonucleotide primer pairs (F: CGGAGGTTCCGCAAAAGATG, R: CCTCCAGAGTGATCGATGTT) complementary to the nucleotide sequence of the hlyA gene selected for detection of L. monocytogenes using polymerase chain reaction (PCR). PCR products of 234 bp generated with DNA from all of L. monocytogenes isolates. The highest occurrence of haemolytic L. monocytogenes isolates from various meat samples was in raw chicken (6.0%), followed by fish meat (4.0%), and then beef (2.5%). Among various milk and milk products, curd (2.0%) showed the highest prevalence, followed by raw milk (1.3%). The cytotoxic effects of haemolytic L. monocytogenes isolates were screened on vero cell lines. The cell lines with cell free culture supernatant (CFCS) examined at 1 min, 10 min, 30 min, and 60 min. The significant changes in vero cells were observed at 30 min with both 30 µL and 50 µL of volume. We conclude that application of PCR approaches can provide critical information on distribution of haemolytic strains of L. monocytogenes in food processing environments. Vero cell cytotoxicity assay (in vitro) resulted positive in twenty four strong haemolysin producing L. monocytogenes isolates. The vero cytotoxicity assay could be suggested as a further step towards an alternative assay for detection of haemolytic strains of L. monocytogenes.(AU)

Molecular characterization of Listeria monocytogenes isolated from animal products in a city of Northern Brazil

Listeria monocytogenes, a foodborne pathogen causes listeriosis, a fatal disease in about 30% of cases that affects mainly immunocompromised persons. The aim of this research was to characterize L. monocytogenes pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) types isolated from meat products collected at public markets in Araguaina city, TO. Sixty samples of raw ground beef and frescal sausage were analyzed during the second half of 2008. Five out of 30 samples (16.7%) of raw ground beef tested positive for L. monocytogenes, three of which were classified as serotype 1/2b and two as serotype 4b. Among the 30 samples of sausage collected, two strains of L. monocytogenes were isolated (6.7%), one of them belonging to serotype 1/2a and the other belonging to serotype 1/2b. The restriction enzymes used were ApaI and SmaI. Similarities among the strains were determined by Dice coefficient. The macro restriction profile obtained by using SmaI enzyme allowed the distribution of seven strains in two clusters, two pulsotypes and two subtypes. The result indicates that L. monocytogenes isolates, belonging to serotype 4b, 1/2a and 1/2b, are strongly correlated within the same serotype group, and in some cases among different serotypes, suggesting that they have a common source.

Listeria monocytogenes é um patógeno de origem alimentar que causa a listeriose, doença fatal em aproximadamente 30% dos casos, e que afeta principalmente pessoas imunocomprometidas. O presente trabalho teve como objetivo analisar os perfis PFGE de cepas de L. monocytogenes isoladas de produtos de origem animal, obtidos em mercados públicos da cidade de Araguaína, TO. Foram analisadas 60 amostras de carne moída crua e de linguiça frescal, no segundo semestre de 2008. Cinco (16,7%) das 30 amostras de carne moída crua foram positivas ao patógeno, sendo que três pertenciam ao sorotipo 1/2b e duas ao sorotipo 4b. Das 30 amostras de linguiça mista frescal, duas (6,7%) foram positivas para L. monocytogenes, sendo uma do sorotipo 1/2a e outra do 1/2b. Foram utilizadas as enzimas de restrição ApaI e SmaI. A similaridade entre eles foi determinada pelo coeficiente de Dice. A análise do perfil de macrorestrição com a enzima SmaI permitiu a distribuição dos sete isolados em dois clusters, dois pulsotipos e dois subtipos. Os resultados permitiram concluir que os isolados de L. monocytogenes sorotipos 4b, 1/2a e 1/2b foram fortemente correlacionados dentro dos mesmos sorotipos e em alguns casos entre diferentes sorotipos, sugerindo uma fonte comum.

Molecular characterization of Listeria monocytogenes isolated from animal products in a city of Northern Brazil

Listeria monocytogenes, a foodborne pathogen causes listeriosis, a fatal disease in about 30% of cases that affects mainly immunocompromised persons. The aim of this research was to characterize L. monocytogenes pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) types isolated from meat products collected at public markets in Araguaina city, TO. Sixty samples of raw ground beef and frescal sausage were analyzed during the second half of 2008. Five out of 30 samples (16.7%) of raw ground beef tested positive for L. monocytogenes, three of which were classified as serotype 1/2b and two as serotype 4b. Among the 30 samples of sausage collected, two strains of L. monocytogenes were isolated (6.7%), one of them belonging to serotype 1/2a and the other belonging to serotype 1/2b. The restriction enzymes used were ApaI and SmaI. Similarities among the strains were determined by Dice coefficient. The macro restriction profile obtained by using SmaI enzyme allowed the distribution of seven strains in two clusters, two pulsotypes and two subtypes. The result indicates that L. monocytogenes isolates, belonging to serotype 4b, 1/2a and 1/2b, are strongly correlated within the same serotype group, and in some cases among different serotypes, suggesting that they have a common source.

Listeria monocytogenes é um patógeno de origem alimentar que causa a listeriose, doença fatal em aproximadamente 30% dos casos, e que afeta principalmente pessoas imunocomprometidas. O presente trabalho teve como objetivo analisar os perfis PFGE de cepas de L. monocytogenes isoladas de produtos de origem animal, obtidos em mercados públicos da cidade de Araguaína, TO. Foram analisadas 60 amostras de carne moída crua e de linguiça frescal, no segundo semestre de 2008. Cinco (16,7%) das 30 amostras de carne moída crua foram positivas ao patógeno, sendo que três pertenciam ao sorotipo 1/2b e duas ao sorotipo 4b. Das 30 amostras de linguiça mista frescal, duas (6,7%) foram positivas para L. monocytogenes, sendo uma do sorotipo 1/2a e outra do 1/2b. Foram utilizadas as enzimas de restrição ApaI e SmaI. A similaridade entre eles foi determinada pelo coeficiente de Dice. A análise do perfil de macrorestrição com a enzima SmaI permitiu a distribuição dos sete isolados em dois clusters, dois pulsotipos e dois subtipos. Os resultados permitiram concluir que os isolados de L. monocytogenes sorotipos 4b, 1/2a e 1/2b foram fortemente correlacionados dentro dos mesmos sorotipos e em alguns casos entre diferentes sorotipos, sugerindo uma fonte comum.

OCORRÊNCIA E QUANTIFICAÇÃO DE Listeria spp. EM PRESUNTOS FATIADOS PELA INDÚSTRIA E PELO COMÉRCIO VAREJISTA

Listeria monocytogenes é um agente patogênico transmitido por alimentos, causador de listeriose e tem sido isolado de produtos cárneos prontos para consumo (RTE). O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência e quantificação de Listeria monocytogenes em presuntos cozidos fatiados e embalados pela indústria e em presuntos cozidos fatiados e embalados no varejo. As amostras foram analisadas após a aquisição (Tempo 1) e ao fim da validade indicada no rótulo (Tempo 2). A quantificação e a detecção de presença e ausência de Listeria monocytogenes nas amostras foi obtida por meio da metodologia ISO 11290-1 e 11290-2. Além disso, foram realizados testes fenotípicos para diferenciação de Listeria spp. que compreenderam teste de catalase, cloração de gram, motilidade, - hemólise e fermentação de açucares (xilose, ramnose, dextrose e manitol). Foram escolhidas três marcas distintas de empresas com importância na comercialização de derivados cárneos no mercado nacional, as quais foram adquiridas em quatros supermercados conforme disponibilidade de venda. Foram avaliadas 60 amostras provenientes da indústria nas quais não foi detectado Listeria monocytogenes. Contudo, nas 60 amostras analisadas do varejo, 23,3 % apresentaram presença de Listeria spp.. As espécies que apresentaram a maior frequência nas amostras do varejo foram L. ivanovii (37,5 %), L. seeligeri (37,5 %), L. innocua (23,6 %) e L. welshimeri (1,3 %). As amostras do varejo foram analisadas quanto ao tempo de prateleira e 27 amostras (45 %) apresentaram validade superior a 5 dias, dessas, 21 amostras (35%) foram adquiridas no mesmo estabelecimento comercial (GP). As amostras também foram submetidas a contagem de Bactérias Ácido Láticas (BAL) nas quais houve aumento de 3 logs nas amostras com fatiamento na indústria e 2 logs nas amostras com origem de fatiamento no comercio varejista.

Listeria monocytogenes is a foodborne pathogen that causes listeriosis and has been isolated from ready-to-eat meat. The objective of this work was to verify the occurrence and quantification of Listeria monocytogenes in sliced and packaged hams by the industry and also in sliced and packaged hams at retail. Samples were analyzed after the acquisition (Time 1) and at the expiration of the validity indicated on the label (Time 2). Quantification and detection of presence and absence of Listeria monocytogenes in the samples were obtained using the methodology ISO 11290-1 and 11290-2. In addition, phenotypic tests for differentiation of Listeria spp. were conducted including catalase testing, gram staining, motility, -hemolysis and fermentation of sugars (xylose, rhamnose, dextrose and mannitol). Three different brands of companies with importance in the commercialization of meat products in the national market were chosen, which were acquired in four supermarkets according to the products availability. Were evaluated 60 samples from the industry in which Listeria monocytogenes was not detected. However, in the 60 samples analyzed from retail, 23,3 % showed presence of Listeria spp.. The species that presented the highest frequency in the retail samples were L. ivanovii (37,5 %), L. seeligeri (37,5 %), L. innocua (23,6 % ) and L. welshimeri (1,3 %). Retail samples were analized according to the shelf life where 27 samples (45 %) showed validity for more than 5 days, in which 21 samples (35 %) were acquired at the same commercial establishment. The samples were also submitted to a Lactic Acid Bacteria (LAB) count in which there was an increase of 3 logs in the samples with slice in the industry and 2 logs in the samples with origin of slicing in the retail trade.

Avaliação da oleuropeína e de sanitizantes químicos, isolados ou associados, para eliminação de biofilmes de Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes e Escherichia coli em superfícies inertes

Este estudo avaliou a eficiência da oleuropeína (OLE) (composto fenólico extraído das folhas de Oliveira) isolada e associada aos sanitizantes comerciais ácido peracético 2% (APA), hipoclorito de sódio 2% (HS), peróxido de hidrogênio 3% (PH), digluconato de clorexidina 2% (DC), cloreto de benzalcônio 1% (CB) e iodofor 2% (IO), para inativação de células em suspensão e biofilmes monoespécie e multiespécie formados em superfícies de aço inoxidável ou microplaca de poliestireno por Listeria monocytogenes (ATCC 7644), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Escherichia coli (ATCC 25922), todas classificadas como fortes produtores de biofilmes. Os isolados foram semeados em caldo TSB (caldo tripticase soja), incubados (37oC/24h) e corrigidos a ~108células/mL (escala 0,5 McFarland). Para bactérias em suspensão, a resistência a sanitizantes foi determinada pela Concentração Inibitória Mínima (CIM) em tubos e pelo método de Disco Difusão em Ágar (DDA), no qual as bactérias foram plaqueadas em ágar TSA contendo discos de 6mm de papel filtro embebidos nos sanitizantes. Após a incubação, a medição dos halos de inibição foi feita com paquímetro. Para os ensaios de resistência dos biofilmes aos compostos sanitizantes, foram utilizadas microplacas de poliestireno 96 poços, as quais foram preparadas para incubação-fixação dos biofilmes e submetidas à leitura em espectrofotômetro de ELISA (600 nm). Em seguida, as placas foram lavadas com solução salina tamponada (PBS, pH 7.4) e os sanitizantes inseridos por 1 minuto. Após neutralização com tiossulfato de sódio (5 minutos), as placas foram lavadas com PBS e metanol, coradas com cristal violeta 1% e coradas com ácido acético glacial (33%) para nova leitura a 570nm. A eficácia da remoção do biofilme pelos sanitizantes foi comparada pelo índice de formação de biofilme (IFB). As imagens do aço inoxidável após tratamento com sanitizante foram feitas através de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) eMicroscopia Confocal, para visualizar a persistência dos biofilmes. Os valores de CIM (diluição 1:2) mostraram que OLE não teve atividade bactericida. No método DDA, L. monocytogenes, foi resistente à OLE, enquanto E. coli e S. aureus apresentaram resistência intermediária. Os sanitizantes comerciais apresentaram boa atividade bactericida nos ensaios de CIM e DDA, sendo que as associações de OLE aos sanitizantes comerciais aumentaram o efeito germicida. Nos ensaios com biofilmes em monoespécie, somente os sanitizantes comerciais, isolados ou associados com OLE, foram eficazes de reduzir o valor de BFI em microplaca de poliestireno. Em biofilmes multiespécie, OLE apresentou efeito antimicrobiano, sobretudo sobre a associação de L. monocytogenes + E. coli + S. aureus (redução: 91,49%). Nenhum dos compostos avaliados foi capaz de inativar completamente os biofilmes nas superfícies de aço inoxidável, uma vez que células viáveis foram observadas após os tratamentos com os sanitizantes, indicando persistência dos biofilmes. Os resultados indicam que a oleuropeína apresentou potencial para incrementar o efeito bactericida de sanitizantes comerciais para eliminação de biofilmes em superfícies inertes, sendo necessários estudos para compreender os mecanismos de ação dessas combinações.

This study evaluated the efficiency of oleuropein (OLE) (a phenolic compound extracted from Oliveira leaves) alone or in association with commercial sanitizers peracetic acid 2% (PPA), sodium hypochlorite 2% (SH), hydrogen peroxide 3% (HP), chlorhexidine digluconate 2% (CD), benzalkonium chloride 1% (BC) and iodophor 2% (IO), for inactivation of suspended cells and monospecies or multispecies biofilms formed on stainless steel surfaces or microplate polystyrene by Listeria monocytogenes (ATCC 7644), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) and Escherichia coli (ATCC 25922), all classified as strong producers of biofilms. The isolates were grown in TSB (trypticase soy broth), incubated (37°C/24 h) and adjusted to ~108 cells/mL (0.5 McFarland scale). For the bacterial suspensions, resistance to sanitizers was determined by Minimum Inhibitory Concentration (MIC) in tubes and by Agar Disk Diffusion (ADD), in which the bacteria were plated on TSA agar containing 6mm disks of filter paper soaked in sanitizers. After incubation, measurement of the inhibition halos was done using a caliper rule. For the sanitizer resistance assays with biofilms, polystyrene 96-well microplates were prepared for incubation-fixing of biofilms and read in an ELISA spectrophotometer (600 nm). After, the plates were washed with phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4) and the sanitizers were placed for 1 minute. After neutralization with sodium thiosulfate (5 minutes), the plates were washed with PBS and methanol, stained with 1% crystal violet and stained with glacial acetic acid (33%) for a new reading at 570 nm. The effectiveness of biofilm removal by each sanitizer was compared using a Biofilm Formation Index (IFB). The images from stainless steel coupons after treatments with sanitizers were obtained by Scanning Electron Microscopy (SEM) and Confocal Microscopy, to view the persistence of biofilms. MIC values (dilution 1: 2) showed that OLE had no bactericidal activity. In the ADD assays, L. monocytogenes was resistant to OLE, while E. coli and S. aureus showed intermediate resistance. Commercial sanitizers showed good bactericidal activity in both CIM and DDA assays, and the associations of OLE with commercial sanitizers increased their germicidal effect. In the monospecies biofilm assays, only commercialsanitizers, isolated or associated with OLE, were effective for reducing the BFI values in polystyrene microplates. In multispecies biofilms, OLE had an antimicrobial effect, especially on the association of L. monocytogenes + E. coli and S. aureus (reduction: 91.49%). None of the compounds evaluated was able to completely inactivate the biofilms on the stainless steel surfaces, since viable cells of bacteria were observed after treatment with sanitizers, indicating persistence of biofilms. The results indicate that oleuropein has the potential to enhance the bactericidal effect of commercial sanitizers to eliminate biofilms on inert surfaces. Further studies are needed to understand the mechanisms of action of these combinations.

Avaliação de biofilmes formados por isolados de Listeria monocytogenes provenientes de laticínios e perfil de resistência a agentes sanitizantes / Evaluation of biofilms formed by Listeria monocytogenes isolated from dairy plants and resistance to sanitizing agents

O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de isolados de Listeria monocytogenes em formar biofilmes em superfícies inertes, bem como sua resistência a agentes sanitizantes. Foram utilizados 37 isolados provenientes de ambiente de laticínios, amostras de queijos e salmoura, pertencentes à coleção do Laboratório de Microbiologia e Micotoxicologia de Alimentos (LMMA) do Departamento de Engenharia de Alimentos da FZEA/USP. Dos 37 isolados avaliados, 67,6% eram pertencentes ao sorotipo 4b. Três isolados de L. monocytogenes foram obtidos de salmoura, 5 foram obtidos de caixas plásticas, 1 de queijo Prato, 1 da mão de manipulador de embalagens, e 27 foram isolados de superfícies sem contato com alimentos (piso da sala de pasteurização, piso da câmara fria, ralo da câmara fria ou estrado da câmara fria). Os isolados de L. monocytogenes apresentaram maior capacidade de produzir biofilme nos ensaios com cupons de aço inox (43,2% dos isolados), seguido dos ensaios em microplaca de poliestireno (16,2%), cupons de borracha (13,5%) e discos de silicone (2,7%). As células de L. monocytogenes aderidas nas superfícies do aço inox foram visualizadas sob microscopia eletrônica de varredura após 48 horas de incubação a 37ºC. Dezenove isolados de L.monocytogenes, os quais produziram biofilmes nos ensaios com aço inox, borracha ou silicone, foram testados para determinação da eficiência de sanitizantes pelo método de concentração inibitória mínima (CIM), utilizando-se ácido peracético (2%), cloreto de banzalcônio (1%), digluconato de clorexidina (2%), hipoclorito de sódio (2%) e tintura de iodo (2%). Os isolados de L. monocytogenes analisados apresentaram resistência a ácido peracético, hipoclorito de sódio e tintura de iodo, cujos valores de CIM foram 3,12%, 6,25% e 6,25%, respectivamente. Nenhum isolado apresentou resistência a cloreto de benzalcônio e digluconato de clorexidina, os quais foram eficientes para inibição de isolados de L. monocytogenes provenientes de amostras de queijos e ambientes de laticínios. A L. monocytogenes apresenta capacidade de persistir em ambiente de laticínios sob a forma de biofilme em várias superfícies inertes como aço inox, borracha e silicone, o que pode representar uma fonte permanente de contaminação para produtos e processos de obtenção de leite e derivados.

The objective of the present study was to evaluate the ability of isolates of Listeria monocytogenes to form biofilms and their resistance to sanitizers. Thirty seven strains belonging to the collection of the Laboratory of Microbiology and Food Mycotoxicology (LMMA), Department of Food Engineering of FZEA / USP, were used. Of the 37 isolates, 67.6% belonged to serotype 4b. Three isolates of L. monocytogenes were obtained from brine, 5 were obtained from plastic boxes, one of Prato cheese, one from the packaging handler/'s hand, and 27 were isolated from non-food contact surfaces (pasteurization room floor, the floor of the cold room, the drain cold or pallet from the cold chamber). The isolates of L. monocytogenes showed greater ability to produce biofilm in the assays with stainless steel coupons (43.2% of isolates), followed by polystyrene micro plate (16.2%), rubber coupons (13.5%) and silicone disks (2.7%) assays. Cells of L. monocytogenes attached to stainless steel surfaces were viewed under scanning electron microscopy after 48 hours incubation at 37°C. Nineteen strains of L. monocytogenes, which were considered biofilms producers in the assays with stainless steel, rubber or silicone, have been tested to evaluate the efficiency of the sanitizing method by means of the minimum inhibitory concentration (MIC), using peracetic acid (2%), sodium chloride benzalkonium (1%), chlorhexidine digluconate (2%), sodium hypochlorite (2%) and iodine solution (2%). The isolates of L. monocytogenes analyzed showed resistance to peracetic acid, sodium hypochlorite and iodine tincture, with MIC values of 3.12%, 6.25% and 6.25%, respectively. No isolate showed resistance to benzalkonium chloride and chlorhexidine digluconate, which were effective for inhibiting the isolates of L. monocytogenes from samples of cheeses and dairy environments. In conclusion, L. monocytogenes has the ability to persist in the environment of dairy products by forming biofilms in several inert surfaces such as stainless steel, rubber and silicone, which may represent a continuing source of contamination to manufacture processes of dairy products.

Avaliação de biofilmes formados por isolados de Listeria monocytogenes provenientes de laticínios e perfil de resistência a agentes sanitizantes / Evaluation of biofilms formed by Listeria monocytogenes isolated from dairy plants and resistance to sanitizing agents

O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de isolados de Listeria monocytogenes em formar biofilmes em superfícies inertes, bem como sua resistência a agentes sanitizantes. Foram utilizados 37 isolados provenientes de ambiente de laticínios, amostras de queijos e salmoura, pertencentes à coleção do Laboratório de Microbiologia e Micotoxicologia de Alimentos (LMMA) do Departamento de Engenharia de Alimentos da FZEA/USP. Dos 37 isolados avaliados, 67,6% eram pertencentes ao sorotipo 4b. Três isolados de L. monocytogenes foram obtidos de salmoura, 5 foram obtidos de caixas plásticas, 1 de queijo Prato, 1 da mão de manipulador de embalagens, e 27 foram isolados de superfícies sem contato com alimentos (piso da sala de pasteurização, piso da câmara fria, ralo da câmara fria ou estrado da câmara fria). Os isolados de L. monocytogenes apresentaram maior capacidade de produzir biofilme nos ensaios com cupons de aço inox (43,2% dos isolados), seguido dos ensaios em microplaca de poliestireno (16,2%), cupons de borracha (13,5%) e discos de silicone (2,7%). As células de L. monocytogenes aderidas nas superfícies do aço inox foram visualizadas sob microscopia eletrônica de varredura após 48 horas de incubação a 37ºC. Dezenove isolados de L.monocytogenes, os quais produziram biofilmes nos ensaios com aço inox, borracha ou silicone, foram testados para determinação da eficiência de sanitizantes pelo método de concentração inibitória mínima (CIM), utilizando-se ácido peracético (2%), cloreto de banzalcônio (1%), digluconato de clorexidina (2%), hipoclorito de sódio (2%) e tintura de iodo (2%). Os isolados de L. monocytogenes analisados apresentaram resistência a ácido peracético, hipoclorito de sódio e tintura de iodo, cujos valores de CIM foram 3,12%, 6,25% e 6,25%, respectivamente. Nenhum isolado apresentou resistência a cloreto de benzalcônio e digluconato de clorexidina, os quais foram eficientes para inibição de isolados de L. monocytogenes provenientes de amostras de queijos e ambientes de laticínios. A L. monocytogenes apresenta capacidade de persistir em ambiente de laticínios sob a forma de biofilme em várias superfícies inertes como aço inox, borracha e silicone, o que pode representar uma fonte permanente de contaminação para produtos e processos de obtenção de leite e derivados. (AU)

The objective of the present study was to evaluate the ability of isolates of Listeria monocytogenes to form biofilms and their resistance to sanitizers. Thirty seven strains belonging to the collection of the Laboratory of Microbiology and Food Mycotoxicology (LMMA), Department of Food Engineering of FZEA / USP, were used. Of the 37 isolates, 67.6% belonged to serotype 4b. Three isolates of L. monocytogenes were obtained from brine, 5 were obtained from plastic boxes, one of Prato cheese, one from the packaging handler\'s hand, and 27 were isolated from non-food contact surfaces (pasteurization room floor, the floor of the cold room, the drain cold or pallet from the cold chamber). The isolates of L. monocytogenes showed greater ability to produce biofilm in the assays with stainless steel coupons (43.2% of isolates), followed by polystyrene micro plate (16.2%), rubber coupons (13.5%) and silicone disks (2.7%) assays. Cells of L. monocytogenes attached to stainless steel surfaces were viewed under scanning electron microscopy after 48 hours incubation at 37°C. Nineteen strains of L. monocytogenes, which were considered biofilms producers in the assays with stainless steel, rubber or silicone, have been tested to evaluate the efficiency of the sanitizing method by means of the minimum inhibitory concentration (MIC), using peracetic acid (2%), sodium chloride benzalkonium (1%), chlorhexidine digluconate (2%), sodium hypochlorite (2%) and iodine solution (2%). The isolates of L. monocytogenes analyzed showed resistance to peracetic acid, sodium hypochlorite and iodine tincture, with MIC values of 3.12%, 6.25% and 6.25%, respectively. No isolate showed resistance to benzalkonium chloride and chlorhexidine digluconate, which were effective for inhibiting the isolates of L. monocytogenes from samples of cheeses and dairy environments. In conclusion, L. monocytogenes has the ability to persist in the environment of dairy products by forming biofilms in several inert surfaces such as stainless steel, rubber and silicone, which may represent a continuing source of contamination to manufacture processes of dairy products. (AU)

Prevalência de listeria spp em amostras de carne de frango obtidas em abatedouros do Estado de São Paulo / Prevalence of listeria spp in samples of chicken meat obtained in s slaughtherhouses of the State of São Paulo

Listeria monocytogenes está envolvida em surtos humanos relacionados a alimentos, embora, no Brasil a doença em humanos seja pouco relatada. Enfoque renovado foi dado a esta bactéria após surtos de doenças de origem alimentar (DOA) ocorridos na América do Norte e Europa durante os anos de 1980 e 1990. Listeria spp é freqüentemente isolada de carnes cruas, incluindo as de frango, como resultado de ampla contaminação cruzada em plantas industriais. A carne de frango é parte integrante da dieta dos brasileiros como fonte de proteína animal, assim, é importante que se conheça a prevalência deste agente neste tipo de alimento. Para tanto, foram examinadas 74 (setenta e quatro) amostras de carne de frango (coxa, sobrecoxa, peito, frango à passarinho e inteiro) utilizando-se métodos de isolamento de Listeria spp com meios de enriquecimento e seletivos, e reação em cadeia de polimerase (PCR), para confirmação dos testes bioquímicos. Em apenas uma das amostras foi detectada a presença de L. monocytogenes. Aventa-se, para o baixo índice de listérias encontrado, a ação antimicrobiana determinada pelo uso de descontaminantes nos tanques de resfriamento dos abatedouros.

Listeria monocytogenes is responsible for food borne disease, although in Brazil there is little data about this agent. Renewed emphasis has been given to this bacterium after the North American and European outbreaks during the 1980s and 1990s. Listeria spp is usually isolated from raw meat, including chicken, due to cross contamination in industrial plants. Chicken meat plays an important role in the diet of Brazilian people as an animal protein source. This work was aimed at investigating this bacterium' s prevalence in different cuts of chicken sampled at slaughterhouses. To achieve this, 74 chicken samples (drumsticks, thighs, breasts, entire chickens cut-up and whole) were cultivated in Listeria spp enrichment and selective culture media, and submitted to polymerase chain reaction to confirm the biochemical tests. Just one sample was positive for L. monocytogenes. As one possible explanation for the low level of listeria found, the authors point to the antiimicrobial action of disinfectant products used in the chilled tanks of slaughther houses.

Prevalência de listeria spp em amostras de carne de frango obtidas em abatedouros do Estado de São Paulo / Prevalence of listeria spp in samples of chicken meat obtained in s slaughtherhouses of the State of São Paulo

Listeria monocytogenes está envolvida em surtos humanos relacionados a alimentos, embora, no Brasil a doença em humanos seja pouco relatada. Enfoque renovado foi dado a esta bactéria após surtos de doenças de origem alimentar (DOA) ocorridos na América do Norte e Europa durante os anos de 1980 e 1990. Listeria spp é freqüentemente isolada de carnes cruas, incluindo as de frango, como resultado de ampla contaminação cruzada em plantas industriais. A carne de frango é parte integrante da dieta dos brasileiros como fonte de proteína animal, assim, é importante que se conheça a prevalência deste agente neste tipo de alimento. Para tanto, foram examinadas 74 (setenta e quatro) amostras de carne de frango (coxa, sobrecoxa, peito, frango à passarinho e inteiro) utilizando-se métodos de isolamento de Listeria spp com meios de enriquecimento e seletivos, e reação em cadeia de polimerase (PCR), para confirmação dos testes bioquímicos. Em apenas uma das amostras foi detectada a presença de L. monocytogenes. Aventa-se, para o baixo índice de listérias encontrado, a ação antimicrobiana determinada pelo uso de descontaminantes nos tanques de resfriamento dos abatedouros.(AU)

Listeria monocytogenes is responsible for food borne disease, although in Brazil there is little data about this agent. Renewed emphasis has been given to this bacterium after the North American and European outbreaks during the 1980s and 1990s. Listeria spp is usually isolated from raw meat, including chicken, due to cross contamination in industrial plants. Chicken meat plays an important role in the diet of Brazilian people as an animal protein source. This work was aimed at investigating this bacterium' s prevalence in different cuts of chicken sampled at slaughterhouses. To achieve this, 74 chicken samples (drumsticks, thighs, breasts, entire chickens cut-up and whole) were cultivated in Listeria spp enrichment and selective culture media, and submitted to polymerase chain reaction to confirm the biochemical tests. Just one sample was positive for L. monocytogenes. As one possible explanation for the low level of listeria found, the authors point to the antiimicrobial action of disinfectant products used in the chilled tanks of slaughther houses. (AU)