Effect of bacterial endotoxin lipopolysaccharide treatment on duck Leydig cells

This study aimed to investigate the effects of bacterial endotoxin lipopolysaccharide (LPS) on hormone production and gene expression in duck Leydig cells and its underlying mechanisms. Leydig cells were collected from 200-day-old mallard ducks and divided into five treatment groups (0, 50, 100, 200, and 400 ng/mL LPS). After treatment with LPS for 6, 12, 24, and 48 h, testosterone, activin, and inhibin levels in the cell supernatants were determined using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits. The expression levels of testosterone synthesis-related genes, including steroidogenic acute regulatory protein (StAR), 3-beta-hydroxysteroid dehydrogenase (3β-HSD), and cytochrome P450 aromatase (P450arom), and reproductive-related genes, including gonadotropin-inhibitory hormone receptor (GnIHR), follicle stimulating hormone receptor (FSHR), and luteinizing hormone receptor (LHR) were detected using quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). We successfully isolated and cultured duck Leydig cells with cell purity above 90%. Compared with the control group, the levels of testosterone, activin, and inhibin secreted in Leydig cells decreased gradually with increasing LPS concentration. After treatment with LPS, the expression of StAR and 3β-HSD genes in Leydig cells was upregulated at 12 h, and that of GnIHR was upregulated at 24 h; whereas the expression of FSHR and LHR was reduced at 24 h. This study indicates that LPS can inhibit the secretion of hormones and regulate the expression of related genes in duck Leydig cells.(AU)

Effect of bacterial endotoxin lipopolysaccharide treatment on duck Leydig cells

This study aimed to investigate the effects of bacterial endotoxin lipopolysaccharide (LPS) on hormone production and gene expression in duck Leydig cells and its underlying mechanisms. Leydig cells were collected from 200-day-old mallard ducks and divided into five treatment groups (0, 50, 100, 200, and 400 ng/mL LPS). After treatment with LPS for 6, 12, 24, and 48 h, testosterone, activin, and inhibin levels in the cell supernatants were determined using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits. The expression levels of testosterone synthesis-related genes, including steroidogenic acute regulatory protein (StAR), 3-beta-hydroxysteroid dehydrogenase (3β-HSD), and cytochrome P450 aromatase (P450arom), and reproductive-related genes, including gonadotropin-inhibitory hormone receptor (GnIHR), follicle stimulating hormone receptor (FSHR), and luteinizing hormone receptor (LHR) were detected using quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). We successfully isolated and cultured duck Leydig cells with cell purity above 90%. Compared with the control group, the levels of testosterone, activin, and inhibin secreted in Leydig cells decreased gradually with increasing LPS concentration. After treatment with LPS, the expression of StAR and 3β-HSD genes in Leydig cells was upregulated at 12 h, and that of GnIHR was upregulated at 24 h; whereas the expression of FSHR and LHR was reduced at 24 h. This study indicates that LPS can inhibit the secretion of hormones and regulate the expression of related genes in duck Leydig cells.

Changes induced by pathogens and metabolic stress on endometrial function in cattle: possible impacts of increased inflammation on fertility / Mudanças induzidas por patógenos e estresse metabólico na função endometrial de bovinos: possíveis impactos do aumento da inflamação na fertilidade

Harmonized embryo maternal relationships, are necessary at the beginning of pregnancy to insure the development of the young embryo and of the placenta. Specific mechanisms modulate the immune balance towards immune-tolerance for the embryo to be accepted by the endometrium. By the same time this tissue is submitted to intense remodelling, under complex signalling, allowing implantation. Some pathogens and metabolic stress, especially excessive mobilisation of fat tissue, disturb this delicate balance. This review describes how these stressors can alter endometrial function through pro-inflammatory mechanisms and by inducing changes of specific signals possibly altering the establishment of contacts and functional interactions between the embryo and the endometrium around time of implantation.(AU)

Changes induced by pathogens and metabolic stress on endometrial function in cattle: possible impacts of increased inflammation on fertility / Mudanças induzidas por patógenos e estresse metabólico na função endometrial de bovinos: possíveis impactos do aumento da inflamação na fertilidade

Harmonized embryo maternal relationships, are necessary at the beginning of pregnancy to insure the development of the young embryo and of the placenta. Specific mechanisms modulate the immune balance towards immune-tolerance for the embryo to be accepted by the endometrium. By the same time this tissue is submitted to intense remodelling, under complex signalling, allowing implantation. Some pathogens and metabolic stress, especially excessive mobilisation of fat tissue, disturb this delicate balance. This review describes how these stressors can alter endometrial function through pro-inflammatory mechanisms and by inducing changes of specific signals possibly altering the establishment of contacts and functional interactions between the embryo and the endometrium around time of implantation.

Regulação da Atividade Macrofágica pela Aspirina 15 cH in vitro

Plaquetas e endotélio de vasos interagem em direção da homeostase circulatória durante processos inflamatórios, contudo, efeitos paradoxais podem ocorrer em função do balanço entre mediadores anti e prótrombóticos. A administração de uma única e alta dose de Aspirina pode ocasionar a formação de trombos arteriais em oito a dez dias. Tem-se observado que Aspirina ultradiluída também promove trombogênese após uma hora de administração, porém não é sabido se ambos os casos envolvem a mesma via regulatória. Os efeitos antitrombóticos de altas doses podem ser revertidos pela ação protrombótica da Aspirina ultradiluída. Para compreender os mecanismos envolvidos nessa regulação, postula-se que a Aspirina ultradiluída tenha seu mecanismo de ação relacionado a efeito rebote envolvendo COX-2 e células inflamatórias, como macrófagos. Objetivo: Estudar os efeitos da Aspirina 15 cH sobre macrófagos ativados ou não por LPS, um ativador de COX-2. Métodos: Água, água sucussionada e Aspirina 200 µg/ml foram usadas como controle. A atividade macrofágica foi estudada mediante avaliação de espraiamento; dosagens de óxido nítrico, peróxidos, citocinas, quimiocinas; expressão de receptores TLR4, viabilidade celular e produção intracelular de espécies reativas de oxigênio. Resultados: O tratamento das células com Aspirina 15 cH levou ao aumento no spreading e produção de H2O2 com a mesma magnitude do LPS, mas anulou seu efeito quando administrados ambos conjuntamente. A Aspirina 200 µg/ml produziu efeito anti-inflamatório clássico em todos os parâmetros analisados, revertendo os efeitos do LPS. A água sucussionada per se mostrou efeitos pró-inflamatórios independente do LPS, como aumento de spreading e redução de IL 10; ação regulatória sobre a produção de TNF e H2O2 e aumento na atividade oxidativa celular, com efeito paradoxal após estímulo com LPS. O tratamento com Aspirina 15 cH não alterou a atividade oxidativa intracelular, mas água sucussionada elevou o número absoluto de células que expressam essa atividade. A expressão de TLR-4, por sua vez, foi significativamente maior nos grupos tratados com LPS, independentemente dos co-tratamentos. Conclusão: O efeito paradoxal da Aspirina 15 cH observado in vivo foi reproduzido neste modelo in vitro. A Aspirina 15 cH isoladamente ou em associação com LPS produz efeitos antagônicos, com reversão de efeitos sobre spreading e produção de H2O2. Especula-se que sua ação seja sobre as proteínas dos microtúbulos, favorecendo o spreading. A Aspirina 200 µg/ml produz efeitos anti-inflamatórios clássicos e a água sucussionada produz efeitos pró-inflamatórios e regulação de TNF e H2O2 após o estímulo com LPS.

Introduction: platelets and endothelium interact towards circulatory homeostasis during inflammatory processes however, paradoxical effects may occur due to the balance between anti and prothrombotic mediators. The administration of a single high dose of Aspirin can lead to the formation of arterial thrombi in eight to ten days. It has been observed that ultra-diluted aspirin also promotes thrombogenesis after one hour of administration, but it is not known whether both cases involve the same regulatory pathway. The antithrombotic effects of high doses can be reversed by the prothrombotic action of ultra-diluted aspirin. To understand the mechanisms involved in this regulation, it is postulated that ultra-diluted aspirin has its mechanism of action related to a rebound effect involving COX-2 and inflammatory cells, such as macrophages. Objective: To study the effects of Aspirin 15 cH on macrophages activated or not by LPS, a COX-2 activator. Methods: Water, sucussed water and Aspirin 200 µg/ml were used as controls. The macrophage activity was studied by means of spreading evaluation; nitric oxide, peroxides, cytokines, and chemokines measurements; expression of TLR4 receptors; cell viability and intracellular production of reactive oxygen species. Results: The treatment of cells with Aspirin 15 cH led to increase in the cell spreading and production of H2O2, with the same magnitude as LPS did, but nullified its effect when both were administered together. Aspirin 200 µg/ml produced a classic anti-inflammatory effect in all parameters analyzed, reversing the effects of LPS. Sucussed water per se showed pro-inflammatory effects independent of LPS, such as increase in the cell spreading and reduction of IL 10; as well as regulatory action on the production of TNF and H2O2. Moreover, it increased the cellular oxidative activity, with paradoxical effect after stimulation with LPS. Treatment with Aspirin 15 cH did not change the intracellular oxidative activity, but sucussed water increased the absolute number of cells that express this activity. TLR-4 expression, in turn, was significantly higher in LPS-treated groups, regardless of the co-treatments. Conclusion: The paradoxical effect of Aspirin 15 cH observed in vivo was reproduced in this in vitro model. Aspirin 15 cH alone or in association with LPS produces antagonistic effects, with reversal of the effects on spreading and production of H2O2. It is speculated that it could act on microtubule proteins, favoring the spreading. Aspirin 200 µg/ml produces classic anti-inflammatory effects and sucussed water produces pro-inflammatory effects and regulation of TNF and H2O2 after being stimulated with LPS.

Effects of housing conditions and glutamine levels on growthperformance of post-weaning piglets / Efeitos da condição de alojamento e do nível de glutamina sobre odesempenho de leitões desmamados

This study aimed to determine the effects of housing conditions and glutamine (GLN) levels on growth performance and incidence of diarrhea in weaned piglets. Forty-eight piglets were randomly assigned (4x2 factorial design) to one of the eight experimental diets represented by four levels of dietary GLN (0.0, 1.0, 1.5 or 2.0 %) and two housing conditions (AD = adequate and INAD = inadequate). From 22 to 28 days of age all animals were challenged daily with Escherichia coli polysaccharides. No effect of GLN level was found on daily gain (ADG), daily feed intake (ADFI) or body weight at 28 days postweaning (BW28). For housing conditions, ADG at 21 days after weaning was greater for animals of treatment AD than INAD, and AD had lower body weight variation than INAD pigs at 21 days after weaning. Considering the whole period, AD had a higher ADG, ADFI and BW28 than INAD. However, an interaction effect was observed for feed:gain rate, in which values decreased linearly (Y = 2.1727 - 0.4017x; R2=0.92) just for AD pigs as GLN levels increased. No GLN level effects were observed for diarrhea incidence; however, AD had a higher number of animals without diarrhea and with lower incidence of severe diarrhea than INAD pigs. In conclusion, supplementing GLN doesnt affect ADG, ADFI or BW28 but it improves feed efficiency when housing conditions are adequate.

Este estudo visou determinar o efeito das condições de alojamento e dos níveis de glutamina (GLN) sobre o desempenho e a incidência de diarréia em leitões desmamados. Quarenta e oito leitões foram divididos aleatoriamente (modelo fatorial 4x2) e submetidos a oito dietas experimentais representadas por quatro níveis de GLN dietética (0.0, 1.0, 1.5 ou 2.0 %) e duas condições de alojamento (AD = adequada e INAD = inadequada). A partir do 22º dia de idade até os 28 dias de experimentação, todos os leitões foram desafiados com lipopolissacarídeo de Escherichia coli. Nenhum efeito do nível de GLN foi observado sobre o ganho de peso diário (GDP) consumo diário de ração (CDR), conversão alimentar (CA), e peso dos animais no dia 28 pós-desmame (BW28). Para a condição de alojamento, o valor de GDP no dia 21 pós-desmame foi maior para os animais AD que os INAD e os animais AD apresentaram menor heterogeneidade de peso que INAD. Considerando todo o período experimental, os animais de AD obtiveram maiores GDP, CDR e BW28 que animais INAD. No entanto, houve efeito de interação para CA, com valores decrescendo linearmente (Y = 2,1727 0,4017x; R2 = 0.92) para leitões AD conforme aumentou a suplementação de GLN. Nenhum efeito de nível de GLN foi observado para a incidência de diarreia, no entanto, o tratamento AD apresentou maior número de animais sem diarreia e menor número de diarreias severa

TÉCNICA DE ALONGAMENTO POR STRETCHING INDUZ ESTRESSE E NÃO MELHORA RESPOSTA COMPORTAMENTAL E IMUNE EM RATOS SAUDÁVEIS E SOB COMPORTAMENTO DOENTIO

A atividade física regular talvez seja a única unanimidade como medida de promoção de qualidade de vida. Pensando nisso, foi objetivo deste trabalho estudar um modelo experimental de atividade física que não exigisse preparo físico nem infraestrutura especializada. A técnica de alongamento por stretching em ratos é baseada em conceitos de yoga e tem revelado resultados promissores em estudos após lesões e inflamações locais. Porém, não existem estudos focando o bem-estar e o comportamento, que são os principais objetivos da atividade física e do yoga. Assim, o presente estudo avaliou os possíveis efeitos benéficos do stretching em diferentes contextos, incluindo em ratos saudáveis, sob comportamento doentio e após desafio estressor. Foi objetivo ainda entender os mecanismos centrais e periféricos envolvidos. Ratos foram submetidos ao stretching por três dias consecutivos, duas vezes ao dia; expostos ao lipopolissacarídeo (LPS) para indução do comportamento doentio; e estressados psicologicamente por contenção. Eles foram avaliados quanto: a comunicações por vocalização ultrassônica; comportamentos motores, exploratórios e de ansiedade em campo aberto; e aos níveis séricos de IL-1 beta e de corticosterona. O LPS induziu comportamento doentio (diminuição de comportamentos motores e exploratórios, e elevação dos níveis de IL-1 beta). O estresse induziu respostas estressoras, incluindo comportamento estereotipado e de luta/fuga, efeito ansiogênico, comunicações de estresse (vocalizações), e elevação dos níveis de corticosterona. Porém, o stretching não foi capaz de induzir bem-estar animal, bem como não amenizou o comportamento doentio e o estresse. Pelo contrário, o stretching induziu resposta estressora, verificado pela emissão de vocalizações (22 kHz) e maiores níveis de corticosterona. Desse modo, os presentes resultados refutam o stretching como modelo experimental para atividade física e yoga. Além disso, contribuem no entendimento dos efeitos benéficos no caso de lesões e inflamações locais, uma vez que foi demonstrada a ativação do eixo HPA em detrimento do estresse gerado, e consequente efeito anti-inflamatório.

Regular physical activity promotes health and quality of life. The present study evaluated an experimental model of physical activity that did not require physical preparation or specialized infrastructure. The stretching technic in rats is based on yoga concepts and has shown promising results in studies following local inflammation and injury. However, there are no studies focusing on animal welfare and behavior, which are the main objectives of physical activity and yoga. Therefore, it was evaluated possible beneficial effects of stretching in different contexts, including in healthy rats, under sickness behavior and after stressor challenge. It was also objective to understand the central and peripheral mechanisms involved. Rats were submitted to stretching for three consecutive days, twice a day; exposed to lipopolysaccharide (LPS) to induce sickness behavior; and psychologically stressed by restraint stress. Rats were evaluated for communications by ultrasonic vocalization; motor, exploratory and anxiety behaviors in the open-field; and IL-1 beta and corticosterone serum levels. LPS induced sickness behavior (decreased motor and exploratory behavior and increased IL-1 beta levels). Stress induced several stress responses, including stereotyped and fight/flight behaviors, anxiogenic effect, stress communications (vocalizations), and elevated corticosterone levels. However, stretching was not able to induce animal welfare, nor did it alleviate sickness behavior and stress. On the contrary, stretching induced stress response, verified by the emission of vocalizations (22 kHz) and the elevated corticosterone levels. Thereby, the present results refuted stretching as an experimental model for physical activity and yoga. Moreover, it contributed to the understanding of the beneficial effects in case of local inflammation and injury because it was revealed the activation of the HPA axis to the detriment of the stress response, and consequent anti-inflammatory effect.

Use of lipopolysaccharide (E. coli) as stress inducing in sheep in intermediate stage of pregnancy / Uso de lipolissacarídeo (E. coli) como indutor de estresse em ovinos na fase intermedíaria da gestação

To analyze stress during the intermediate stage of gestation, 43 multiparous, crossbred Santa Inês, pregnant ewes, with a average age of 5 and average body weight (BW) of 60kg, were challenged with a intravenous administration of 0.8µg.kg-1 of LPS (lipopolysaccharide E. coli - outer membrane cell of gram-negative bacteria), diluted in physiological saline solution - simulating an immune stressor. The females were placed in individual cages at feedlot, with adaptation period of 5 days before the begin of sampling, with free access to good water quality, shade and food in the trough (corn silage and mineral supplementation). The ewes were divided into three groups, with a completely randomized design (CRD): CG - control group, with 15 animals that were not subjected to stress; IG - intermediate group stage, with 14 animals undergoing stress at 70 days of gestation; FG final group, made up of 14 animals undergoing stress at 120 days of gestation. The variables used to investigate stress were measured during the intermediate stages of pregnancy in a 24 hour sampling, with this was possible to observe the change in rectal temperature (RT) and blood levels of cortisol by its circadian rhythm. Shortly after the baseline sampling, the treatment corresponding to the intermediate stage of gestation was submitted to stress, with the sampling interval of one hour each, from the first to

O artigo não apresenta resumo em português.

Gestational stress in sheep and lambs at birth / Estresse gestacional em ovelhas e cordeiros no momento do parto

The stress in animals is linked with possible unusual changes that reduce the individual welfare. These changes generally related to the environment or to animal physiology cause imbalance in the biological reactions as a defense by releasing certain substances, including cortisol. There are few studies which indicate that there is heritable consequences promoted by cortisol generated by stress during pregnancy on the first hours of life of the lamb and the gestational phase (days of gestation) in which stress was promoted also interferes with it. Thus, the aim of this study was to evaluate during the delivery time the cortisol levels of lambs and sheep subjected to stress in different weeks of pregnancy and the effect on the birth weight of the lambs. The study was approved by Ethics Committee of FZEA/USP (13.1.2109.74.8). Forty crossbred Santa Ines ewes, multiparous, with an average age of 5 years and 60 kg of body weight (BW), grazing on Coast-cross were used (Cynodon dactylon (L.) Pers.) on rotated system, with free access to shade, water and mineral supplementation. All experimental ewes were artificially inseminated with semen from White Dorper breed. During gestation, the ewes were divided into three groups on a completely randomized design: CG - control group of 15 animals that were not subjected to stress; GI - intermediate group of 12 animals that suffered stress at 7

O artigo não apresenta resumo em português.

Avaliação dos efeitos in vitro do Dimetilsulfóxido em células sinoviais de equinos e de sua utilização intra-articular como tratamento para sinovite aguda

As lesões articulares na espécie equina causam inúmeras perdas econômicas e funcionais, com objetivo de minimizá-las vários estudos sobre técnicas e terapias são realizadas e se fazem necessárias. Acredita-se que o dimetilsulfóxido (DMSO) tenha ação moduladora nos processos inflamatórios articulares agudos e ação sobre radicais livres, porém sua eficácia ainda é dúbia. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do DMSO sobre células sinoviais e a lavagem articular com diferentes concentrações de DMSO (5% e 10%), em um modelo experimental de indução da sinovite aguda em equinos, com LPS. Para tanto, este estudo foi dividido em duas etapas. A primeira etapa visou verificar o efeito do DMSO sobre células sinoviais, através da análise de viabilidade celular após a estimulação das células sinoviais pelo LPS e tratamento com o DMSO. Para a segunda etapa do estuo foram utilizadas 26 articulações tibiotársicas, distribuídas aletoriamente em quatro grupos. Os grupos foram tratados e organizados da seguinte forma: grupo solução de ringer lactato; grupo DMSO 5% em solução de ringer lactato; grupo DMSO 10% em solução de ringer lactato; e Grupo controle (apenas indução da sinovite). Foram realizadas coletas do líquido sinovial (LS) antes da infiltração das articulações com LPS, na dose de 0,5 ng (M0), após 1h (M1), antes das lavagens (M8), e após 24h e 48h (M24 e M48) da indução da sinovite, as amostras de LS foram utilizadas para contagem total de células nucleadas e diferenciação celular, quantificação de PGE2, interleucina-1, interleucina-6, TNF-, AH, CS, ureia, proteína total e análise do burst oxidativo. As células sinoviais estimuladas por LPS e tratadas com DMSO 5% apresentaram menor porcentagem de células viáveis após vinte e quatro horas, entretanto após 48h somente as células tratadas com ringer lactato apresentaram menor porcentagem de células viáveis. O equipamento Lameness Locator® foi utilizado para verificar a presença de dor articular, previamente a todas coletas. Todos os grupos apresentaram aumento na contagem total de células nucleadas, concentração de PGE2, IL-1, IL-6 e proteína total no M8. Sendo que os grupos DMSO 5% e DMSO 10% apresentaram diminuição da contagem total de células nucleadas após a lavagem articular. A concentração de PGE2 e IL-1 no grupo DMSO 10% foi menor no M48 em relação ao M8, e o grupo ringer lactato apresentou menor concentração de IL-1 que os grupos DMSO 5% e controle no M24. O grupo DMSO 10% apresentou menor concentração de IL-6 em relação aos grupos DMSO 5% e ringer lactato no momento 24. O TNF- apresentou aumento em todos os grupos no M1. Os grupos DMSO 10% e controle apresentaram menor concentração de TNF- nos M24 e M48 em relação ao M1. Os grupos DMSO 5% e controle não apresentaram diferença na concentração de IL-10, porém os grupos ringer lactato e DMSO 10% apresentaram maior concentração no M48. Os grupos DSMO 10% e ringer lactato apresentaram menor concentração de AH no M24. Todos os grupos apresentaram aumento da concentração de CS após as lavagens articulares. Não houve diferença na avaliação de dor articular, bem como na análise do burst oxidativo e concentração de ureia. Os diferentes grupos apresentaram similaridade de comportamento das células e citocinas estudadas no líquido sinovial ao longo do experimento, contudo o grupo DMSO 10% foi o que apresentou mais rapidamente o retorno próximo aos valores basais. Os resultados apresentados neste estudo permitem concluir que frente à necessidade de se realizar lavagens articulares a utilização de solução de ringer lactato com DMSO 10% é mais indicada que o uso de ringer lactato ou solução com DMSO a 5%. Entretanto, nenhum tratamento foi capaz de demonstrar efeito condroprotetor.

Joint injuries in the equine species cause numerous economic and functional losses, in order to minimize them, several studies on techniques and therapies are performed and are necessary. Dimethylsulfoxide (DMSO) is thought to have modulating action on acute joint inflammatory processes and action on free radicals, but its efficacy is still dubious. This study aimed to evaluate the effects of DMSO on synovial cells and joint lavage with different concentrations of DMSO (5% and 10%) in an experimental model of induction of acute synovitis in horses with LPS. Therefore, this study was divided into two steps. The first step aimed to verify the effect of DMSO on synovial cells by analyzing cell viability after stimulation of synovial cells by LPS and treatment with DMSO. For the second stage of the study, 26 tibiotarsal joints were used, divided into four groups. The groups were treated and organized as follows: ringer lactate solution group; 5% DMSO group in ringer lactate solution; 10% DMSO group in ringer lactate solution; and Control group (synovitis induction only). Synovial fluid (LS) was collected prior to infiltration of the joints with LPS at a dose of 0.5 ng (M0), after 1h (M1), before washes (M8), and after 24h and 48h (M24 and M48), from synovitis induction. LS samples were used for total nucleated cell count and cell differentiation, PGE2 quantification, interleukin-1, interleukin-6, TNF-, HA, CS, urea, total protein and burst oxidative analysis. The synovial cells stimulated by LPS and treated with DMSO 5% presented lower percentage of viable cells-after 24 hours, however after 48h only the cells treated with Ringer lactate showed lower percentage of viable cells. Lameness Locator® equipment was used to verify the presence of joint pain, prior to all collections. All groups showed an increase in total nucleated cell count, PGE2, IL-1, IL-6 and total protein in M8. The DMSO 5% and DMSO 10% groups showed a decrease in the total nucleated cell count after joint washing. The concentration of PGE2 and IL-1 in the 10% DMSO group was lower in M48 compared to M8, and the ringer lactate group presented lower IL-1 concentration than the 5% DMSO and control groups in M24. The 10% DMSO group showed lower IL-6 concentration compared to the 5% DMSO and ringer lactate groups at time 24. TNF- increased in all groups at M1. The 10% DMSO and control groups presented lower TNF- concentration in M24 and M48 in relation to M1. The 5% DMSO and control groups showed no difference in IL-10 concentration, but the ringer lactate and 10% DMSO groups showed higher concentration in M48. The DSMO 10% and ringer lactate groups presented lower HA concentration in M24. All groups showed increased concentration of CS after joint washes. There was no difference in joint pain evaluation, oxidative burst analysis and urea concentration. The different groups showed similarity of behavior of cells and cytokines studied in the synovial fluid throughout the experiment, however the 10% DMSO group showed the fastest return near basal values. The results presented in this study allow us to conclude that in view of the need to perform joint washes, the use of 10% DMSO lactated ringer's solution is better than the use of 5% DMSO lactated ringer's solution. However, no treatment was able to demonstrate chondroprotective effect

Marcadores inflamatórios, maturação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial em bovinos

A resposta inflamatória surge como mecanismo do sistema imune para combater agentes infecciosos. Estudos sugerem uma associação entre a inflamação e a fertilidade, principalmente devido à modulação e síntese de mediadores inflamatórios. A lipoproteína de alta densidade (HDL) é a principal lipoproteína no fluido folicular, tem propriedades anti-inflamatória e antioxidante, que derivam principalmente de sua composição lipídica, porção de apolipoproteína AI (ApoAI) e paraoxonase-1 (PON1). Por outro lado, os lipopolissacarídeos (LPS) são endotoxinas bacterianas que agem como potente estimulador da resposta inflamatória. Neste sentido, objetivou-se avaliar o efeito do HDL durante a maturação in vitro (MIV) sobre a maturação oocitária e desenvolvimento embrionário, e avaliar o efeito da exposição de oócitos bovinos ao LPS in vitro e in vivo, sobre a maturação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial em bovinos. No primeiro estudo, complexos cumulus oócito (COCs) foram suplementados com proteína HDL durante a MIV, após, foram fecundados (FIV) e cultivados in vitro (CIV). No segundo estudo, COCs foram desafiados com LPS durante a MIV e após, passaram pela FIV e CIV. Separadamente, COCs foram submetidos à MIV sem LPS, depois disso passaram pela FIV e, durante os 7 dias de CIV foram desafiados com LPS. Ainda no segundo estudo, novilhas foram desafiadas com LPS intravenoso durante a sincronização da onda folicular. Os animais foram abatidos, os ovários foram coletados e foi realizada a recuperação dos COCs. Os COCs selecionados passaram por MIV, FIV e CIV. Dessa forma, encontramos que, a adição do complexo HDL/ApoAI do plasma humano durante a MIV, na ausência de atividade da PON1, diminui o desenvolvimento embrionário inicial. Ainda, a exposição de oócitos bovinos ao LPS durante a MIV diminui a taxa de maturação nuclear, entretanto, não foi capaz de afetar o desenvolvimento embrionário inicial. Da mesma maneira, a exposição de zigotos ao LPS durante o CIV não afetou o desenvolvimento embrionário. No entanto, a infusão de LPS em novilhas diminuiu a taxa de clivagem, porém o desenvolvimento embrionário foi semelhante ao do grupo não desafiado com LPS. Conclui-se que a interação dos componentes do complexo HDL-ApoAI-PON1, pode afetar a fertilidade bovina, em nível de oócito e subsequente desenvolvimento embrionário. Da mesma, forma o LPS, pode afetar o oócito e desenvolvimento embrionário, entretanto, os mecanismos pelos quais isso acontecem parecem ser diferentes in vitro e in vivo.

The inflammatory response arises as a mechanism of the immune system to fight infectious agents. Studies suggest an association between inflammation and fertility, mainly due to the modulation and synthesis of inflammatory mediators. High-density lipoprotein (HDL) is the main lipoprotein in follicular fluid. It has anti-inflammatory and antioxidant properties, mainly derived from its lipid composition, apolipoprotein AI (ApoAI) and paraoxonase-1 (PON1). On the other hand, lipopolysaccharides (LPS) are bacterial endotoxins that act as potent stimulator of the inflammatory response. The objective of this study was to evaluate the effect of HDL during in vitro maturation (IVM) on oocyte maturation and early embryonic development and to evaluate the effect of bovine oocyte exposure to LPS in vitro and in vivo on oocyte maturation and embryonic development in cattle. In the first study, cumulus oocyte complex (COCs) were supplemented with HDL protein during IVM, after, were fertilized (IVF) and cultured in vitro (IVC). In the second study, COCs were challenged with LPS during IVM and after, underwent IVF and IVC. Separately, COCs were subjected to IVM without LPS, thereafter they underwent IVF and during the 7 days of IVC they were challenged with LPS. Still in the second study, heifers were challenged with intravenous LPS during follicular wave synchronization. The animals were slaughtered, the ovaries were collected and COC recovery was performed. All recovered COCs underwent IVM, IVF, and IVC. In this way, we found that the addition of the HDL/ApoAI complex of human plasma during IVM, in the absence of PON1 activity, decreases the initial embryonic development. Furthermore, the exposure of bovine oocytes to LPS during IVM decreases the nuclear maturation rate, however, it was not able to affect the initial embryonic development. Similarly, exposure of zygotes to LPS during IVC did not affect embryonic development. However, infusion of LPS into heifers decreased the rate of cleavage, but the embryonic development was similar to that of the non-LPS challenged group. It is concluded that the interaction of HDL-ApoAI-PON1 complex components may affect bovine fertility at oocyte level and subsequent embryonic development. In the same way, the LPS can affect the oocyte and embryonic development; however, the mechanisms by which this happens appear to be different in vitro and in vivo.

Estresse pré-cópula altera a microbiota vaginal de fêmeas suínas nulíparas

O período pré-cópula é frequentemente associado a um estresse intenso para fêmeas suínas em sistemas de produção comercial, devido à mudança de manejo, dieta, instalações, entre outros. Fêmeas suínas são mantidas em celas no período pré-cópula, o que desafia seu bem-estar, ocorrendo a liberação de cortisol, alterando sua fisiologia, modificando as respostas à dor, infecção, lesão e resposta ao estresse. Uma exposição prolongada ao estresse pode suprimir o sistema imunológico e aumentar a suscetibilidade a infecções, frequentemente causadas por bactérias Gram-negativas que contêm em sua parece celular lipopolissacarídeos (LPS). O papel da microbiota no eixo intestino-cerebral é reconhecido em processos relacionados ao estresse, obesidade, transtornos psiquiátricos, entre outros, sendo influenciados por fatores ambientais, fisiológicos, genotípicos e sociais. A hipótese desse estudo é que a microbiota vaginal seja alterada pelo estresse que a fêmea sofre durante o período de précópula e essa alteração compromete sua saúde e bem-estar. Neste trabalho, investigamos as consequências do alojamento de 42 fêmeas suínas nulíparas em celas (n=14), baia coletiva (n=14) e ao ar livre (n=14), portanto em três diferentes sistemas de alojamento, no período pré-cópula. Metade dos animais foram desafiados com a inoculação de lipopolissacarídeos (LPS), no dia do estro, simulando uma condição inflamatória. Medidas de cortisol salivar, comportamento, microbiota vaginal, temperatura e suabes post-mortem foram coletados. Nossos dados indicam que o alojamento pode modular o comportamento e fisiologia, influenciando na forma como os animais lidam com um desafio de LPS, que induz um aumento de temperatura, interferindo assim em seu bem-estar. Propomos que o sistema de alojamento em baia coletiva, sendo um ambiente pobre e confinado, devido ao ambiente físico e social, foi mais favorecido para o aparecimento de patógenos nas amostras de suabes. Foi observado uma maior diversidade bacteriana nos animais alojados ao ar livre 11 quando comparados com animais alojados em cela, corroborando nossa hipótese inicial, juntamente com uma maior prevalência de Enterobacter e Klebsiella em animais alojados em cela quando comparados com animais alojados ao ar livre. Os resultados de cortisol salivar sugeriram que o desafio com LPS não comprometeu o eixo HPA dos animais, talvez por ter sido realizado no período do estro. Nós demonstramos que o LPS é eficaz para induzir um aumento da temperatura corporal, corroborando estudos anteriores, modificando o comportamento dos animais. Nós demonstramos que a complexidade do ambiente, como experimentada pelos animais alojados ao ar livre, pode indicar um melhor bem-estar que o sistema de alojamento em baia coletiva e celas, pobre e confinado. Nós demonstramos que o Sistema de alojamento influencia o nível de atividade do animal, com os animais alojados em cela sendo menos ativos e apresentando mais atividades biologicamente irrelevantes. Nossos dados mostram que manter marrãs em celas compromete seu bem-estar.

Pre-mating period is often associated with intense stress for sows in commercial production systems, due to the change of management, diet, facilities, among others. Sows are kept in crates during the pre-mating period, which challenge their welfare, occurring the release of cortisol, altering their physiology, modifying responses to pain, infection, injury and stress response. A prolonged exposure to stress can suppress the immune system and increase the susceptibility to infections, often caused by Gram-negative bacteria than contains lipopolysaccharide (LPS) in their cell wall. The role of microbiota in the gut-brain axis is recognized in processes related to stress, obesity, psychiatric disorders, among others, being influenced by environmental, physiological, genotypic and social factors. The hypothesis of this study is that the vaginal microbiota is altered by the stress that female undergoes during the pre-mating period and this alteration compromises their health and welfare. In this study, we investigated the consequences of housing 42 gilts in crates (n=14), indoor group housing (n=14) and outdoors (n=14), three different housing systems, prior to mating. Half of the gilts were challenged with an inoculation of lipopolysaccharides (LPS), in the day of the estrus, simulating an inflammatory condition. Measures of salivary cortisol, behavior, vaginal microbiota, temperature and post-mortem samples were collected. Our data indicates that housing can modulate behavior and physiology, influencing how animals cope with an LPS challenge, which induces a rise in temperature, thus interfering in their welfare. We propose that indoor group housing system, being a barren and poor environment, due the physical and social environment, was more favored to the appearance of pathogens in the swab samples. Greater bacterial diversity was observed in animals housed outdoors when compared with animals housed in crates, corroborating our initial hypothesis, along with a higher prevalence of Enterobacter and Klebsiella in animals housed in crates when compared to outdoor housed animals. Salivary cortisol results suggested that LPSs challenge did not compromised animals 9 hypothalamic-pituitary-adrenal axis (HPA), maybe due the estrus period. We demonstrated that LPS is effective inducing an increase in body temperature, corroborating previous studies, modifying animals behavior. We demonstrated that environmental complexity, as experienced by animals housed outdoor, could indicate better welfare than indoor, barren group housing system and crates. We showed that the housing system influences animals level of activity, with crated animals being less active and performing more biologically irrelevant tasks. Our data showed that keeping gilts in crates compromises their welfare.

Efeitos do zinco e do paracetamol no comportamento tipo-depressivo de ratos induzido por lipopolissacarídeo

A depressão pode ser desencadeada por fatores imunes/inflamatórios e possui alta comorbidade como o comportamento doentio e a ansiedade. Os medicamentos antidepressivos existentes apresentam eficácia limitada. O zinco e o paracetamol, além de interferirem no sistema imune, já demonstraram efeito benéfico no tratamento da depressão, quando administrados concomitantemente a doses subefetivas dos antidepressivos. O objetivo do estudo foi utilizar o zinco e/ou paracetamol como tratamento do comportamento doentio, da ansiedade e do comportamento tipo-depressivo em ratos. Induzimos o comportamento doentio e tipo-depressivo em ratos Wistar adultos com administrações repetidas de lipopolissacarídeo (LPS, endotoxina bacteriana gram-negativa). Os ratos receberam zinco e/ou paracetamol por três dias consecutivos. Avaliações: (1) comportamento doentio (diariamente pelo peso corporal e atividade geral em campo aberto); (2) ansiedade (teste claro-escuro); (3) comportamento tipo-depressivo/antidepressivo (teste do nado forçado); (4) corticosterona e interferon (IFN)-gama plasmáticos; e (5) proteína glial fibrilar ácida (GFAP) e tirosina hidroxilase (TH) encefálicos. Avaliações 4 e 5 são biomarcadores ligados ao sistema neuroimune e/ou a depressão, para entendimento dos mecanismos envolvidos. O LPS induziu o comportamento doentio e o comportamento tipo-depressivo, assim como elevou os níveis de IFN-gama e a expressão de GFAP nos ratos. O zinco preveniu tanto os prejuízos comportamentais quanto os bioquímicos. Embora o tratamento com paracetamol e a associação zinco+paracetamol tenham revelado aparente efeito benéfico na melhora de alguns parâmetros, não se pode afirmar este ser um efeito robusto. A ansiedade, corticosterona e TH parecem não estarem relacionadas às demais alterações comportamentais e neuroimunes. Assim, pudemos destacar o efeito benéfico do sulfato de zinco no tratamento do comportamento doentio e tipo-depressivo, sem o auxílio de antidepressivos. Além disso, nossos achados relativos ao IFN-gama e GFAP revelaram sua relação com a gênese do comportamento doentio e da depressão e que os tratamentos que tenham a capacidade de interferir com os níveis de IFN-gama e a expressão de GFAP podem auxiliar na melhora dos sintomas desses transtornos.

Depression can be triggered by immune/inflammatory factors and presents high comorbidity with sickness behavior and anxiety. Antidepressant drugs are considered to be of limited effectiveness. Zinc and paracetamol interfere with immune system and have demonstrated a beneficial effect on depression treatment when administered concomitant with subeffective doses of antidepressant drugs. The objective of this study was to use zinc and/or paracetamol as treatment of sickness behavior, anxiety, and depressive-like behavior in rats. We induced sickness behavior and depressive-like behavior in adult Wistar rats with repetitive lipopolysaccharide (LPS, gram-negative bacteria endotoxin) administrations. Rats received zinc and/or paracetamol for three consecutive days. Evaluations: (1) sickness behavior (daily body weight and open field general activity); (2) anxiety (light-dark test); (3) depressive-like/antidepressant behavior (forced swim test); (4) plasmatic corticosterone and interferon (IFN)-gamma levels; and (5) glial fibrillary acidic protein (GFAP) and tyrosine hydroxylase (TH) brain expression. Evaluations 4 and 5 are biomarkers linked with neuroimmune system and/or depression, evaluated to understand the mechanisms involved. LPS induced sickness behavior and depressive-like behavior, as well as elevated IFN-gamma levels and GFAP expression. Zinc prevented both behavioral and biochemistry impairments. Although paracetamol and zinc+paracetamol association induced apparent beneficial effect ameliorating some parameters, this was not a robust effect. Anxiety, corticosterone, and TH seem not to be related with the other behavioral and neuroimmune changes. Concluding, sulfate zinc treatment was beneficial for sickness behavior and depressive-like behavior, without antidepressant concomitant administration. IFN-gamma and GFAP data revealed their relation with sickness behavior and depressive-like behavior genesis. Moreover, treatments which interfere with IFN-gamma levels and GFAP expression may be considered to treat symptoms of these disorders.

ESTUDO COMPARATIVO DO PERFIL IMUNOFENOTÍPICO, POTENCIAL DE DIFERENCIAÇÃO, CAPACIDADE DE PRODUÇÃO DE CITOCINAS E CRIOPRESERVAÇÃO DE CÉLULAS ESTROMAIS DO ENDOMÉTRIO DE VACAS DURANTE O CICLO ESTRAL

As células-tronco de origem mesenquimal provenientes do tecido endometrial (CTMsE) e seu meio condicionado (MC) apresentam propriedades terapêuticas, e são alternativas promissoras para estudos na medicina veterinária. Estudos envolvendo CTMsE e seu MC ainda são considerados escassos na espécie bovina até o presente momento. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de diferenciação, perfil imunofenotípico, estabilidade cromossômica, eficiência de clonicidade, resposta à criopreservação das CTMsE de bovinos coletadas em duas fases do ciclo estral. Adicionalmente, avaliar o secretoma, produção de citocinas e de prostaglandina E2 (PGE2) das CTMsE estimuladas ou não com lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano. Para tanto, foi colhido o útero de fêmeas hígidas (Fase II n=6/ Fase III n=6) para o isolamento das CTMsE por digestão enzimática. CTMsE em primeira passagem foram avaliadas quanto ao número de cromossomos e as em segunda passagem foi conduzido o ensaio de clonicidade. As CTMsE em terceira passagem (P3) foram submetidas a diferenciação nas linhagens adipogênica, condrogênica e osteogênica e caracterizadas em relação ao perfil imunofenotípico por citometria de fluxo (CF) (vimentina, CD29, CD44, MHC-II, CD34) e imunocitoquímica (vimentina e CD44). Adicionalmente, as CTMsE em P3 foram criopreservadas utilizando-se dois meios de criopreservação e avaliadas por CF antes e após a criopreservação. Para avaliação da produção de citocinas, PGE2 e análise do secretoma, o MC das CTMsE foi colhido após 2, 6, 12 e 24 horas de desafio (grupo tratado - GT) ou não (grupo controle - GC) com LPS bacteriano. As proteínas identificadas foram classificadas de acordo com os processos biológicos, função molecular, componente celular e classe proteica. De acordo com os resultados foi observado uma população celular homogênea, com morfologia fibroblastóide e aderente ao plástico. Na análise por CF as CTMsE expressaram elevada marcação para CD29, CD44 e vimentina, baixa marcação para CD34 e ausência de expressão para o marcador MHC-II. Ainda, apresentaram estabilidade cromossômica, alta eficiência de clonicidade e diferenças (P>0.05) na produção de citocinas e PGE2 após desafio ou não com LPS. Diferenças não foram observadas (P>0.05) entre os meios ou fase após o descongelamento. Foram identificados 397 grupos de proteínas no GT e 302 no GC. Houve um enriquecimento positivo para proteínas relacionadas à resposta antibacteriana, ativação dos macrófagos, atividade de hidrolase e enzimas inibitórias no GT, e moléculas de atividade estrutural e filamentos intermediários no GC. Pode-se concluir que as CTMsE de bovinos apresentam nas condições experimentais clonicidade, multipotencialidade, estabilidade cromossômica e satisfatória resposta à criopreservação, o que corrobora para o estabelecimento de bancos de células para uso terapêutico ou novos estudos in vitro. Adicionalmente, tais células respondem ao LPS na concentração utilizada, por meio da produção de citocinas, podendo este modelo ser utilizado para avaliação da resposta inflamatória. Ainda, a secreção de proteínas principalmente relacionadas ao remodelamento, resposta imune e angiogênese fazem destas células e de seus meios, promissores para futura aplicação na terapia celular.

Mesenchymal stem cells from the endometrial tissue (MSCsE) and their conditioned medium (CM) have important therapeutic properties and are alternatives for studies in veterinary medicine. Studies involving MSCsE and its CM are still considered scarce in the bovine species until now. Thus, the aim of this study was to evaluate evaluate the potential of differentiation, immunophenotypic profile, chromosomal stability, clonicity efficiency and cryopreservation response of MSCsE from bovines collected in two phases of the estrous cycle. Additionally, to evaluate the secretoma production of cytokine and prostaglandin E2 (PGE2) of MSCsE stimulated or not with bacterial lipopolysaccharide (LPS). For this, the uterus of healthy females (Phase II n = 6 / Phase III n = 6) was collected for isolation of MSCsE by enzymatic digestion. MSCsE in first passage were evaluated for the number of chromosomes and the second passage was conducted the clonicity assay. The MSCsE in third passage (P3) were differentiated into the adipogenic, chondrogenic and osteogenic lineages and characterized by the immunophenotypic profile by flow cytometry (FC) (vimentin, CD29, CD44, MHC-II, CD34) and immunocytochemistry (vimentin, CD44). Additionally, MSCsE in P3 were cryopreserved using two cryopreservation medium: and evaluated by FC before and after cryopreservation. For evaluation of cytokine, PGE2 production and analysis of the secretome, CM was collected after 2, 6, 12 and 24 hours of challenge (treated group - TG) or not (control group - CG) with LPS. The identified proteins were classified according to the biological processes, molecular function, cellular component and protein class. According to the results, was observed a homogeneous cell population, with a fibroblastoid morphology and adherent to the plastic. In FC analysis, the MSCsE expressed high labeling for CD29, CD44 and vimentin, low labeling for CD34 and absence of expression for the MHC-II marker. Still, they presented chromosomal stability, high efficiency of clonicity and differences (P<0.05) in the production of cytokines and PGE2 after stimulus or not with LPS. Differences were not observed (P>0.05) between the medium or phase after thawing. 397 groups of proteins were identified in GT and 302 in CG. There was a positive enrichment for proteins related to antibacterial response, macrophages activation, hydrolase activity and inhibitory enzymes in TG, and structural activity molecules and intermediate filaments in CG. It is possible to conclude that bovine MSCsE present in the experimental conditions clonicity, multipotentiality, chromosomal stability and satisfactory cryopreservation response, which corroborates for the establishment of cell banks for therapeutic use or new in vitro studies. Additionally, these cells respond to LPS at the concentration used, by the production of cytokines, and this model can be used to evaluate the inflammatory response.

Associação de imunoestimulante com anti-helmíntico no tratamento da verminose em ovinos

This study aimed to verify the effectiveness of the immunostimulant combined with anthelmintic on the helminthiasis treatment in sheep. The animals of group I (n=29) received the anthelmintic albendazole (11mg kg-1) in a single administration and the immunostimulant composed with Propionibacterium granulosum (16ug kg-1) and lypopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli (1,2ug kg-1) into two doses every 48 hours and the animals from group II (n=29) received anthelmintic albendazole (11mg g-1). Samples were collected weekly during 28 days, to carry out the total and differential count of leukocytes, hematocrit and the eggs count per gram of feces (EPG). The animals that received immunostimulant combined with anthelmintic showed significantly increases of eosinophils and lymphocytes (P 0.05) compared to animals that only received the anthelmintic. In eggs count per gram of feces (EPG), there were no significant differences between groups (P>0.05). Based on these results it was concluded that immunostimulants can be used when combined with anthelminthic as an alternative therapy for the treatment of helminthiasis in sheep, since they promote the activation of immune response with participation of cells and mediators important for the removal of helminths in sheep.

Este estudo teve como objetivo verificar a eficiência do uso de imunoestimulante associado a anti-helmíntico no tratamento das helmintoses de ovinos. Os animais do grupo I (n=29) receberam o anti-helmíntico albendazole (11mg kg-1) em administração única e o imunoestimulante composto de Propionibacterium granulosum (16ug kg-1) e lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli (1,2ug kg-1) em duas doses com intervalo de 48 horas e os animais do grupo II (n=29) receberam o anti-helmíntico albendazole (11mg kg-1). Amostras foram colhidas semanalmente durante 28 dias para a realização da contagem total e diferencial de leucócitos, hematócrito e contagem de ovos por grama de fezes (OPG). Os animais que receberam imunoestimulante associado a anti-helmíntico apresentaram aumento significativo dos valores de eosinófilos e linfócitos (P 0,05) em relação aos animais que receberam somente anti-helmíntico. Na contagem de ovos por grama de fezes (OPG), não foram observadas diferenças significativas entre os grupos (P>0,05). Com base nesses resultados, pode-se concluir que imunoestimulantes podem ser utilizados associados a anti-helmínticos como alternativa terapêutica no tratamento das helmintíases em ovinos, uma vez que promovem a ativação da resposta imune com participação de células e mediadores importantes para a eliminação de helmintos em ovinos.

Associação de imunoestimulante com anti-helmíntico no tratamento da verminose em ovinos

This study aimed to verify the effectiveness of the immunostimulant combined with anthelmintic on the helminthiasis treatment in sheep. The animals of group I (n=29) received the anthelmintic albendazole (11mg kg-1) in a single administration and the immunostimulant composed with Propionibacterium granulosum (16ug kg-1) and lypopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli (1,2ug kg-1) into two doses every 48 hours and the animals from group II (n=29) received anthelmintic albendazole (11mg g-1). Samples were collected weekly during 28 days, to carry out the total and differential count of leukocytes, hematocrit and the eggs count per gram of feces (EPG). The animals that received immunostimulant combined with anthelmintic showed significantly increases of eosinophils and lymphocytes (P 0.05) compared to animals that only received the anthelmintic. In eggs count per gram of feces (EPG), there were no significant differences between groups (P>0.05). Based on these results it was concluded that immunostimulants can be used when combined with anthelminthic as an alternative therapy for the treatment of helminthiasis in sheep, since they promote the activation of immune response with participation of cells and mediators important for the removal of helminths in sheep.

Este estudo teve como objetivo verificar a eficiência do uso de imunoestimulante associado a anti-helmíntico no tratamento das helmintoses de ovinos. Os animais do grupo I (n=29) receberam o anti-helmíntico albendazole (11mg kg-1) em administração única e o imunoestimulante composto de Propionibacterium granulosum (16ug kg-1) e lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli (1,2ug kg-1) em duas doses com intervalo de 48 horas e os animais do grupo II (n=29) receberam o anti-helmíntico albendazole (11mg kg-1). Amostras foram colhidas semanalmente durante 28 dias para a realização da contagem total e diferencial de leucócitos, hematócrito e contagem de ovos por grama de fezes (OPG). Os animais que receberam imunoestimulante associado a anti-helmíntico apresentaram aumento significativo dos valores de eosinófilos e linfócitos (P 0,05) em relação aos animais que receberam somente anti-helmíntico. Na contagem de ovos por grama de fezes (OPG), não foram observadas diferenças significativas entre os grupos (P>0,05). Com base nesses resultados, pode-se concluir que imunoestimulantes podem ser utilizados associados a anti-helmínticos como alternativa terapêutica no tratamento das helmintíases em ovinos, uma vez que promovem a ativação da resposta imune com participação de células e mediadores importantes para a eliminação de helmintos em ovinos.

Associação de imunoestimulante com anti-helmíntico no tratamento da verminose em ovinos

This study aimed to verify the effectiveness of the immunostimulant combined with anthelmintic on the helminthiasis treatment in sheep. The animals of group I (n=29) received the anthelmintic albendazole (11mg kg-1) in a single administration and the immunostimulant composed with Propionibacterium granulosum (16ug kg-1) and lypopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli (1,2ug kg-1) into two doses every 48 hours and the animals from group II (n=29) received anthelmintic albendazole (11mg g-1). Samples were collected weekly during 28 days, to carry out the total and differential count of leukocytes, hematocrit and the eggs count per gram of feces (EPG). The animals that received immunostimulant combined with anthelmintic showed significantly increases of eosinophils and lymphocytes (P 0.05) compared to animals that only received the anthelmintic. In eggs count per gram of feces (EPG), there were no significant differences between groups (P>0.05). Based on these results it was concluded that immunostimulants can be used when combined with anthelminthic as an alternative therapy for the treatment of helminthiasis in sheep, since they promote the activation of immune response with participation of cells and mediators important for the removal of helminths in sheep.

Este estudo teve como objetivo verificar a eficiência do uso de imunoestimulante associado a anti-helmíntico no tratamento das helmintoses de ovinos. Os animais do grupo I (n=29) receberam o anti-helmíntico albendazole (11mg kg-1) em administração única e o imunoestimulante composto de Propionibacterium granulosum (16ug kg-1) e lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli (1,2ug kg-1) em duas doses com intervalo de 48 horas e os animais do grupo II (n=29) receberam o anti-helmíntico albendazole (11mg kg-1). Amostras foram colhidas semanalmente durante 28 dias para a realização da contagem total e diferencial de leucócitos, hematócrito e contagem de ovos por grama de fezes (OPG). Os animais que receberam imunoestimulante associado a anti-helmíntico apresentaram aumento significativo dos valores de eosinófilos e linfócitos (P 0,05) em relação aos animais que receberam somente anti-helmíntico. Na contagem de ovos por grama de fezes (OPG), não foram observadas diferenças significativas entre os grupos (P>0,05). Com base nesses resultados, pode-se concluir que imunoestimulantes podem ser utilizados associados a anti-helmínticos como alternativa terapêutica no tratamento das helmintíases em ovinos, uma vez que promovem a ativação da resposta imune com participação de células e mediadores importantes para a eliminação de helmintos em ovinos.

Estudo comportamental e da expressão astrocitária de GFAP em ratos submetidos ao LPS e tratados com maropitant

O maropitant é um antagonista do receptor de NK-1 e um antiemético amplamente utilizado em cães e gatos. Diversas evidências sugerem que o maropitant possui efeitos anti-inflamatórios e ansiolíticos. Os astrócitos possuem receptores NK-1 e se caracterizam pela presença de prolongamentos dotados de filamentos intermediários, cujo componente básico é a proteína glial fibrilar ácida (GFAP), principal marcador para este tipo celular. O objetivo do presente estudo foi o de analisar se o maropitant tem o potencial de alterar a expressão astrocitária de GFAP e o comportamento de ratos expostos ao modelo de comportamento doentio induzido pelo LPS. Foram utilizados 40 ratos Wistar machos, divididos nos seguintes grupos: SAL - solução salina 0,9% (IP), MAR - maropitant (20mg/kg,IP), LPS - LPS (100 µg/kg,IP), LPS + MAR - LPS + maropitant. Os animais foram submetidos aos testes comportamentais de campo aberto, que avaliam, principalmente, a atividade motora e exploratória, em que foram aferidos os parâmetros: frequência locomotora, grooming, rearing e contagem de bolos fecais. Os animais também foram submetidos ao teste claro-escuro, que avalia principalmente a ansiedade, em que foram aferidos os parâmetros: tempo de permanência nos compartimentos claro e escuro, rearing e frequência locomotora. Foi realizada a coleta do encéfalo para análise imuno-histoquímica da expressão astrocitária de GFAP. Nossos resultados demonstram que o maropitant teve capacidade de agir no comportamento ansioso nos testes de campo aberto e claro/escuro, porém não suprimiu o comportamento doentio no grupo tratado com LPS. A expressão de GFAP diminuiu no grupo LPS+MAR em relação ao grupo LPS, demonstrando que o maropitant conseguiu reduzir a ativação astrocitária causada pelo LPS. Pode-se concluir que o maropitant foi capaz de atenuar a astrogliose induzida pelo LPS e promoveu redução da defecação, porém não alterou o comportamento doentio causado pelo LPS.

Maropitant is an NK-1 receptor antagonist and an anti-emetic widely used in dogs and cats. Several evidences suggest that maropitant has anti-inflammatory and anxiolytic effects. Astrocytes are the most numerous glial cells present in the CNS, have NK-1 receptors and are characterized by the presence of extensions filled with intermediate filaments whose main component is the glial fibrillary acidic protein (GFAP), which serves as the main marker for this cellular type. Considering this, the objective of this study was to demonstrate if maropitant had the potential of altering the astrocytic expression of GFAP and the behavior of rats exposed to LPS model. Forty male Wistar rats were divided into the following groups: SAL - saline solution 0.9% (IP), MAR - maropitant (20mg / kg, IP), LPS (100 g / kg, IP) and LPS+MAR. The animals were submitted to the behavioral tests of the open field, which evaluated mainly motor and exploratory activity, and the parameters were evaluated: locomotor frequency, grooming, rearing and defecation. The animals were also submitted to the light-dark test, which evaluated the anxiety mainly, and the parameters were evaluated: time spent in the light and dark compartments, rearing and locomotor frequency. Brain samples were collected for the immunohistochemical analysis of the astrocytic expression of GFAP. Our results demonstrate that maropitant was able to act on anxious behavior in the open field and light / dark tests, but did not suppress the sickness behavior in the group treated with LPS. GFAP expression decreased in the LPS+MAR group in relation to the LPS group demonstrating that maropitant was able to reduce the astrocytic activation caused by LPS. It can be concluded that the maropitant was able to attenuate the astrogliosis induced by LPS and promoted reduction of defecation, however, it potentiated the sickness behavior caused by LPS.

A indução do receptor B1 de bradicinina é sinalizada por estresse oxidativo produzido por peróxido de hidrogênio em céluas endoteliais imortalizadas de camundongo / / Induction of the Bradykinin B1 receptor is Triggered by oxidative stress produced by hydrogen perocide in immortalized endothelial mouse cells

O receptor B1 de cininas é uma proteína induzível, que mede a vasodilatação em diversos estados patológicos, tais como inflamação, dor e choque séptico. Considerando que sua expressão tem sido apontada como um indicador da gravidade de doenças, por mecanismos que envolvem espécies oxidarivos e nitrosativos, perguntamos se a indução de receptor B1 poderia ser desencadeada em condições pré-oxidantes. Assim, células endoteliais isoladas de um nódulo linfático axilar de camundongo, SVEC4-10E2, foram tratadas com 0,1 a 1.5 mm de H2O2 ou LPS (10g/ml) e mantidas por 3 h em cultura. Análises quantitativas de RT-PCR mostraram que a expressão do receptor B1 de cininas é dependente da dose de H2O2 com um aumento maximo no pulso 0,05mm. A funcionalidade do receptor B1 nas células tratadas com 1mMH2O2 foi similar àquela induzida por LPS, conforme determinado por medidas da taxa de acidificação extracelular em resposta ao agonista de B1, denominado Des-Arg9-bradicinina (DBK). A expressão das enzimas NADPH oxidase e prote´na do choque térmico 90 (hsp90) também foram analisadas, tendo em conta seus papés já bem conhecidos na disfunção endotelial associada com o estresse oxidativo, de moodo que ambas poderiam estar atuando como contribuintes para a indução do receptor B1 em nosso sistema de estudo. O aumento nas concentrações de H2O2 não causou mudança nos níveis de expressão da NADPH oxidase, mas diminui a expressão de hsp90. Esta mitigação nos níveis da hsp90 possivelmente potencializou a indução do receptor B1 por H2O2, já que níveis baixos ou mau funcionamento do hsp90 estão associados com a geração de superóxido por eNOS desacoplado. Portanto, nossos resultados mostram uma indução específica por H2O2 dos receptores de cininas B1 em céluas endoteliais de camundongo. Tal fenômeno pode significar uma resposta adaptativa das céluas às elevadas condições de estresse oxidativo.

The inducible kinin B, receptor mediates vasodilation in several pathological states such as inflammation, pain and septic shock. Since it has been considered and indicator of disease severity by mechanisms involving both oxidative and nitrosative species, we asked whether B1, receptor induction could be triggered by pro-oxidant conditions. Thus, endothelial cells from mouse lymph nodes, SVEC4-10E2, were treated with 0.1-1.5mM H2O2 or 10 ug/mL LPS and kept for 3h in culture. Quantitative RT-PCR analyses show H2O2 dose-dependent expression of the kinin B1 receptor, with the maximum increase at 0.05mM pulse. The functionality of the B1 receptor in 1mM H2O2-treated cells was similar to that induced by LPS, as determined by extracellular acidication rate measurements in response to B1 agonis Des-Arg³-Bradykinin (DBK). The expression of the enzymes NADPH oxidase and heat shock protein 90 (hsp90) was also examined, taking into account their well known roles in endothelial dysfunction associated with oxidative stress, so that both could be acting as contributors to rhe B1 receptor induction in our system. increasing H1O2 concentrations caused no changes in NADPH oxidase, but led to down regulation expression of hsp90. This mitigation of hsp90 levels possibly potentiates the B1 receptor induction by H2O2, since low levels or malfunction of hsp90 are associated with the generation of superoxide by eNOS. These results show a specific upregulation of the kinin B1 recepetor expression induced by H1O2 in mouse endothelial cells. This phenomenon could mean an adaptive response to elevated oxidative stress conditions.

A indução do receptor B1 de bradicinina é sinalizada por estresse oxidativo produzido por peróxido de hidrogênio em céluas endoteliais imortalizadas de camundongo / / Induction of the Bradykinin B1 receptor is Triggered by oxidative stress produced by hydrogen perocide in immortalized endothelial mouse cells

O receptor B1 de cininas é uma proteína induzível, que mede a vasodilatação em diversos estados patológicos, tais como inflamação, dor e choque séptico. Considerando que sua expressão tem sido apontada como um indicador da gravidade de doenças, por mecanismos que envolvem espécies oxidarivos e nitrosativos, perguntamos se a indução de receptor B1 poderia ser desencadeada em condições pré-oxidantes. Assim, células endoteliais isoladas de um nódulo linfático axilar de camundongo, SVEC4-10E2, foram tratadas com 0,1 a 1.5 mm de H2O2 ou LPS (10g/ml) e mantidas por 3 h em cultura. Análises quantitativas de RT-PCR mostraram que a expressão do receptor B1 de cininas é dependente da dose de H2O2 com um aumento maximo no pulso 0,05mm. A funcionalidade do receptor B1 nas células tratadas com 1mMH2O2 foi similar àquela induzida por LPS, conforme determinado por medidas da taxa de acidificação extracelular em resposta ao agonista de B1, denominado Des-Arg9-bradicinina (DBK). A expressão das enzimas NADPH oxidase e prote´na do choque térmico 90 (hsp90) também foram analisadas, tendo em conta seus papés já bem conhecidos na disfunção endotelial associada com o estresse oxidativo, de moodo que ambas poderiam estar atuando como contribuintes para a indução do receptor B1 em nosso sistema de estudo. O aumento nas concentrações de H2O2 não causou mudança nos níveis de expressão da NADPH oxidase, mas diminui a expressão de hsp90. Esta mitigação nos níveis da hsp90 possivelmente potencializou a indução do receptor B1 por H2O2, já que níveis baixos ou mau funcionamento do hsp90 estão associados com a geração de superóxido por eNOS desacoplado. Portanto, nossos resultados mostram uma indução específica por H2O2 dos receptores de cininas B1 em céluas endoteliais de camundongo. Tal fenômeno pode significar uma resposta adaptativa das céluas às elevadas condições de estresse oxidativo.(AU)

The inducible kinin B, receptor mediates vasodilation in several pathological states such as inflammation, pain and septic shock. Since it has been considered and indicator of disease severity by mechanisms involving both oxidative and nitrosative species, we asked whether B1, receptor induction could be triggered by pro-oxidant conditions. Thus, endothelial cells from mouse lymph nodes, SVEC4-10E2, were treated with 0.1-1.5mM H2O2 or 10 ug/mL LPS and kept for 3h in culture. Quantitative RT-PCR analyses show H2O2 dose-dependent expression of the kinin B1 receptor, with the maximum increase at 0.05mM pulse. The functionality of the B1 receptor in 1mM H2O2-treated cells was similar to that induced by LPS, as determined by extracellular acidication rate measurements in response to B1 agonis Des-Arg³-Bradykinin (DBK). The expression of the enzymes NADPH oxidase and heat shock protein 90 (hsp90) was also examined, taking into account their well known roles in endothelial dysfunction associated with oxidative stress, so that both could be acting as contributors to rhe B1 receptor induction in our system. increasing H1O2 concentrations caused no changes in NADPH oxidase, but led to down regulation expression of hsp90. This mitigation of hsp90 levels possibly potentiates the B1 receptor induction by H2O2, since low levels or malfunction of hsp90 are associated with the generation of superoxide by eNOS. These results show a specific upregulation of the kinin B1 recepetor expression induced by H1O2 in mouse endothelial cells. This phenomenon could mean an adaptive response to elevated oxidative stress conditions.(AU)