Avaliação da mutagenicidade do indoxacarbe em ratos e gatos / Mutagenicity assessment of indoxacarb in rats and cats

Background: Pesticides are substances used for pest control. Due to their persistence in the environment, they can induce toxicity in humans and animals. Indoxacarb is an oxadiazine insecticide that acts against insects of the order Lepidoptera. Choice of rats and cats used in this study is based on factors such as these animals have a high count of micronucleated polychromatic erythrocytes and the product is intended for use in cats. Limited data in literature pertaining to the mutagenic effects of this product motivated this study. The aim of this study was to evaluate the effect of the micronucleus test on the mutagenicity of indoxacarb when administered in one and tenfold therapeutic doses in rats and cats.Materials, Methods & Results: Forty male Wistar rats aged 70 days and weighing 280 ± 10 g and 20 mixed breed male and female adult cats weighing 4 ± 0.2 kg were selected. These animals were obtained from the central animal facility and cattery, respectively, of the university of origin. Rats were reared in individual cages with a controlled temperature of 22°C ± 2°C, humidity of 55% ± 5% and 12-h light–dark cycle. Cats were reared in individual stalls with water and food ad libitum. Animals were randomly distributed into four groups comprising 10 rats and 5 cats in respective groups: negative control group, which received 0.9% sodium chloride solution as a single topical administration; positive control group, which received 50 mg/kg cyclophosphamide as a single intra-peritoneal (rats) or intravenous injection (cats); indoxacarb group, which received indoxacarb as a single topical dose according to the manufacturers recommendations; and high dose indoxacarb group, which also received indoxacarb in a single topical dose, but at a tenfold concentration. Rats were evaluated 24 h after indoxacarb administration. After euthanasia, rat femurs were obtained and their medullary canals were washed using fetal bovine serum.[...](AU)

Avaliação da mutagenicidade do indoxacarbe em ratos e gatos / Mutagenicity assessment of indoxacarb in rats and cats

Background: Pesticides are substances used for pest control. Due to their persistence in the environment, they can induce toxicity in humans and animals. Indoxacarb is an oxadiazine insecticide that acts against insects of the order Lepidoptera. Choice of rats and cats used in this study is based on factors such as these animals have a high count of micronucleated polychromatic erythrocytes and the product is intended for use in cats. Limited data in literature pertaining to the mutagenic effects of this product motivated this study. The aim of this study was to evaluate the effect of the micronucleus test on the mutagenicity of indoxacarb when administered in one and tenfold therapeutic doses in rats and cats.Materials, Methods & Results: Forty male Wistar rats aged 70 days and weighing 280 ± 10 g and 20 mixed breed male and female adult cats weighing 4 ± 0.2 kg were selected. These animals were obtained from the central animal facility and cattery, respectively, of the university of origin. Rats were reared in individual cages with a controlled temperature of 22°C ± 2°C, humidity of 55% ± 5% and 12-h light–dark cycle. Cats were reared in individual stalls with water and food ad libitum. Animals were randomly distributed into four groups comprising 10 rats and 5 cats in respective groups: negative control group, which received 0.9% sodium chloride solution as a single topical administration; positive control group, which received 50 mg/kg cyclophosphamide as a single intra-peritoneal (rats) or intravenous injection (cats); indoxacarb group, which received indoxacarb as a single topical dose according to the manufacturer’s recommendations; and high dose indoxacarb group, which also received indoxacarb in a single topical dose, but at a tenfold concentration. Rats were evaluated 24 h after indoxacarb administration. After euthanasia, rat femurs were obtained and their medullary canals were washed using fetal bovine serum.[...]

Evaluation of genotoxicity and cytotoxicity of water samples from the Sinos River Basin, southern Brazil

p>Some water bodies in the Sinos River Basin (SRB) have been suffering the effects of pollution by residential, industrial and agroindustrial wastewater. The presence of cytotoxic and genotoxic compounds could compromise the water quality and the balance of these ecosystems. In this context, the research aimed to evaluate the genotoxicity and cytotoxicity of the water at four sites along the SRB (in the cities of Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom and Esteio), using bioassays in fish and cell culture. Samples of surface water were collected and evaluated italic>in vitro /italic> using the italic>Astyanax jacuhiensis /italic> fish species (micronucleus test and comet assay) and the Vero lineage of cells (comet assay and cytotoxicity tests, neutral red - NR and tetrazolium MTT). The micronucleus test in fish showed no significant differences between the sampling sites, and neither did the comet assay and the MTT and NR tests in Vero cells. The comet assay showed an increase in genetic damage in the fish exposed to water samples collected in the middle and lower sections of the basin (Parobé, Campo Bom and Esteio) when compared to the upper section of the basin (Santo Antônio da Patrulha). The results indicate contamination by genotoxic substances starting in the middle section of the SRB. /p>

p>Alguns corpos dágua da Bacia Hidrográfica do Rio dos Sinos (BHRS) vêm sofrendo os efeitos da poluição por efluentes domésticos, industriais e agroindustriais. A presença de compostos citotóxicos e genotóxicos pode comprometer a qualidade da água e o equilíbrio desses ecossistemas. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a genotoxicidade e a citotoxicidade da água em quatro pontos ao longo da BHRS (Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom e Esteio), utilizando bioensaios em peixes e em cultura celular. As amostras de água de superfície foram coletadas e avaliadas italic>in vitro /italic> utilizando a espécie de peixe italic>Astyanax jacuhiensis /italic> (teste de micronúcleo e ensaio cometa) e a linhagem celular tipo Vero (ensaio cometa e os testes de citotoxicidade vermelho neutro - VN e tetrazólio MTT). O teste de micronúcleos em peixes não apresentou diferenças significativas entre os pontos de coleta, assim como o ensaio cometa e os testes VN e MTT nas células Vero. O ensaio cometa demonstrou aumento nos danos genéticos em peixes expostos às amostras de água coletadas nos trechos médio e inferior da bacia (Parobé, Campo Bom e Esteio) em relação ao trecho superior da bacia (Santo Antônio da Patrulha). Os resultados indicam contaminação por substâncias genotóxicas a partir do trecho médio da BHRS. /p>

Evaluation of genotoxicity and cytotoxicity of water samples from the Sinos River Basin, southern Brazil / Avaliação da genotoxicidade e da citotoxicidade de amostras de água da Bacia do Rio dos Sinos, sul do Brasil

Some water bodies in the Sinos River Basin (SRB) have been suffering the effects of pollution by residential, industrial and agroindustrial wastewater. The presence of cytotoxic and genotoxic compounds could compromise the water quality and the balance of these ecosystems. In this context, the research aimed to evaluate the genotoxicity and cytotoxicity of the water at four sites along the SRB (in the cities of Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom and Esteio), using bioassays in fish and cell culture. Samples of surface water were collected and evaluated in vitro using the Astyanax jacuhiensis fish species (micronucleus test and comet assay) and the Vero lineage of cells (comet assay and cytotoxicity tests, neutral red - NR and tetrazolium MTT). The micronucleus test in fish showed no significant differences between the sampling sites, and neither did the comet assay and the MTT and NR tests in Vero cells. The comet assay showed an increase in genetic damage in the fish exposed to water samples collected in the middle and lower sections of the basin (Parobé, Campo Bom and Esteio) when compared to the upper section of the basin (Santo Antônio da Patrulha). The results indicate contamination by genotoxic substances starting in the middle section of the SRB.(AU)

Alguns corpos dágua da Bacia Hidrográfica do Rio dos Sinos (BHRS) vêm sofrendo os efeitos da poluição por efluentes domésticos, industriais e agroindustriais. A presença de compostos citotóxicos e genotóxicos pode comprometer a qualidade da água e o equilíbrio desses ecossistemas. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a genotoxicidade e a citotoxicidade da água em quatro pontos ao longo da BHRS (Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom e Esteio), utilizando bioensaios em peixes e em cultura celular. As amostras de água de superfície foram coletadas e avaliadas in vitro utilizando a espécie de peixe Astyanax jacuhiensis (teste de micronúcleo e ensaio cometa) e a linhagem celular tipo Vero (ensaio cometa e os testes de citotoxicidade vermelho neutro - VN e tetrazólio MTT). O teste de micronúcleos em peixes não apresentou diferenças significativas entre os pontos de coleta, assim como o ensaio cometa e os testes VN e MTT nas células Vero. O ensaio cometa demonstrou aumento nos danos genéticos em peixes expostos às amostras de água coletadas nos trechos médio e inferior da bacia (Parobé, Campo Bom e Esteio) em relação ao trecho superior da bacia (Santo Antônio da Patrulha). Os resultados indicam contaminação por substâncias genotóxicas a partir do trecho médio da BHRS.(AU)

Acute copper toxicity in juvenile fat snook Centropomus parallelus (Teleostei: Centropomidae) in sea water

Three experiments were designed to assess the accumulation and acute toxicity of copper (Cu) in juvenile fat snook Centropomus parallelus. The first experiment was performed to determine the 96-h lethal concentration (LC50) of Cu. The second experiment was designed to assess the effects of sublethal concentrations of Cu (0.47 and 0.94 mg/L), while the third one allowed us to test the recovery capacity of fish exposed to the sublethal concentrations Cu and kept in sea water without Cu addition. The LC50 value for Cu was found to be 1.88 mg/L Cu. Fish exposed to the sublethal concentrations of Cu showed a significant accumulation of Cu in gills at 96 h respect to the control ones (0.43 µg/g Cu). No significant difference was observed in the accumulation of Cu in gills between fish exposed to 0.47 mg/L (1.09 µg/g Cu) and 0.94 mg/L (1.26 µg/g Cu). Exposure (24 and 96 h) to the sublethal concentrations of Cu tested induced DNA damage in the erythrocytes. The results show that acute exposure to sublethal concentrations induces Cu accumulation and DNA damage in fish, these effects being recovered after 240 h in sea water without Cu addition.(AU)

Três experimentos foram realizados para avaliar o acúmulo e toxicidade aguda do cobre (Cu) em juvenis de robalo-peva Centropomus parallelus. O primeiro experimento foi realizado para determinar a concentração letal (96h-CL50) de Cu. O segundo experimento foi realizado para avaliar os efeitos de concentrações subletais de Cu (0,47 e 0,94 mg/L), enquanto o terceiro permitiu testar a capacidade de recuperação dos peixes expostos a concentrações subletais do Cu e posteriormente mantidos em água do mar sem acréscimo de Cu. O valor de LC50 encontrado para o Cu foi de 1,88 mg/L. Os peixes expostos as concentrações subletais de Cu mostraram um acúmulo significativo nas brânquias em relação ao controle em 96 h de exposição (0,43 µg/g Cu). Nenhuma diferença significativa foi observada entre os peixes expostos a 0,47 mg/L de Cu (1,09 µg/g) e 0,94 mg/L de Cu (1,26 µg/g). A exposição (24 e 96 h) para as concentrações subletais de Cu induziram danos no DNA. Os resultados mostram que a exposição aguda a concentrações subletais induz o acúmulo de Cu e danos ao DNA nas brânquias dos peixes, onde estes efeitos são recuperados após 240 h em água do mar sem adição de Cu.(AU)

AVALIAÇÃO DO EFEITO PROTETOR DA MELATONINA EXÓGENA SOBRE OS NEONATOS DE MATRIZES SUBMETIDAS AO CONSUMO CRÔNICO DE ÁLCOOL DURANTE A PRENHEZ

(3 g/kg/dia) e melatonina (15 mg/kg/dia). Após o nascimento, as matrizes e 10 filhotes (cinco machos e cinco fêmeas) de cada grupo experimental foram anestesiados para coleta do sangue e fígado das mães e do sangue, fígado e cérebro dos neonatos para verificação da frequência de danos no DNA pelo ensaio cometa. O sangue ainda foi usado para o teste do micronúcleo. Análises sobre tamanho e peso ao nascer dos neonatos, assim como avaliações morfométricas, histoquímicas (quantificação de glicogênio e colágeno) e imunohistoquímicas (fator TNF- e IL-6) no fígado desses animais também foram realizadas. Os resultados demonstraram um aumento significativo de dano no DNA das células sanguíneas e hepáticas das matrizes e das proles do grupo álcool, bem como no cérebro desses neonatos. Os tratamentos com melatonina (10 e 15 mg/kg/dia) reduziram significativamente a genotoxicidade causada pelo etanol no sangue das mães e dos neonatos (machos e fêmeas), no fígado das matrizes e dos filhotes machos e no cérebro da prole de fêmeas. Mostrou-se ainda que apenas a prole de fêmeas exposta ao consumo materno de álcool apresentou frequência maior de micronúcleos em eritrócitos policromáticos. Além disso, a exposição intrauterina ao álcool provocou redução significativa no comprimento e peso ao nascer dos neonatos. Ademais, reduziu o número de hepatócitos e de sua área nuclear, aumentou a área citoplasmática dessas células, diminuiu o acúmulo de glicogênio hepático e elevou os níveis das citocinas pró-inflamatórias TNF- e IL-6. Contudo, o número de megacariócitos e a deposição de colágeno não foram alterados. Os tratamentos com melatonina a 10 e a 15 mg/kg durante a prenhez protegeram os neonatos contra as injúrias provocadas pelo consumo materno de álcool sobre o crescimento, peso ao nascer e morfofisiologia hepática. Assim, concluímos que o tratamento com melatonina exógena pode ser uma estratégia eficaz na proteção contra danos induzidos pela exposição pré-natal ao álcool.

Alcohol consumption during pregnancy is a serious public health problem because it increases the risk of spontaneous abortions, mental retardation and congenital anomalies, compromising healthy fetal development. Production of acetaldehyde and increase in the liberation of free radicals due to the metabolism of ethanol are the main factors that contribute to the damages induced by alcohol. These products react and injure proteins, lipids and DNA of the cells and thus impair organogenesis and fetal physiology. Melatonin is a powerful antioxidant capable of freely crossing the morphological and physiological barriers found in cells and cell compartments, including the nucleus and mitochondria, protecting cell membranes, proteins and nuclear and mitochondrial genomes. The objective of this study was to evaluate the protective effect of exogenous melatonin on the neonates of matrices submitted to chronic alcohol consumption during pregnancy. Twenty pregnant rats were used and divided into the groups: I - Rats receiving distilled water (control); II - Rats receiving absolute ethyl alcohol (3 g/kg/day); III - Rats receiving absolute ethyl alcohol (3 g/kg/day) and melatonin (10 mg/kg/day); IV - Rats receiving absolute ethyl alcohol (3 g/kg/day) and melatonin (15 mg/kg/day). After birth, dams and 10 neonates (five males and five females) of each experimental group were anesthetized to collect of the dams' blood and liver and of the neonates' blood, liver and brain to verify the frequency of DNA damage by the comet assay. Blood was also used for the micronucleus test. Analyzes of size and birth weight of newborns, as well as, morphometric, histochemical (quantification of glycogen and collagen) and immunohistochemical (tumor necrosis factor alpha - TNF- and interleukin 6 - IL-6) evaluations in the liver of these animals were also performed. Our results demonstrated a significant increase in DNA damage in the blood and liver cells of the dams and offspring of the alcohol group as well as in the brains of these neonates. Treatments with melatonin (10 and 15 mg/kg/day) significantly reduced the genotoxicity caused by ethanol in the blood of dams and neonates (males and females), liver of dams and male offspring, and in the brain of offspring of females. It was also shown that only the offspring of females exposed to maternal alcohol consumption showed a higher frequency of micronuclei in polychromatic erythrocytes. In addition, intrauterine exposure to alcohol resulted in a significant reduction in neonatal length and birth weight. Moreover, it reduced the number of hepatocytes and their nuclear area, increased the cytoplasmic area of these cells, decreased the accumulation of hepatic glycogen and raised the levels of the proinflammatory cytokines TNF- and IL-6. However, the number of megakaryocytes and collagen deposition were not altered. Treatments with melatonin at 10 and 15 mg/kg during pregnancy protected the neonates against injuries caused by maternal alcohol consumption on growth, birth weight and hepatic morphophysiology. Thus, we conclude that treatment with exogenous melatonin may be an effective strategy in protecting against damage induced by intrauterine exposure to alcohol.

Avaliação dos efeitos genotóxicos e antigenotóxicos de Salvia officinalis e seus aspectos terapêuticos em ciência animal

Salvia officinalis tem sido amplamente utilizada na culinária e na medicina tradicional, e estudos têm identificado inúmeros compostos químicos e potenciais ações terapêuticas. Esta pesquisa avaliou a genotoxicidade do extrato hidroalcoólico liofilizado de folhas de S. officinalis L. (SO) usando o ensaio do micronúcleo em medula óssea de camundongos. A interação entre SO e os efeitos genotóxicos induzidos pela doxorrubicina (DXR) também foi analisada ensaio de antigenotoxicidade. Grupos experimentais constituídos de camundongos machos e fêmeas Swiss albinus (Unib: SW) foram avaliados após 24-48h de tratamento com ciclofosfamida (CP; 50 mg/Kg), DXR (5 mg/Kg), NaCl (150 mM), SO (0,52 g/Kg) e SO (0,5 g/Kg) + DXR (5 mg/Kg). As análises de EPCMNs mostraram diferenças (p0,05) entre os tratamentos de SO (12 g/Kg) e NaCl, independentemente do gênero e do tempo. DXR induziu EPCMNs significativamente em ambos os gêneros e tempos de tratamento. Grupos de camundongos tratados com DXR mostraram frequências menores (p<0,05) de EPCMNs quando comparados com os grupos controles CP (50 mg/Kg). O tratamento associativo (500 mg/Kg de SO + 5 mg/Kg de DXR) não reduziu a frequência de EPCMNs (p<0,05) induzida por DXR. As proporções de EPC/ENC entre tratamentos controles (NaCl, CP e DXR) e experimentais genotóxicos e antigenotóxicos (SO; SO + DXR) foram insignificantes (p0,05). Os resultados sugerem efeitos moderadamente genotóxicos (clastogenia e/ou aneugenia) de folhas de S. officinalis L., dose-dependente (i.e., a partir de 1 g/Kg) e gênero - e tempo - independentes. Contudo, S. officinalis não apresenta toxicidade sistêmica e efeitos antigenotóxicos (SO + DXR) nas condições estabelecidas no presente teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos.

Salvia officinalis has been widely used in culinary and traditional medicine, and studies have identified numerous chemical compounds and potential therapeutic actions. This study evaluated the genotoxicity of lyophilized hydroalcoholic extract of S. officinalis L. (SO) leaves using the micronucleus assay in mouse bone marrow. The interaction between SO and the genotoxic effects induced by doxorubicin (DXR) was also analyzed antigenotoxicity assay. Experimental groups consisting of male and female Swiss albinus mice (Unib: SW) were evaluated after 24-48h treatment with cyclophosphamide (CP; 50 mg/kg), DXR (5 mg/kg), NaCl 0.5-2 g/kg) and SO (0.5 g/kg) + DXR (5 mg/kg). The PCEMN analyzes showed differences (p0.05) between SO (1-2 g/kg) and NaCl treatments, regardless of gender and time. DXR induced EPCMNs significantly in both genders and treatment times. Groups of mice treated with DXR showed lower frequencies (p0.05) of PCEMNs when compared to CP control groups (50 mg/kg). Associative treatment (500 mg/kg SO + 5 mg/kg DXR) did not reduce the frequency of DXR-induced PCEMNs (p0.05). The PCE/NCE ratio between control (NaCl, CP and DXR) and experimental genotoxic and antigenotoxic (SO; SO + DXR) treatments were insignificant (p0.05). The results suggest moderately genotoxic effects (clastogeny and/or aneugeny) of S. officinalis L. leaves, dose-dependent (i.e., from 1 g/kg) and gender- and time-independent. However, S. officinalis has no systemic toxicity and antigenotoxic effects (SO + DXR) under the conditions established in the present micronucleus test in mouse bone marrow.

Mutagenicity induced by the hydroalcoholic extract of the medicinal plant Plathymenia reticulata Benth

Plathymenia reticulata Benth has an anti-inflammatory effect and is capable of neutralizing the neuromuscular blockade induced by Bothrops jararacussu or Crotalus durissus terrificus venoms, probably by precipitating venom proteins (an effect caused by plant tannins). The present study aimed to evaluate the mutagenic activity of P. reticulata by using the Salmonella mutagenicity assay (Ames test) and the micronucleus test in CHO-K1 cells. P. reticulata extract concentrations of 2.84, 5.68, 11.37, and 19.90 mg/plate were assayed by the Ames test using TA97a, TA98, TA100 and TA102 bacterial strains, with (+S9) and without (-S9) metabolic activation. Concentrations of 5, 1.6 and 0.5 μg/mL of P. reticulata extract were used for the micronucleus test. P. reticulata extract was mutagenic to TA98 (-S9) and showed signs of mutagenic activity in TA97a and TA102 (both -S9) strains. Micronucleus test CBPI values showed that the endogenous metabolic system increased the number of viable cells when compared to the non-activated samples and the micronucleus frequency increased when the cells were treated in the absence of S9. We concluded that P. reticulata extract may present direct mutagenic properties.(AU)

TOXICIDADE DE FUNGICIDA COMERCIAL A BASE DE TEBUCONAZOL EM Danio rerio

Avaliar os efeitos da exposição de diferentes concentrações de tebuconazol, princípio ativo de fungicidas comerciais, sobre embriões e adultos de Danio rerio, através de ensaio de ansiedade, glicemia, danos no DNA e desenvolvimento embrionário. Foram realizados dois ensaios, sendo o primeiro com adultos da espécie visando avaliar parâmetros de estresse através do teste de mergulho em tanque novo, glicose plasmática e genotoxicidade com os testes de micronúcleo e ensaio cometa. No segundo ensaio, avaliou-se a toxicidade do fungicida influenciando o desenvolvimento embrionário de zebrafish. No ensaio 1, utilizou-se 320 exemplares adultos de D. rerio divididos em oito aquários, tendo sido expostos às concentrações de 0; 100; 200 e 300 g/L de tebuconazol com suas respectivas réplicas nos tempos de 24, 72 e 96 horas. Após cada período de exposição, 10 animais foram retirados de cada aquário, levados para filmagem do teste de mergulho em tanque novo e em seguida realizados os procedimentos de coleta de sangue e brânquias para a realização dos demais. No ensaio 2, embriões de zebrafish foram expostos às concentrações de 0; 12,5; 25; 50; 100 e 200 g/L de tebuconazol por um período de 96h, sendo analisadas diariamente as alterações morfológicas e taxa de sobrevivência. Os resultados encontrados mostraram desvio comportamental de zebrafish, em que os animais expostos ao tebuconazol apresentaram-se mais ansiosos, diminuindo seu tempo de permanência na superfície do aquário. Para a glicose plasmática (mg/dL), não houve diferença significativa (p>0,05). Para os testes de micronúcleo e ensaios cometa à exposição de D. rerio ao tebuconazol resultou em aumento significativo (p<0,05) de danos ao DNA em função do tempo de exposição e das diferentes concentrações de tebuconazol. Nos embriões, o tebuconazol não causou nenhuma malformação durante os estágios embrionários. As taxas de sobrevivência não foram alteradas nas doses de 12,5; 25 e 50 g/L, apenas a dose de 100 g/L foi capaz de atuar diminuindo a sobrevivência. Ao analisar diferentes doses dentro de um mesmo período de desenvolvimento embrionário, houve diferença significativa (p<0,001), em que as maiores taxas de sobrevivência foram obtidas nas menores concentrações de tebuconazol. A concentração de 200 g/L foi considerada altamente tóxica para os embriões, pois em menos de 24hpf todos os embriões haviam morrido. Os resultados obtidos neste estudo permitem concluir que o tebuconazol possui efeitos tanto nos adultos quanto em embriões de Danio rerio, gerando fragmentação no material genético e alterações no comportamento dos adultos, além de induzir letalidade nos embriões.

This work aimed at evaluating the effects of the exposure to different concentrations of tebuconazole, active principal for commercial fungicides, over Danio rerio embryos and adults, by means of anxiety, glucose, DNA damage and embryonic development trials. Two trials were conducted, the first with adults, aiming at evaluating stress parameters by means of new tank dive, plasma glucose and genotoxicity tests, as well as micronuclei test and comet trial. In the second trial, we evaluated the toxicity of the fungicide, influencing the embryonic development of zebrafish. In trial 1, 320 specimens of adult D. rerio, divided into 8 tanks, having been exposed to the concentrations of 0, 100, 200 and 300 g/L of tebuconazole, with the respective replicates at times 24, 72 and 96 hours. After each period of exposure, 10 animals were removed from each tank, taken to filming of the new tank dive test having, subsequently, collected blood and gill samples to conduct the remaining tests. In trial 2, zebrafish embryos were exposed to the concentrations of 0, 12.5, 25, 50, 100 and 200 g/L of tebuconazole for a period of 96 hours, daily analyzing morphological changes and survival rate. The results show a behavioral deviation of the zebrafish, when the animals exposed to tebuconazole were more anxious, reducing the time of permanence at the surface of the tank. For plasmatic glucose (mg/dL) there was no significant difference (p>0.05). For the micronuclei test and comet trial, the exposure to tebuconazole resulted in a significant increase (p<0.05) of damage to the DNA in function of the time of exposure and different concentrations of tebuconazole. For the embryos, the tebuconazole caused no malformation during the embryonic stages. The survival rates were not altered with the doses of 12.5, 25 and 50 g/L. Only the dose of 100 g/L was capable of decreasing the survival. When analyzing the different doses within a same period of embryonic development, there was significant difference (p<0.001), in which the higher survival rates were obtained at the lowest concentrations of tebuconazole. The concentration of 200 g/L was considered highly toxic to the embryos, given that, in less than 24 hours, all embryos had died. The results obtained in this study allow us to conclude that tebuconazole has the same effects over Danio rerio embryos and adults, causing fragmentation of the genetic material and changes in the behavior of the adults, in addition to reducing embryo lethality.

AVALIAÇÃO DA MUTAGENICIDADE DO INDOXACARBE EM RATOS E GATOS

Introdução: Os pesticidas são venenos intencionalmente dispersos no ambiente para o controle de pragas e, com sua persistência nesse meio podem induzir a toxicidade em seres humanos e animais. Indoxacarbe é um inseticida, oxidiazínico, que apresenta atividade sobre insetos da ordem lepidóptera. No tratamento contra pulgas em pequenos animais, o indoxacarbe tem demonstrado uma alta atividade inseticida associada a esses ectoparasitas. A escolha da utilização dessas duas espécies animais neste estudo se deu pelo fato de que ratos e gatos apresentam uma grande quantidade de eritrócitos policromáticos micronucleados, facilitando desta forma a realização do ensaio escolhido e, pelo rato ser o modelo biológico padrão para avaliações de mutagenicidade, e por fim pelo fato do produto ser indicado para o uso em gatos. A escassez na literatura sobre o efeito mutagênico causado pelo uso desse produto levou a realização dessa pesquisa, cujo objetivo foi avaliar por meio do teste de micronúcleo a mutagenicidade do indoxacarbe em dose terapêutica e em dez vezes maior em ratos e gatos. Materiais, métodos e resultados: Foram selecionados 40 ratos, com 70 dias de idade, da linhagem Wistar, machos, peso de 280g±10 e 20 gatos adultos, sem raça definida, machos e fêmeas, com peso de 4kg±200gr, ambos do biotério central e gatil da universidade de origem, respectivamente. Os ratos foram mantidos em caixas individuais em ambiente com controle de temperatura 22ºC±2, umidade 55%±5, fotoperíodo 12 horas claro e escuro, os gatos foram mantidos em baias individuais, e ambos com água e ração ad libitum. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos, com 10 animais em cada grupo de ratos e 5 animais nos grupos compostos por gatos, e foram tratados com: Grupo controle negativo (GCN)-solução de cloreto de sódio 0,9% por via tópica, em dose única. Grupo controle positivo (GCP)-ciclofosfamida em única dose de 50mg/kg por via intraperitoneal nos ratos e intravenosa nos gatos. Grupo indoxacarbe (GI)- indoxacarbe por via tópica, em dose única recomendado pelo fabricante. Grupo indoxacarbe dose alta (GIDA)-indoxacarbe por via tópica, em dose única, porém dez vezes maior que a dose recomendada pelo fabricante. Os ratos foram avaliados 24 horas após o uso do indoxacarbe, após eutanásia e retirada do fêmur para a realização da lavagem do canal medular com soro fetal bovino, posterior centrifugação, retirada do sobrenadante e realização do esfregaço. Os gatos foram avaliados por meio do teste de micronúcleo antes e 24 horas após a aplicação do indoxacarbe, através da coleta de uma gota de sangue periférico da extremidade do rabo para a realização do esfregaço. A fixação, coloração e leitura das lâminas foram semelhantes para os ratos e gatos. Os testes estatísticos utilizados foram de análise de variância com contraste pelo método de Tukey e, para a comparação entre momentos utilizou-se teste t pareado. O nível de significância adotado foi de 5%. Indoxacarbe não apresentou atividade mutagênica em nenhuma das espécies e doses estudadas, mesmo nos animais submetidos a altas doses, a quantidade de micronúcleos permaneceu dentro da normalidade (p>0,05).Discussão: Os resultados obtidos neste estudo corroboraram com os poucos relatos encontrados na literatura, afirmando a ausência da capacidade mutagênica do indoxacarbe em diferentes espécies animais e vias de administração do produto. Observou-se também a rapidez, e facilidade na realização do teste para micronúcleo, caracterizando-o como um importante bioensaio para avaliações de mutagenicidade.

Background: Pesticides are substances used for pest control. Because of their persistence in the environment, they can induce toxicity in humans and animals. Indoxacarb is an oxadiazine insecticide that acts against insects of the order Lepidoptera. Furthermore, indoxacarb has demonstrated strong insecticide activity against fleas; therefore, it is used in ectoparasite treatment. Choice of species used in this study (rats and cats) is based on several factors such as these animals have a high count of micronucleated polychromatic erythrocytes, thereby facilitating the execution of the chosen assay; rats are the standard animal model for mutagenicity studies; and the product is intended for use in cats. Limited data in literature pertaining to the mutagenic effects of this product motivated this study. The aim of this study was to evaluate the mutagenicity of indoxacarb when administered in one and tenfold therapeutic doses in rats and cats. This evaluation was performed using the micronucleus test. Materials, Methods & Results: Forty male Wistar rats aged 70 days and weighing 280 ± 10 g and 20 mixed breed male and female adult cats weighing 4 ± 0.2 kg were selected. These animals were obtained from the central animal facility and cattery, respectively, of the university of origin. Rats were reared in individual cages with a controlled temperature of 22°C ± 2°C, humidity of 55% ± 5% and 12-h lightdark cycle. Cats were reared in individual stalls with water and food ad libitum. Animals were randomly distributed into four groups comprising 10 rats and 5 cats in respective groups: negative control group, which received 0.9% sodium chloride solution as a single topical administration; positive control group, which received 50 mg/kg cyclophosphamide as a single intra-peritoneal (rats) or intravenous injection (cats); indoxacarb group, which received indoxacarb as a single topical dose according to the manufacturers recommendations; and high dose indoxacarb group, which also received indoxacarb in a single topical dose, but at a tenfold concentration. Rats were evaluated 24 h after indoxacarb administration. After euthanasia, rat femurs were obtained and their medullary canals were washed using fetal bovine serum. The content was centrifuged and used for smear preparations. Cats were evaluated using the micronucleus test before and 24 h after indoxacarb administration. For smear preparations, a drop of peripheral blood samples was obtained from the tail tip. Smear fixation, staining, and microscopic analysis were similar for cats and rats. Statistical analyses were performed using analysis of variance with contrast through Tukeys method and paired t test to compare time points. The significance level was 5%. Indoxacarb showed no mutagenic activity in the two species and doses evaluated. Even in animals subjected to high doses, the micronuclei count remained within the normal range (p > 0.05). Discussion: The results of this study corroborate those of other studies, where in the mutagenic capacity of indoxacarb was similar in different animal species and product delivery routes. In addition, it is of note the speed and ease of micronucleus testing, which makes it an important mutagenicity bioassay.

Evaluation of the genotoxic potential of Austroplenckia populnea (Reiss) Lundell chloroform fraction from barkwood extract in rodent cells in vivo

The genotoxic effect of the Austroplenckia populnea chloroform fraction from barkwood extract was tested in vivo on peripheral blood cells of Swiss mice with the comet assay (SCGE), and the clastogenic effect was investigated on peripheral blood cells of Swiss mice and bone marrow cells of Wistar rats, with the micronucleus and chromosome aberrations tests. The animals were treated by gavage with 3 concentrations of the extract: 300, 600 and 900 mg.kg-1. Peripheral blood cells of Swiss mice were collected 4 and 24 hours after the treatment to the SCGE assay and 48 and 72 hours to the micronucleus test. Bone marrow cells of Wistar rats were collected 24 hours after the treatment to the micronucleus and chromosome aberration tests. The results showed that the A. populnea chloroform fraction induced an increase in the average number of DNA damage in peripheral blood cells at the three concentrations tested, but this increase was not statistically significant. In the micronucleus and chromosome aberrations test, no significant increase was observed in the mean number of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) of Swiss mice or MNPCE or chromosome aberrations for the rat bone marrow cells, for any of the tested doses. Our findings enable us to conclude that by the comet assay, A. populnea chloroform fraction from barkwood extract showed no genotoxic effects, and by the micronucleus and chromosome aberration tests, the extract fraction showed no clastogenic/aneugenic effects on the rodent cells tested.

O possível efeito genotóxico da fração clorofórmica de cascas de caule de Austroplenckia populnea foi testado in vivo em células do sangue periférico de camundongos Suíços pelo ensaio cometa, e o seu possível efeito clastogênico foi investigado em células de sangue periférico de camundongos Suíços e células da medula óssea de ratos Wistar, respectivamente pelos testes do micronúcleo e de aberrações cromossômicas. Os animais foram tratados por via oral com três concentrações do extrato: 300, 600 e 900 mg.kg-1 de peso corpóreo. Células do sangue periférico dos camundongos foram coletadas 4 e 24 horas após o tratamento para a realização do ensaio cometa, e 48 e 72 horas para o teste do micronúcleo. Células da medula óssea dos ratos Wistar foram coletadas 24 horas após o tratamento para os testes do micronúcleo e de aberrações cromossômicas. Os resultados mostraram que a fração clorofórmica do extrato de A. populnea induziu um pequeno aumento no número médio de danos ao DNA nas células sanguíneas nas três concentrações testadas, mas tal aumento não foi estatisticamente significativo. Nos testes do micronúcleo e de aberrações cromossômicas não houve um aumento significativo no número médio de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPM) dos camundongos, bem como nos EPM e aberrações cromossômicas nas células da medula óssea dos ratos, em nenhuma das doses testadas. Nossos resultados nos permitem concluir que, pelo ensaio cometa, a fração clorofórmica de cascas do caule de A. populnea não apresentou efeito genotóxico, e, pelos testes do micronúcleo e de aberrações cromossômicas, o extrato não mostrou efeitos clastogênicos e/ou aneugênicos nas células analisadas dos roedores.

Avaliação da mutagênese e genotoxicidade em Eigenmannia virescens (Teleostei: Gymnotiformes) expostos ao benzeno

The effects of genotoxic substances on fishes genome have been object of many studies, especially those which attempt to establish the responses of genes to environmental stimulus. The objective of this study was to evaluate the mutagenicity and genotoxicity in electric fishes of species Eingenmannia virescens, under to benzene exposure (50ppm), utilizing Micronuclei Test (MNs) and Comet Assay techniques. Ten fish blood samples were collected in different times of exposure: T0, 24h, 48h, 72h, 96h and 360h (15 days). To determine the frequency of MNs, 1.000 cells per microscopical slides were counted. For the Comet Assay analysis, four damage classes were defined: I - II - III - IV, and for the statistic analysis number values (ranks) from 0 to 3 were assigned for each class. The sum of ranks (values) for all times of exposure was compared to T0 and these differences were statistically analyzed. On Micronuclei Test demonstrated do not possible detect significant mutagenic effects in the erythrocytes analyzed. On the other hand, for the Comet Assay, the results suggested genotoxic action of benzene, proper the gradual increase of number of cells with greatest damage class with the greatest of exposure time, indicating an effect time-dependent. These results suggested the most sensibility for the Comet Assay like Micronuclei Test.

Os efeitos de substâncias genotóxicas sobre o genoma de peixes tem sido objeto de muitos estudos, sobretudo daqueles que buscam estabelecer a resposta dos genes aos estímulos ambientais. O presente trabalho teve como objetivo realizar um estudo sobre mutagenicidade e genotoxicidade em peixes elétricos da espécie Eingenmannia virescens, pela exposição ao benzeno (50ppm), utilizando as técnicas da Freqüência de Micronúcleos (MNs) e o Ensaio do Cometa. Foram coletadas amostras do sangue de dez peixes em diferentes tempos de exposição: T0, 24h, 48h, 72h, 96h e 360h (15 dias). Para a análise das lâminas no Teste do MN, foram contadas 1.000 células e estipulada a freqüência de ocorrência de MNs. Para análise do Ensaio do Cometa a contagem foi feita estipulando quatro classes de danos: I - II - III - IV, e para a análise estatística foram atribuídos valores numéricos (ranques) de 0 a 3, respectivamente, verificando diferenças significativas para a soma dos ranques em todos os tempos de exposição em relação ao T0. No Teste do Micronúcleo não foi possível detectar efeitos mutagênicos significativos nos eritrócitos analisados. No entanto, para o Ensaio do Cometa os resultados sugerem ação genotóxica do benzeno, devido a um aumento gradual no número de células com maiores classes de danos de acordo com maior tempo de exposição, indicando um efeito tempo-dependente. Estes resultados sugerem maior sensibilidade do Ensaio do Cometa que o Teste do MN.