Detecção de glicoconjugados de lecitinas em neoplasias mamárias caninas

Os tumores mamários representam aproximadamente 52%, de todas as neoplasias observadas em cadelas. Lecitinas são proteínas naturais de origem não imune, que se ligam a carboidratos. Por existir um grande número de lecitinas com capacidade de ligação com diferentes carboidratos, esta versátil molécula tem sido utilizada em diversos segmentos da pesquisa biológica. O presente trabalho tem por objetivo investigar, em tecido mamário canino, receptores das lecitinas UEA - Ulex europaeus (carqueja), PNA - Arachis hypogaea (amendoim), HPA - Helix pomatia (caracol romano) e DBA - Dolichos biflorus (faveira) presentes em tecido mamário normal, em neoplasias mamárias e em metástases dessas neoplasias. Para tanto, foram utilizadas 125 amostras de mama, classificadas de acordo com Cassali et al., (2011). Para a quantificação da frequência da marcação foram aleatoriamente selecionados quatro campos por corte e estabelecido um valor para o percentual de células marcadas, utilizando-se objetiva de 40x. Os resultados foram submetidos às análises de variância e à comparação de médias pelo teste de Tukey (p<0,05). Para a lecitina UEA, não foi observada diferença significativa entre nenhum dos tipos histológicos. Para PNA, foi observada menor marcação no carcinoma sólido grau II, que diferiu significativamente dos demais tipos histológicos. Para HPA, observou-se menor marcação do grupo carcinossarcoma, que diferiu significativamente dos demais tipos histológicos. Para DBA, houve menor marcação do carcinoma papilar grau II com relação aos demais tipos histológicos. Na comparação das lecitinas utilizadas no presente estudo, por tipo histológico, não foi observado nenhum padrão. Quanto à formação de glicoconjugados em estruturas celulares (tipo celular e marcação de membrana, citoplasmática ou nuclear), as lecitinas...

Mammary tumors represent approximately 52% of all malignancies observed in dogs. Lectins are natural proteins of non-immune origin which bind to carbohydrates. Because there is a large number of lectins, with binding affinity for different carbohydrates, this versatile molecule has been used in several segments of biological research. The present study aims to investigate, in canine mammary tissue, lectins receptors UEA - Ulex europaeus (gorse), PNA - Arachis hypogaea (peanut), HPA - Helix pomatia (Roman snail) and DBA - Dolichos biflorus (horse gram) present in normal breast tissue, in breast neoplasms and metastases in these neoplasms. Thus, we used 125 samples of breast, classified according Cassali et al., (2011). To quantify the frequency of marking, four fields per section were randomly selected and a value for the percentage of labeled cells was set, using a 40x objective. The results were submitted to analysis of variance and comparison of means by Tukey test (p <0.05). For lectin UEA, there was no significant difference between any of histological types. For PNA, the lowest marking was observed in solid carcinoma grade II, which differed significantly from other histologic types. For HPA, a lower markup in carcinosarcoma group was observed, which differed significantly from other histological types. For DBA the smaller markup was for grade II papillary carcinoma in relation to other histologic types. Comparison the lectins used in this study for histological type showed no observable pattern. None of lectins had more or less marking in all groups, marking or different histological types between more and less aggressive. Lectins PNA and HPA have shown promise for the diagnostic evaluation of canine mammary neoplasms. The formation of glycoconjugates for PNA varied between different histological types and HPA was...

Valor prognóstico da expressão gênica e proteica do ATM, p53 e VEGF em cadelas com neoplasias mamárias

O tumor de mama é o principal tumor que acomete as cadelas e seu comportamento biológico se assemelha com o que ocorre nas mulheres; com isso as cadelas podem ser um excelente modelo comparativo para o estudo do processo carcinogênico desta neoplasia. A metástase é uma consequência comum e a principal causa de mortalidade por esta doença. A identificação de marcadores tumorais pode ser uma ferramenta útil para a determinação do prognóstico pelo câncer de mama. Assim, os objetivos deste estudo foram avaliar a expressão gênica e proteica do ATM, p53 e VEGF na glândula mamária de cadelas e tentar correlacioná-las com a evolução tumoral e possível envolvimento metastático. Com isso foram utilizadas 53 amostras de glândula mamária de cadelas divididas em quatro grupos: G1= mamas normais, G2 = lesões mamárias benignas, G3 = carcinomas mamários não metastáticos e G4 = carcinomas mamários metastáticos. A análise de expressão gênica foi realizada pelo método de RT-qPCR e de expressão proteica pelo método de imuno-histoquímica. Baixa regulação de transcritos do ATM foi observada entre as neoplasias e as mamas normais, além da diminuição de níveis proteicos, sendo esta diminuição maior no grupo 4 quando comparado com o grupo 1. Os transcritos de TP53 e VEGF não apresentaram diferença estatística entre os grupos analisados. Entretanto, verificou-se diminuição proteica da p53 e aumento da proteína VEGF nos carcinomas mamários metastáticos em comparação com a mama normal. As expressões gênica e proteica do ATM apresentaram comportamento semelhante ao observado em mulheres, assim, o processo de desenvolvimento de metástase do carcinoma mamário pode ser semelhante em ambas as espécies. O aumento da expressão proteica do VEGF e a diminuição do ATM estavam principalmente relacionados com...

Canine mammary tumor is the major tumor that affects bitches and their biological behavior is similar to what occurs in women, so bitches can be an excellent comparative model for the study of the carcinogenic process in this type of neoplasm. Metastasis is a common consequence and the major cause of death by the tumor. Identification of tumor markers can be a useful tool for determining the prognosis of mammary gland cancer. So, the objectives of this study were to evaluate ATM, p53, and VEGF gene and protein expression in canine mammary tissues and try to correlate them with tumor development and metastatic involvement potential. Therefore 53 bitches mammary gland tissue samples were used divided in four groups: G1 = normal mammary glands, G2: benign mammary lesions, G3 = non-metastatic mammary gland carcinomas and G4 = metastatic mammary gland carcinomas. Gene expression analysis was performed by RT-qPCR and protein expression by immunohistochemistry. Down-regulation of ATM transcripts was observed between tumor tissue and normal mammary gland and protein levels were also reduced, it was mainly observed in group 4 when compared to group 1. TP53 and VEGF markers did not show statistical difference in gene expression among the groups. However, it was observed lower level of p53 protein in malignant tumors and higher level of VEGF protein in tumor tissues. ATM showed similar behavior when compared to women, so tumorigenesis process of breast cancer may be similar in both species. The increase in VEGF protein expression and ATM decrease were mainly related in poor prognosis tumors...

Expressão de citocinas na glândula mamária de cadelas e sua relação com a malignidade dos tumores mamários

O microambiente do tecido mamário é regido desde o seu desenvolvimento embrionário por uma complexa rede de citocinas, como o TNF-?, o IFN-?, a IL-4 e a IL-10, e de componentes celulares. O desequilíbrio entre a resposta destas citocinas e a presença de células inflamatórias como macrófagos e linfócitos T estão correlacionados com a malignidade dos tumores de mama em mulheres, auxiliando na progressão e metastatização dos carcinomas mamários. O objetivo deste estudo foi caracterizar a malignidade dos tumores de mama na espécie canina, por meio da expressão destas citocinas pela técnica quantitativa de RT-PCR em tempo real e da densidade de células inflamatórias pela técnica de imuno-histoquímica. A expressão das citocinas e a densidade do infiltrado inflamatório foram comparadas em cada um dos grupos experimentais, através de análise de variância, utilizando-se como teste de comparação de médias, contrastes ortogonais, com nível de significância de 5%. O coeficiente de correlação de Spearman foi empregado para a análise de correlação entre as variáveis das citocinas, leucócitos e outros dados secundários. As maiores expressões de TNF-?, IL-4 e IL-10 e a presença de macrófagos e linfócitos T ocorreram nos carcinomas mamários, demonstrando que este conjunto de citocinas e células inflamatórias quando presentes no microambiente tumoral favorecem a progressão e malignização tumoral

The microenvironment of the breast tissue is governed since his embrionary development by a complex cytokine network including TNF-?, IFN-?, IL-4 and IL-10, and cellular components. The imbalance between the response of these cytokines and inflammatory cells such as macrophages and lymphocytes had been correlated with the malignancy of breast tumors in women aiding in the progression and metastasis of breast carcinomas. The aim of this study was to characterize the malignancy of breast tumors in dogs through the expression of these cytokines by the technique of quantitative real time RT-PCR and the density of the inflammatory cells in canine mammary tissues by immunohistochemistry. The cytokine expression and density of inflammatory infiltrate were compared in each experimental groups, using analysis of variance, taking as tests of comparison of means, orthogonal contrasts, with a significance level of 5%. The Spearman rank correlation coefficient was used to analyze the correlation between the variables of cytokines, leukocyte, and others secondary data. The highest expression of TNF-?, IL-4 and IL-10 and the presence of macrophages and T lymphocytes occurred in breast carcinomas, demonstrating that this set of cytokines and inflammatory cells present in the tumor microenvironment can promote tumor progression, and malignancy

Diagnóstico comparativo entre a histopatologia e citologia por capilaridade com agulha de insulina nas neoplasias mamárias caninas

A glândula mamária é o sítio neoplásico primário mais frequente em cadelas. A apresentação clássica da doença é caracterizada por pacientes idosas não castradas ou castradas tardiamente e com múltiplas nodulações. O diagnóstico definitivo das lesões é dado pelo exame histopatológico. Nos dias atuais, especialmente em oncologia veterinária, a determinação precoce de um estado neoplásico pode alterar o curso da doença. Nesse âmbito, a citologia com agulha fina possui grande valia, pois permite a diferenciação entre processos inflamatórios, formações neoplásicas benignas e malignas de forma rápida, precisa e segura. Entretanto, a aplicação nos tumores mamários, em medicina veterinária, possui inúmeras controvérsias, em virtude da diversidade histológica. O presente estudo teve como objetivo comparar os exames citológicos e histopatológicos em cadelas e, assim, avaliar a acurácia da citologia por capilaridade com agulha de insulina nas lesões neoplásicas de mama. Para tanto, estudou-se 69 lesões mamárias obtidas de pacientes atendidas no Setor de Oncologia Veterinária da Unesp, Câmpus de Jaboticabal, e no Instituto Veterinário Dr. Daleck. A punção por capilaridade foi realizada em quatro áreas diferentes do tumor com agulhas de insulina. Os esfregaços citológicos foram corados com May Grünwald Giemsa. Já os fragmentos tumorais colhidos para o exame histopatológico foram fixados imediatamente em formol tamponado a 10% durante 48 horas e, após o processamento, foram corados com hematoxilina - eosina e classificados segundo Cassali et al., 2011. Os resultados obtidos revelaram 83,9% de sensibilidade, 100% de especificidade, 100% de valor preditivo positivo (VPP), 9,1 % de valor preditivo negativo (VPN) e 84,1% de acurácia da técnica citológica em detectar neoplasias mamárias malignas. A citologia por...

The mammary gland is the most common primary neoplasm site in female dogs. The classic presentation of the disease is characterized by elderly patients not spayed or later neutered with multiple nodules. Definitive diagnosis of lesions is given by histopathological examination. Nowadays, especially in veterinary oncology, the early detection of a neoplastic state can alter the course of disease. In this context, fine-needle cytology has great value because it allows differentiation between inflammatory processes, benign and malignant neoplastic formations quickly, accurately and safely. However, the application mammary tumors in veterinary medicine has several controversies, due to the diverse histology. The present study aimed to compare the cytological and histological bitches and thus evaluate the accuracy of cytology by capillarity with insulin needle in neoplastic lesions of the mammary glands. Therefore, we studied 69 breast lesions obtained from patients treated at the Service of Oncology Veterinary, Unesp Jaboticabal, and Veterinary Institute Dr. Daleck. The capillary puncture was performed in four different areas of the tumor with insulin needles. The cytology smears were stained with May Grünwald Giemsa. Already tumor fragments harvested for histologic examination were fixed immediately in 10% buffered formalin for 48 hours and, after processing, were stained with hematoxylin - eosin and classified according Cassali et al., 2011. The results showed 83.9% sensitivity, 100% specificity, 100% positive predictive value (PPV), 9.1% negative predictive value (NPV) of 84.1% and accuracy of cytological technique to detect cancers malignant breast. Cytology by capillarity with insulin needle, in this test, proved to be a superior technique to aspiration for diagnosis of malignant mammary gland tumors in female dogs because it allowed...

Caracterização da resposta imune celular pela expressão imunoistoquímica de CD4, CD8, CD28, CD152, CD56 e FOXP3 em carcinoma mamário de fêmeas caninas

O estudo dos tumores mamários em cadelas revela-se como um excelente modelo para a investigação das neoplasias mamárias em mulheres e tanto no homem quanto nos animais a resposta imune pode interferir no desenvolvimento de neoplasias. Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia e estimulação do sistema imune celular em tumores mamários de fêmeas caninas por meio da expressão de CD4, CD8, CD4+CD25+ (Foxp3), CD28, CD152 e CD56 (NK). A avaliação da expressão desses marcadores foi avaliada por imunoistoquimica, utilizando-se o método estreptoavidina-biotina-peroxidase. Para a realização desse estudo foram coletadas 20 amostras de tumores mamários de fêmeas caninas e essas divididas de acordo com a classificação histopatológica em 2 grupos: 10 carcinomas simples e 10 carcinomas complexos. Em relação aos resultados não se observou diferenças quanto à quantificação das células imunomarcadas quando comparadas segundo o tipo tumoral. No caso dos carcinomas simples evidenciou-se diferença entre a quantificação das células imunomarcadas (P< 0,05) pelo anticorpo CD28 (p=0,03) e Foxp3 (p=0,01) sendo menores que todas as demais marcações. Já para os carcinomas complexos houve diferença entre a quantificação das células imunomarcadas (P= 0,05) pelo anticorpo CD-152 que apresentou valor maior que as demais marcações com exceção do CD8. Os marcadores CD28, CD56 e Foxp3 foram menores que o CD8 (p=0,01) sendo o Foxp3 menor que todos os outros marcadores. No presente estudo observou-se que existe um controle negativo do sistema imune em ambos os casos, porém esse controle negativo foi mais evidente no carcinoma complexo

The mammary tumor study in female dogs is revealed as an excellent model for the investigation of breast tumors in humans. On both species, the immune system can interfere on neoplasia progression. The aim of this study was to evaluate the immunolocalization and quantification of CD4, CD8, CD4+CD25+ (Foxp3), CD28, CD152 and NK in tumour lymphocyte infiltration, to evaluate the efficacy of stimulation and immune system defense in canine mammary carcinoma. The expression of these markers using immunohistochemistry was made by streptoavidin-biotin peroxidase method. The tissues were collected from twenty mammary carcinomas, subdivided in ten simple carcinomas and ten complex carcinomas of twenty female dogs. This study identified no significant differences on quantification of positive cellular staining in simple carcinoma compared with complex carcinoma. The samples of simple carcinoma resulted significant differences on positive staining between the antibodies CD28 (p=0,03) and Foxp3 (p=0,01) and these markers revealed less quantitative staining compared with the others markers (CD4, CD8, CD152 and NK). The samples of complex carcinoma resulted significant differences on cellular staining quantification by the antibody CD152 (p<0,05) compared with the others markers (CD4, Foxp3, CD28, and NK) with exception when compared with CD8. The immune quantification of positive cellular staining about the markers CD28, CD56 and Foxp3 were smaller than CD8 (p=0,01), and the Foxp3 was smallest than those others markers. It was concluded that exist a negative control of immune system to complex and simple mammary carcinoma, but, this negative control was more significant in female dogs with complex mammary carcinoma

Avaliçao clínica e imunoistoquímica de tumores mamários em cadelas submetidas a tratamento com inibidor da cicloxogenase-2 (Firocoxibe)

Tumores mamários expressam a enzima cicloxigenase (Cox-2), que caracteriza um processo inflamatório intenso e pode também demonstrar a presença de alterações paraneoplásicas. Este trabalho teve por objetivo estudar a expressão de Cox-2 em tumores mamários de cadelas e avaliar o efeito do anti-inflamatório firocoxibe sobre a mesma. Os animais selecionados foram divididos em dois grupos: controle (9 animais) e tratado (10 animais). As cadelas foram avaliadas por exame clínico, bioquímica sérica, tamanho, volume, localização e avaliação TNM dos tumores e avaliação da qualidade de vida. O grupo tratado recebeu o firocoxibe na dosagem de 5mg/kg ao dia por sete dias e após este período todos os animais foram novamente avaliados e submetidos à mastectomia. As amostras obtidas nos dois momentos foram avaliadas por exame histológico e imunoistoquímica para expressão de Cox-2. Os resultados mostraram que, embora não tenha havido diferença no tamanho do maior nódulo ou na expressão de COX -2 entre os grupos após o tratamento, o aumento na expressão de COX-2 observado no grupo controle não foi verificado no grupo tratado e que os animais que receberam o tratamento por 7 dias apresentaram diminuição dos níveis de proteínas séricas totais (p=0.00588) e aumento dos níveis séricos de uréia (p=0.01388). Estes resultados sugerem que o uso do firocoxibe como coadjuvante no tratamento de cadelas com neoplasia mamária submetidas à mastectomia pode ser benéfico para deter a evolução da doença, embora seja indicado o acompanhamento dos animais para garantir que não haja sangramento gastrintestinal e que a saúde seja preservada

Breast tumors express the enzyme cycloxygenase (COX-2), characterizing an inflammatory process and also demonstrate the presence of paraneoplastic alterations. This experiment aimed to study the expression of Cox-2 in mammary tumors of dogs and to evaluate the effect of anti-inflammatory firocoxib on it. The selected animals were divided into two groups: control (9 animals) and treated (10 animals). The animals were evaluated by clinical examination, serum biochemistry, size, volume, location and TNM evaluation of tumors and assessment of quality of life. The treatment group received firocoxib at dosage of 5mg/kg daily for seven days and after this period all animals were re-evaluated and submitted to mastectomy. The samples obtained at both moments were evaluated by histology and immunohistochemistry for the expression of Cox-2. The results showed that, although there was no difference in size of the largest tumor or in the expression of COX-2 between the groups after treatment, increased expression of COX-2 seen in the control group was not observed in the treated group and that those animals that received firocoxib for 7 days showed decreased levels of total serum protein (p = 0.00588) and increased serum levels of urea (p = 0.01388). These results suggest that the use of firocoxib as adjuvant therapy for dogs with breast cancer submitted to mastectomy can be beneficial to halt the progression of the disease, although monitoring of animals is indicated to ensure there is no gastrointestinal bleeding and health is preserved

Expressão de marcadores de células-tronco em carcinoma espontaneo de mama em cadelas e sua correlação com o grau de agressividade nos diferentes subtipos de tumores

Por ser a maior causa de morte entre as fêmeas caninas, o câncer de mama desperta o interesse da comunidade científica, pois sua apresentação e evolução clínica são muito semelhantes aos casos de câncer de mama na mulher. No intuito de permitir a continuação dos estudos comparativos entre os tumores de cadelas e os das mulheres, foram realizadas as marcações imunoistoquímicas para receptores de estrógeno (RE), HER-2, p63 e CK5, a fim de classificar os tumores de acordo com sua expressão, nos diferentes subtipos. Além disso, foram utilizados os marcadores para CD10, BMI-1, CD44, CD24, ESA e MUC-1 por meio da imunoistoquímica em lâminas confeccionadas pela técnica de Tissue microarray (TMA) para avaliar a presença de células-tronco tumorais. A partir dos resultados da imunoistoquímica os tumores foram classificados em Luminal A (RE+ e HER-2- ) (25,89%), Luminal B (RE+ e HER-2+) (33,93%), Superexpressão de HER-2 (RE- e HER-2 +) (14,29%) e Basal (RE-, HER-2- e p63 e/ou CK5 +) (25,89%). Dos 112 tumores, 75 foram positivos para CD10 (66,96%), 81 positivos para BMI-1 (72,32%), para o CD44 apenas seis tumores (5,35%) foram positivos, 48 tumores positivos para CD24 (42,86%), 24 positivos para ESA (21,43%) e 23 tumores foram positivos para MUC-1 (20,54%). Desses tumores, quatro apresentaram o imunofenótipo CD44+CD24-, representando 3,57% dos tumores. Ao correlacionar as marcações para células-tronco tumorais com os diferentes subtipos, alguns marcadores apresentaram diferença estatística, sugerindo que os tumores com imunofenótipo mais agressivo (Superexpressão de HER-2 e Basal) foram positivos para a marcação de células-tronco tumorais. Além disso, houve uma maior marcação das células-tronco tumorais para os carcinomas classificados em complexo, o que desafia os dados de literatura, já que esses tumores eram considerados com melhor prognóstico do que os carcinomas simples. São necessários novos estudos

For being the biggest cause of death among the canine females, mammary cancer arises the interest of the scientific community; therefore its presentation and clinical outcome are very similar to the cases of breast cancer in woman. In intention to allow the following of comparative studies between the tumors of dogs and women, immunohistochemical markers were performed to estrogen receptors (RE), HER-2, p63 e CK5, to classify the tumors according to their expression, in different subtypes. Beyond that, markers to CD10, BMI-1, CD44, CD24, ESA e MUC-1 were used through the immunohistochemical in slides made by Tissue microarray technique (TMA) to evaluate the presence of cancer stem cells. From the immunohistochemical results, tumors were classified in Luminal A (RE+ e HER-2-) (25,89%), Luminal B (RE+ e HER-2+) (33,93%), HER-2 Overexpression (RE- e HER-2 +) (14,29%) and Basal (RE-, HER-2- e p63 e/ou CK5 +) (25,89%). Among 112 tumors, 75 were positive to CD10 (66,96%), 81 positive to BMI-1 (72,32), to CD44 only six tumors (5,35%) were positive, 48 positive tumors to CD24 (42,86%), 24 positive to ESA (21,43%) and 23 tumors were positive to MUC-1 (20,54%). In these tumors, four presents CD44+CD24- immunophenotypes, performing 3,57% of tumors. To correlate cancer stem cells markers with the distinct subtypes, some markers presented statistical differences, suggesting that more aggressive tumors immunophenotypes (HER-2 Overexpression and Basal) were positive to cancer stem cells markers. Besides, there were higher cancer stem cell markers in complex carcinomas, which challenge literature data because this kind of tumor was considered with better prognosis when compared with simple carcinomas. More studies are necessary with new samples to confront this research results? and determinate the more indicated markers. Still, the female dog must be considered to be used as experimental model for breast cancer

Immunodetecção de marcadores de prognóstico em neoplasias mamárias de gatas: correlação dos padrões classificados

As neoplasias mamárias em gatas representam o terceiro tipo neoplásico mais frequente nesta espécie. A maioria destas neoplasias são malignas, e exibem alto potencial metastático. Devido a isto, e a escassez de trabalhos referentes ao prognóstico de gatas com câncer de mama, foram avaliados em 32 amostras de neoplasia mamária de gatas, a expressão imuno- histoquímica de alguns marcadores de prognóstico. As amostras foram segregadas em grupos seguindo os parâmetros de classificação da organização mundial de saúde em carcinomas tubulopapilares, cribriformes e sólidos e de acordo com o método de Nottighan modificado em graus I, II e III. Os cortes histológicos foram submetidos a processamento imuno-histoquímico para avaliação da expressão da metaloproteinase 9 (MMP-9), do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), da proteína de proliferação celular Ki- 67 e de linfócitos TCD3+, CD79+ e macrófagos, afim de se avaliar os diferentes padrões de classificação. Os resultados da marcação imuno- histoquímica foram avaliados com auxílio de um sistema de análise de imagem computadorizada para determinar a porcentagem da área imunomarcada. Em relação à classificação morfológica observou-se diferença significativa entre a densidade de linfócitos TCD3+ entre os grupos. Durante a análise nas amostras segregadas de acordo com a gradação histológica verificou-se diferença significativa entre a imunomarcação da MMP-9, entre a intensidade de infiltração de células TCD3+ e uma tendência de variação na proteína Ki-67. Observamos também correlação positiva entre os níveis de expressão da MMP-9 e da Ki-67, da MMP-9 e células TCD3, e da proteína Ki-67 com as células TCD3. Desta forma concluímos que classificação histológica dos carcinomas de mama em gatas não é um bom parâmetro para determinação do prognóstico da doença...

The mammary tumors in cats represent the third most common tumor type in the species. Most of these are malignant neoplasms exhibit a high metastatic potential. Because of this and the lack of studies regarding the prognosis for cats with breast cancer were evaluated 32 samples of breast cancer in cats. These samples were grouped according to morphological and histological classification, and the sections were submitted to immunohistochemical processing to evaluate the expression of metalloproteinase 9 (MMP-9), the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein of cell proliferation Ki-67 and CD3 + T lymphocytes, and CD79 + macrophages in order to evaluate differences in the different grading standards. The results of immunohistochemical marking were evaluated by using a system of computerized image analysis to assess the percentage of area immunomarked. Regarding the morphological classification showed a significant difference between the amount of T lymphocytes CD3 + between the groups. During analysis the samples segregated according to histologic grading there was significant difference between the immunostaining of MMP-9, between the intensity of infiltration of T cells CD3 + and a tendency of variation in the Ki-67 protein. We also observed a positive correlation between the expression levels of MMP-9 and Ki-67, MMP-9 and TCD3 cells, and Ki-67 protein in cells T CD3+. Thus we conclude that histologic classification of breast carcinomas in cats is not a good parameter for determining the prognosis of the disease when evaluated together with the levels of immunohistochemical expression of MMP- 9, VEGF and Ki67. The best best parameters for determining the prognosis was observed when the histological grade was considered . The higher was the proliferative index determined by the positivity of Ki-67 protein from neoplastic cells, the greater...

Imunodetecção de células-tronco tumorais em neoplasias mamárias caninas

Neoplasias mamárias são muito frequentes em cadelas. Entre 50 e 70% são malignas. Estudos recentes sobre carcinogênese têm abordado a detecção de células-tronco tumorais (CTTs) em neoplasias mamárias. A CTT é uma célula capaz de se autorrenovar e se diferenciar em células maduras no tecido a qual está inserida. Estudos em cães demonstraram marcações de CTTs por citometria de fluxo em culturas de neoplasias mamárias. Nesse estudo objetivou-se detectar as CTTs por meio de reações imuno-histoquímicas e relacioná-las com graus e tipos histológicos de neoplasias mamárias caninas. Para isso, 136 neoplasias mamárias classificadas de acordo com Cassali et al. (2011) foram selecionadas. Utilizou-se os anticorpos CD44, CD24, Oct-4 e ALDH-1. Quarenta apresentaram o fenótipo CD44+/CD24-, sendo a maioria em graus mais avançados e nas metástases. Para o marcador Oct-4 foi observado aumento significativo de células marcadas nos carcinomas sólidos, do grau II para o grau III. A marcação para o ALDH-1 quando positiva, associou-se com as neoplasias de maior grau de malignidade (II e III). Nos carcinossarcomas não houve diferença significativa entre a marcação dos componentes epiteliais e mesenquimais para os marcadores estudados. No grupo dos adenomas foram observadas poucas células marcadas para CD44 com aumento significativo de células marcadas para os anticorpos CD24 e Oct-4. Nesse grupo não foram observadas marcações para o ALDH-1. O inverso ocorreu nas metástases, sendo a marcação significativamente maior para o anticorpo CD44 e pouco ou ausente nos demais. Em estudos realizados em cães por citometria de fluxo foram encontradas porcentagens de marcações para o fenótipo CD44/CD24 semelhantes aos encontrados nesse trabalho. As marcações para o anticorpo Oct-4 nos carcinomas sólidos condiz...

Canine mammary neoplasias are very common in dogs and most of them are considered malignant. Strategies to new ways to treat these cancers have been proposed as the detection of cancer stem cells (CSC). A CSC is a cell able to self-renew and have abilities to form metastases. In canine mammary tumors these CSCs were isolated by flow cytometry by means of the surface markers CD44+/CD24-. The aims of this study was detect these CSCs by immunohistochemical reactions and relate them with grades and histological types of canine mammary neoplasias. Thus a sample of 136 breast neoplasias classified according by Cassali et al. (2011) were selected and performed immunohistochemical study for antibodies CD44, CD24, Oct-4 and ALDH-1. From 130 samples, 40 showed the phenotype CD44+/CD24-, mostly in the metastases. Grades III normally exhibited more CD44 than CD24. For the marker Oct-4 was significantly increased only in solid carcinomas. The ALDH-1 when present, is associated with a worse prognosis. In carcinosarcomas no significant difference between epithelial and mesenchymal components for markers of CSCs. Benign tumors scored low CD44, high to CD24 and Oct-4 and failed to score ALDH-1. In studies in dogs by flow cytometry were found percentages of CSCs markings similar to those found...

Avaliação da população de células tronco tumorais nas neoplasias da glândula mamária em cadelas

Os tumores mamários são as mais freqüentes neoplasias em cadelas, representando cerca de 50% dos tumores diagnosticadas nesta espécie e tem maior incidência em fêmeas de meia idade a idosas. Têm sido utilizadas como modelo de estudo para neoplasias mamárias de mulher devido às várias características comuns como as similaridades histológicas e imuno- histoquímicas. Na última década, estudos baseados nos perfis moleculares das neoplasias mamárias, tornaram possível a identificação de algumas células neoplásicas com características de células tronco ? as células tronco tumorais (CTT). Uma das moléculas putativas para marcação das CTTs é o CD44. A telomerase, que vem sendo relatada como marcador tumoral, é potencialmente expressa também em CTTs. Estudos recentes estabeleceram um elo crucial entre a transição epitelial-mesenquimal (EMT) e a aquisição de propriedades moleculares e funcionais de células-tronco. Por este motivo analisamos a expressão das proteínas CD44, Citoqueratinas AE1/AE3 e Vimentina, e da enzima telomerase, em tumores mamários de cadelas a fim de investigar o potencial de marcação de CTTs e sua relação com a EMT. Para tal foram utilizados métodos de imuno-histoquímica em tecidos parafinizados tanto in vivo quanto in vitro, fazendo-se uso de técnicas como Tissue MicroArrays (TMA), citoinclusão de tecidos tumorais e cultivos celulares. A expressão da telomerase nas células de tumores mamários cultivadas foi analizada por PCR em tempo real. Nas amostras de tecido parafinizado in vivo, a imunomarcação da citoqueratina demonstrou diferença significativa entre tumores benignos e malignos (p?0,05), mostrando-se mais intensa em tumores malignos. Já a vimentina apresentou maior intensidade de marcação em tumores benignos, porém não apresentando diferença significativa (p?0,05)...

Mammary tumors are the most frequent cancers in dogs, representing about 50% of tumors, and have a higher incidence in females of middle aged and elderly. These tumors have been used as a model for breast cancer in women due to several common characteristics such as histological and immunohistochemical similarities. In the last decade, studies based on molecular profiles of breast cancer, made possible the identification of some neoplastic cells with characteristics of stem cells ? cancer stem cells (CSC). One of the putative molecules of CSCs is CD44. Telomerase, which has been reported as a tumor marker, is potentially also expressed in CSCs. Recent studies have established a crucial link between the epithelial- mesenchymal transition (EMT) and the acquisition of molecular and functional properties of stem cells. For that reason we analyzed the expression of proteins CD44, Cytokeratins AE1/AE3 and Vimentin, and the telomerase enzyme, in dogs mammary tumors, to investigate the potencial for CSC markers, and its relation with the EMT using immunohistochemistry in paraffin embedded tissues in both in vivo and in vitro, making use of techniques such as Tissue MicroArrays (TMA), cell blocks from tumors and cell cultures. Besides that, we analyzed the telomerase expression in mammary tumor cultivated cells by quantitative real time PCR. Immunostaining of cytokeratin had no significant difference between benign and malignant tumors (p ? 0,05), being more intense in malignant tumors. However vimentina showed higher staining intensity in benign tumors, but with no significant difference (p ? 0,05). The expression of CD44 was higher in malignant tumors that have greater proliferative and metastatic potencial, however its relation with EMT was not detected in the analyzed tumors. Telomerase expression was positive in the neoplastic cultivated cells, however without significant difference...

Relação da ciclooxigenase-2 com VEGF e a caspase-3 nas neoplasias mamárias de cadelas

Nas cadelas, os tumores de mama representam em média 40% de todos os tumores, e sua carcinogênese é atribuída a interação complexa de fatores individuais da paciente. A enzima ciclooxigenase-2 (COX-2) apresenta-se como um marcador potencial para o câncer de mama, uma vez que é expressa em resposta a processos inflamatórios, que frequentemente acompanham as neoplasias e alterando o seu prognóstico. A caspase-3 é foco de estudos relacionados ao mecanismo da apoptose, tornando-se peça-chave no entendimento dos mecanismos de morte celular. O VEGF está envolvido na angiogênese e linfangiogênese, apresentando papel importante na progressão do câncer. O objetivo deste trabalho foi investigar a imunorreatividade da ciclooxigenase-2, do VEGF e da Caspase-3 nas neoplasias mamárias de cadelas, e correlacionar a expressão da COX-2 com o VEGF e com a Caspase-3, nesses tumores. Para a realização deste estudo foram selecionadas 60 amostras de tumores mamários de cadelas e 10 amostras de tecido mamário livre de malignidade que foram divididas em seis grupos compostos por 10 tumores de mesma classificação histológica cada grupo, e um grupo composto por 10 amostras de tecido mamário livre de malignidade. Os grupos foram denominados Adenomas, Carcinomas de prognóstico bom, Carcinomas de prognóstico ruim, Carcinomas primários metastáticos, Metástases pulmonares, Carcinomas inflamatórios e Controle. Os 7 grupos foram agrupados em micro-arranjo tecidual em lâmina de microscopia, e analisados através de imunoistoquímica pela técnica estreptavidina-biotina-peroxidase. A avaliação da intensidade de marcação foi obtida por densitometria com auxílio do programa ImageJ. A intensidade da marcação da Cox-2 foi maior nos casos de metástase pulmonar e fraca nos casos de...

In bitches, breast tumors represent an average of 40% from all tumors, and its carcinogenesis is attributed to a complex interaction of individual patient?s factors. The enzyme cyclooxygenase-2 (COX-2) is presented as a potential marker for breast cancer, since it is expressed in response to inflammation, which are often associated with neoplasms, changing its prognosis. Caspase-3 has been investigated as a key-protein associated with the mechanism of apoptosis, becoming a key part in understanding the mechanisms of cell death. VEGF is involved in angiogenesis and lymphangiogenesis, presenting important role in cancer progression. The objective of this study was to investigate the immunoreactivity of cyclooxygenase-2, VEGF and Caspase-3 in mammary neoplasms in bitches, and correlate the expression of COX-2 and VEGF and the Caspase-3 in these tumors. For this study we selected 60 samples of bitches´s mammary tumors and 10 samples of breast tissue malignancy´s free, which were divided into six groups of 10 tumors of the same histological grade of each group and one group of 10 breast tissue samples malignancy´s free. The groups were called adenomas, carcinomas good prognosis, carcinomas with poor prognosis, metastatic primary carcinomas, lung metastases, inflammatory carcinomas and Control. The seven groups were grouped into tissue micro-array on a microscope slide, and analyzed by immunohistochemistry technique streptavidin-biotin-peroxidase. The evaluation of the intensity of staining was obtained by densitometry using the program ImageJ. The intensity of COX-2 labeling was higher in cases of pulmonary metastasis and poor in cases of adenoma. In the assessment of marking of Caspase-3, there was a significant correlation between the control and carcinoma with poor prognosis (p <0.001) Furthermore, there was significant difference...

Influência da terapia fotodinâmica sobre a expressão dos genes BCL-2, BAX e HER-2 na carcinogênese mamária

A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma modalidade terapêutica utilizada para o tratamento de neoplasia maligna que induz a morte celular por necrose ou apoptose. Estudos in vitro e in vivo são realizados para avaliar o sucesso da terapia, bem como as respostas e alterações celulares ocorridas. Esse trabalho tem por objetivos avaliar a expressão dos genes BCL-2, BAX e HER-2 e de suas proteínas, relacionados à proliferação celular e apoptose, na eficácia da TFD, avaliar qualitativamente o grau de necrose causado pela TFD em diferentes doses e validar a técnica de PCR em tempo real com a imunohistoquímica em tumores de mama tratados por TFD. Para tal 28 ratas da linhagem Sprague-Dawley (SD) receberam dose única de DMBA (80mg/kg, via gavagem) para indução do tumor de mama, quando da manifestação clínica da neoplasia foi realizado exame citológico e os animais foram divididos em 4 grupos G1: grupo controle, tumor de mama não tratado; G2 tratado com TFD utilizando-se iluminação intersticial com dose de luz de 50J/cm; G3 dose de luz de 100J/cm, G4 dose de luz de 150J/cm. Amostras dos tumores foram colhidas para realização de exame histopatológico, imuno-histoquímica e qRT-PCR. Através da imuno-histoquímica observou-se que os tumores mamários induzidos químicamente em ratas SD superexpressam Bcl-2 e Bax e tem baixa expressão de Her-2 e que isso não se altera com os diferentes tratamentos (G2,G3 e G4) quando comparado com o grupo controle (G1). Já através do qRT-PCR observou ?se que o padrão de expressão de BCL-2, BAX e HER-2 não se altera nos diferentes tratamentos (G2,G3 e G4) quando comparado ao controle (G1). Não há evidência estatística de que a TFD influencie a expressão proteíca e gênica de Bcl-2, Bax e Her-2 nas condições do experimento

Photodynamic therapy (PDT) is a therapeutic procedure used to treat malignancy which induces cell death by necrosis or apoptosis. In vitro and in vivo are performed to evaluate the success of therapy, as well as the responses and cellular changes that occur. This study aims to evaluate the expression of genes BCL-2, BAX and HER-2 and its protein related to cell proliferation and apoptosis in the efficacy of PDT, qualitatively assess the degree of necrosis caused by PDT at different doses and validate the technique of real time PCR with immunohistochemistry in breast tumors treated by PDT. For this 28 Wistar female Sprague-Dawley (SD) received a single dose of DMBA (80mg/kg by gavage) for induction of breast tumor, when the tumor clinical cytological examination was performed and the animals were divided into 4 groups G1: control group, untreated breast tumor; G2 treated with PDT using interstitial illumination with light dose of 50J/cm; G3 dose 100J/cm light, G4 light dose of 150J/cm. Samples of tumors were harvested for histological examination, immunohistochemistry and qRT-PCR. By immunohistochemistry it was found that the chemically induced mammary tumors in female rats SD overexpress Bcl-2 and Bax and has low expression of Her-2, and it does not change in either group (G2, G3 and G4) compared with the control group (G1). Already using the qRT-PCR showed that the expression pattern of BCL-2, BAX and HER-2 is not changed in different treatments (G2, G3 and G4) compared to control (G1). There is no statistical evidence that PDT influence the expression of gene and protein of Bcl-2, Bax and Her-2 in the experimental conditions

Avaliação clínica, de progesterona e da expressão gênica de receptores esteróides dos tumores de mama em cadelas

Os tumores mamários constituem as neoplasias de maior ocorrência nas cadelas e os hormônios são apontados como um dos principais fatores etiológicos. Foram utilizadas 26 cadelas portadoras de neoplasias mamárias e cinco cadelas sem afecções mamárias para o grupo controle. Através de um questionário respondido pelos proprietários das cadelas, parâmetros como pseudogestação, histórico de prenhez, uso de contraceptivos e tipo de alimentação foram analisados. Foram realizadas dosagens hormonais séricas e teciduais, através da técnica de radioimunoensaio, além da expressão de receptores de estrógeno e progesterona por meio da técnica de q-PCR. Os resultados obtidos demonstraram que há uma maior incidência das neoplasias malignas em relação às benignas na cidade de Botucatu e região. Em relação aos aspectos clínicos, a nuliparidade ou o pequeno número de gestações compreenderam a maioria dos animais com neoplasia mamária. Além disso, o estudo demonstrou um nível de conscientização dos proprietários da região, já que poucos utilizaram meios contraceptivos em seus animais. Em relação à dieta, a maioria dos animais estudados recebia carne bovina e suína. Foi observado que as neoplasias (benignas ou malignas) sintetizam uma quantidade maior de progesterona em relação à glândula mamária normal. Por fim, os três grupos de animais estudados (tumor maligno, benigno e controle) expressaram receptores de estrógeno alfa, beta e progesterona. A quantificação relativa mostrou uma tendência para expressão maior dos receptores no grupo controle e menor no grupo dos animais com neoplasias malignas. Além disso, houve uma expressão maior de ER? em relação ao ER? e as neoplasias malignas de origem mista apresentaram maiores concentrações dos receptores PR, ER? e ER?, comparadas às neoplasias de origem epitelial

Mammary gland tumors are the neoplasms most common in female dogs and the hormones may be one of the principal etiologic factors. Twenty six female dogs with mammary neoplasias and five female dogs without mammary afeccions for the control group were used. Through questionary answered by female dogs owners, the variables as pseudopregnancy, pregnancy history, contraceptives use and diet were analyzed. It was done serum and tissue hormonal content by the radioimmunoassay technique, besides the estrogen and progesterone receptors expression by q-PCR technique. The results obtained showed higher incidence of malignant tumors in respect to benign tumors at Botucatu city and region. About clinical aspects the nulliparity or a small number of pregnancy are the major of animals with mammary tumors. Besides the study showed that owners have knowledge about the incorrect use of contraceptives in their animals. About the diet the major of animals analyzed received beef or pork. It was observed that tumors (benign or malignant) synthesize major progesterone amount in respect to the normal mammary gland. Finally the three animals groups evaluated (malignat tumor, benign tumor and control) expressed alpha and beta estrogen and progesterone receptors. The relative quantification showed a tendency for a higher expression of receptors from the controle group and smaller in the malignat tumors animal group. Besides there was a major ER? expression in respect to ER? and the malignat tumors from mixed origin presented higher concentrations of receptors PR, ER? and ER?, in compared to tumors from epithelial origin

Análise prognóstica da imunoexpressão de proteínas relacionadas à transição epitelial-mesenquimal nos carcinomas mamários esporádicos de cadelas

Transição epithelial-mesenquimal (EMT) é a conversão de células epiteliais polarizadas para células migratórias com fenótipo fibroblasto-símile. A EMT está envolvida na progressão e metástase em diversos cânceres nos seres humanos, porém permanece a ser mais bem explorada na literatura veterinária. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a imunoexpressão de proteínas relacionadas à EMT nos carcinomas mamários de cadelas (CMCs). Seis proteínas foram avaliadas por meio de imunoistoquímica em 94 amostras de CMCs. Tecidos mamários não neoplásicos de 17 cadelas e amostras de 9 tumores mamários benignos de cadelas foram avaliados de modo a determinar o perfil de imunoexpressão de Snai-1. Características anatomopatológicas foram comparadas com a imunoexpressão de proteínas relacionadas à EMT nos CMCs. A perda de proteínas epiteliais e/ou a aquisição de proteínas mesenquimais foi observada principalmente em neoplasias com evidência de invasão estromal; entretanto, somente foi observada significância estatística quando comparado S100A4 e invasão vascular. Snai-1 foi observado em células luminais de neoplasias simples malignas e em células mioepiteliais de tumores benignos ou malignos de caráter complexo, sendo também significativamente relacionado à baixa de expressão de Caderina-E. Conclui-se que a perda de proteínas epiteliais e/ou a aquisição de proteínas mesenquimais está associada com EMT e pode possuir importante papel na avaliação de CMCs. O padrão único de imunoexpressão de Snai-1 pode ajudar a distinção entre um adenoma e um carcinoma não metastático e aparenta estar relacionado à conversão de células mioepiteliais a um fenótipo mesenquimal completo. A perda de Caderina-E e citoqueratina e a mudança no padrão de imunoexpressão de Snai-1, Caderina-N, S100A4 e MMP-2 indica a ocorrência de EMT em carcinomas mamários de cadelas...

Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is defined as switching of polarized epithelial cells to a migratory fibroblastoid phenotype. EMT is known to be involved in the progression and metastasis of various cancers in humans, but this specific process is still little explored in the veterinary literature. The aim of this research was to evaluate the expression of EMT-related proteins in canine mammary carcinomas (CMCs). The expression of six EMT-related proteins in CMC of 94 female dogs was evaluated by immunohistochemistry. Additionally, mammary tissues from 17 female dogs with no history of mammary tumor development and from 9 bitches with benign tumors were evaluated in order to determine Snai-1 immunoexpression patterns. Anatomopathological characteristics were compared with the expression of EMTrelated proteins in CMCs. Loss of epithelial protein and/or acquisition of the expression of mesenchymal proteins were observed, particularly in tumors with evidence of stromal invasion; however, significance was only observed between the S100A4 and vascular invasion. Snai-1 was only expressed in luminal cells of histologically malignant tumors and in myoepithelial cells of benign and malignant complex tumors and was significantly related to E-cadherin loss. In conclusion, loss of epithelial proteins and/or the acquisition of mesenchymal proteins are associated with EMT and may have an important role in the evaluation of CMC patients. The unique immunoexpression pattern of Snai-1 could help to distinguish between an adenoma and a non-metastatic carcinoma and seems to be related to conversion of myoepithelial cells to a complete mesenchymal-like phenotype. Loss of E-cadherin and cytokeratin and change of immunoexpression pattern of Snai-1, N-cadherin, S100A4 and MMP-2 indicate the occurrence of EMT in canine mammary carcinomas and should result in an en bloc resection or a close follow-up

Determinação dos valores plasmáticos de osteopontina em cães com tumores mamários metastáticos ou não : correlações clínicas e anatomopatológicas

A osteopontina (OPN) é uma proteína produzida por diversas células e tem grande implicação com o desenvolvimento de tumores mamários e na disseminação de metástases em humanos. Em cães há poucos estudos envolvendo neoplasias e OPN. Neste trabalho objetiva-se determinar as concentrações de OPN sérica em cães sem a presença de tumores mamários (GC) ou com presença de carcinoma mamário ou carcinoma em tumor misto, com e sem metástase macro ou microscopicamente evidente. Utilizou-se o Ensaio Imunoenzimático Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA), a partir do plasma colhido antes e após a ressecção cirúrgica do tumor, em animais com neoplasia, e apenas em um momento (basal) nos animais sadios. As informações do ensaio, assim como os dados histopatológicos, hematológico e de bioquímica sérica foram confrontadas e analisadas por análise de variância e teste de Tukey. Os cães do GC obtiveram média de OPN de 2499 ± 1159 ng/d, com amplitude de referência entre 4770 e 227 ng/dL. Os cães com presença de tumor, quando em um único grande grupo, obtiveram uma diminuição significativa nos níveis plasmáticos de OPN, quando avaliado a densidade óptica. Quando o grupo se subdivide, em função do tipo histológico e/ ou presença de metástases, os resultados não evidenciam diferenças significativas nos níveis plasmáticos de OPN entre os animais sadios e os animais com neoplasias metastáticas ou não. A análise de correlação também não apresentou nenhum resultado significativo com os dados hematológicos ou de bioquímica sérica. Nas condições de realização deste ensaio, infere-se que, ao contrário ...

The osteopontin (OPN) is a protein produced by several cells and has extensive involvement with the development of mammary tumors and its spread through metastases in humans. In dogs there are no studies involving cancer and OPN. This study aimed to determine serum concentrations of OPN in dogs without the presence of mammary tumors (GC) and presence of carcinoma in breast or carcinoma in mixed tumor with or without metastasis macro or microscopically evident. We used immunoenzymatic assay Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) from plasma collected before and after surgical resection of the tumor, in animals with cancer, and only at a time (baseline) in healthy animals. The information of the test, and histopathological data, hematology and serum biochemistry were compared and analyzed by ANOVA and Tukey test. Dogs GC got an average of OPN in 2499 ± 1159 ng / d, with reference range between 227 and 4770 ng / dL. Dogs with the presence of tumor, when one large group, had a significant decrease in plasma levels of OPN, when determined by optical density. When the group is subdivided, according to the histological type and / or metastasis, the results showed no significant differences in serum levels of OPN between healthy animals and animals with metastases or not. The correlation analysis did not show any significant result with hematological or serum 4 biochemistry. We conclude that, contrarily to what is observed in humans, OPN does not appear important in the diagnosis or prognosis of breast neoplasm in dogs

Imunomarcação de micrometástases de neoplasias mamárias espontâneas em linfonodos de cadelas por meio do receptor CD44

As neoplasias mamárias caninas são as mais frequentes nessa espécie e também são comuns em mulheres. Um dos principais fatores prognósticos dessa enfermidade é a presença ou ausência de metástase em linfonodos. A metástase é um mecanismo complexo que envolve vários fatores. Em mulheres sabe-se que a molécula de adesão CD44 está relacionada com invasão e metástase. Este trabalho teve como objetivos: avaliar a imunomarcação de CD44 nas neoplasias mamárias malignas da cadela, com e sem metástase em linfonodos regionais; associá-la como fator prognóstico; na detecção precoce de metástase; relacioná-la com a imunomarcação de MMP-9, E-caderina e VEGF e associar com a sobrevida das cadelas. Compuseram os grupos experimentais, cadelas com tumor mamário, com (Grupo M) ou sem metástase (Grupo N) detectável em linfonodos e um grupo controle composto por tecido mamário normal. Não houve predileção por localização mamária, mas utilizou-se mais as mamas inguinais e linfonodos inguinais. As neoplasias mamárias foram classificadas de acordo com a Organização Mundial de Saúde. Para isso utilizou-se a técnica de imuno-histoquímica, em amostras incluídas em parafina. Para a determinação da porcentagem de imunomarcação considerou-se somente as células epiteliais neoplásicas. Para o anticorpo CD44 contou-se as marcações em linfócitos T nos linfonodos dos dois grupos Observou-se aumento significativo na marcação do CD44 do sítio primário do tumor para a metástase, assim como nas marcações de MMP-9 e E-caderina. As marcações em linfócitos T foram maiores no grupo N e menores no grupo M. O tipo histopatológico mais comum foi o carcinoma simples túbulo papilífero. A raça predominante no grupo das metástases foi Teckel, com idade média de 9,4 anos, e com tempo de sobrevida de sete meses. Concluiu-se...

Mammary neoplasia are the most frequently type of cancer in bitches and also in women. One of the main prognostic factors of this desease is the presence or absent of lymphonodes metastasis. Metastasis is a complex mechanism which involve multiple factors. At women, researchs have shown that the CD44, a adhesion molecule, is related with invasion and metastasis. This research looked for as objectives: Evaluation of CD44 in malignant mammary neoplasia at bitches with and without lymphonodes metastasis; link CD44 and prognosis; CD44 and early detection of metastasis; link CD44 with MMP-9; E-cadherin and VEGF; and associate with the survival of bitches. Experimental groups were arranged with bitches suffering from mammary neoplasia and divided into three groups: Group one(M) were compounded by bitches with visible metastasis in the lymphonodes; Group two(N) were compounded by bitches without visible metastasis in the lymphonodes;Group three or control compounded by bitches with normal mammary tissue. During the research did not have predilection about the mammary localization, despite inguinal breast and lymphonodes were more collected. Mammary neoplasias were classified according to the OMS norms. For this we used the technique of immunohistochemistry in paraffin sections and counted only epithelial cancer cells by method of percentage of labeled cells. Only antibody to CD44 told that the markings on T lymphocytes in lymph nodes of the two groups observed a significant increase in CD44 marking the site of the primary tumor to metastasis, as well as the markings of MMP-9 and E-cadherin. The markings on T lymphocytes were higher in group N and lower in group M. The most common pathological type was the simple tubular papillary carcinoma. The xiii predominant race in the group of metastasis was Daschshund, mean age 9,4 years, and survival...

TGF?, pSmad2, p53, p63, E-caderina e Vimentina como marcadores prognósticos em tumores espontâneos de mama de cadelas

Tumores mamários são freqüentemente diagnosticados em cadelas e apresentam comportamento biológico muito semelhante aos das mulheres, fazendo da cadela um modelo para o estudo comparativo. Nas neoplasias malignas, invasão e metástase são características biológicas que têm influência direta no prognóstico. Com o aumento da disponibilidade de anticorpos para imuno-histoquímica na espécie canina, inúmeros estudos têm sido realizados para prover informações a respeito das transformações celulares que ocorrem durante a carcinogênese e o processo metastático. A p53 é conhecida como ?guardiã do genoma? e aparece mutada em cerca de 50% das neoplasias humanas. A p63 possui elevada homologia seqüencial com a p53 e sua função supressora tumoral tem sido investigada. A transição de células epiteliais em mesenquimais (EMT) é um processo fisiológico no qual as células perdem suas características epiteliais e adquirem fenótipo mesenquimal, capaz de permitir a migração celular e esta transição tem sido investigada em participar da disseminação metastática nos cânceres humanos. Assim, este estudo avaliou a presença de p53, p63 e marcadores envolvidos na EMT (TGF?, pSmad2, E-caderina e Vimentina) em adenomas e carcinomas mamários caninos com e sem metástase. Houve diminuição da marcação para p63 e E-caderina conforme progressão da lesão e o inverso ocorreu com a p53 e Vimentina. O percentual de marcação para o TGF? não variou, tendo apresentado apenas variação com relação à intensidade de marcação. A marcação do pSmad2 foi diminuída nas células epiteliais neoplásicas e aumentada nas células estromais de acordo com o avanço da neoplasia. Estes achados sugerem que a EMT também ocorra nas neoplasias mamárias caninas e abrem perspectivas para mais estudos nesta área

Mammary tumors are often diagnosed in bitches and they are very similar to that occur in women, making this animal an excellent model for comparative studies. In malignancies, invasion and metastasis are important biological features that have direct influence on patient´s prognosis. They occur in several pathways and there are several factors that can influence a malignancy until it arrives at a distant site as well as their growth and differentiation into a new tumor. With increasing of availability of antibodies to perform immnuohistochemistry in dogs, numerous studies have been conducted in order to provide more information about the cellular changes that occur in breast carcinogenesis. p53 is a protein that actively participates in cell cycle regulation and appears mutated in about 50% of human malignancies. p63 has a high sequential homology with p53, and despite its known role in embrio development, its tumor suppression function has been investigated. The epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a physiological process that occurs during development and wound healing, by which cells lose their epithelial characteristics and acquire mesenchymal phenotype allowing migration. Recently, EMT has been investigated in participate on metastatic spread in human cancers. This way, this study assessed the presence of p53 and p63 as well as EMT´s involved markers (TGF?, e-cadherin and vimentin) in benign and malignant mammary tumors, with or without metastasis. Decrease staining of p63 was observed in injury progression, what occur inversely with p53. The TGF? staining did not vary between groups, presenting only variation in labeling intensity. We also observed that e-cadherin staining was decreased in advanced cancers and they were express vimentin, a marker of mesenchymal cells. This findings suggest that EMT also occurs in canine mammary neoplasias and give perspectives for...

Quantificação dos mastócitos nas neoplasias mamárias malignas de cadelas : análise histopatotológica, histoquímica e imunoistoquímica

O presente trabalho teve como objetivo quantificar e avaliar presença dos mastócitos nos diferentes tipos de neoplasias malignas da glândula mamária da cadela. Através de estudo retrospectivo, foi empregado à coloração histoquímica do azul de toluidina, para detecção de mastócitos, e a técnica imunoistoquímica, usando os anticorpos Ki-67 para proliferação celular e a caspase-3 para identificar as células em apoptose. As amostras (n= 102) foram descritas conforme a Classificação Histopatológica para Neoplasia Mamária do Cão e do Gato da Organização Mundial de Saúde. Os animais sem raça definida apresentaram o maior número de casos, e entre os animais com raça definida, a raça Poodle foi a que apresentou o maior número de casos. A idade média das cadelas foi de 8,6 anos. Os tipos morfológicos de neoplasias encontradas foram o carcinoma in situ com 0,98%, carcinoma complexo com 45,09%, carcinoma simples com 35,29%, carcinossarcoma com 10,78% e os tipos especiais de carcinomas que representaram 7,89% dos casos. Os mastócitos estavam presentes no foco neoplásico em 96,08% das amostras. 99% das amostras apresentaram marcação positiva para o anticorpo Ki-67 (MIB-1). Já a imunomarcação pela caspase-3 revelou marcação positiva em 95% dos casos. Foi observada correlação significativa positiva entre o número de mastócitos e o índice de proliferação (Ki-67) (p?0,05) nos carcinomas do tipo complexo. Os mastócitos mostraram influência na proliferação das células dos carcinomas complexos, contudo, é necessário mais estudos para elucidar o papel destas células no índice de proliferação

The presented study aimed to quantify and evaluate the presence or absence of mast cells in different types of malignancies in the mammary gland of the female dogs. For this, it was used the blue toluidine in the histochemical colours with the purpose of detecting mast cells, and immunohistochemical techniques, using the antibodies Ki-67 to the proliferation of the cells and caspase-3 antibody to identify undergoing cells in apoptosis. All samples were put according to the pathological classification for dog?s and cat?s breast cancer in the World Health Organization. About the racial pattern, it was observed a higher number of cases in animals without breed, and in the animals with breed, the Poodle was the one with the largest number of cases. The average age of the female dogs was 8.6 years old. The morphological types of neoplasm founded were: carcinoma in situ with 0.98% (1/102), complex carcinoma with 45.09% (46/102), simple carcinoma in 35.29% (36/102) carcinosarcom in 10.78% (11/102) and special types of carcinomas that were represented with 7.89% (08/102) of the total number of cases. The mast cells were presented in the neoplasic focus with 96.08% (98/102), and it prevailed in areas where there are lots of human tissues, especially around the vessels. About the immune numbers of samples using the Ki-67 (MIB-1), it was conclude that 99% (101/102) showed positive results. However, using the caspase-3 it was showed positive results in 95% (97/102). About the influence of mast cells in the proliferation of neoplasic cells, it was observed a significant positive correlation between the number of mast cells and the proliferation (Ki-67) for the complex carcinoma (p 0.05). The correlation between death and cells proliferation showed a negative significant relation in spindle cells carcinomas, between the apoptotic number (Caspase-3) and the proliferation number (NORs). How bigger is the number

Lesão no DNA e terapia fotodinâmica em neoplasia mamária de ratas (Sprague-Dawley) induzida quimicamente

Neoplasia é um processo anormal que compromete a proliferação e diferenciação celular de início localizado, podendo disseminar pelo organismo do hospedeiro levando a sua morte. As características desse processo devem ser investigadas para se estabelecer um protocolo terapêutico, para isso, uma importante ferramenta é o Teste do Cometa que detecta a lesão do DNA. Quanto ao protocolo terapêutico a Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma nova modalidade utilizada para o tratamento de neoplasia. Consiste na indução da citotoxicidade, através da interação da luz de comprimento de onda adequado, de um fotossensibilizador e do oxigênio molecular presente nas células. Com o objetivo de quantificar a lesão no DNA das neoplasias mamárias pelo Teste do Cometa; avaliar a resposta desse tumor à Terapia Fotodinâmica como tratamento único e adjuvante a cirurgia utilizamos 20 ratas Sprague-Dawley divididas em quatro grupos durante 12 semanas: os grupos G1 a G4 receberam dose única de DMBA 50 mg/kg por gavagem para indução do tumor de mama. Quando da manifestação da neoplasia aplicou-se nos animais de todos os grupos citados o TNM clínico, exame citológico e Teste do Cometa. O G1 foi acompanhado clinicamente, o G2 submetido à TFD, o G3 à cirurgia associada a TFD, G4 à cirurgia. Os animais do grupo 2 foram submetidos a uma única sessão da TFD, após 8 semanas, tiveram o estadiamento clínico e lesão no DNA menores quando comparado ao grupo controle. Os animais do grupo 3 não apresentaram recidivas até o final de 12 semanas quando foram comparados com os animais do grupo 4 o qual apresentou 60% de taxa de recidiva após 11 semanas, embora os animais do grupo 3 tenham apresentado menor lesão no DNA. A TFD pode ser usada no modelo experimental de tumor de mama como terapia única e adjuvante a cirurgia para redução da evolução do tumor e evitar recidivas respectivamente

Neoplasm is a process that results from an the abnormal proliferation and cell differentiation initially localized, but can metastize leading to death. The characteristics of this process should be investigated to establish a therapeutic protocol Comet assay is an important tool that detects the DNA damage. Photodynamic Therapy (PDT) is a therapeutic modality that can be used to treat cancer, where the cytotoxic effect is induced by the interaction of light at adequate wavelength, a photosensitizer and molecular oxygen present in cells. Aiming to quantify the DNA damage by Comet assay in mammary tumor assess the tumor response after Photodynamic Therapy as a single treatment or adjunvant modality to surgery, 20 Sprague-Dawley rats were used. The animals were divided into four groups all animals received a single dose of DMBA, 50 mg / kg by gavage to induce the mammary tumors the TNM clinical, cytological and Comet assay classifications were performed. The animals of were clinically monitored, the animals were treated by PDT, the animals were treated with surgery and PDT, and the animals of only surgery. The animals in group 2 were subjected to a single session of PDT, and after 8 weeks, clinical staging and DNA damage were less when compared to the control group. The animals in group 3 showed no tumor recidive until the end of the 12 th week. The animals of group 4 showed 60% rate of tumor recurrence after 11 weeks. The animals in group 3 showed less DNA damage when compared to group 4. PDT can be used in an experimental model of mammary tumor as single and as adjuvant therapy to reduce the development of tumors and to prevent recurrences, respectively

Detecção de inseticidas piretróides em tecido adiposo de neoplasia maligna de mama em cadelas

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência ? HPLC foi adaptada para detectar e identificar inseticidas piretróides no tecido adiposo adjacente ao tumor maligno de mama de 10 cadelas, sem predileção por raça e idade. Após a cirurgia, as massas eram examinadas cuidadosamente para lesões neoplásicas malignas. Cinco gramas de tecido adiposo adjacente ao tumor foram colhidos para demonstração de contaminantes ambientais. Os piretróides identificados foram aletrina, cialotrina, cipermetrina, deltametrina e tetrametrina, com nível de contaminação de 40%. A histopatologia demonstrou sete cadelas (70%) como carcinoma complexo, duas (20%) com carcinoma simples e uma (10%) com carcinoma anaplásico. Desses tumores, (80%) apresentaram grau III e (20%) grau I de agressividade. O nível de contaminação foi observado nos tumores mais agressivos. Esta foi à primeira demonstração que se tem conhecimento que o nível de contaminates ambientais pode ser detectado no tecido adiposo de cadela com tumor maligno de mama, pela HPLC. O presente resultado sugere que contaminantes ambientais possam estar envolvidos com o processo de formação ou associação ao risco de desenvolvimento do câncer de mama de cadela, sendo um indicador para auxiliar na monitoração de piretróides

High Precision Liquid Chromatography ? HPLC was adapted to detect and identify pyrethroid insecticides in adipose tissue adjacent to malignant tumor mammary gland tumor in 10 female dogs, without predilection for breed or age. After surgery, the masses were examined carefully for malignant neoplastic lesions. Five grams of adipose tissue adjacent to the tumor were collected for demonstration of environmental contaminants. The pyrethroids identified were allethrin, cyalothrin, cypermethrin, deltamethrin and tetramethrin, with a contamination level of 40%. The histopathology demonstrated seven female dogs (70%) as having complex carcinoma, two (20%) with simple carcinoma and one (10%) with anaplastic carcinoma. Of these tumors, (80%) presented aggressiveness degree III and (20%) degree I. The contamination level was observed in more aggressive tumors. This was the first known demonstration in which the level of environmental contaminants could be detected in adipose tissue of female dogs with malignant mammary tumor, by HPLC. The present result suggests that environmental pollutants can be involved with the formation process or association to the risk of development of female dog's breast cancer, being an indicator to aid in monitoring pyrethroids