Comparison between immunofluorescence and immunohistochemistry for Listeria monocytogenes detection in formalin-fixed paraffin-embedded tissues / Comparação entre imunofluorescência e imuno-histoquímica para detecção de Listeria monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados

Listeria monocytogenes is a bacterium that infect humans and animals and causes a zoonotic disease characterized by encephalitis, septicemia or abortion. In addition, listeriosis leads to significant economic losses due to animal death and sacrifice. This research compared the technique of immunofluorescence (IF) and immunohistochemistry (IHC) for the diagnosis of L. monocytogenes in formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissues. A total of 30 tissue blocks from 15 animals with history and/or lesions compatible with listeriosis were selected. For both IHC and IF, the same diluted (1:200) polyclonal primary antibody was used against L. monocytogenes serotypes 1 and 4. For IHC, a polymer secondary antibody conjugated to peroxidase (HRP) was used. For IF, samples were incubated with a fluorescein-labeled anti-rabbit IgG secondary antibody. Each sample was classified according to the presence and percentage of immunolabeling area. From 30 samples, 10 were positive at least for one technique, whereas eight samples were positive for both IHC and IF with similar score. There was strong immunolabeling in tissue samples from bovines experimentally infected with L. monocytogenes ATCC 7644, as well as in nervous tissues from naturally infected ruminants. Additionally, IF did not show any difference in sensitivity when compared to IHC. Using processed biological materials for IF, instead of fresh tissues, is a quite unique technique, since there are few protocols described. Therefore, this study demonstrated that both techniques are efficient to detect L. monocytogenes in FFPE tissues.

Listeria monocytogenes é uma bactéria que infecta humanos e animais, podendo causar uma doença zoonótica caracterizada por encefalite, septicemia e abortos. Além disso, a listeriose resulta em perdas econômicas significativas pela morte e sacrifício de animais. O objetivo deste trabalho foi comparar a técnica de imunofluorescência (IF) e imuno-histoquímica (IHQ) para detecção de L. monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados. Foram selecionados 30 blocos de tecidos de 15 animais com histórico e/ou lesões compatíveis com listeriose. Para ambas as técnicas, foi utilizado o mesmo anticorpo primário policlonal diluído (1:200) para detecção de L. monocytogenes sorotipos 1 e 4. Para a IHQ foi utilizado anticorpo secundário em polímero acoplado a peroxidase (HRP). Para a IF, as amostras foram incubadas com anticorpo secundário anti-IgG de coelho marcado com fluoresceína. Cada amostra foi classificada quanto à presença de imunomarcação e porcentagem de área positiva. Das 30 amostras, 10 foram positivas em pelo menos uma das técnicas, sendo oito amostras positivas em ambas IHQ e IF com o mesmo escore. Houve forte imunomarcação tanto em amostras de bovino experimentalmente infectado com L. monocytogenes ATCC 7644, como em amostras de tecido nervoso de ruminantes naturalmente infectados. Além disso, a IF não apresentou diferença na sensibilidade quando comparada com a IHQ. O uso de materiais biológicos processados para IF, ao invés de tecidos frescos, é algo inovador, uma vez que existem poucos protocolos descritos. Portanto, este estudo demonstrou que as duas técnicas foram eficientes para detectar L. monocytogenes em tecidos fixados em formol e parafinizados.

Principais aspectos de listeria monocytogenes e sua importância para a saúde pública / Main aspects of l. Monocytogenes and its importance to public health

Esta revisão tem como objetivo descrever os principais aspectos relacionados a Listeria monocytogenes e sua ocorrência nos alimentos. Alimentos contaminados com L. monocytogenes representam importante risco para o desenvolvimento das doenças veiculadas por alimentos (DVA). Listeriose é uma doença grave para grupos de risco, como idosos, mulheres grávidas, recém-nascidos e pacientes imunocomprometidos, com taxas de letalidade que podem ultrapassar 80%. É um patógeno amplamente distribuído na natureza, pode ser isolado de diversos produtos de origem animal e vegetal, como carnes de frango, bovinos, suínos, embutidos, leite e derivados e hortaliças. Além disso, possui inúmeros fatores de virulência, que permitem que escape do sistema imune e mantenha a infecção. É um microrganismo capaz de crescer em temperaturas de refrigeração e formar biofilme, sendo esses fatores de risco quando associados às más práticas de manejo e controle da cadeia produtiva dos alimentos, já que estas características propiciam a contaminação cruzada. Como medidas de controle, faz-se necessário implementar métodos que assegurem as boas condições de manipulação dos alimentos na indústria, no varejo e nas residências. Muitas práticas previstas na legislação podem ser empregadas para controlar contaminação nos alimentos, como as Boas Práticas de Fabricação (BPF), os Procedimentos Padrão de Higiene Operacional (PPHO) e o sistema de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC). Porém, a falta de fiscalização pelos órgãos competentes pode ser um fator de incentivo para a não implementação destas práticas, o que pode comprometer a qualidade microbiológica dos alimentos e gerar riscos à saúde pública.

This review aims to list the main aspects of Listeria monocytogenes and its occurrence in foods. Food contaminated with L. monocytogenes poses an important risk for the occurrence of foodborne illnesses. Listeriosis is a serious disease to risk groups, such as the elderly, pregnant women, newborns and immunocompromised patients, with mortality rates that can exceed 80%. It is a widely distributed pathogen in the environment and can be isolated from various animal and greens, such as chicken, beef, pork, sausages, dairy products and vegetables. In addition, the pathogen has numerous of virulence factors, that allows the microorganism to dodge the immune system and continue the infection. It is a microorganism capable of growing at refrigeration temperatures and forming biofilm, which is a risk factor when combined with poor management and control practices in the food production chain, as these features can lead to cross contamination. As control measures, it is necessary to implement methods that ensure good food handling conditions in industry, retail and households. Many practices provided in the legislation can be used to control food contamination, such as Good Manufacturing Practices (GMP), Standard Operating Hygiene Procedures (SOHP) and the Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP) system; however, the lack of inspection by competent bodies can be an encouragement factor for the non-implementation of these practices, which would be able to compromise the microbiological quality of the food and creates a threat to public health.

Principais aspectos de listeria monocytogenes e sua importância para a saúde pública / Main aspects of l. Monocytogenes and its importance to public health

Esta revisão tem como objetivo descrever os principais aspectos relacionados a Listeria monocytogenes e sua ocorrência nos alimentos. Alimentos contaminados com L. monocytogenes representam importante risco para o desenvolvimento das doenças veiculadas por alimentos (DVA). Listeriose é uma doença grave para grupos de risco, como idosos, mulheres grávidas, recém-nascidos e pacientes imunocomprometidos, com taxas de letalidade que podem ultrapassar 80%. É um patógeno amplamente distribuído na natureza, pode ser isolado de diversos produtos de origem animal e vegetal, como carnes de frango, bovinos, suínos, embutidos, leite e derivados e hortaliças. Além disso, possui inúmeros fatores de virulência, que permitem que escape do sistema imune e mantenha a infecção. É um microrganismo capaz de crescer em temperaturas de refrigeração e formar biofilme, sendo esses fatores de risco quando associados às más práticas de manejo e controle da cadeia produtiva dos alimentos, já que estas características propiciam a contaminação cruzada. Como medidas de controle, faz-se necessário implementar métodos que assegurem as boas condições de manipulação dos alimentos na indústria, no varejo e nas residências. Muitas práticas previstas na legislação podem ser empregadas para controlar contaminação nos alimentos, como as Boas Práticas de Fabricação (BPF), os Procedimentos Padrão de Higiene Operacional (PPHO) e o sistema de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC). Porém, a falta de fiscalização pelos órgãos competentes pode ser um fator de incentivo para a não implementação destas práticas, o que pode comprometer a qualidade microbiológica dos alimentos e gerar riscos à saúde pública.(AU)

This review aims to list the main aspects of Listeria monocytogenes and its occurrence in foods. Food contaminated with L. monocytogenes poses an important risk for the occurrence of foodborne illnesses. Listeriosis is a serious disease to risk groups, such as the elderly, pregnant women, newborns and immunocompromised patients, with mortality rates that can exceed 80%. It is a widely distributed pathogen in the environment and can be isolated from various animal and greens, such as chicken, beef, pork, sausages, dairy products and vegetables. In addition, the pathogen has numerous of virulence factors, that allows the microorganism to dodge the immune system and continue the infection. It is a microorganism capable of growing at refrigeration temperatures and forming biofilm, which is a risk factor when combined with poor management and control practices in the food production chain, as these features can lead to cross contamination. As control measures, it is necessary to implement methods that ensure good food handling conditions in industry, retail and households. Many practices provided in the legislation can be used to control food contamination, such as Good Manufacturing Practices (GMP), Standard Operating Hygiene Procedures (SOHP) and the Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP) system; however, the lack of inspection by competent bodies can be an encouragement factor for the non-implementation of these practices, which would be able to compromise the microbiological quality of the food and creates a threat to public health.(AU)

Listeria monocytogenes en leche de vaca producida por granjas lecheras familiares / Listeria monocytogenes in cow's milk produced by family-owned dairy farms / Listeria monocytogenes em leite de vaca produzido por propriedades leiteiras familiares

Refrigeration is an important milk preservation method. However, milk quality may deteriorate if the product is refrigerated for long periods, mainly due to the growth of psychrotrophic bacteria. This group of microorganisms includes pathogenic genera, most notably Listeria monocytogenes. The detection of this bacterium in food is important, given its pathogenic effects on human and animal health and also its economic relevance. This study focused on detecting the presence of L. monocytogenes in milk samples collected at small family-owned dairy farms. Samples were cultivated on PALCAM and ALOA agars for microbiological analysis and a molecular analysis by polymerase chain reaction was performed for the detection of L. monocytogenes. Despite the negative results obtained in both these analyses, further studies are recommended to confirm or refute the negligible effect of L. monocytogenes on small dairy farms.

A refrigeração é um método importante de preservação do leite. No entanto, a qualidade do leite pode piorar se o produto for mantido sob refrigeração por longos períodos, principalmente devido ao crescimento de bactérias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos inclui gêneros patogênicos, mais notavelmente Listeria monocytogenes. A detecção dessa bactéria em alimentos é importante, tendo em vista seus efeitos patogênicos na saúde humana e animal e também sua relevância econômica. Este estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de leite coletadas em pequenas fazendas leiteiras de propriedade familiar. As amostras foram cultivadas em ágar PALCAM e ALOA para análise microbiológica e análise molecular por reação em cadeia da polimerase para detecção de L. monocytogenes. Apesar dos resultados negativos obtidos em ambas as análises, estudos adicionais são recomendados para confirmar ou refutar o efeito insignificante de L. monocytogenes em pequenas fazendas leiteiras.

La refrigeración es un método importante de conservación de la leche. Sin embargo, la calidad de la leche puede deteriorarse si el producto se refrigera durante períodos prolongados, principalmente debido al crecimiento de bacterias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos incluye géneros patógenos, más notablemente Listeria monocytogenes. La detección de esta bacteria en los alimentos es importante, dados sus efectos patógenos sobre la salud humana y animal y también su relevancia económica. Este estudio se centró en detectar la presencia de L. monocytogenes en muestras de leche recolectadas en pequeñas granjas lecheras familiares. Las muestras se cultivaron en agares PALCAM y ALOA para análisis microbiológico y se realizó un análisis molecular por reacción en cadena de la polimerasa para la detección de L. monocytogenes. A pesar de los resultados negativos obtenidos en ambos análisis, se recomiendan más estudios para confirmar o refutar el efecto insignificante de L. monocytogenesen pequeñas granjas lecheras.

Listeria monocytogenes en leche de vaca producida por granjas lecheras familiares / Listeria monocytogenes in cow's milk produced by family-owned dairy farms / Listeria monocytogenes em leite de vaca produzido por propriedades leiteiras familiares

Refrigeration is an important milk preservation method. However, milk quality may deteriorate if the product is refrigerated for long periods, mainly due to the growth of psychrotrophic bacteria. This group of microorganisms includes pathogenic genera, most notably Listeria monocytogenes. The detection of this bacterium in food is important, given its pathogenic effects on human and animal health and also its economic relevance. This study focused on detecting the presence of L. monocytogenes in milk samples collected at small family-owned dairy farms. Samples were cultivated on PALCAM and ALOA agars for microbiological analysis and a molecular analysis by polymerase chain reaction was performed for the detection of L. monocytogenes. Despite the negative results obtained in both these analyses, further studies are recommended to confirm or refute the negligible effect of L. monocytogenes on small dairy farms.(AU)

A refrigeração é um método importante de preservação do leite. No entanto, a qualidade do leite pode piorar se o produto for mantido sob refrigeração por longos períodos, principalmente devido ao crescimento de bactérias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos inclui gêneros patogênicos, mais notavelmente Listeria monocytogenes. A detecção dessa bactéria em alimentos é importante, tendo em vista seus efeitos patogênicos na saúde humana e animal e também sua relevância econômica. Este estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de leite coletadas em pequenas fazendas leiteiras de propriedade familiar. As amostras foram cultivadas em ágar PALCAM e ALOA para análise microbiológica e análise molecular por reação em cadeia da polimerase para detecção de L. monocytogenes. Apesar dos resultados negativos obtidos em ambas as análises, estudos adicionais são recomendados para confirmar ou refutar o efeito insignificante de L. monocytogenes em pequenas fazendas leiteiras.(AU)

La refrigeración es un método importante de conservación de la leche. Sin embargo, la calidad de la leche puede deteriorarse si el producto se refrigera durante períodos prolongados, principalmente debido al crecimiento de bacterias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos incluye géneros patógenos, más notablemente Listeria monocytogenes. La detección de esta bacteria en los alimentos es importante, dados sus efectos patógenos sobre la salud humana y animal y también su relevancia económica. Este estudio se centró en detectar la presencia de L. monocytogenes en muestras de leche recolectadas en pequeñas granjas lecheras familiares. Las muestras se cultivaron en agares PALCAM y ALOA para análisis microbiológico y se realizó un análisis molecular por reacción en cadena de la polimerasa para la detección de L. monocytogenes. A pesar de los resultados negativos obtenidos en ambos análisis, se recomiendan más estudios para confirmar o refutar el efecto insignificante de L. monocytogenesen pequeñas granjas lecheras.(AU)

Nervous form of listeriosis in buffaloes / Listeriose nervosa em búfalos

ABSTRACT: Listeriosis is a disease that affects several animal species, including humans, and has three different forms of presentation: encephalic, reproductive, or septicemic. The nervous form is caused mainly by the bacterium Listeria monocytogenes. In Brazil, this disease has already been described in sheep, goats, and cattle. There are no reports of the disease in buffaloes in Brazil and worldwide. The objective of this study was to describe an outbreak of listeric meningoencephalitis in buffaloes in the state of Pará, Brazil. The outbreak occurred in a property located in the municipality of Bujaru, in the eastern Amazon, from May to July 2016. In a herd of 47 buffaloes, three animals (Cases 1, 2 and 3), aged <40 days, presented a neurological condition with locomotion difficulty characterized by paralysis of the four limbs, hypoesthesia, lateral recumbency, and death. Morbidity was 6.38% and lethality was 100%. At necropsy, no significant macroscopic lesions were found. Samples of the central nervous system were collected, fixed in 10% buffered formalin, and routinely processed for histopathological analysis. The main microscopic changes observed were unilateral microabscesses in the brainstem composed predominantly of mononuclear cells, with fewer polymorphonuclear cells, and perivascular cuffs composed mostly of mononuclear cells and few neutrophils. Samples of Cases 1 and 2 revealed Gram-positive bacteria in the areas of necrosis by the Gram's stain technique. Samples of Case 1 were positive in immunohistochemistry for L. monocytogenes. Diagnosis of the nervous form of listeriosis was based on epidemiological data, clinical profile, and immunostaining for Listeria monocytogenes. Results showed that listeriosis should be considered in the differential diagnosis in buffaloes with nervous signs.

RESUMO: A listeriose é uma doença que afeta várias espécies animais, incluindo o homem, e possui três formas diferentes de apresentação: nervosa, abortiva ou septicêmica. A forma nervosa é causada principalmente pela bactéria Listeria monocytogenes. No Brasil a doença já foi descrita em bovinos, ovinos e caprinos, mas não foram encontrados relatos desta doença em búfalos no Brasil e no mundo. O objetivo deste trabalho foi descrever um surto de listeriose nervosa em búfalos no estado do Pará, Brasil. O surto ocorreu de maio a julho de 2016, em uma propriedade localizada no município de Bujaru, na Amazônia Oriental. Três bubalinos de um total de 47 animais (Casos 1, 2 e 3), menores de 40 dias, apresentaram um quadro clínico neurológico caracterizado por dificuldade de locomoção, paralisia dos quatro membros, diminuição da sensibilidade cutânea, decúbito lateral e morte. A morbidade foi de 6,38% e a letalidade de 100%. Na necropsia não foram encontradas lesões macroscópicas significativas. Amostras do sistema nervoso central foram coletadas e fixadas em formalina tamponada a 10% e processadas rotineiramente para análise histopatológica. As principais alterações microscópicas observadas foram microabscessos unilaterais no tronco encefálico, compostos predominantemente por células mononucleares, com menor número de polimorfonucleares, e manguitos perivasculares compostos predominantemente por células mononucleares e poucos neutrófilos. Amostras dos Casos 1 e 2 revelaram bactérias Gram positivas nas áreas de necrose na técnica de Gram. Amostras do Caso 1 resultaram positivas na imuno-histoquímica para L. monocytogenes. O diagnóstico da forma nervosa da listeriose foi baseado nos dados epidemiológicos, no quadro clínico patológico e na imunomarcação para Listeria monocytogenes. Os resultados demostram que a listeriose deve ser considerada no diagnóstico diferencial em bubalinos com sinais nervosos.

Nervous form of listeriosis in buffaloes / Listeriose nervosa em búfalos

Listeriosis is a disease that affects several animal species, including humans, and has three different forms of presentation: encephalic, reproductive, or septicemic. The nervous form is caused mainly by the bacterium Listeria monocytogenes. In Brazil, this disease has already been described in sheep, goats, and cattle. There are no reports of the disease in buffaloes in Brazil and worldwide. The objective of this study was to describe an outbreak of listeric meningoencephalitis in buffaloes in the state of Pará, Brazil. The outbreak occurred in a property located in the municipality of Bujaru, in the eastern Amazon, from May to July 2016. In a herd of 47 buffaloes, three animals (Cases 1, 2 and 3), aged <40 days, presented a neurological condition with locomotion difficulty characterized by paralysis of the four limbs, hypoesthesia, lateral recumbency, and death. Morbidity was 6.38% and lethality was 100%. At necropsy, no significant macroscopic lesions were found. Samples of the central nervous system were collected, fixed in 10% buffered formalin, and routinely processed for histopathological analysis. The main microscopic changes observed were unilateral microabscesses in the brainstem composed predominantly of mononuclear cells, with fewer polymorphonuclear cells, and perivascular cuffs composed mostly of mononuclear cells and few neutrophils. Samples of Cases 1 and 2 revealed Gram-positive bacteria in the areas of necrosis by the Gram's stain technique. Samples of Case 1 were positive in immunohistochemistry for L. monocytogenes. Diagnosis of the nervous form of listeriosis was based on epidemiological data, clinical profile, and immunostaining for Listeria monocytogenes. Results showed that listeriosis should be considered in the differential diagnosis in buffaloes with nervous signs.(AU)

A listeriose é uma doença que afeta várias espécies animais, incluindo o homem, e possui três formas diferentes de apresentação: nervosa, abortiva ou septicêmica. A forma nervosa é causada principalmente pela bactéria Listeria monocytogenes. No Brasil a doença já foi descrita em bovinos, ovinos e caprinos, mas não foram encontrados relatos desta doença em búfalos no Brasil e no mundo. O objetivo deste trabalho foi descrever um surto de listeriose nervosa em búfalos no estado do Pará, Brasil. O surto ocorreu de maio a julho de 2016, em uma propriedade localizada no município de Bujaru, na Amazônia Oriental. Três bubalinos de um total de 47 animais (Casos 1, 2 e 3), menores de 40 dias, apresentaram um quadro clínico neurológico caracterizado por dificuldade de locomoção, paralisia dos quatro membros, diminuição da sensibilidade cutânea, decúbito lateral e morte. A morbidade foi de 6,38% e a letalidade de 100%. Na necropsia não foram encontradas lesões macroscópicas significativas. Amostras do sistema nervoso central foram coletadas e fixadas em formalina tamponada a 10% e processadas rotineiramente para análise histopatológica. As principais alterações microscópicas observadas foram microabscessos unilaterais no tronco encefálico, compostos predominantemente por células mononucleares, com menor número de polimorfonucleares, e manguitos perivasculares compostos predominantemente por células mononucleares e poucos neutrófilos. Amostras dos Casos 1 e 2 revelaram bactérias Gram positivas nas áreas de necrose na técnica de Gram. Amostras do Caso 1 resultaram positivas na imuno-histoquímica para L. monocytogenes. O diagnóstico da forma nervosa da listeriose foi baseado nos dados epidemiológicos, no quadro clínico patológico e na imunomarcação para Listeria monocytogenes. Os resultados demostram que a listeriose deve ser considerada no diagnóstico diferencial em bubalinos com sinais nervosos.(AU)

Nitric oxide synthase expression in naturally infected sheep brain with Listeria monocytogenes and relationship with cell death

Background: Nitric oxide is synthesized from L-arginine and catalyzed by a family of NOS. There are three different NOS isoforms: neuronal (nNOS), inducible (iNOS) and endothelial (eNOS). Nitric oxide is an important apoptosis regulator in mammalian system that can induce and prevent apoptosis depending on levels of NO production and environmental conditions of the cell. NOS expression and its relationship with apoptosis has not been well elucidated in listerial meningoencephalitis in sheep. The aim of this study was to investigate eNOS and iNOS expressions in the brain of sheep with natural listeriosis and to compare them with apoptosis which is shaped in the region.Materials, Methods & Results: In the study, formalin fixed and paraffin embedded brainstem tissue from 25 sheep naturally infected with LM were used from archives. Five μm-thick section was taken from each block. Histopathologically, sections were stained with H&E. Five normal sheep brain tissues were used as control. At the end of the study, Histopathologically in brainstem tissue infected with LM, multifocal microabscesses in different sizes mixed with neutrophils and macrophages were detected and perivascular mononuclear cell infiltration and meningitis characterized by mononuclear cell infiltration were found. All sections were also immunohistochemically stained with LM, eNOS and iNOS antibodies. In addition, TUNEL method was used to determine apoptosis in brain tissues. As a result of immunostaining, listeria immunoreactivity was observed in microabscesses. The Listeria antigens were detected mainly in the cytoplasm of the neutrophils and macrophages and located extracellulary in microabscesses. Both eNOS and iNOS immunoreactivity were observed in very few neurons and glial cells in normal control sheep. Neurons and glial cells in brain tissues of infected animals stained with eNOS and iNOS.[...][

Nitric oxide synthase expression in naturally infected sheep brain with Listeria monocytogenes and relationship with cell death

Background: Nitric oxide is synthesized from L-arginine and catalyzed by a family of NOS. There are three different NOS isoforms: neuronal (nNOS), inducible (iNOS) and endothelial (eNOS). Nitric oxide is an important apoptosis regulator in mammalian system that can induce and prevent apoptosis depending on levels of NO production and environmental conditions of the cell. NOS expression and its relationship with apoptosis has not been well elucidated in listerial meningoencephalitis in sheep. The aim of this study was to investigate eNOS and iNOS expressions in the brain of sheep with natural listeriosis and to compare them with apoptosis which is shaped in the region.Materials, Methods & Results: In the study, formalin fixed and paraffin embedded brainstem tissue from 25 sheep naturally infected with LM were used from archives. Five μm-thick section was taken from each block. Histopathologically, sections were stained with H&E. Five normal sheep brain tissues were used as control. At the end of the study, Histopathologically in brainstem tissue infected with LM, multifocal microabscesses in different sizes mixed with neutrophils and macrophages were detected and perivascular mononuclear cell infiltration and meningitis characterized by mononuclear cell infiltration were found. All sections were also immunohistochemically stained with LM, eNOS and iNOS antibodies. In addition, TUNEL method was used to determine apoptosis in brain tissues. As a result of immunostaining, listeria immunoreactivity was observed in microabscesses. The Listeria antigens were detected mainly in the cytoplasm of the neutrophils and macrophages and located extracellulary in microabscesses. Both eNOS and iNOS immunoreactivity were observed in very few neurons and glial cells in normal control sheep. Neurons and glial cells in brain tissues of infected animals stained with eNOS and iNOS.[...][(AU)

Detection of Listeria spp. in cattle and environment of pasture-based dairy farms / Detecção de Listeria spp. em gados leiteiros no meio ambiente com base na pastagem

The aim of the study was to detect Listeria spp., particularly Listeria monocytogenes, in cattle and environment of pasture based dairy farms in Paysandú, Uruguay. A two-stage sampling was conducted, 10 farms were selected by probability proportional to size. A single visit was made to each farm. Samples from bovine faeces, feedstuffs, bulk tank milk, drinking water and soil from the entry and exit pens of the milking parlour were collected for bacteriological studies. PCR assays were used to confirm species and determine the serotype profile of L. monocytogenes isolates. AscI-pulsed-field gel electrophoresis was done to genetically compare them. Listeria spp. were isolated from eight of ten dairy farms, whereas L. monocytogenes in three of them. Serotype distribution in L. monocytogenes was as follows: 1/2a, three isolates; 4b, one isolate. L. monocytogenes or L. innocua excreted from clinically healthy milking cows was detected via faeces. In feedstuffs, only one L. monocytogenes 1/2a isolate from a pasture was obtained. The strain was identical by PFGE to an isolate 1/2a obtained from a pool of milking cow feces that grazed on this farm. No isolation of Listeria spp. was retrieved from the bulk tank milk or drinking water from any of the farms. Listeria innocua was detected in 13 feedstuffs and seven samples of soil from the entry and exit pens of the milking parlour. This is a first local study that confirms the presence of Listeria spp. including L. monocytogenes in healthy cattle and environment of pasture-based dairy farms. These results suggest the potential role that healthy cattle and their sub-products would play as a source of these agents for humans and/or others animals. More detailed studies that include genetic comparison of human and animal isolates are required in order to clearly establish the epidemiological relationship.(AU)

O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de bactérias do gênero Listeria e particularmente Listeria monocytogenes, em bovinos leiteiros no ambiente de Paysandú, Uruguai. Foi realizada uma amostragem em duas etapas, dez estabelecimentos foram selecionados por probabilidade proporcional ao tamanho. Foi realizada uma única visita a cada propriedade. Foram coletadas amostras para cultura bacteriológica de matéria fecal bovina, além de alimentos, leite do tanque de resfriamento, água e solo na entrada e saída da sala de ordenha. Com os isolados de L. monocytogenes foi realizado PCR para a confirmação da espécie e determinação do perfil do serotipo. AscI-elctroforese em gel de campo pulsado foi realizado para compará-los geneticamente. Listeria spp. foram isoladas de oito de dez estabelecimentos, enquanto L. monocytogenes foram detectadas em três deles. A distribuição dos serotipos nos isolados de L. monocytogenes recuperados foi: 1/2a três isolados, 4b um isolado. Foram detectadas vacas leiteras clinicamente sadias ​​que excretaram L. monocytogenes ou L. innocua nas fezes. Dos alimentos do gado houve só um isolamento de L. monocytogenes 1/2a em uma pastagem. Esta estirpe foi idêntica no PFGE a um isolado 1/2a obtido de uma "piscina" de fezes de vacas leiteiras do mesmo estabelecimento. Não houve isolamento de Listeria no leite do tanque de resfriamento ou na água de nenhum dos estabelecimentos. Listeria innocua foi detectada em 13 alimentos para o gado e sete amostras de solo na entrada e saída da sala de ordenha. Este parece ser o primeiro estudo local que confirma a presença de Listeria spp. incluindo L. monocytogenes em vacas leiteiras sadias e no meio ambiente de propriedades leiteiras com base alimentícia na pastagem. Esses resultados sugerem o potencial de vacas sadias e seus subprodutos como possível fonte desses agentes para humanos e/ou outros animais. São necessários estudos mais detalhados que incluem a comparação genética de isolados humanos e de animais para estabelecer claramente seu relacionamento epidemiológico.(AU)

Detection of Listeria spp. in cattle and environment of pasture-based dairy farms / Detecção de Listeria spp. em gados leiteiros no meio ambiente com base na pastagem

The aim of the study was to detect Listeria spp., particularly Listeria monocytogenes, in cattle and environment of pasture based dairy farms in Paysandú, Uruguay. A two-stage sampling was conducted, 10 farms were selected by probability proportional to size. A single visit was made to each farm. Samples from bovine faeces, feedstuffs, bulk tank milk, drinking water and soil from the entry and exit pens of the milking parlour were collected for bacteriological studies. PCR assays were used to confirm species and determine the serotype profile of L. monocytogenes isolates. AscI-pulsed-field gel electrophoresis was done to genetically compare them. Listeria spp. were isolated from eight of ten dairy farms, whereas L. monocytogenes in three of them. Serotype distribution in L. monocytogenes was as follows: 1/2a, three isolates; 4b, one isolate. L. monocytogenes or L. innocua excreted from clinically healthy milking cows was detected via faeces. In feedstuffs, only one L. monocytogenes 1/2a isolate from a pasture was obtained. The strain was identical by PFGE to an isolate 1/2a obtained from a pool of milking cow feces that grazed on this farm. No isolation of Listeria spp. was retrieved from the bulk tank milk or drinking water from any of the farms. Listeria innocua was detected in 13 feedstuffs and seven samples of soil from the entry and exit pens of the milking parlour. This is a first local study that confirms the presence of Listeria spp. including L. monocytogenes in healthy cattle and environment of pasture-based dairy farms. These results suggest the potential role that healthy cattle and their sub-products would play as a source of these agents for humans and/or others animals. More detailed studies that include genetic comparison of human and animal isolates are required in order to clearly establish the epidemiological relationship.(AU)

O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de bactérias do gênero Listeria e particularmente Listeria monocytogenes, em bovinos leiteiros no ambiente de Paysandú, Uruguai. Foi realizada uma amostragem em duas etapas, dez estabelecimentos foram selecionados por probabilidade proporcional ao tamanho. Foi realizada uma única visita a cada propriedade. Foram coletadas amostras para cultura bacteriológica de matéria fecal bovina, além de alimentos, leite do tanque de resfriamento, água e solo na entrada e saída da sala de ordenha. Com os isolados de L. monocytogenes foi realizado PCR para a confirmação da espécie e determinação do perfil do serotipo. AscI-elctroforese em gel de campo pulsado foi realizado para compará-los geneticamente. Listeria spp. foram isoladas de oito de dez estabelecimentos, enquanto L. monocytogenes foram detectadas em três deles. A distribuição dos serotipos nos isolados de L. monocytogenes recuperados foi: 1/2a três isolados, 4b um isolado. Foram detectadas vacas leiteras clinicamente sadias ​​que excretaram L. monocytogenes ou L. innocua nas fezes. Dos alimentos do gado houve só um isolamento de L. monocytogenes 1/2a em uma pastagem. Esta estirpe foi idêntica no PFGE a um isolado 1/2a obtido de uma "piscina" de fezes de vacas leiteiras do mesmo estabelecimento. Não houve isolamento de Listeria no leite do tanque de resfriamento ou na água de nenhum dos estabelecimentos. Listeria innocua foi detectada em 13 alimentos para o gado e sete amostras de solo na entrada e saída da sala de ordenha. Este parece ser o primeiro estudo local que confirma a presença de Listeria spp. incluindo L. monocytogenes em vacas leiteiras sadias e no meio ambiente de propriedades leiteiras com base alimentícia na pastagem. Esses resultados sugerem o potencial de vacas sadias e seus subprodutos como possível fonte desses agentes para humanos e/ou outros animais. São necessários estudos mais detalhados que incluem a comparação genética de isolados humanos e de animais para estabelecer claramente seu relacionamento epidemiológico.(AU)

Prevalence and serotype distribution of Listeria monocytogenes isolated from foods in Montevideo-Uruguay

ABSTRACT The aim of this work was to study the prevalence of Listeria monocytogenes in foods obtained in retail shops and food industries located in Montevideo-Uruguay, and to identify the serogroups of the obtained isolates. Three-thousand one-hundred and seventy-five food samples (frozen, deli meats, ready-to-eat and cheese) were analyzed. The obtained isolates were serogrouped by multiplex PCR and serotyped by conventional procedure. Genetic comparisons were performed using pulsed-field gel electrophoresis on a sub-set of isolates belonging to the same serotype successively recovered from the same establishment. L. monocytogenes was isolated from 11.2% of samples. The highest prevalence was observed in frozen foods (38%), followed by cheese (10%). 1/2b and 4b were the most frequently identified serotypes. In six of 236 analyzed establishments we successively recovered L. monocytogenes isolates belonging to the same serotype. Most of them corresponded to serotype 1/2b. Pulsed-field gel electrophoresis profiles suggest that at least 33% of L. monocytogenes 1/2b isolates are genetically related and that may remain viable for prolonged periods. The observed prevalence of L. monocytogenes was lower than reported in neighboring countries. Our findings highlight the role that frozen foods may play in the spread of this pathogen, and the relevance of serotypes 1/2b and 4b.(AU)

Prevalence and serotype distribution of Listeria monocytogenes isolated from foods in Montevideo-Uruguay

ABSTRACT The aim of this work was to study the prevalence of Listeria monocytogenes in foods obtained in retail shops and food industries located in Montevideo-Uruguay, and to identify the serogroups of the obtained isolates. Three-thousand one-hundred and seventy-five food samples (frozen, deli meats, ready-to-eat and cheese) were analyzed. The obtained isolates were serogrouped by multiplex PCR and serotyped by conventional procedure. Genetic comparisons were performed using pulsed-field gel electrophoresis on a sub-set of isolates belonging to the same serotype successively recovered from the same establishment. L. monocytogenes was isolated from 11.2% of samples. The highest prevalence was observed in frozen foods (38%), followed by cheese (10%). 1/2b and 4b were the most frequently identified serotypes. In six of 236 analyzed establishments we successively recovered L. monocytogenes isolates belonging to the same serotype. Most of them corresponded to serotype 1/2b. Pulsed-field gel electrophoresis profiles suggest that at least 33% of L. monocytogenes 1/2b isolates are genetically related and that may remain viable for prolonged periods. The observed prevalence of L. monocytogenes was lower than reported in neighboring countries. Our findings highlight the role that frozen foods may play in the spread of this pathogen, and the relevance of serotypes 1/2b and 4b.

An overview of Listeria monocytogenes contamination in ready to eat meat, dairy and fishery foods / Uma visão geral sobre contaminação por Listeria monocytogenes em alimentos cárneos, laticícios e pescado prontos para o consumo

Listeria monocytogenes is a relevant foodborne pathogen in public health, responsible for outbreaks of listeriosis often associated to the consumption of ready to eat meat, dairy and fishery products. Listeriosis is a serious disease that can lead to death and mainly affect children, the elderly and immunocompromised individuals. In pregnant women causes abortion or neonatal listeriosis. In Brazil, ready to eat food are appreciated and increasingly consumed by the population. Furthermore, products such as sausages, bologna, hams and cheeses have characteristics such as pH, Aw and sodium chloride content that favor the development of L. monocytogenes during their shelf life. The purpose of this paper was to present an overview of L. monocytogenes contamination in different meat, dairy and fishery products that are ready for consumption and thereby support the adoption of strategies to mitigate this risk, contributing to achieve the appropriate level protection for the consumers and thus strengthen Brazil"s food safety system.

Listeria monocytogenesé um patógeno de importância em saúde pública por estar associado a surtos de listeriose, muitas vezes causados por produtos de origem animal prontos para o consumo. Listeriose é uma doença grave que pode levar ao óbito crianças, idosos e indivíduos imunocomprometidos. Em gestantes ocasiona aborto ou listeriose neonatal. No Brasil, os produtos de origem animal, prontos para consumo, são cada vez mais apreciados pela população. Eles, muitas vezes, podem ser ingeridos sem a necessidade de que o consumidor realize preparo prévio do alimento por meio de calor. Além disso, produtos como salsicha, mortadela, presunto e queijo possuem características como pH, Aw e teor de cloreto de sódio que favorecem o desenvolvimento de L. monocytogenes ao longo da vida de prateleira. Objetivou-se com este trabalho apresentar um panorama da contaminação por L. monocytogenes em produtos cárneos, lácteos e pescados prontos para consumo e, assim, auxiliar na adoção de estratégias para mitigar o risco, contribuindo para alcançar um nível adequado de proteção do consumidor e fortalecer o sistema de segurança alimentar brasileiro.

An overview of Listeria monocytogenes contamination in ready to eat meat, dairy and fishery foods / Uma visão geral sobre contaminação por Listeria monocytogenes em alimentos cárneos, laticícios e pescado prontos para o consumo

Listeria monocytogenes is a relevant foodborne pathogen in public health, responsible for outbreaks of listeriosis often associated to the consumption of ready to eat meat, dairy and fishery products. Listeriosis is a serious disease that can lead to death and mainly affect children, the elderly and immunocompromised individuals. In pregnant women causes abortion or neonatal listeriosis. In Brazil, ready to eat food are appreciated and increasingly consumed by the population. Furthermore, products such as sausages, bologna, hams and cheeses have characteristics such as pH, Aw and sodium chloride content that favor the development of L. monocytogenes during their shelf life. The purpose of this paper was to present an overview of L. monocytogenes contamination in different meat, dairy and fishery products that are ready for consumption and thereby support the adoption of strategies to mitigate this risk, contributing to achieve the appropriate level protection for the consumers and thus strengthen Brazil"s food safety system. (AU)

Listeria monocytogenesé um patógeno de importância em saúde pública por estar associado a surtos de listeriose, muitas vezes causados por produtos de origem animal prontos para o consumo. Listeriose é uma doença grave que pode levar ao óbito crianças, idosos e indivíduos imunocomprometidos. Em gestantes ocasiona aborto ou listeriose neonatal. No Brasil, os produtos de origem animal, prontos para consumo, são cada vez mais apreciados pela população. Eles, muitas vezes, podem ser ingeridos sem a necessidade de que o consumidor realize preparo prévio do alimento por meio de calor. Além disso, produtos como salsicha, mortadela, presunto e queijo possuem características como pH, Aw e teor de cloreto de sódio que favorecem o desenvolvimento de L. monocytogenes ao longo da vida de prateleira. Objetivou-se com este trabalho apresentar um panorama da contaminação por L. monocytogenes em produtos cárneos, lácteos e pescados prontos para consumo e, assim, auxiliar na adoção de estratégias para mitigar o risco, contribuindo para alcançar um nível adequado de proteção do consumidor e fortalecer o sistema de segurança alimentar brasileiro. (AU)

An overview of Listeria monocytogenes contamination in ready to eat meat, dairy and fishery foods

ABSTRACT: Listeria monocytogenes is a relevant foodborne pathogen in public health, responsible for outbreaks of listeriosis often associated to the consumption of ready to eat meat, dairy and fishery products. Listeriosis is a serious disease that can lead to death and mainly affect children, the elderly and immunocompromised individuals. In pregnant women causes abortion or neonatal listeriosis. In Brazil, ready to eat food are appreciated and increasingly consumed by the population. Furthermore, products such as sausages, bologna, hams and cheeses have characteristics such as pH, Aw and sodium chloride content that favor the development of L. monocytogenes during their shelf life. The purpose of this paper was to present an overview of L. monocytogenes contamination in different meat, dairy and fishery products that are ready for consumption and thereby support the adoption of strategies to mitigate this risk, contributing to achieve the appropriate level protection for the consumers and thus strengthen Brazil's food safety system.

RESUMO: Listeria monocytogenesé um patógeno de importância em saúde pública por estar associado a surtos de listeriose, muitas vezes causados por produtos de origem animal prontos para o consumo. Listeriose é uma doença grave que pode levar ao óbito crianças, idosos e indivíduos imunocomprometidos. Em gestantes ocasiona aborto ou listeriose neonatal. No Brasil, os produtos de origem animal, prontos para consumo, são cada vez mais apreciados pela população. Eles, muitas vezes, podem ser ingeridos sem a necessidade de que o consumidor realize preparo prévio do alimento por meio de calor. Além disso, produtos como salsicha, mortadela, presunto e queijo possuem características como pH, Aw e teor de cloreto de sódio que favorecem o desenvolvimento de L. monocytogenes ao longo da vida de prateleira. Objetivou-se com este trabalho apresentar um panorama da contaminação por L. monocytogenes em produtos cárneos, lácteos e pescados prontos para consumo e, assim, auxiliar na adoção de estratégias para mitigar o risco, contribuindo para alcançar um nível adequado de proteção do consumidor e fortalecer o sistema de segurança alimentar brasileiro.

Suppurative infectious diseases of the central nervous system in domestic ruminants / Doenças infecciosas supurativas do sistema nervoso central de ruminantes domésticos

This study describes suppurative infectious diseases of the central nervous system (CNS) in domestic ruminants of southern Brazil. Reports from 3.274 cattle, 596 sheep and 391 goats were reviewed, of which 219 cattle, 21 sheep and 7 goats were diagnosed with central nervous system inflammatory diseases. Suppurative infectious diseases of the CNS corresponded to 54 cases (28 cattle, 19 sheep and 7 goats). The conditions observed consisted of listerial meningoencephalitis (8 sheep, 5 goats and 4 cattle), suppurative leptomeningitis and meningoencephalitis (14 cattle, 2 goats and 1 sheep), cerebral (6 cattle and 2 sheep), and spinal cord (7 sheep) abscesses, and basilar empyema (4 cattle and 1 sheep). Bacterial culture identified Listeria monocytogenes (9/54 cases), Escherichia coli (7/54 cases), Trueperella pyogenes (6/54 cases) and Proteus mirabilis (1/54 cases). All cases diagnosed as listeriosis through histopathology yielded positive immunostaining on immunohistochemistry, while 12/17 of the cases of suppurative leptomeningitis and meningoencephalitis presented positive immunostaining for Escherichia coli. Meningoencephalitis by L. monocytogenes was the main neurological disease in sheep and goats, followed by spinal cord abscesses in sheep. In cattle, leptomeningitis and suppurative meningoencephalitis was the most frequent neurological disease for the species, and E. coli was the main cause of these lesions. Basilar empyema, mainly diagnosed in cattle, is related to traumatic injuries, mainly in the nasal cavity, and the main etiologic agent was T. pyogenes.(AU)

Neste trabalho são descritas as doenças neurológicas infecciosas supurativas de ruminantes domésticos na Região Sul do Brasil. Foram avaliados laudos de 3.274 bovinos, 596 ovinos e 391 caprinos, dos quais 219 bovinos, 21 ovinos e sete caprinos foram diagnosticados como doenças inflamatórias no sistema nervoso central. As doenças neurológicas infecciosas supurativas corresponderam a 54 casos (28 bovinos, 19 ovinos e sete caprinos). As enfermidades observadas foram meningoencefalite por Listeria monocytogenes (oito ovinos, cinco caprinos e quatro bovinos), leptomeningite e meningoencefalite supurativa (14 bovinos, dois caprinos e um ovino), abscessos cerebrais (seis bovinos e dois ovinos) e medulares (sete ovinos); e empiema basilar (quatro bovinos e um ovino). Através do isolamento bacteriano foram identificados: L. monocytogenes (9/54 casos), Echerichia coli (7/54 casos), Trueperella pyogenes (6/54 casos) e Proteus mirabilis (1/54 casos). Todos os casos diagnosticados como listeriose por histologia foram positivos na imuno-histoquímica para L. monocytogenes, e 12/17 casos de leptomeningite e meningoencefalite supurativa foram positivos na imuno-histoquímica para E. coli. A meningoencefalite por L. monocytogenes representou a principal enfermidade neurológica em ovinos e caprinos, seguido dos abscessos medulares em ovinos. A leptomeningite e meningoencefalite supurativa foi a doença neurológica supurativa mais frequente em bovinos e o principal agente causador da lesão foi E. coli. O empiema basilar, frequentemente, diagnosticado em bovinos, foi relacionado com lesões traumáticas, principalmente, de cavidade nasal e o principal agente causador foi T. pyogenes.(AU)

Suppurative infectious diseases of the central nervous system in domestic ruminants / Doenças infecciosas supurativas do sistema nervoso central de ruminantes domésticos

This study describes suppurative infectious diseases of the central nervous system (CNS) in domestic ruminants of southern Brazil. Reports from 3.274 cattle, 596 sheep and 391 goats were reviewed, of which 219 cattle, 21 sheep and 7 goats were diagnosed with central nervous system inflammatory diseases. Suppurative infectious diseases of the CNS corresponded to 54 cases (28 cattle, 19 sheep and 7 goats). The conditions observed consisted of listerial meningoencephalitis (8 sheep, 5 goats and 4 cattle), suppurative leptomeningitis and meningoencephalitis (14 cattle, 2 goats and 1 sheep), cerebral (6 cattle and 2 sheep), and spinal cord (7 sheep) abscesses, and basilar empyema (4 cattle and 1 sheep). Bacterial culture identified Listeria monocytogenes (9/54 cases), Escherichia coli (7/54 cases), Trueperella pyogenes (6/54 cases) and Proteus mirabilis (1/54 cases). All cases diagnosed as listeriosis through histopathology yielded positive immunostaining on immunohistochemistry, while 12/17 of the cases of suppurative leptomeningitis and meningoencephalitis presented positive immunostaining for Escherichia coli. Meningoencephalitis by L. monocytogenes was the main neurological disease in sheep and goats, followed by spinal cord abscesses in sheep. In cattle, leptomeningitis and suppurative meningoencephalitis was the most frequent neurological disease for the species, and E. coli was the main cause of these lesions. Basilar empyema, mainly diagnosed in cattle, is related to traumatic injuries, mainly in the nasal cavity, and the main etiologic agent was T. pyogenes.(AU)

Neste trabalho são descritas as doenças neurológicas infecciosas supurativas de ruminantes domésticos na Região Sul do Brasil. Foram avaliados laudos de 3.274 bovinos, 596 ovinos e 391 caprinos, dos quais 219 bovinos, 21 ovinos e sete caprinos foram diagnosticados como doenças inflamatórias no sistema nervoso central. As doenças neurológicas infecciosas supurativas corresponderam a 54 casos (28 bovinos, 19 ovinos e sete caprinos). As enfermidades observadas foram meningoencefalite por Listeria monocytogenes (oito ovinos, cinco caprinos e quatro bovinos), leptomeningite e meningoencefalite supurativa (14 bovinos, dois caprinos e um ovino), abscessos cerebrais (seis bovinos e dois ovinos) e medulares (sete ovinos); e empiema basilar (quatro bovinos e um ovino). Através do isolamento bacteriano foram identificados: L. monocytogenes (9/54 casos), Echerichia coli (7/54 casos), Trueperella pyogenes (6/54 casos) e Proteus mirabilis (1/54 casos). Todos os casos diagnosticados como listeriose por histologia foram positivos na imuno-histoquímica para L. monocytogenes, e 12/17 casos de leptomeningite e meningoencefalite supurativa foram positivos na imuno-histoquímica para E. coli. A meningoencefalite por L. monocytogenes representou a principal enfermidade neurológica em ovinos e caprinos, seguido dos abscessos medulares em ovinos. A leptomeningite e meningoencefalite supurativa foi a doença neurológica supurativa mais frequente em bovinos e o principal agente causador da lesão foi E. coli. O empiema basilar, frequentemente, diagnosticado em bovinos, foi relacionado com lesões traumáticas, principalmente, de cavidade nasal e o principal agente causador foi T. pyogenes.(AU)

Suppurative infectious diseases of the central nervous system in domestic ruminants

ABSTRACT: This study describes suppurative infectious diseases of the central nervous system (CNS) in domestic ruminants of southern Brazil. Reports from 3.274 cattle, 596 sheep and 391 goats were reviewed, of which 219 cattle, 21 sheep and 7 goats were diagnosed with central nervous system inflammatory diseases. Suppurative infectious diseases of the CNS corresponded to 54 cases (28 cattle, 19 sheep and 7 goats). The conditions observed consisted of listerial meningoencephalitis (8 sheep, 5 goats and 4 cattle), suppurative leptomeningitis and meningoencephalitis (14 cattle, 2 goats and 1 sheep), cerebral (6 cattle and 2 sheep), and spinal cord (7 sheep) abscesses, and basilar empyema (4 cattle and 1 sheep). Bacterial culture identified Listeria monocytogenes (9/54 cases), Escherichia coli (7/54 cases), Trueperella pyogenes (6/54 cases) and Proteus mirabilis (1/54 cases). All cases diagnosed as listeriosis through histopathology yielded positive immunostaining on immunohistochemistry, while 12/17 of the cases of suppurative leptomeningitis and meningoencephalitis presented positive immunostaining for Escherichia coli. Meningoencephalitis by L. monocytogenes was the main neurological disease in sheep and goats, followed by spinal cord abscesses in sheep. In cattle, leptomeningitis and suppurative meningoencephalitis was the most frequent neurological disease for the species, and E. coli was the main cause of these lesions. Basilar empyema, mainly diagnosed in cattle, is related to traumatic injuries, mainly in the nasal cavity, and the main etiologic agent was T. pyogenes.

RESUMO: Neste trabalho são descritas as doenças neurológicas infecciosas supurativas de ruminantes domésticos na Região Sul do Brasil. Foram avaliados laudos de 3.274 bovinos, 596 ovinos e 391 caprinos, dos quais 219 bovinos, 21 ovinos e sete caprinos foram diagnosticados como doenças inflamatórias no sistema nervoso central. As doenças neurológicas infecciosas supurativas corresponderam a 54 casos (28 bovinos, 19 ovinos e sete caprinos). As enfermidades observadas foram meningoencefalite por Listeria monocytogenes (oito ovinos, cinco caprinos e quatro bovinos), leptomeningite e meningoencefalite supurativa (14 bovinos, dois caprinos e um ovino), abscessos cerebrais (seis bovinos e dois ovinos) e medulares (sete ovinos); e empiema basilar (quatro bovinos e um ovino). Através do isolamento bacteriano foram identificados: L. monocytogenes (9/54 casos), Echerichia coli (7/54 casos), Trueperella pyogenes (6/54 casos) e Proteus mirabilis (1/54 casos). Todos os casos diagnosticados como listeriose por histologia foram positivos na imuno-histoquímica para L. monocytogenes, e 12/17 casos de leptomeningite e meningoencefalite supurativa foram positivos na imuno-histoquímica para E. coli. A meningoencefalite por L. monocytogenes representou a principal enfermidade neurológica em ovinos e caprinos, seguido dos abscessos medulares em ovinos. A leptomeningite e meningoencefalite supurativa foi a doença neurológica supurativa mais frequente em bovinos e o principal agente causador da lesão foi E. coli. O empiema basilar, frequentemente, diagnosticado em bovinos, foi relacionado com lesões traumáticas, principalmente, de cavidade nasal e o principal agente causador foi T. pyogenes.

Isolamento e caracterização da Listeria monocytogenes de alimentos

Listeria monocytogenes é uma bactéria importante para a saúde pública humana e veterinária. As cepas da linhagem I têm sido associadas a grandes surtos de listeriose, e os sorotipos da linhagem II são comuns em alimentos e estão difundidos no ambiente e na produção agrícola; as cepas da linhagem II também são comumente isoladas de casos de listeriose em animais e de casos clínicos humanos esporádicos. Além disso, os sorotipos 1/2a, 1/2b e 4b são responsáveis por 98% dos casos documentados de listeriose humana com alta correlação com o consumo de alimentos contaminados com a bactéria. No Brasil, a prevalência da listeriose não é bem conhecida e não há um sistema de monitoramento nacional, porém estudos indicam uma prevalência em torno de 20% em produtos de origem animal e em sistemas de produção. Objetivo: Este estudo teve o objetivo de caracterizar a bactéria L. monocytogenes isolada a partir de alimentos obtidos de estabelecimentos comerciais e feiras livres localizadas em três municípios do Estado de São Paulo, Brasil. Métodos: Para isso, 130 amostras de alimentos foram inoculadas em meios de cultivo bacteriano cromogênicos e seletivos para o gênero Listeria. Além disso, gênero e espécie de L. monocytogenes, bem como os sorotipos, foram confirmados por meio de PCR multiplex. Resultados: O presente estudo identificou uma prevalência de 40% de L. monocytogenes em alimentos em feiras e comércios do Estado de São Paulo (queijos, pescados, produtos de origem animal e vegetal e alimentos prontos para consumo). Além disso, das amostras genotipadas por PCR, foi possível identificar via eletroforese que 71 delas pertencem ao gênero Listeria sp., e dessas, 52 foram identificadas como Listeria monocytogenes. Também foi possível identificar 28 amostras pertencentes ao sorotipo 1/2b, linhagem I; 14 do sorotipo 1/2b, linhagem II; e 4 do sorotipo 4b, linhagem I. Os resultados do presente estudo sugerem que cepas patogênicas de L. monocytogenes estão circulando em alimentos frescos e/ou prontos para o consumo, o que representa risco de saúde pública. Conclusão: Estudos como o presente, utilizando a biologia molecular, auxiliam a diferenciar cepas avirulentas de virulentes de L. monocytogenes em alimentos e fornecem subsídios para o estabelecimento de uma vigilância efetiva sobre a prevalência e incidência da listeriose em alimentos no Estado de São Paulo, bem como no Brasil.

Listeria monocytogenes is an important bacterium for human and veterinary public health. The lineage I strains have been linked to major outbreaks of listeriosis, and serotypes of lineage II are common in food and are widespread in the environment and in agricultural production; lineage II strains are also commonly isolated from cases of listeriosis in animals and sporadic human clinical cases. Moreover, serotypes 1/2a, 1/2b and 4b are responsible for 98% of cases of human listeriosis with a high correlation with the consumption of food contaminated with the bacteria. In Brazil, the prevalence of listeriosis is not well known and there is no national monitoring system, but studies indicate a prevalence around 20% in products of animal origin and production systems. This study aimed to isolate and characterize the bacterium L. monocytogenes in foods obtained from commercia establishments and open markets located in three municipalities in the state of São Paulo, Brazil. For this, 130 samples were isolated from selective and chromogenic Listeria culture media. In addition, L. monocytogenes genus and species, as well as serotypes, were confirmed by multiplex PCR. The present study identified a prevalence of 40% of L. monocytogenes in food at fairs and stores in the state of São Paulo (cheeses, fish, animal and vegetable products and ready-to-eat foods). From the PCR genotyped samples, it was possible to identify through electrophoresis that 71 of them belong to the genus Listeria sp., 52 of which belonged to the species Listeria monocytogenes. It was also possible to identify 28 samples belonging to serotype1/2b, lineage I; 14 of serotype 1/2a, lineage II; and 4 of serotype 4b, lineage I. The results of the present study suggest that pathogenic strains of L. monocytogenes are circulating in fresh and/or ready-to-eat foods, which represents a public health risk. Studies like the present, using molecular biology, help to differentiate avirulent and virulent strains of L. monocytogenes in foods and provide subsidies for the establishment of an effective surveillance on the prevalence and incidence of listeriosis in foods in the State of São Paulo, as well as in Brazil.