Cytological grading of canine mast cell tumors: correlation with histologic grading and survival time / Graduação citológica de mastocitomas caninos: correlação com graduação histológica e sobrevida

ABSTRACT: Mast cell tumors are one of the most common neoplasia in dogs and cytopathology and/or histopathology examinations are used for diagnosis. Histologic grading is considered the gold standard test to predict the prognosis of this neoplasia. However, studies have been conducted using the cytological grading system to provide similar information in a faster, less invasive, and more accessible way. This study aimed to investigate cytological graduation and correlate it with histological grading and the survival time of dogs diagnosed with cutaneous mast cell tumors at the Veterinary Hospital of "Universidade Federal de Uberlândia" over five years. For that, cytological and histological slides from 72 animals were reviewed. The statistical methods used were the kappa test for agreement between grading systems, the Kaplan-Meier for survival time, Cox regression for comparison of cytological and histological grades and survival time. The cytological grading when compared to the two-tier histologic grading, high and low grades, had a moderate agreement (kappa 0.566). When the correlation between survival time and the cytological grade was evaluated, there was a higher death rate in the group with high-grade mast cell tumors compared to low grade, pointing to a correlation between survival time and cytological grade (p=0.009). In conclusion, the cytological grade is useful to treatment planning and providing prognostic information that precedes tumor removal, showing a good correlation with the two-tier histologic grading and with the survival time of the animals.

RESUMO: O mastocitoma é uma das neoplasias cutâneas mais comum nos cães e os exames citopatológicos e/ou histopatológicos são utilizados para diagnóstico. A graduação histológica é considerada padrão ouro para prever o prognóstico dessa neoplasia. Contudo, estudos têm sido realizados visando utilizar graduação citológica para fornecer informações semelhantes de maneira rápida, menos invasiva e mais acessível. Esse trabalho objetivou realizar graduação citológica e correlacionar com as graduações histológicas e com a sobrevida de cães diagnosticados com mastocitoma cutâneo no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Uberlândia durante 5 anos. Para isso, lâminas de citologia e histologia de mastocitomas de 72 animais foram revisadas. Os métodos estatísticos utilizados foram teste kappa para concordância entre os sistemas de graduação, método Kaplan-Meier para tempo de sobrevida dos animais, e análise pela regressão de Cox para comparação do grau citológico e grau histológico e o tempo de sobrevida global. A graduação citológica quando comparada com a histológica de dois níveis, alto grau e baixo grau, obteve uma concordância moderada (kappa 0,566). Na avaliação da correlação entre sobrevida e grau citológico, houve maior taxa de óbito no grupo de cães com mastocitoma de alto grau, comparado aos de baixo grau, sendo observada correlação entre a sobrevida e o grau citológico (p=0,009). Esse estudo concluiu que o grau citológico é útil para o planejamento do tratamento e para fornecer informações prognósticas que antecedem a exérese do tumor, tendo boa correlação com a graduação histológica de dois níveis e com a sobrevida dos animais.

Abordagem diagnóstica de mastocitoma cutâneo metastático em canino / Diagnostic approach of metastatic cutaneous mastocytoma in dog

O mastocitoma é uma das neoplasias cutâneas mais comuns que acometem cães. O diagnóstico da doença é baseado em aspectos clínicos e laboratoriais, sendo a citologia e a histopatologia os métodos de eleição. Diante disso, o objetivo deste estudo é relatar a importância da ampla abordagem diagnóstica de mastocitoma cutâneo metastático em uma fêmea canina castrada, atendida no Hospital Veterinário da Universidade Estadual do Ceará, com uma neoformação em membro compatível com mastocitoma. O estadiamento da paciente foi feito através de exames laboratoriais de hemograma completo, e citologia aspirativa de linfonodo regional e medula óssea, que evidenciaram a presença de focos de metástase; bem como do exame de ultrassom abdominal, que evidenciou alterações no parênquima hepático e linfoadenomegalia ilíaco medial direita. Diante das suspeitas, optou-se pela eutanásia da paciente, cujo corpo foi enviado para os exames de necropsia e histopatologia, os quais confirmaram o diagnóstico de mastocitoma cutâneo de alto grau, com metástase em fígado, pulmão, medula e linfonodos. Desta forma pode-se concluir que o mastocitoma cutâneo metastático é uma neoplasia de diagnóstico multifatorial, em que a realização de exames hematológicos associados às análises citológicas, histopatológicas e de imagem são indispensáveis para estabelecer o diagnóstico definitivo para que seja determinada uma melhor conduta terapêutica e prognóstico de pacientes caninos.

Mast cell tumors are one of the most common skin neoplasms that affect dogs. The diagnosis is based on clinical and laboratory aspects, with cytology and histopathology being the preferred methods. Therefore, this study aims to report the importance of the broad diagnostic approach of metastatic cutaneous mastocytoma in a castrated a female dog attended at the Veterinary Hospital of the State University of Ceará, with a neoformation in a member compatible with mast cell tumor. The patient's staging was performed through laboratory tests of complete blood count, aspiration cytology of regional lymph nodes and bone marrow, which showed the presence of focus of metastasis, as well as the abdominal ultrasound examination, which showed changes in the liver parenchymas and right medial iliac lymphadenopathy. Given the suspicions, the patient was euthanized and the body was sent for necropsy and histopathological examination, which confirmed the diagnosis of high-grade cutaneous mast cell tumor, with metastasis in the liver, lung, bone marrow, and lymph nodes. Thus, it can be is concluded that mast cell tumor is a neoplasm of multifactorial diagnosis, where hematological tests associated with cytology, histopathological, and imaging analyses are essential to establish the definitive diagnosis to determine a better therapeutic behavior and prognosis of canine patients.

Epidemiology of Canine Mast Cell Tumors in Uruguay

We examined in the present study main epidemiological features of canine mast cell tumors in Uruguay, principal breeds of occurrence, age, gender, anatomical distributions, and associated differences of pathological grading. During a three-year period, eighty four out of 405 skin specimens of dogs mainly received at the Veterinary Faculty of Montevideo from private clinics were mast cell tumors. Mix-breed dogs were mostly affected, followed by Labrador Retrievers, Boxers, Pit bulls and Golden Retrievers. Age of patients ranged from 3 to 15 years (median 7.9), and the incidence in females was slightly higher than in males. Tumors were more frequent in the trunk, followed by extremities, scrotum and neck. The majority of specimens were of high malignancy.(AU)

Epidemiology of Canine Mast Cell Tumors in Uruguay

We examined in the present study main epidemiological features of canine mast cell tumors in Uruguay, principal breeds of occurrence, age, gender, anatomical distributions, and associated differences of pathological grading. During a three-year period, eighty four out of 405 skin specimens of dogs mainly received at the Veterinary Faculty of Montevideo from private clinics were mast cell tumors. Mix-breed dogs were mostly affected, followed by Labrador Retrievers, Boxers, Pit bulls and Golden Retrievers. Age of patients ranged from 3 to 15 years (median 7.9), and the incidence in females was slightly higher than in males. Tumors were more frequent in the trunk, followed by extremities, scrotum and neck. The majority of specimens were of high malignancy.

Comparison of two different vinblastine dosages for treatment of cutaneous mast cell tumor in dogs

Background: Mast cell tumors (MCT) are among the most common malignant cutaneous neoplasm in dogs with variable biologic behavior and remain a therapeutic challenge in high-grade cases. Surgery remains the primary treatment for canine MCT; however, chemotherapy and radiation therapy are commonly used to treat aggressive cases. The combination of vinblastine (VBL) at a dose of 2 mg/m² and prednisone is the classically described protocol for MCT treatment. Studies have shown the safety of higher VBL doses for dogs with MCT, but there is a lack of information regarding dose intensity and outcome as a goal after chemotherapy. This study aimed to evaluate the impact of a higher dose of VBL on MCT treatment outcome. Materials, Methods & Results: This was an observational and comparative study conducted in two different Veterinary Teaching Hospitals. Client-owned dogs with histopathological diagnosis of grade II or III MCT were selected and underwent at least four chemotherapy sessions with VBL and prednisone. The experimental group (EG) consisted of 18 dogs that received a dose of 3 mg/m² VBL treated in one institution. The control group (CG) included 31 dogs that received a dose of 2 mg/m² VBL treated at the other institution. All dogs treated in both groups had a clinical and complete blood count (CBC) evaluation performed previous the start of chemotherapy (T0) and before each weekly treatment (T1, T2, T3, and T4). After treatment, dogs in both groups were followed-up for the recurrence rate and overall survival time after diagnosis. There was no significant difference in clinical variables between EG and CG. During treatment, dogs of EG showed a significant reduction in erythrocyte, hemoglobin, and hematocrit values between T0 and T1, T2, T3, and T4 (P < 0.001). Comparatively, the CG showed significant reduction in hemoglobin (P = 0.02) and total leucocytes (P = 0.001) values in the same period. Despite these findings, these hematological...

Ancillary techniques on the evaluation of canine cutaneous mast cell tumors from Brazil / Técnicas auxiliares avaliação de mastocitomas cutâneos caninos do Brasil

The use of histologic classification by a 2-tier grading system only, immunohistochemistry (IHC) for KIT and Ki-67 and polymerase chain reaction (PCR) for internal tandem duplications (ITD) on exon 11 has improved the prognostication of canine cutaneous mast cell tumors (CCMTs) particularly in the United States. However, these techniques are not commonly used in most Brazilian laboratories. Likewise, no studies, to date, have investigated the occurrence of ITD in CCMTs from the country. Thus, this study tested the 2-tier grading system, the immunohistochemistry for KIT and Ki-67 and the PCR for exon 11 in a group of Brazilian CCMTs with the goal of investigating the applicability of these tests in a Brazilian laboratory. Of the 39 CCMTs, 69.2% (27/39) were identified as low-grade and 30.8% (12/39) as high-grade by a 2-tier grading system. All tumors had a KIT expression pattern II, and 30.6% (11/36) had a high growth fraction (Ki-67). PCR amplification was successful in four of the 11 tumors examined. Two of these (50%) were positive for ITD. This study highlights the importance of using auxiliary techniques in the CCMT evaluation, identifies limitations and confirms the applicability of these methods on a routine diagnostic basis in Brazil. Our results will help to improve the prognostication of CCMTs in Brazilian diagnostic laboratories, encouraging the use of supplementary methods.(AU)

O uso de classificação histológica por um novo sistema de graduação que utiliza apenas duas categorias, imuno-histoquímica (IHQ) para KIT e Ki-67 e reação de polimerase em cadeia (PCR) para mutações (duplicações internas) no éxon 11 tem melhorado a avaliação do prognóstico de mastocitomas cutâneos caninos (MCCs), particularmente nos Estados Unidos. No entanto, essas técnicas são ainda pouco utilizadas em laboratórios brasileiros e, até então, nenhum estudo investigou a prevalência de duplicações internas (DIs) em MCCs do país. Este estudo testou o novo sistema de graduação histológica de duas categorias, a imuno-histoquímica para KIT e Ki-67 e o PCR para exon 11 em um grupo de MCCs brasileiros, com o objetivo de investigar a aplicabilidade desses métodos em um laboratório brasileiro. De 39 MCCs, 69,2% foram identificados como sendo de baixo grau e 30,8% como de alto grau. Todos tiveram um padrão II de expressão de KIT, e 30,6% (11/36) tiveram uma alta contagem para Ki-67. A amplificação foi bem-sucedida em quatro dos 11 tumores examinados. Dois destes (50%) foram positivos para DIs. Este estudo ressaltou a importância do uso de técnicas auxiliares na avaliação de MCCs, identificou limitações e confirmou a aplicabilidade desses métodos em uma rotina de diagnósticos no Brasil. Esses resultados irão auxiliar na melhor avaliação prognóstica dos MCCs em laboratórios brasileiros, encorajando o uso de métodos suplementares neste processo.(AU)

AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DA VIA PD-1/PDL-1 E DAS PROTEÍNAS CTLA-4, RANK-RANK-L E IFN-y EM MASTOCITOMAS CUTÂNEOS DE ALTO GRAU EM CÃES: NOVAS PERSPECTIVAS DE USO DA IMUNOTERAPIA

Os mastócitos caninos são considerados os tumores malignos cutâneos mais frequentes. São potencialmente metastáticos. A escolha do tratamento dependerá da presença ou ausência dos fatores prognósticos negativos, incluindo metástases dos linfonodos regionais, entretanto, até o momento não existe um marcador prognóstico aplicado em linfonodos que pudesse estar associado aos demais fatores prognósticos. A imunoterapia em medicina veterinária está sendo desenvolvida recentemente. Os pontos de controle imunológicos (CTLA-4, PD-1 / PD-L1) desempenham um papel vital na inibição das respostas imunes e na promoção da auto-tolerância através da modulação da atividade das células T, ativando a apoptose de células T específicas do antígeno e inibindo a apoptose de células T regulatórias. Estratégias terapêuticas que modulam o microambiente tumoral e reforçam a migração de células T para o tumor são fundamentais no controle de diversos tipos de câncer. Uma dessas estratégias é o uso de moduladores da imunidade inata, como os agonistas do receptor toll-like (TLRs). Nesse cenário, a nanoimunoterapia Onco- Therad induz a via de sinalização do interferon mediada por TLR4, resultando em potentes efeitos antitumorais. Além disso, a inibição da via de sinalização RANK / RANK-L regulou negativamente a expressão de PD-1 / PD-L1 no microambiente tumoral. O objetivo deste estudo é avaliar a expressão dos checkpoints e anticorpos RANK - RANK-L e IFN- em MCT de alto grau e correlacionados com a expressão de PD-1 / PD-L1 em linfonodos associada a características clínicas.

Canine mast cell tumors (MCTs) being considered the most frequent cutaneous malignant tumor. Are potentially metastatic. The choice of treatment will depend of the presence or absence of negative prognostic factors, including regional lymph nodes metastasis, however, until now does not exist a prognostic marker applied in lymph nodes that could be associated with the others prognostic factors. Immunotherapy in veterinary medicine recently being developed. The immune checkpoints (CTLA-4 , PD-1/PD-L1) plays a vital role in inhibiting immune responses and promoting self-tolerance through modulating the activity of T-cells, activating apoptosis of antigen-specific T cells and inhibiting apoptosis of regulatory T cells. Therapeutic strategies that modulate the tumor microenvironment and reinforce the migration of T cells to the tumor are fundamental in the control of several types of cancers. One of these strategies is the use of innate immunity modulators, such as agonists of toll-like receptor (TLRs). In this scenario, OncoTherad nano-immunotherapy induces TLR4-mediated interferon signaling pathway, resulting in potent antitumor effects. Also, inhibition of RANK/ RANK-L signaling pathway downregulated PD-1/PD-L1 expression on tumor microenvironment. The main of this study is evaluate the expression of checkpoints and antibodies RANK - RANK-L and IFN- in MCT high grade and correlated with the expression of PD-1/PD-L1 in lymph nodes associated with clinical characteristics.

Immunohistochemical and Morphopathological Features of Multiple Cutaneous Mast Cell Tumor in a Cow

A 4 year old female Holstein cow with multiple skin lesions was referred for clinical examination. Grossly, approximately 60 discrete cutaneous nodules and masses with variable sizes ranging from 1 to 5 cm were observed on both sides of flunks, shoulders, neck, back, and mammary glands. Histopathologically, the masses were composed of non-encapsulated accumulation of neoplastic round cells contained moderate to abundant amounts of finely eosinophilic granules in the cytoplasm. Cellular or nuclear pleomorphism and mitotic figures were not remarkable. Metachromasia was seen in cytoplasmic granules stained with toluidine blue. In the immunohistochemical staining, the neoplastic cells were positive for vimentin and c-kit. No immunoreactivity was seen for cytokeratin and HMB - 45. Based on these findings, multiple cutaneous mast cell tumor was diagnosed. Immunohistochemical features of mast cell tumor have not been reported previously in cattle.

Immunohistochemical and Morphopathological Features of Multiple Cutaneous Mast Cell Tumor in a Cow

A 4 year old female Holstein cow with multiple skin lesions was referred for clinical examination. Grossly, approximately 60 discrete cutaneous nodules and masses with variable sizes ranging from 1 to 5 cm were observed on both sides of flunks, shoulders, neck, back, and mammary glands. Histopathologically, the masses were composed of non-encapsulated accumulation of neoplastic round cells contained moderate to abundant amounts of finely eosinophilic granules in the cytoplasm. Cellular or nuclear pleomorphism and mitotic figures were not remarkable. Metachromasia was seen in cytoplasmic granules stained with toluidine blue. In the immunohistochemical staining, the neoplastic cells were positive for vimentin and c-kit. No immunoreactivity was seen for cytokeratin and HMB - 45. Based on these findings, multiple cutaneous mast cell tumor was diagnosed. Immunohistochemical features of mast cell tumor have not been reported previously in cattle.(AU)

Use of masitinib mesylate as an adjuvant treatment of metastatic canine mast cell tumor / Utilização do mesilato de masitinibe no tratamento adjuvante do mastocitoma canino metastático

Background: The proliferative disorders of mast cells include, in addition to mast cell tumor, systemic mastocytosis and myeloid leukemia of mast cells. Surgery is the treatment of choice for tumors in the skin, in regions which allow wide excision but adjuvant treatments should be performed in selected patients. However, the use of adjuvant chemotherapy remains empirical, due to the absence of controlled studies. Despite the relevance of the use of tyrosine kinase inhibitors for the treatment of mast cell tumors, studies with these drugs have focused primarily on neoadjuvant scenery. Case: A 13-year-old male Poodle dog, weighing 4.6 kg, was presented with bilateral increase in inguinal lymph nodes and a vesicular cutaneous lesion, in the inguinal region, 75 days after surgery for the removal of a scrotum grade II mast cell tumor. Patient was admitted for surgery and the tissues removed were sent for pathological examination that allowed the diagnosis of grade II mast cell tumor and metastasis in all inguinal lymph nodes. The immunohistochemical study for CD117 revealed an aberrant expression of KIT receptor (KIT II), while the PCR for mutations in exon 11 of c-KIT gene revealed internal tandem duplications. The patient underwent a session of chemotherapy with lomustine, however it had serious side effects that resulted in discontinuation of treatment, opting for utilization...(AU)

Análise de sobrevida e fatores prognósticos de cães com mastocitoma cutâneo / Survival analyses and prognostic markers in canine cutaneous mast cell tumors

O mastocitoma é a neoplasia cutânea maligna de maior frequência em cães. Apesar do estudo e do desenvolvimento de diversos marcadores prognósticos na tentativa de prever o comportamento biológico deste tipo de neoplasia, a graduação histológica continua sendo utilizada como principal delineador prognóstico para os animais acometidos, mesmo não conseguindo prever o comportamento de mastocitomas de diferenciação intermediária. Diferentes marcadores de proliferação e atividade celular vêm sendo testados com resultados promissores, entretanto, em sua maioria, demandam técnicas específicas de coloração e imuno-histoquímica que, ainda hoje, são de alto custo e muitas vezes não estão facilmente disponíveis. O índice mitótico é um método indireto de mensuração da atividade proliferativa celular, que pode ser contabilizado em uma lâmina comum de avaliação histológica e estudos vêm determinando-o como importante marcador prognóstico para o mastocitoma canino. Dada a recente publicação sugerindo nova graduação em dois graus (alto e baixo) e indisponibilidade das técnicas específicas utilizadas na determinação de outros fatores prognósticos, objetivou-se avaliar o poder prognóstico das diferentes classificações, associando-as à sobrevida destes animais e comparando com o índice mitótico. Apesar de isoladamente ambas as classificações histológicas apresentarem associação com a sobrevida (P<.001) dos animais acometidos, na análise multifatorial nenhuma foi significativamente associada com a sobrevida (P>0,05). O índice mitótico foi o fator prognóstico mais confiável para sobrevida, independente do ponto de corte utilizado (P<0,05), principalmente para os mastocitomas grau 2 de Patnaik et al. (1984), que apresentam comportamento biológico variado, sendo também associado à ocorrência de recidivas, tanto locais como distantes, e de síndromes paraneoplásicas (P<0,05). Conclui-se ser o índice mitótico o fator prognóstico mais significante, na ausência de técnicas específicas mais avançadas. Preconiza-se seu uso associado às graduações histológicas, visando maior poder prognóstico.(AU)

Mast cell tumor (MCT) is the most common malignant cutaneous neoplasm in dogs. Even with several prognostic markers being studied, in attempt to previse the biological behavior of these tumors, the histological grading is still commonly used to predict behavior, however, it is not significant to predict intermediately differentiated MCT behavior. Different prognostic and cell proliferation markers are being tested with promising results however, the majority of then requires specific staining and immunohistochemical techniques that even nowadays are expensive and not suitable for all veterinarians. Mitotic index is an indirect measure of cell proliferation and it can be established in a common histological microscope slide, and studies indicate it as an important prognostic marker for MCT in dogs. Given the recent publication of the novel two-tier histologic grading system, this study objective to evaluate the prognostic value of the different grading systems associating with survival and compare it with the mitotic index. Even though both grading systems associate with survival in the univariable analyses (P<.001), at the multivariable analyses neither was associated with survival (P>0,05), and the mitotic index was the most significant prognostic factor for survival, regardless of the cut-off point used (P<0,05), especially when Patnaik grade 2 tumors with unpredictable biological behavior were analyzed. The mitotic index was also significantly associated with both local and distant reccurence and paraneoplastic syndrome. In this study, mitotic index was the most significant prognostic factor, in the absence of specific staining and advanced immunohistochemical techniques, and its use is indicated in association with both histological grading system, aiming to add higher prognostic value possible.(AU)

Use of masitinib mesylate as an adjuvant treatment of metastatic canine mast cell tumor / Utilização do mesilato de masitinibe no tratamento adjuvante do mastocitoma canino metastático

Background: The proliferative disorders of mast cells include, in addition to mast cell tumor, systemic mastocytosis and myeloid leukemia of mast cells. Surgery is the treatment of choice for tumors in the skin, in regions which allow wide excision but adjuvant treatments should be performed in selected patients. However, the use of adjuvant chemotherapy remains empirical, due to the absence of controlled studies. Despite the relevance of the use of tyrosine kinase inhibitors for the treatment of mast cell tumors, studies with these drugs have focused primarily on neoadjuvant scenery. Case: A 13-year-old male Poodle dog, weighing 4.6 kg, was presented with bilateral increase in inguinal lymph nodes and a vesicular cutaneous lesion, in the inguinal region, 75 days after surgery for the removal of a scrotum grade II mast cell tumor. Patient was admitted for surgery and the tissues removed were sent for pathological examination that allowed the diagnosis of grade II mast cell tumor and metastasis in all inguinal lymph nodes. The immunohistochemical study for CD117 revealed an aberrant expression of KIT receptor (KIT II), while the PCR for mutations in exon 11 of c-KIT gene revealed internal tandem duplications. The patient underwent a session of chemotherapy with lomustine, however it had serious side effects that resulted in discontinuation of treatment, opting for utilization...

Tomografia computadorizada de mastocitomas em cães: avaliação pré e pós-tratamento quimioterápico / Computed tomography of mast cell tumors in dogs: assessment before and after chemotherapy

Foram avaliados, por meio da tomografia computadorizada, 19 cães com mastocitomas tratados com quimioterapia. Aspectos como contorno, atenuação, realce pós-contraste e presença de clivagem com estruturas adjacentes foram avaliados. Aplicaram-se os critérios RECIST e a mensuração volumétrica das lesões para se avaliar a resposta ao tratamento. Quanto à atenuação, os mastocitomas se mostraram como lesões homogêneas ou heterogêneas, com tendência a limites definidos e contornos regulares e apresentaram realce moderado após administração do contraste iodado intravenoso. Os métodos RECIST e a mensuração volumétrica apresentaram uma excelente concordância na classificação da resposta terapêutica, fornecendo um bom parâmetro da resposta ao tratamento instituído. O exame de tomografia computadorizada se mostrou útil na delimitação do tumor e importante ferramenta no planejamento das margens cirúrgicas. (AU)

Nineteen dogs with mast cell tumors treated with chemotherapy were evaluated by computed tomography (CT). Were evaluated aspects related to contours, attenuation, post-contrast enhancement and presence of cleavage with adjacent structures. The RECIST criteria and volumetric measurement of lesions were performed to assess the response to treatment. The mast cell tumors presented a homogeneous or heterogeneous attenuation, presented more frequently a well delineated and regular contours and moderate enhancement after intravenous administration of the iodinated contrast media. The methods RECIST and volumetric measurements showed an excellent agreement to the classification of therapeutic response, providing a good parameter of the response to treatment. The CT examination proved to be useful in the delimitation of the tumor and an important tool for planning of surgical margins. (AU)

Investigação do dicloroacetato de sódio (DCA) para tratamento de mastocitomas caninos: estudos in vitro

O efeito Warburg ou glicólise aeróbica é o fenômeno em que células tumorais convertem a glicose a ácido lático mesmo na presença de oxigênio, diferentemente das células normais do organismo que realizam o ciclo de Krebs e a fosforilação oxidativa. O dicloroacetato de sódio (DCA) ativa a piruvato desidrogenase (PDH), resultando no aumento de piruvato dentro da mitocôndria e no restabelecimento do metabolismo normal da respiração celular. Estudos apontam que a associação de DCA com metformina ou omeprazol potencializam esse efeito. Os mastocitomas caninos são neoplasias originárias de mastócitos, sendo bastante prevalente entre os cães, por isso a importância de averiguar novas terapias para esta doença. O objetivo geral deste projeto foi investigar o efeito do DCA em mastocitomas caninos, por meio da realização de ensaios in vitro. Também foram investigados os efeitos do tratamento com DCA associado ao omeprazol ou merformina em linhagens de mastocitoma canino. As linhagens de mastocitoma canino utilizadas, grau 2 e 3, foram estabelecidas no Laboratório de Oncologia Experimental e Comparadas da FMVZ/USP e foram cultivadas em meio AIM-V. As células foram tratadas com diversas concentrações de DCA (de 0,31 a 100mM). O DCA 0.1, 0.5, 1.0, 5, 10 e 20mM foi também testado em associação com metformina (0.02, 0.2 e 2mM) ou com omeprazol (0.02, 0.1 e 0.2mM). Após os tratamentos, foi realizado ensaio para analisar a viabilidade celular utilizando o método do cristal violeta, com leituras em 3 e 5 dias. Ao contrário do que era esperado, o tratamento com dicloroacetato isolado ou com associações aumentou a população de células neoplásicas principalmente nas concentrações de 10 e 20mM. Num experimento realizado com três linhagens diferentes de mastocitomas caninos foram utilizadas concentrações de 10 a 100mM de DCA, e mostrou que a partir de 60mM há diminuição da viabilidade celular, sendo que o efeito se intensifica com o aumento das concentrações de DCA. Concluímos que o tratamento com DCA isoladamente, em concentrações de até 60mM, ou as associações com metformina e omeprazol não foram eficazes em diminuir a população de células de mastocitomas canino de graus 2 e 3 in vitro. Consideramos que a realização deste estudo foi importante para obter informações sobre os efeitos do DCA e associações em mastocitomas caninos. Os resultados deverão ser divulgados e evitarão o uso indiscriminado deste fármaco, cujas consequências poderiam ser adversas para os cães portadores de mastocitomas.

The Warburg effect or aerobic glycolysis is a phenomenon in which tumor cells convert glucose to lactic acid in the presence of oxygen, unlike normal cells in the body that perform the Krebs cycle and oxidative phosphorylation. Sodium dichloroacetate (DCA) activates pyruvate dehydrogenase (PDH), resulting in increased pyruvate within the mitochondria and in the reestablishment of normal metabolism of cellular respiration. Studies indicate that the association of DCA with metformin or omeprazole potentiate this effect. Canine mastocytomas are neoplasms originating from mast cells, being quite prevalent among dogs, so the importance of investigating new therapies for this disease. The general objective of this project was to investigate the effect of DCA on canine mast cell tumors, by performing in vitro tests. The treatment with dca DCA was then associated with omeprazole or merformin in canine mastocytoma cell lines. The canine mast cell tumor lines used, grade 2 and 3, were established in the Laboratory of Experimental and Comparative Oncology of FMVZ / USP and were cultured in AIM-V medium.. Treatment with DCA alone was performed with varying concentrations (0.31 mM to 100 mM). The associations were performed with 0.1, 0.5, 1.0, 5, 10 and 20 mM of DCA with 0.02, 0.2 and 2 mM of metformin or with 0.02, 0.1 and 0.2 mM of omeprazole. After the treatments, an assay was performed to analyze cell viability using the crystal violet method, with readings at 3 and 5 days. Contrary to our expectations, treatment with dichloroacetate alone or with combinations increased the population of neoplastic cells mainly in the concentrations of 10 and 20mM. In an experiment with three different canine mastocytomas cell lines treated with DCA (10 to 100mM of DCA.), it was found that from 60mM the cell viability was decreased. This effect was intensified with increasing DCA concentrations. We conclude that treatment with DCA alone, at concentrations up to 60mM, or associated with metformin and omeprazole were not effective to decrease the population of canine mast cell tumors of grades 2 and 3 in vitro. The results should be disclosed and will avoid the indiscriminate use of this drug, the consequences of which could be adverse for dogs with mastocytomas.

Estudo crítico de mastocitomas caninos e avaliação termográfica de técnicas de anaplastia.

Em grande parte das vezes, a excisão cirúrgica apropriada de mastocitomas em cães requer a realização de técnicas de reconstrução para o fechamento da ferida resultante, e o seu conhecimento se torna essencial para todo o cirurgião. Alcançar margens livres tem uma influência significativa sobre o tempo de sobrevida, e deve ser o objetivo para a maioria dos pacientes. A avaliação da evolução de retalhos cutâneos e a mensuração da aderência e neovascularização do tecido no local intencionado é extremamente importante para diagnóstico precoce de falhas na implantação do tecido. Não há evidências em literatura de trabalhos relacionados a avaliação da perfusão tecidual de retalhos cutâneos em animais de companhia, com o uso de técnicas de termografia. Neste trabalho, foram obtidas imagens, do tipo padrão e do tipo termográficas, de 63 mastocitomas, provenientes de 60 cães. A classificação histológica determinada neste estudo foi significativa na influência à sobrevida (p<0,001). A pontuação prognóstica (0-13) aqui proposta, adaptada de Melo e colaboradores (2015) teve forte associação com sobrevida (p<0,001). A presença de metástase foi observada em 17% dos casos, e de recidiva em 14%. Em ambas as ocorrências 90% dos animais acometidos vieram a óbito. Por meio de analises estatísticas comprovamos a associação entre esses dois fatores (metástase e recidiva) com o tempo de sobrevida (em ambas p<0,001). Dentro do nosso estudo foi observado que, em tumores com a presença de AIM (agrupamentos independentes de mastócitos) há um risco de mortalidade 8,57 vezes maior do que animais com margens livres ou mesmo comprometidas. Esse risco é inclusive maior do que o risco de óbito em animais com recidiva (HR 5,13). VEGF-A se mostrou de significância estatística perante sobrevida; confirmando estudo anteriores e sugerido mais uma vez a inclusão desse marcador no perfil prognóstico do mastocitomas. Todas as formações apresentadas neste estudo tiveram análise termográfica concluída e documentada. Nota-se que mesmo quando considerado ponto central ou quando considerada toda área tumoral, 65 e 67% respectivamente, dos mastocitomas eram mais quentes que a pele sadia circundante. A causa destas mudanças de temperatura não é totalmente compreendida, mas sugere-se que esteja associada a neoangiogênese e inflamação local (XIE et al., 2004). Por meio das análises estatísticas é possível afirmar que as regiões tumoral e não tumoral são significativamente diferentes, tanto na avaliação de ponto central (SpT e SPNT) como na avaliação da área (AT e ANT) do tumor e pele circundante sadia (p < 0,001). Ainda por meio de termografia, pudemos estabelecer que retalhos cutâneos pediculados apresentaram chance de deiscência 5,57 vezes maior do que o uso de outras técnicas de anaplastia e deslizamento de tecidos. Por fim, conseguimos estabelecer uma curva térmica de evolução das feridas da nossa população do estudo, bem como diferenciar o comportamento térmico quando há ou não deiscência. Isso pode ser útil a estudos futuros ou mesmo à prática clínico-cirúrgica, de modo a comparar a evolução de pacientes com as curvas previamente aqui estabelecidas, sendo factível assim prever a cicatrização da ferida. Acreditamos, por meio deste estudo, que a análise termográfica da evolução de retalhos cutâneos pode ser usada como correspondente a perfusão tecidual, conforme indicado em literatura e ser usada como ferramenta de reconhecimento precoces de deiscência da ferida cirúrgica, conforme proposto por diversos autores (SALMI et al., 1995; EICHHORN et al., 2009; WEERD et al., 2009; WEERD et al., 2011).

In most cases, proper surgical excision of mast cell tumors in dogs requires reconstructive techniques for the closure of the resulting wound, and it knowledge becomes essential for the surgeon. Achieving free margins has a significant influence on survival time, and should be the goal for most patients. The evaluation of the evolution of cutaneous flaps and the measurement of tissue adherence and vascularization at the intended site is extremely important for early diagnosis of defects in tissue implantation. There is no evidence in literature of studies related to evaluate tissue perfusion of skin flaps in companion animals, using thermography techniques. In this study, standard images and thermographic ones were obtained from 63 mast cell tumors from 60 dogs. The histological classification of the tumors in this study was significant in survival time (p <0.001). The prognostic score (0-13) proposed here, adapted from Melo et al. (2015), had also strong association with survival time (p <0.001). The presence of metastasis was observed in 17% of cases, and relapse in 14%. In both cases, 90% of the affected animals died. By means of statistical analyzes, we verified the association between these two factors (metastasis and relapse) in survival time (for both p <0.001). Within our study it was observed that in tumors with the presence of AIM (independent mast cell groups) there is a mortality risk 8.57 times higher than animals with free or even compromised margins. This risk is even greater than the risk of death in animals with relapse (HR 5,13). Also, VEGF-A was shown to be statistically significant at survival time; confirming previous studys and leading us to suggets once again the inclusion of this marker in the prognostic profile of mast cell tumors. All the tumors presented in this study had a thermographic analysis completed and documented. It is noted that even when considered central point or tumor area, 65 and 67% respectively, of the mast cell tumors were warmer than the surrounding healthy tissue. The cause of these temperature changes is not fully understood, but it is suggested to be associated with neoangiogenesis and local inflammation (XIE et al., 2004). By means of the statistical analyzes it is possible to affirm that the tumoral and non-tumoral regions are significantly different, as well as in the evaluation of the central point (SpT and SPNT) and in the evaluation of the tumoral area (TA and ANT) im comparison with healthy surrounding skin (p <0.001 ). Also through thermography, we could establish that skin flaps had a chance of dehiscence 5.57 times greater than the use of other techniques of reconstructive surgery. Finally, we were able to establish a thermal curve of evolution of the wounds of our study population, as well as to differentiate the thermal behavior when there is or not dehiscence. This may be useful for future studies or even clinical-surgical practice, in order to compare the evolution of patients with the curves previously established here, and it is feasible to predict wound healing. We believe, by means of this study, that the thermographic analysis of the evolution of cutaneous flaps can be used as corresponding to tissue perfusion, as indicated in the literature and be used as an early recognition tool for surgical wound dehiscence, as proposed by several authors (SALMI et al., 1995; EICHHORN et al., 2009; WEERD et al., 2009; WEERD et al., 2011).

Valor prognóstico de marcadores imunohistoquímicos em mastocitomas cutâneos caninos

O mastocitoma (MCT) é um dos tumores mais frequentes em cães, compreendendo de 16 a 21% de todas as neoplasias cutâneas nesta espécie. A graduação histológica é considerada o padrão ouro na avaliação prognóstica dos MCTs, porém seu comportamento biológico variado ressalta a necessidade de métodos complementares para uma avaliação precisa. Atualmente, identifica-se na literatura indexada uma série de estudos propondo novos marcadores moleculares como fatores prognósticos em MCTs caninos, porém poucos estão consolidados na rotina clínica e/ou diagnóstica. Assim, este trabalho teve como objetivo principal investigar o valor prognóstico de marcadores imunohistoquímicos publicados em artigos científicos através de uma revisão sistemática e meta-análise, assim como avaliar o valor prognóstico do fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) em MCTs caninos. O processo de revisão sistemática se iniciou com 124 estudos identificados em 5 bases de dados e, após a aplicação dos critérios de inclusão e exclusão, 7 artigos foram selecionados para a meta-análise. Os resultados demonstraram que o marcador de proliferação celular Ki67 pode ser considerado um bom fator prognóstico nos MCTs caninos. Porém, a baixa qualidade dos artigos e a insuficiência de dados publicados impossibilitaram a avaliação de outros marcadores, incluindo o receptor de tirosina quinase KIT. No estudo retrospectivo, a imunoexpressão dos marcadores KIT, Ki67 e VEGF foi avaliada em MCTs cutâneos de 43 cães. O marcador Ki67 apresentou correlação significativa com a taxa de mortalidade e sobrevida e o marcador KIT apresentou diferença significativa de sobrevida entre o padrão membranoso e citoplasmático difuso, porém não foram observadas diferenças no VEGF. Em conclusão, estes estudos validaram os marcadores de proliferação celular Ki67 e o receptor de tirosina quinase KIT como principais fatores prognósticos em MCTs caninos, enquanto o VEGF não foi indicado. Por fim, a revisão sistemática permitiu uma análise crítica da qualidade dos trabalhos publicados na área, ressaltando a importância da padronização de metodologias analíticas e da documentação completa de dados clínicos, patológicos e estatísticos empregados em estudos controlados na oncologia veterinária.

Mast cell tumor (MCT) is one of the most frequent tumors in dogs, accounting for 16 to 21% of all cutaneous tumors in this species. Histological grading is considered the standard evaluation method to access the prognostic of MCTs. However, its varied biological behavior highlights the need of complementary methods for an accurate evaluation. Currently, a number of studies proposing new molecular markers as prognostic factors in canine MCTs is identified in the indexed literature, but few are consolidated in the clinical and/or diagnostic routine. The aim of this study was to investigate the prognostic value of immunohistochemical markers published in scientific articles through a systematic review and meta-analysis, as well as to evaluate the prognostic value of vascular endothelial growth factor (VEGF) in canine MCTs. The systematic review process has started with 124 studies identified in 5 databases and, after applying the inclusion and exclusion criteria, 7 articles were selected for the meta-analysis. The results demonstrated that the cell proliferation marker Ki67 can be considered a good prognostic factor in canine MCTs. However, poor quality of the articles and insufficient published data made it impossible to evaluate other markers, including the tyrosine kinase receptor KIT. In the retrospective study, immunoexpression of KIT, Ki67 and VEGF markers was evaluated in cutaneous MCTs from 43 dogs. The Ki67 marker showed a significant correlation with the mortality and survival rates, and the KIT marker showed a significant difference in survival between the membranous and diffuse cytoplasmic patterns groups, but no differences were observed in VEGF. In conclusion, these studies validated the cell proliferation marker Ki67 and the KIT tyrosine kinase receptor as major prognostic factors in canine MCTs, whereas VEGF was not indicated. Finally, the systematic review allowed a critical analysis of the quality of the published studies in this area, emphasizing the importance of the standardization of analytical methodologies and the complete documentation of clinical, pathological and statistical data used in controlled studies in veterinary oncology.

Estudo do valor prognóstico de índices proliferativos e apoptóticos em mastocitomas cutâneos caninos

Mastocitoma é uma das principais neoplasias cutâneas em cães, caracterizada por uma multiplicação anormal de mastócitos, com comportamento biológico muito variável. Os principais fatores prognósticos incluem grau histopatológico, marcadores de proliferação, como índice mitótico, Ki67 e AgNOR, além de estadiamento clínico. Diversos estudos concentram-se na avaliação da relação da apoptose com a oncogênese e seu papel no prognóstico. Em condições fisiológicas, a apoptose ocorre na maturação e senescência celular, mantendo a homeostasia dos diferentes tecidos, removendo do organismo células que tenham sofrido alguma mutação. A genética da apoptose pode ser interrompida frente à ocorrência de mutações, levando à perda do controle na proliferação celular, o que resulta no desenvolvimento de uma neoplasia. O presente estudo avaliou a ocorrência de apoptose por meio de ensaio TUNEL em mastocitomas cutâneos caninos, com o objetivo de testar sua relação com as graduações histopatológicas e o valor prognóstico quanto à sobrevida pós-cirúrgica, assim como compará-lo à expressão imuno-histoquímica de caspase 3 e Ki67. Quarenta e quatro mastocitomas cutâneos caninos, provenientes de 36 cães, foram submetidos à avaliação histopatológica para graduação quanto à diferenciação tumoral, à análise imuno-histoquímica para avaliação das expressões de Ki67 e caspase 3. A marcação positiva para TUNEL não mostrou relação com grau histopatológico, nem foi um bom indicador para sobrevida ou mortalidade em função da doença. Apesar disso, houve correlação positiva entre os índices apoptóticos.

Mast cell tumor is a very common neoplasm in dogs and characterized by an abnormal proliferation of mast cells, with variable biological behavior. The main prognostic factors include histological grade, proliferation markers, such as mitotic index, Ki67 and AgNOR, and clinical staging. Several studies focus in the relation of apoptosis and oncogenesis and its role in prognostication. In physiological conditions, apoptosis occurs due to aging and cell senescence, maintaining the homeostasis of different tissues by removing mutated cells. The genetics of apoptosis can be interrupted by mutations, leading to loss of control in cellular proliferation, and resulting in cancer development. This study evaluated the occurrence of apoptosis by TUNEL assay in canine cutaneous mast cell tumors, compared it with histopathological grading and the immunohistochemical expressions of caspase-3 and Ki67, as well as tested its prognostic value for post-surgical survival. Forty-four canine cutaneous mast cell tumors, from 36 dogs were submitted to histopathologic and immunohistochemical analyses. Positive staining for TUNEL showed no relation with histological grade, and was not considered a good indicator for survival or mortality. Nevertheless, a positive correlation between the apoptotic indexes was found.

Expressão sérica de kit como um potencial marcador tumoral em mastocitomas cutâneos caninos

O presente trabalho foi feito para estudar o potencial da expressão de RNAm de c-kit no soro de cães portadores de mastocitomas (MCT) como um marcador tumoral dessas neoplasias, utilizando a transcrição reversa e a reação em cadeia da polimerase quantitativa (RT-qPCR). O estudo foi realizado com 48 animais, sendo dez livres de neoplasia, usados como grupo controle, e 38 portadores de MCT. As amostras de sangue desses pacientes foram obtidas por punção venosa e criopreservadas em tubos contendo EDTA. O RNA total foi extraído, realizada a transcrição reversa do cDNA e a PCR quantitativa. O diagnóstico foi feito por citologia ou histopatologia, sendo nesses casos procedida a graduação e a pesquisa da imunoexpressão de KIT. O nível de transcrição de c-kit foi normalizado usando a expressão de 2- microglobulina, sendo a expressão relativa calculada pelo método CT. A expressão de c-kit foi detectada em 72,9% das amostras, incluindo todas as amostras do grupo controle e 25 dos portadores MCT, tratados ou não, com superexpressão em 76% dos casos (p < 0,01,teste de Mann-Whitney). Nos seres humanos com mastocitoma os níveis de KIT, em particular, parecem refletir a extensão e a gravidade da doença. Neste trabalho observamos que a expressão e quantificação do c-kit no sangue periférico destes cães é um método promissor para identificar portadores de MCT, submetidos ou não à quimioterapia.

The present work was carried out to study the potential of serum expression of KIT mRNA as a tumoral marker in mast cell tumor (MCT), using reverse transcription and quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) on blood samples. This study was performed with 48 animals, 10 without tumoral disease and 38 dogs with MCT. Blood was obtained by venopuncture, and cryopreserved in tubes containing EDTA. The total RNA was extracted, reverse transcribed in cDNA and submitted to qPCR. Fifteen dogs underwent surgical excision of the tumor and the diagnosis of MCT was histologically confirmed, the lesions graduated and the immunoexpression of KIT evaluated. The level of KIT transcript was standardized using the expression of beta2-microglobulin, and the relative expression calculated by CT method. The expression of KIT was detected in 72,9% of the samples, including all the control samples and 25 from MCT carriers, treated or not, with overexpression in 76% of the cases (p < 0,01, Mann-Whitney test). In humans with mastocytosis soluble KIT levels, in particular, seem to reflect the extent and severity of disease. Here we observed that peripheral blood KIT expression quantification is a promising method in order to identify MCT carriers, submitted or not to chemotherapy.

Avaliação de macrófagos e eosinófilos associados ao tumor como fatores prognósticos em mastocitomas cutâneos caninos

O mastocitoma é a neoplasia cutânea mais comum em cães. Acredita-se que as células inflamatórias associadas ao tumor desempenham papéis importantes no comportamento biológico do mastocitoma. Este estudo teve como objetivo verificar a presença de macrófagos associados ao tumor (TAMs) e eosinófilos na região intratumoral e comparar à graduação histopatológica e à evolução clínica dos casos para avaliar se são marcadores prognósticos para MCTs cutâneos caninos. Foram avaliados 38 MCTs provenientes de 30 animais submetidos à cirurgia, sem nenhuma outra terapia complementar. Os tumores foram submetidos à análise imuno-histoquímica para detecção de CD68 e à contagem de eosinófilos em lâminas coradas por hematoxilina e eosina. Os resultados foram comparados à classificação histopatológica segundo os critérios de Patnaik et a. (1984) e Kiupel et al. (2011) e à sobrevida e mortalidade em função do tumor. O número de TAM detectado pela imunomarcação de CD68 não apresentou diferenças significativas entre os graus histopatológicos, assim como não foi um indicador de mortalidade em função do tumor, nem para sobrevida, o mesmo sendo observado para a contagem de eosinófilos. Os números de TAMs e eosinófilos não apresentaram correlação. Nossos resultados sugerem que a presença de TAM e eosinófilos em MCTs cutâneos caninos não são bons indicadores prognósticos para esta doença.

Mast cell tumors are the most common skin cancer in dogs. It is believed that tumor-associated inflammatory cells play important roles in biological behavior of this neoplasm. This study aimed to verify the presence of the tumor associated macrophages (TAMs) and eosinophils in the intratumoral region in comparison with the histopathologic grading and clinical evolution of cases in order to assess their prognostic value for canine cutaneous MCTs. Thirty-eight MCTs from 30 dogs treated by surgery with no complementary therapy were investigated. The tumors were submitted to immunohistochemical analysis for CD68 detection and eosinophil count on HE-stained slides. The results were compared with histopathological classification, according to the criteria of Patnaik et al. (1984) and Kiupel et al. (2011), and with survival and mortality due to the disease. The number of TAMs and eosinophils showed no significant differences between the histopathologic grades, as well as it was not a predictor of disease-related mortality or survival. The number of TAMs and eosinophil count showed no correlation. Our results suggest that the presence of TAMs and eosinophils in cutaneous canine MCTs are not good prognostic indicators for this disease.

Estudo Retrospectivo, Índice AgNOR e Níveis Séricos de Vitamina D em Cães com Mastocitoma

Mastocitomas são proliferações neoplásicas de mastócitos, de etiopatogênese desconhecida, que representam até 21% de todos os tumores cutâneos caninos. Este tumor possui uma grande variedade de apresentações e comportamentos biológicos, os quais vão desde benignos a extremamente agressivos levando à metástase e morte. A identificação citológica do mastocitoma um método bastante recomendado para detecção inicial do tumor, é de baixo custo, pode ser realizada com o animal consciente e permite suspeitar de um tumor de alto grau conforme as características celulares. Além da graduação histológica, que é o padrão-ouro para estabelecer o prognóstico do mastocitoma, marcadores adicionais são recomendados, como a contagem de AgNOR, um indicador de proliferação celular. Adicionalmente, alguns estudos enfocam a relação entre mastocitoma e vitamina D, uma vez que mastocitomas expressam receptores de vitamina D (VDR). Assim, a finalidade desta pesquisa é caracterizar a ocorrência de mastocitoma canino diagnosticado por exame citológico na região de Santa Maria/RS, descrever um protocolo para determinação de índice AgNOR em amostras citológicas de mastocitoma e investigar a relação entre níveis de vitamina D e índice AgNOR em cães com este tumor, visto que o índice AgNOR já é consolidado como marcador prognóstico para o mastocitoma e a vitamina D vem sendo apontada como alvo de intestigação neste tumor. Em relação ao perfil de ocorrência do mastocitoma canino, neste trabalho encontraram-se resultados semelhantes aos descritos na literatura, com algumas particularidades referentes a raças e achados clínico-patológicos, permitindo o direcionamento para suspeita de mastocitoma e planejamento de intervenções terapêuticas mais adequadas para cada caso. Referente ao índice AgNOR, foi especificado um protocolo adaptado, a partir de técnicas já descritas, aplicável a amostras citológicas. Também pode-se observar que a vitamina D e o índice AgNOR em cães com mastocitoma estão correlacionados de forma negativa e moderada (P=0,011), sugerindo-se que os níveis de vitamina D sejam avaliados nos cães com este tumor. Em adição, estudos de acompanhamento de cães com mastocitoma e monitoramento de seu tempo de sobrevida são necessários para que a dosagem de vitamina D possa ser proposta como marcador prognóstico e agente terapêutico para esta neoplasia.

Mast cell tumors (MCT) are neoplastic tumors of mast cells of unknown etiopathogenesis, representing up to 21% of all canine cutaneous cancers. This tumor varies widely in biological presentations and behaviors, ranging from benign to extremely aggressive, leading to metastasis and death. The cytological identification of MCT is a highly recommended method for initial detection of the tumor, it is inexpensive, can be performed with conscious animal and allows to suspect a tumor of high degree according to the cellular features. In addition to the histological grading, which is the gold standard for establishing the prognosis of MCT, additional markers are recommended, among them the AgNOR count, an indicator of cell proliferation. Additionally, some studies focus on the relationship between MCT and vitamin D, since mast cell tumors express vitamin D receptors (VDR). Thus, the aim of this research is to characterize the occurrence of canine MCT diagnosed by cytological examination in the region of Santa Maria/RS, to describe a protocol for determining AgNOR index in cytological samples of MCT and to investigate the relationship between vitamin D levels and AgNOR index in dogs with this tumor, since the AgNOR index is already consolidated as a prognostic marker for mastocytoma and vitamin D has been reported as a target for MCT management. Regarding to the occurrence profile of this tumor, we found results similar to those described in the literature, with some peculiarities referring to breeds and clinicopathological findings, allowing to suspected of MCT and planning more appropriate therapeutic interventions for each case. Referring to the AgNOR index, a protocol adapted from techniques already described was applied to cytological samples. Also has been observed that vitamin D and AgNOR index in dogs with MCT are negatively and moderatelycorrelated (P=0,011), suggesting that vitamin D levels can be measured in dogs with this tumor. In addition, follow-up studies of dogs with MCT and monitoring their outcoming are necessary, so that the vitamin D can be proposed as a prognostic marker and therapeutic agent for this neoplasm.