Evolution of Avian coronavirus (AvCoV) in BHK-21 and VERO cells / Evolução de Coronavírus aviário (AvCoV) em células BHK-21 e VERO

Avian coronavirus (AvCoV) infects a range of tissues in chickens and several other avian species. Although the virus can be isolated in chicken embryos, only a few strains of the 6 genotypes/33 lineages can grow in cell lines, with the Beaudette strain (GI-1 lineage) being the most used for in vitro studies. Considering the differences between cell lines and chicken embryos as habitats for AvCoV, this study aimed to assess the diversity of the genes coding for the nonstructural protein 3 (nsp3) and spike envelope protein (S) after serial passages in BHK-21 and Vero cells. After 14 passages of an embryo-adapted Beaudette strain, the virus loads fluctuated in both cell lines, with the highest loads being 8.72 log genome copies/µL for Vero and 6.36 log genome copies/µL for BHK-21 cells. No polymorphisms were found for nsp3; regarding S, not only aa substitutions (Vero: 8th passage A150S, and 14th S150A; BHK-21: 4th S53F, 8th F53Y, and 8th S95R), but also minor variants could be detected on chromatograms with fluctuating intensities. As the regions of these aa substitutions are within the receptor-binding domain of S, it can be speculated that differences in cell receptors between Vero and BHK-21 cells and the speed of cell death led to the selection of different dominant strains, while the stability of nsp3 supports its function as a protease involved in AvCoV replication. In conclusion, AvCoV quasispecies evolution is influenced by the biological model under consideration, and a gradual transition is seen for minor and major variants.(AU)

O Coronavírus aviário AvCoV infecta uma variedade de tecidos de galinhas e de outras espécies aviárias. Apesar de este vírus poder ser isolado em ovos embrionados de galinha, apenas alguns dos 6 genótipos / 33 linhagens podem crescer em cultivo celular, sendo a cepa Beuadette (linhagem GI-11) a mais utilizada para estudos in vitro. Considerando as diferentes linhagens celulares e ovos embrionados como habitats para o AvCoV, este estudo teve por objetivo estudar a diversidade de genes que codificam para a proteína não-estrutural 3 (nsp3) e espícula (S) após passagens seriadas em células BHK-21 e VERO. Após 14 passagens, de uma amostra Beuadette adaptada a ovos embrionados, os títulos virais variaram em ambas as células, com os maiores títulos sendo de 8,72 log cópias genômicas/µL para Vero e 6,36 cópias genômicas/µL para BHK-21. Nenhum polimorfismo foi encontrando para nsp3. Considerando a proteína S, não somente foram encontradas substituições de aminoácidos (Vero: 8a passagem A150S e 14a passagem S150A; BHK-21: 4a passagem S53F, 8a passagem F53Y e S95R), mas também, variantes subconsensuais foram detectadas pelos cromatogramas com intensidades flutuantes. Uma vez que as regiões destes aa se encontram no domínio de ligação de receptor de S, pode-se especular que diferenças em receptores celulares entre Vero e BHK-21, além da velocidade da morte celular, levaram à seleção de diferentes cepas dominantes, enquanto que a estabilidade de nsp3 concorda com sua função como protease com papel na replicação de AvCoV. Como conclusão, a evolução de quase-espécies de AvCoV é influenciada pelo modelo biológico sob consideração e uma transição gradual é vista para variantes dominantes e subdominantes.(AU)

Evolution of Avian coronavirus (AvCoV) in BHK-21 and VERO cells / Evolução de Coronavírus aviário (AvCoV) em células BHK-21 e VERO

Avian coronavirus (AvCoV) infects a range of tissues in chickens and several other avian species. Although the virus can be isolated in chicken embryos, only a few strains of the 6 genotypes/33 lineages can grow in cell lines, with the Beaudette strain (GI-1 lineage) being the most used for in vitro studies. Considering the differences between cell lines and chicken embryos as habitats for AvCoV, this study aimed to assess the diversity of the genes coding for the nonstructural protein 3 (nsp3) and spike envelope protein (S) after serial passages in BHK-21 and Vero cells. After 14 passages of an embryo-adapted Beaudette strain, the virus loads fluctuated in both cell lines, with the highest loads being 8.72 log genome copies/µL for Vero and 6.36 log genome copies/µL for BHK-21 cells. No polymorphisms were found for nsp3; regarding S, not only aa substitutions (Vero: 8th passage A150S, and 14th S150A; BHK-21: 4th S53F, 8th F53Y, and 8th S95R), but also minor variants could be detected on chromatograms with fluctuating intensities. As the regions of these aa substitutions are within the receptor-binding domain of S, it can be speculated that differences in cell receptors between Vero and BHK-21 cells and the speed of cell death led to the selection of different dominant strains, while the stability of nsp3 supports its function as a protease involved in AvCoV replication. In conclusion, AvCoV quasispecies evolution is influenced by the biological model under consideration, and a gradual transition is seen for minor and major variants.(AU)

O Coronavírus aviário AvCoV infecta uma variedade de tecidos de galinhas e de outras espécies aviárias. Apesar de este vírus poder ser isolado em ovos embrionados de galinha, apenas alguns dos 6 genótipos / 33 linhagens podem crescer em cultivo celular, sendo a cepa Beuadette (linhagem GI-11) a mais utilizada para estudos in vitro. Considerando as diferentes linhagens celulares e ovos embrionados como habitats para o AvCoV, este estudo teve por objetivo estudar a diversidade de genes que codificam para a proteína não-estrutural 3 (nsp3) e espícula (S) após passagens seriadas em células BHK-21 e VERO. Após 14 passagens, de uma amostra Beuadette adaptada a ovos embrionados, os títulos virais variaram em ambas as células, com os maiores títulos sendo de 8,72 log cópias genômicas/µL para Vero e 6,36 cópias genômicas/µL para BHK-21. Nenhum polimorfismo foi encontrando para nsp3. Considerando a proteína S, não somente foram encontradas substituições de aminoácidos (Vero: 8a passagem A150S e 14a passagem S150A; BHK-21: 4a passagem S53F, 8a passagem F53Y e S95R), mas também, variantes subconsensuais foram detectadas pelos cromatogramas com intensidades flutuantes. Uma vez que as regiões destes aa se encontram no domínio de ligação de receptor de S, pode-se especular que diferenças em receptores celulares entre Vero e BHK-21, além da velocidade da morte celular, levaram à seleção de diferentes cepas dominantes, enquanto que a estabilidade de nsp3 concorda com sua função como protease com papel na replicação de AvCoV. Como conclusão, a evolução de quase-espécies de AvCoV é influenciada pelo modelo biológico sob consideração e uma transição gradual é vista para variantes dominantes e subdominantes.(AU)

Evolution of Avian coronavirus (AvCoV) in BHK-21 and VERO cells / Evolução de Coronavírus aviário (AvCoV) em células BHK-21 e VERO

Avian coronavirus (AvCoV) infects a range of tissues in chickens and several other avian species. Although the virus can be isolated in chicken embryos, only a few strains of the 6 genotypes/33 lineages can grow in cell lines, with the Beaudette strain (GI-1 lineage) being the most used for in vitro studies. Considering the differences between cell lines and chicken embryos as habitats for AvCoV, this study aimed to assess the diversity of the genes coding for the nonstructural protein 3 (nsp3) and spike envelope protein (S) after serial passages in BHK-21 and Vero cells. After 14 passages of an embryo-adapted Beaudette strain, the virus loads fluctuated in both cell lines, with the highest loads being 8.72 log genome copies/µL for Vero and 6.36 log genome copies/µL for BHK-21 cells. No polymorphisms were found for nsp3; regarding S, not only aa substitutions (Vero: 8th passage A150S, and 14th S150A; BHK-21: 4th S53F, 8th F53Y, and 8th S95R), but also minor variants could be detected on chromatograms with fluctuating intensities. As the regions of these aa substitutions are within the receptor-binding domain of S, it can be speculated that differences in cell receptors between Vero and BHK-21 cells and the speed of cell death led to the selection of different dominant strains, whi

O Coronavírus aviário AvCoV infecta uma variedade de tecidos de galinhas e de outras espécies aviárias. Apesar de este vírus poder ser isolado em ovos embrionados de galinha, apenas alguns dos 6 genótipos / 33 linhagens podem crescer em cultivo celular, sendo a cepa Beuadette (linhagem GI-11) a mais utilizada para estudos in vitro. Considerando as diferentes linhagens celulares e ovos embrionados como habitats para o AvCoV, este estudo teve por objetivo estudar a diversidade de genes que codificam para a proteína não-estrutural 3 (nsp3) e espícula (S) após passagens seriadas em células BHK-21 e VERO. Após 14 passagens, de uma amostra Beuadette adaptada a ovos embrionados, os títulos virais variaram em ambas as células, com os maiores títulos sendo de 8,72 log cópias genômicas/µL para Vero e 6,36 cópias genômicas/µL para BHK-21. Nenhum polimorfismo foi encontrando para nsp3. Considerando a proteína S, não somente foram encontradas substituições de aminoácidos (Vero: 8a passagem A150S e 14a passagem S150A; BHK-21: 4a passagem S53F, 8a passagem F53Y e S95R), mas também, variantes subconsensuais foram detectadas pelos cromatogramas com intensidades flutuantes. Uma vez que as regiões destes aa se encontram no domínio de ligação de receptor de S, pode

Effect of Non-Starch Polysaccharide (NSP) of Wheat and Barley Supplemented with Exogenous Enzyme Blend on Growth Performance, Gut Microbial, Pancreatic Enzyme Activities, Expression of Glucose Transporter (SGLT1) and Mucin Producer (MUC2) Genes of Broiler Chickens

The experiment was carried out in a completely randomized design (CRD) with 625 broiler chicks (Ross 308) for 5 repetitions (25 birds per each replicated) on the 5 treatments diet. Treatments included two different types of cereal grains (wheat, and barley) with or without an enzyme supplementation along with a corn-based diet as control group. The experimental diets were formulated to have similar contents of crude protein, metabolizable energy, total non-starch polysaccharides (NSP) and were fed in two periods of starter and grower. Experimental traits were consisted growth performance, ileal flora numeration, villus morphology in 3 parts of the intestine, digesta viscosity and pancreatic enzyme activity, and determining the gene expression level of glucose transporter (SGLT1) and mucin producer (MUC2) in the jejunum. Results indicated that inclusion of wheat and barley to corn-soy based diet with or without exo-enzymes blend on growth performance traits were significant (p 0.01). Feed intake and average daily gain in wheat diet was lower, conversely FCR was higher than other groups (p 0.01). Maximum microbial count were observed in wheat and barley diets and minimum were observed in enzyme supplemented diets respectively (p 0.01). Control group and enzyme supplemented diets had minimum counting of gram negative, coliform and clostridium, but maximum counting of lactobacilli and bifidobacter were observed in enzyme supplemented diets (p 0.01). Viscosity and activities of pancreatic a-amylase and lipase were significantly increased in chicks fed wheat and barley when compared to the control group fed on corn (p 0.01). Feeding wheat and barley diets reduced villus height in different parts of the small intestine when compared to those fed on a corn diet (p 0.01).(AU)

Effect of Non-Starch Polysaccharide (NSP) of Wheat and Barley Supplemented with Exogenous Enzyme Blend on Growth Performance, Gut Microbial, Pancreatic Enzyme Activities, Expression of Glucose Transporter (SGLT1) and Mucin Producer (MUC2) Genes of Broiler Chickens

The experiment was carried out in a completely randomized design (CRD) with 625 broiler chicks (Ross 308) for 5 repetitions (25 birds per each replicated) on the 5 treatments diet. Treatments included two different types of cereal grains (wheat, and barley) with or without an enzyme supplementation along with a corn-based diet as control group. The experimental diets were formulated to have similar contents of crude protein, metabolizable energy, total non-starch polysaccharides (NSP) and were fed in two periods of starter and grower. Experimental traits were consisted growth performance, ileal flora numeration, villus morphology in 3 parts of the intestine, digesta viscosity and pancreatic enzyme activity, and determining the gene expression level of glucose transporter (SGLT1) and mucin producer (MUC2) in the jejunum. Results indicated that inclusion of wheat and barley to corn-soy based diet with or without exo-enzymes blend on growth performance traits were significant (p 0.01). Feed intake and average daily gain in wheat diet was lower, conversely FCR was higher than other groups (p 0.01). Maximum microbial count were observed in wheat and barley diets and minimum were observed in enzyme supplemented diets respectively (p 0.01). Control group and enzyme supplemented diets had minimum counting of gram negative, coliform and clostridium, but maximum counting of lactobacilli and bifidobacter were observed in enzyme supplemented diets (p 0.01). Viscosity and activities of pancreatic a-amylase and lipase were significantly increased in chicks fed wheat and barley when compared to the control group fed on corn (p 0.01). Feeding wheat and barley diets reduced villus height in different parts of the small intestine when compared to those fed on a corn diet (p 0.01).

Fitase, xilanase e -glucanase sobre a digestibilidade da energia e nutrientes e excreção do nitrogênio e fósforo em juvenis de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus)

As altas taxas de inclusão de alimentos vegetais em dietas para peixes tem levado ao aumento de polissacarídeos não amiláceos (PNAs) e fitato. Tanto os PNAs como o fitato são indesejáveis na nutrição de peixes, por suas propriedades antinutricionais. Carboidrases (xilanase e -glucanase) e fitases são consideradas as principais alternativas frente aos problemas gerados pelos PNAs e fitato, respectivamente. Nesse sentido, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação isolada e combinada do complexo xilanase--glucanase e fitase em dietas exclusivamente vegetais sobre a digestibilidade da energia e nutrientes, incluindo a disponibilidade de minerais e aminoácidos, e excreção fecal do nitrogênio e fósforo em juvenis de tilápia do Nilo. Foram testadas quatro dietas, dieta controle (CON) sem enzimas, dieta com fitase (FT), dieta com xilanase e -glucanase (XB) e dieta com fitase, xilanase e -glucanase (FT+XB). Fitase (Natuphos® E) foi suplementada a 1000 FTU kg-1 e o complexo xilanase-glucanase (Natugrain® TS) a 1120 TXU e 500 TGU kg-1 da dieta. O total de 272 tilápias masculinizadas (22,52 ± 0,65 g) foram distribuídas em delineamento de blocos ao acaso com quatro tratamentos e quatro repetições, em 16 aquários com fundo cônico de 150 L adaptados para a coleta de fezes (sistema Guelph modificado). Os peixes foram alimentados seis vezes ao dia até saciedade aparente com as dietas experimentais contendo 0,5% de óxido de cromo, durante 21 dias. Dietas suplementadas com xilanase e -glucanase aumentaram a digestibilidade da matéria seca, amido e lipídeos (P < 0,001), e disponibilidade do cobre (P < 0,001). Paralelamente, dietas suplementadas com fitase aumentaram a digestibilidade da matéria seca, energia bruta, amido e cinzas (P < 0,001), e disponibilidade do magnésio, manganês e zinco (P < 0,001). Fitase também melhorou a disponibilidade da maioria de aminoácidos, entre eles, arginina (P = 0,019), fenilalanina (P = 0,001), histidina (P = 0,019), lisina (P = 0,019), metionina (P = 0,001) e valina (P = 0,025), e quando combinada com a xilanase e -glucanase potencializou a disponibilidade da isoleucina (P = 0,004), leucina (P = 0,004), treonina (P = 0,002), ácido glutâmico (P = 0,00), cistina (P < 0,001) e serina (P = 0,01). A combinação enzimática (FT+XB) demostrou ter efeito sinérgico na digestibilidade da proteína (P < 0,001) e disponibilidade do cálcio, ferro e fósforo (P < 0,001). Quando comparado a dieta controle, a suplementação com fitase, xilanase e -glucanase demostrou reduzir a excreção fecal do nitrogênio (P = 0,007) e fósforo (P < 0,001) em 30 e 49,5%, respectivamente. Em conclusão, a suplementação isolada e combinada do complexo xilanase--glucanase e fitase melhora a digestibilidade da energia e nutrientes de dietas à base de vegetais, e reduz a excreção do nitrogênio e fósforo pelos peixes, colaborando para a produção de tilápias com menor impacto ambiental.

Increasing the inclusion rate of plant-based feed in fish diets increases the content of non-starch polysaccharides (NSP) and phytate. Both NSP and phytate are undesirable in fish nutrition, due to their anti-nutritional properties. Carbohydrases (xylanase and glucanase) and phytases are considered the main alternatives to the problems generated by NSP and phytate, respectively. In this context, this study aimed to evaluate the effect of isolated and combined supplementation of xylanase--glucanase complex and phytase in entirely plant-based diets on energy and nutrients digestibility, including minerals and amino acids availability, and fecal excretion of nitrogen and phosphorus in Nile tilapia juveniles. Four diets were tested, a control diet (CON) without enzymes, a phytase diet (PHY), a xylanase--glucanase diet (XB), and a diet with phytase, xylanase, and glucanase (PHY+XB). Phytase (Natuphos® E) was supplemented at 1000 FTU kg-1 and xylanase--glucanase complex (Natugrain® TS) at 1120 TXU and 500 TGU kg-1. Two hundred seventy-two masculinized fish (22.52 ± 0.65 g) were distributed in a randomized block design with four treatments and four replications, in sixteen cylindrical-conical fiberglass tanks (150 L), adapted for feces collection (modified Guelph system). Fish were fed six times a day to apparent satiation, with experimental diets containing 0.5% chromium oxide, for 21 days. Diets with xylanase and -glucanase supplementation increased the dry matter, starch, and lipids digestibility (P < 0.001), and copper availability (P < 0.001). At the same time, diets with phytase supplementation increased dry matter, crude energy, starch, and ash digestibility (P < 0.001), and magnesium, manganese, and zinc availability (P < 0.001). Phytase also improved the availability of most amino acids, including arginine (P = 0.019), phenylalanine (P = 0.001), histidine (P = 0.019), lysine (P = 0.019), methionine (P = 0.001) and valine (P = 0.025), and when combined with xylanase and -glucanase enhanced the availability of isoleucine (P = 0.004), leucine (P = 0.004), threonine (P = 0.002), glutamic acid (P = 0.00), cystine (P <0.001) and serine (P = 0.01). Enzymatic combination (PHY+XB) shows a synergy effect on protein digestibility (P < 0.001) and calcium, iron, and phosphorus availability (P <0.001). When compared to control diet, xylanase--glucanase and phytase supplementation reduce fecal excretion of nitrogen (P = 0.007) and phosphorus (P <0.001) by 30 and 49.5%, respectively. In conclusion, the isolated and combined supplementation of xylanase--glucanase complex and phytase improves energy and nutrients digestibility in plant-based diets and reduces the excretion of nitrogen and phosphorus by fish, contributing to tilapia production with less environmental impact.

Development of a Real-time PCR test for porcine group A rotavirus diagnosis / Desenvolvimento de um teste de PCR em Tempo Real para o diagnóstico de rotavírus suínos do Grupo A

Group A Rotavirus (RVA) is one of the most common causes of diarrhea in humans and several animal species. A SYBR-Green Real-Time polymerase chain reaction (PCR) was developed to diagnose RVA from porcine fecal samples, targeting amplification of a 137-bp fragment of nonstructural protein 5 (NSP5) gene using mRNA of bovine NADH-desidrogenase-5 as exogenous internal control. Sixty-five samples were tested (25 tested positive for conventional PCR and genetic sequencing). The overall agreement (kappa) was 0.843, indicating 'very good' concordance between tests, presenting 100% of relative sensitivity (25+ Real Time PCR/25+ Conventional PCR) and 87.5% of relative sensitivity (35- Real Time PCR/40- Conventional PCR). The results also demonstrated high intra- and inter-assay reproducibility (coefficient of variation ≤1.42%); thus, this method proved to be a fast and sensitive approach for the diagnosis of RVA in pigs.(AU)

Rotavírus do grupo A (RVA) é uma das causas mais frequentes de diarreias em humanos e várias espécies animais. Um teste de PCR em Tempo Real com SYBR-Green foi desenvolvido visando o diagnóstico de RVA a partir de fezes suínas, através da amplificação de um fragmento de 137 pares de bases do gene da proteína não estrutural 5 (NSP5) viral e de mRNA de NADH-desidrogenase-5 bovina como controle interno exógeno. Foram testadas 65 amostras (25 delas positivas por PCR convencional e sequenciamento nucleotídico). A concordância entre os testes foi de 0,843, considerada "muito boa", apresentando 100% de sensibilidade relativa (25+ PCR Tempo Real/25+ PCR convencional) e 87,5% de sensibilidade relativa (35- PCR Tempo Real/40- PCR convencional). Os resultados também demonstraram elevada reprodutibilidade inter e intra-ensaio (coeficiente de variação ≤ 1,42%); portanto, este método demonstrou ser uma rápida e sensível alternativa para o diagnóstico de RVA em suínos.(AU)

USO DE CARBOIDRASES EM DIETAS À BASE DE MILHO E FARELO DE SOJA PARA FRANGOS DE CORTE

O uso de enzimas que degradam polissacarídeos não-amiláceos (PNAs) em dietas para monogástricos tem sido cada vez mais explorado por nutricionistas, apesar dos mecanismos pelos quais estas enzimas melhoram o valor nutritivo dos alimentos ainda não estarem totalmente esclarecidos. Assim, este estudo foi desenvolvido com o objetivo de evidenciar os principais mecanismos de ação de enzimas que degradam PNAs e o efeito sobre frangos de corte alimentados com dietas à base de milho e farelo de soja. O primeiro experimento, relatado no Capítulo II, foi desenvolvido para avaliar os efeitos da inclusão de diferentes produtos enzimáticos compostos por xilanase e -glucanase em dietas à base de milho com dois níveis de energia para frangos de corte sobre o desempenho, características intestinais, umidade de cama, incidência de lesões de pododermatite, e parâmetros bioquímicos do sangue. Foram utilizados 1.200 pintos machos, distribuídos em esquema fatorial 2 × 4 (dois níveis de energia × ausência ou inclusão de três diferentes xilanases + -glucanases). O ganho de peso e a conversão alimentar foram prejudicados pelo fornecimento de dietas de baixa energia (CN; 2.925 kcal/kg na fase inicial e 3.025 kcal/kg na fase de crescimento). O uso de diferentes produtos enzimáticos compostos por xilanase e -glucanase não afeta o desempenho e a qualidade intestinal de frangos de corte alimentados com dietas à base de milho. O experimento referente ao Capítulo III teve como objetivo avaliar o efeito da inclusão de um produto enzimático composto por xilanase e -glucanase em dietas à base de milho e soja com níveis variáveis de energia para frangos de corte, sobre desempenho, concentração de ácidos graxos de cadeia curta, pH e perfil térmico dos cecos, digestibilidade ileal de energia e proteína e cinética intestinal. Foram utilizados 744 pintos machos, alojados em 24 boxes e distribuídos em delineamento inteiramente casualizado em esquema 2 × 2 dois níveis de energia × ausência ou inclusão de 100 gramas do produto enzimático por tonelada de ração. A suplementação enzimática melhorou o ganho de peso de 1 a 7, e de 1 a 21 dias, porém não afetou o desempenho de 1 a 35 dias. Frangos alimentados com dieta de baixa energia apresentaram maior concentração cecal de ácido acético quando suplementados com enzima. O fornecimento de dietas de baixa energia reduziu o pH do conteúdo cecal e aumentou a temperatura média dos cecos. A digestibilidade ileal de energia foi maior em frangos alimentados com dietas contendo xilanase, e de proteína e energia maiores com o fornecimento de dietas de alta energia. A inclusão do produto enzimático aumentou o tempo médio de retenção (TMR) no íleo distal, e o fornecimento de dietas de baixa energia reduziu o TMR no jejuno distal. Assim, a inclusão de xilanase em dietas à base de milho favorece o ganho de peso de frangos de corte apenas nas três primeiras semanas de vida, porém aumenta o tempo médio de retenção no íleo distal e melhora a digestibilidade ileal de energia.

The use of NSP-degrading enzymes in diets for monogastrics has been increasingly explored by animal nutritionists, although the mechanisms through these enzymes improve the nutritional value of the raw materials are still not clear. Thus, this study was carried in order to explore the mechanisms involved in the effects of NSP-degrading enzymes on broilers fed diets corn-soybean based diets. The first trial, reported in Chapter II, was carried out to evaluate the effects of different enzyme products composed by xylanase and -glucanase in corn-based diets with two levels of energy on performance, intestinal parameters, litter moisture, incidence of pododermatitis, and blood parameters of broilers. A total of 1200 male chicks were distributed in a 2 × 4 factorial arrangement (two energy levels × absence or inclusion of three different xylanases + -glucanases). Weight gain and feed conversion ratio were impaired when low energy diets were fed. In summary, the inclusion of different enzyme products composed by xylanase and -glucanase does not affect the performance and intestinal quality of broilers fed corn-based diets. The objective of the second trial was to evaluate the effect of an enzyme product composed by xylanase and -glucanase in varying energy corn-based diets for broiler chickens on performance, short chain fatty acid concentration on ceca, pH and thermal profile of cecum, energy and protein ileal digestibility and intestinal kinetics. A total of 744 male chicks were alloted in 24 floor pens in a completely randomized design in a 2 × 2 factorial arrangement - two energy levels × absence or inclusion of 100 ppm of the enzyme product. Enzyme supplementation improved weight gain from 1 to 7 and from 1 to 21 days, but did not affect performance from 1 to 35 days. Broilers fed the low energy diet showed higher cecal concentration of acetic acid when supplemented with enzyme. Broilers fed low energy diets presented reduced cecal pH and increased temperature of ceca. The ileal digestibility of energy was higher in broilers fed on enzyme supplemented diets, and ileal digestibility of protein and energy was higher when high energy diets were fed. Inclusion of enzyme increased the mean retention time (MRT) in the distal ileum, and broilers fed low energy diets presented reduced MRT in the distal jejunum. Therefore, although the inclusion of NSP-degrading enzymes in corn-based diets improves the weight gain of broilers only in the first three weeks, it increases the mean retention time in the distal ileum and improves the energy ileal digestibility.

Evolution of Avian coronavirus (AvCoV) in BHK-21 and VERO cells / Evolução de Coronavírus aviário (AvCoV) em células BHK-21 e VERO

Avian coronavirus (AvCoV) infects a range of tissues in chickens and several other avian species. Although the virus can be isolated in chicken embryos, only a few strains of the 6 genotypes/33 lineages can grow in cell lines, with the Beaudette strain (GI-1 lineage) being the most used for in vitro studies. Considering the differences between cell lines and chicken embryos as habitats for AvCoV, this study aimed to assess the diversity of the genes coding for the nonstructural protein 3 (nsp3) and spike envelope protein (S) after serial passages in BHK-21 and Vero cells. After 14 passages of an embryo-adapted Beaudette strain, the virus loads fluctuated in both cell lines, with the highest loads being 8.72 log genome copies/µL for Vero and 6.36 log genome copies/µL for BHK-21 cells. No polymorphisms were found for nsp3; regarding S, not only aa substitutions (Vero: 8th passage A150S, and 14th S150A; BHK-21: 4th S53F, 8th F53Y, and 8th S95R), but also minor variants could be detected on chromatograms with fluctuating intensities. As the regions of these aa substitutions are within the receptor-binding domain of S, it can be speculated that differences in cell receptors between Vero and BHK-21 cells and the speed of cell death led to the selection of different dominant strains, whi

O Coronavírus aviário AvCoV infecta uma variedade de tecidos de galinhas e de outras espécies aviárias. Apesar de este vírus poder ser isolado em ovos embrionados de galinha, apenas alguns dos 6 genótipos / 33 linhagens podem crescer em cultivo celular, sendo a cepa Beuadette (linhagem GI-11) a mais utilizada para estudos in vitro. Considerando as diferentes linhagens celulares e ovos embrionados como habitats para o AvCoV, este estudo teve por objetivo estudar a diversidade de genes que codificam para a proteína não-estrutural 3 (nsp3) e espícula (S) após passagens seriadas em células BHK-21 e VERO. Após 14 passagens, de uma amostra Beuadette adaptada a ovos embrionados, os títulos virais variaram em ambas as células, com os maiores títulos sendo de 8,72 log cópias genômicas/µL para Vero e 6,36 cópias genômicas/µL para BHK-21. Nenhum polimorfismo foi encontrando para nsp3. Considerando a proteína S, não somente foram encontradas substituições de aminoácidos (Vero: 8a passagem A150S e 14a passagem S150A; BHK-21: 4a passagem S53F, 8a passagem F53Y e S95R), mas também, variantes subconsensuais foram detectadas pelos cromatogramas com intensidades flutuantes. Uma vez que as regiões destes aa se encontram no domínio de ligação de receptor de S, pode