Cryptosporidium sp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão, Brazil / Detecção de Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, Brasil

ABSTRACT: This study detected Cryptosporidium spp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão and determine the elective tissue(s) to examine this protozoan. For this purpose, 200 cultivated oysters were purchased from the municipality of Raposa and another 100 from Paço do Lumiar. Additionally, 100 oysters were extracted from the natural stock of the municipality of Primeira Cruz, thus making up a total of 400 oysters. They were grouped into 80 pools consisting of 5 oysters each. From each pool, the gills and visceral mass were removed to obtain 160 pools, 80 pools for the gill group and another 80 for the visceral mass group. Then, DNA was extracted from each pool using a commercial kit with modifications. Subsequently, the protozoan DNA was detected using nested polymerase chain reaction. With this technique, the DNA of the protozoan under investigation was detected in 2.5% (n = 2/80) of the pools containing gills, with 1.25% of the pools (n = 1/80) belonging to the cultivation group of oysters and the other 1.25% (n = 1/80) to the natural stock. With the results obtained in this study, it was concluded that the analyzed oysters of the genus Crassostrea, from cultivation and natural stock groups, found in the state of Maranhão, were contaminated by Cryptosporidium spp. and may become potential sources of infection in humans and other animals. In addition, the gills are the elective tissue for the study of Cryptosporidium spp. in oysters.

RESUMO: Objetivou-se com o estudo detectar Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão e determinar o(s) tecido(s) eletivo(s) para pesquisa desse protozoário. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz, totalizando 400 ostras. Estas foram agrupadas em 80 pools constituídos por cinco animais. De cada pool, as brânquias e a massa visceral foram removidas totalizando 160 pools, sendo 80 para o grupo das brânquias e 80 para o grupo de massa visceral. Na sequência, procedeu-se à extração de DNA de cada pool com a utilização de kit comercial com modificações. Posteriormente, realizou-se a detecção do DNA do protozoário por meio da técnica de Nested-PCR. Com a técnica utilizada, foi detectado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools apenas de brânquias, sendo 1,25% pools (n=1/80) oriundos de cultivo e os outros 1,25% (n=1/80) de estoque natural. Com os resultados obtidos nesse estudo, conclui-se que as ostras analisadas do gênero Crassostrea sp., oriundas de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, estavam contaminadas por Cryptosporidium sp. e podem se reverter em fontes potenciais para seres humanos e outros animais. Para a pesquisa de Cryptosporidium sp. em ostras, as brânquias são o tecido eletivo.

Cryptosporidium sp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão, Brazil / Detecção de Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, Brasil

This study detected Cryptosporidium spp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão and determine the elective tissue(s) to examine this protozoan. For this purpose, 200 cultivated oysters were purchased from the municipality of Raposa and another 100 from Paço do Lumiar. Additionally, 100 oysters were extracted from the natural stock of the municipality of Primeira Cruz, thus making up a total of 400 oysters. They were grouped into 80 pools consisting of 5 oysters each. From each pool, the gills and visceral mass were removed to obtain 160 pools, 80 pools for the gill group and another 80 for the visceral mass group. Then, DNA was extracted from each pool using a commercial kit with modifications. Subsequently, the protozoan DNA was detected using nested polymerase chain reaction. With this technique, the DNA of the protozoan under investigation was detected in 2.5% (n = 2/80) of the pools containing gills, with 1.25% of the pools (n = 1/80) belonging to the cultivation group of oysters and the other 1.25% (n = 1/80) to the natural stock. With the results obtained in this study, it was concluded that the analyzed oysters of the genus Crassostrea, from cultivation and natural stock groups, found in the state of Maranhão, were contaminated by Cryptosporidium spp. and may become potential sources of infection in humans and other animals. In addition, the gills are the elective tissue for the study of Cryptosporidium spp. in oysters.

Objetivou-se com o estudo detectar Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão e determinar o(s) tecido(s) eletivo(s) para pesquisa desse protozoário. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz, totalizando 400 ostras. Estas foram agrupadas em 80 pools constituídos por cinco animais. De cada pool, as brânquias e a massa visceral foram removidas totalizando 160 pools, sendo 80 para o grupo das brânquias e 80 para o grupo de massa visceral. Na sequência, procedeu-se à extração de DNA de cada pool com a utilização de kit comercial com modificações. Posteriormente, realizou-se a detecção do DNA do protozoário por meio da técnica de Nested-PCR. Com a técnica utilizada, foi detectado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools apenas de brânquias, sendo 1,25% pools (n=1/80) oriundos de cultivo e os outros 1,25% (n=1/80) de estoque natural. Com os resultados obtidos nesse estudo, conclui-se que as ostras analisadas do gênero Crassostrea sp., oriundas de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, estavam contaminadas por Cryptosporidium sp. e podem se reverter em fontes potenciais para seres humanos e outros animais. Para a pesquisa de Cryptosporidium sp. em ostras, as brânquias são o tecido eletivo.

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China / Amplificação cruzada de gêneros e identificação de Colpodella sp. com iniciadores de Cryptosporidium em amostras fecais de zoofilia do nordeste da China

The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.

Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China

Abstract The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.

Resumo Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China / Amplificação cruzada de gêneros e identificação de Colpodella sp. com iniciadores de Cryptosporidium em amostras fecais de zoofilia do nordeste da China

Abstract The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.

Resumo Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados ​​anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China / Amplificação cruzada de gêneros e identificação de Colpodella sp. com iniciadores de Cryptosporidium em amostras fecais de zoofilia do nordeste da China

The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.(AU)

Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.(AU)

Genetic diversity of Anaplasma marginale in calves under natural transmission conditions in the Northeast region of Pará / Diversidade genética de Anaplasma marginale em bezerros sob condições de transmissão natural na região Nordeste do Pará

The objective of the present study was to detect the genetic diversity of Anaplasma marginale strains in naturally infected calves from a rural property located in the northeastern region of the state of Pará, Eastern Amazon, which has a history of mortality due to anaplasmosis. Fourteen calves positive for A. marginale were selected using a semi-nested polymerase chain reaction for the target msp1α gene, with asymptomatic (n=3) and symptomatic (n=11) infections. After sequencing the samples, two genotypes were verified in the E and C regions and the structures in tandem repeats were determined. Nine different strains were found: eight related to the E genotype (α-ß-ß-Γ = one animal, asymptomatic; 16-F-17-F-F = two animals, symptomatic; α-ß-F-F-F-F = one animal, asymptomatic; 31-62-62-61 = one animal, symptomatic; τ-10-3 = three animals, two symptomatic and one asymptomatic; α-ß-ß-ß = one animal, symptomatic; τ-22 -13-18 = two animals, both symptomatic; ß-ß-ß-BRA1-31 = two animals, both symptomatic), and one related to genotype C (23-24-25-31-27-27 = one animal, asymptomatic). Genotype E was predominant in 92.86% of the samples (13/14), followed by genotype C (7.14%). This study made it possible to detect the genetic diversity of A. marginale in calves from the selected dairy farm, in addition to identifying the BRA1 sequence in the animals of the present study, which was recently diagnosed in Minas Gerais, demonstrating the dispersion of A. marginale strains in herds from different Brazilian states. Genetic diversity of A. marginale was observed in both symptomatic and asymptomatic calves. There were no significant differences when clinical signs were compared to the genotype verified in the infected animals. The prevalence of pathogenicity was not observed.

O objetivo do presente trabalho foi detectar a diversidade genética de cepas de Anaplasma marginale em bezerros naturalmente infectados oriundos de uma propriedade rural localizada na região nordeste do estado do Pará, Amazônia Oriental, a qual apresentava histórico de mortalidade devido à anaplasmose. Foram selecionados 14 bezerros positivos para A. marginale pela técnica de semi-nested PCR (nPCR) para o alvo no gene msp1α, com infecção assintomática (n=3) e sintomáticos (n=11). Após o sequenciamento das amostras foram verificados dois genótipos nas regiões E e C, e determinadas as estruturas em tandem repeats. Nove diferentes estirpes foram encontradas, sendo oito relacionadas ao genótipo E (α-ß-ß-Γ = um animal, assintomático; 16-F-17-F-F = dois animais, sintomáticos; α-ß-F-F-F-F = um animal, assintomático; 31-62-62-61 = um animal, sintomático; τ-10-3 = três animais, dois sintomáticos e um assintomático; α-ß-ß-ß = um animal, sintomático; τ-22-13-18 = dois animais, sintomáticos; ß-ß-ß-BRA1-31 = dois animais, sintomáticos) e uma relacionada ao genótipo C (23-24-25-31-27-27 = um animal, assintomático). O genótipo E foi predominante em 92,86% das amostras (13/14), seguido pelo genótipo C (7,14%). O estudo possibilitou a detecção da diversidade genética de A. marginale em bezerros dessa propriedade leiteira, além de identificar a sequência BRA1 nos animais do presente estudo, a qual foi diagnosticada recentemente em Minas Gerais, o que demonstra a dispersão das estirpes de A. marginale nos rebanhos de diferentes estados brasileiros. A diversidade genética de A. marginale foi observada tanto em bezerros sintomáticos quanto em assintomáticos e não houve diferença significativa quando se comparou os sinais clínicos ao genótipo verificado no animal infectado, não observando a prevalência de patogenicidade de estirpes.

Evaluation of fecal smear methods for research on Cryptosporidium spp. oocysts in the feces of dairy calves / Avaliação dos métodos de esfregaço fecal para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. nas fezes de bezerros da bovinocultura de leite

The objective of this study is to compare the direct fecal smear (DFS) and centrifugal sedimentation (CS) methods in the detection of Cryptosporidium spp. oocysts in fecal samples of dairy calves. One hundred and fourteen fecal samples were collected from calves aged up to six months from 10 dairy farms located in Palotina and Francisco Alves, Paraná, Brazil. The microscopic analysis revealed the presence of Cryptosporidium spp. oocysts in 51.75% (59/114) of the samples in both methods. In CS, 48.25% (55/114) of the samples were positive, while in DFS slides, only 6.14% (7/114) were positive. Only 4 samples were positive exclusively in DFS. To ensure that there were no false-negative results in the microscopic analysis, the 55 samples that were negative in both DFS and CS were selected for molecular analysis using the nested PCR (nPCR). Of these 55 samples, 24% (13/55) were positive and forwarded for sequencing part of the genome, which made it possible to identify C. parvum, C. bovis and C. ryanae. Besides the characterization of the Cryptosporidium species, it was possible to identify bacteria of the genus Acinetobacter interfering directly in the analyzed samples. The microscopic analysis also revealed higher sensitivity when CS was used to make the fecal smears. However, some samples that were negative in this technique had positive PCR results. Thus, molecular analysis is indicated to confirm cases of Cryptosporidium spp. Further studies are necessary to prove the specificities of the used primers since the results obtained in nPCR were positive for the protozoan but, when genetic sequencing was performed, Acinetobacter spp. was identified.(AU)

O objetivo deste trabalho foi comparar os métodos de esfregaço fecal direto (DFS) e centrífugo sedimentação (CS) para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bezerros leiteiros. Foram coletadas 114 amostras fecais de bezerros com até seis meses de idade, provenientes de dez propriedades leiteiras localizadas nos municípios de Palotina e Francisco Alves, Paraná. Por meio da análise microscópica, foi possível observar oocistos de Cryptosporidium spp. em 51,75% (59/114) das amostras. Pelo método da CS foi identificada positividade em 48,25% (55/114) das amostras, enquanto nas lâminas pelo método do esfregaço fecal direto (DFS), apenas 6,14% (7/114) foram positivas. Somente 4 amostras foram positivas exclusivamente no método do DFS. Para assegurar que na análise microscópica não houvesse resultados falso-negativos, as 55 amostras negativas para os dois métodos de confecção de lâminas (DFS e CS) foram selecionadas para análise molecular por meio da técnica de Nested PCR. Das 55 amostras submetidas a nPCR, 24% (13/55) apresentaram-se positivas e foram encaminhadas para o sequenciamento genético de uma porção do genoma, o qual possibilitou identificar as espécies de C. parvum, C. bovis e C. ryanae. Além da caracterização das espécies de Cryptosporidium, foi possível identificar a presença de bactérias do gênero Acinetobacter interferindo diretamente nas amostras analisadas. A análise microscópica revelou maior sensibilidade quando o método de CS foi usado para a confecção dos esfregaços fecais, entretanto, amostras negativas por meio dessa metodologia apresentaram resultados positivos na nPCR. Desta forma, para a confirmação dos casos de Cryptosporidium spp., é indicado a realização da análise molecular. Novos estudos são necessários para se comprovar a especificidade dos primers utilizados, uma vez que na nPCR o resultado obtido foi positivo, porém ao realizar o sequenciamento genético houve a identificação de Acinetobacter spp.(AU)

Protocolo para diagnóstico molecular de imunodeficiência e leucemia em gatos domésticos / Protocol for molecular diagnosis of immunodeficiency and leukemia, in domestic cats

Diversas afecções que acometem os felinos domésticos, como as retroviroses, não possuem tratamento efetivo. Tal fato torna relevante o estudo dessas doenças, em virtude da baixa eficácia de cura e caráter majoritariamente vitalício. Entre as retroviroses que mais acometem os felinos estão a imunodeficiência felina (FIV) e a leucemia felina (FeLV). O diagnóstico é obtido pela associação do exame clínico, geralmente inconclusivo, com exames laboratoriais complementares. Testes moleculares, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), são eficientes para a detecção do DNA proviral e podem ser utilizados na rotina diagnóstica. Diante disso, o objetivo deste estudo foi comprovar a eficiência do protocolo molecular Nested PCR para diagnosticar FIV e FeLV. Para tal, amostras de sangue e/ou medula de 41 gatos domésticos foram coletadas por meio de punção venosa ou de medula e encaminhadas ao laboratório Oncells Biotecnologia. Os seguintes pares de primers foram adotados para o Nested PCR: FF1 e FF2 para o primeiro ciclo, com um amplicon de 1325pb para FIV e 490pb para a FeLV. Para o segundo foi utilizada a combinação F14, F15, FE4 e FE7, com um amplicon de 1138pb para FIV e 306pb para FeLV. As bandas correspondentes às esperadas para FeLV foram detectadas pela observação dos géis, porém, além de outras bandas inespecíficas, não foram observadas bandas correspondentes à FIV. Os resultados confirmam a capacidade de detecção do patógeno da FeLV pela técnica empregada. No entanto, novos ajustes do protocolo são necessários.

Several affections that affect domestic cats, such as retroviruses, do not have effective treatment. This fact makes the study of these diseases relevant, due to the low healing efficacy and mostly lifelong character. Among the retroviruses that most affect felines are feline immunodeficiency (FIV) and feline leukemia (FeLV). The diagnosis is obtained by associating the clinical examination, which is generally inconclusive, with complementary laboratory tests. Molecular tests, such as the polymerase chain reaction (PCR), are efficient for proviral DNA detection and can be used in the diagnostic routine. Therefore, this study aimed to prove the efficiency of the molecular protocol Nested PCR to diagnose FIV and FeLV. For this purpose, blood and/ or bone marrow samples from 41 domestic cats were collected through venipuncture or bone marrow and sent to the Oncells Biotechnology laboratory. The following primer pairs were adopted for the Nested PCR: FF1 and FF2 for the first cycle, with an amplicon of 1325bp for FIV and 490bp for FeLV. For the second, the combination F14, F15, FE4, and FE7 was used, with an amplicon of 1138bp for FIV and 306bp for FeLV. The bands corresponding to those expected for FeLV were detected by observing the gels; however, in addition to other non-specific bands, bands corresponding to FIV were not observed. The results confirm the ability to detect the FeLV pathogen by the technique employed. Nevertheless new protocol adjustments are required.

The Rv2807 target gene: a determining factor to directly detect Mycobacterium bovis from suspected bovine tuberculosis lesions / Gene alvo Rv2807: um fator determinante para detectar Mycobacterium bovis diretamente de lesões suspeitas de tuberculose bovina

Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis caused by Mycobacterium bovis, a species belonging to the Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) group. Direct bTB diagnosis from suggestive lesions can be performed by nested q-PCR targeting the Rv2807 gene present in the MTC group, as well as the TbD1 gene, present in M. bovis. In this context, the aim of the present study was to assess the importance of considering positive MTC results for the Rv2807 target gene obtained through the nested real time polymerase chain reaction (nested q-PCR) applied to samples obtained directly from suspected bTB lesions. A total of 174 samples of suggestive bTB caseous lesions were obtained during cattle slaughter in slaughterhouses in the state of Mato Grosso, Brazil. DNA was extracted from the lesions and nested q-PCR was performed to detect both MTC and M. bovis. Both samples positive for the Rv2807 (41/174) and TbD1 (29/174) were submitted to bacterial culturing (23/41), and the DNA of the isolates (23) was extracted and submitted again to nested q-PCR. The Rv2807 gene (MTC) was previously amplified by nested q-PCR directly from the lesions, although the TbD1 gene specific for M. bovis was not amplified previously in four of the successfully isolated samples (4/23), only following isolation, and only the Rv2807 gene was amplified before and after isolation. In conclusion, the target gene Rv2807(MTC) exhibited higher positivity in the analyzed samples compared to the TbD1 gene (M. bovis).

A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose causada pelo Mycobacterium bovis, uma espécie pertencente ao grupo do complexo Mycobacterium tuberculosis (MTC). O diagnóstico direto de bTB a partir de lesões sugestivas pode ser realizado por nested q-PCR visando o gene Rv2807 presente no grupo MTC, bem como o gene TbD1, presente em M. bovis. Nesse contexto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a importância de considerar os resultados de MTC positivos para o gene alvo Rv2807 obtidos através da reação em cadeia da polimerase nested real time (nested q-PCR) aplicada a amostras obtidas diretamente de lesões suspeitas de bTB. Um total de 174 amostras de lesões caseosas sugestivas de bTB foram obtidas durante o abate de bovinos em frigoríficos do estado de Mato Grosso, Brasil. DNA foi extraído das lesões e nested q-PCR foi realizado para detectar tanto MTC quanto M. bovis. Ambas as amostras positivas para Rv2807 (41/174) e TbD1 (29/174) foram submetidas a cultura bacteriana (23/41), e o DNA dos isolados (23) foi extraído e submetido novamente à nested q-PCR. O gene Rv2807 (MTC) foi previamente amplificado por nested q-PCR diretamente das lesões, embora o gene TbD1 específico para M. bovis não tenha sido amplificado anteriormente em quatro das amostras isoladas com sucesso (4/23), apenas após o isolamento, e apenas o gene Rv2807 foi amplificado antes e após o isolamento. Em conclusão, o gene alvo Rv2807 (MTC) apresentou maior positividade nas amostras analisadas em relação ao gene TbD1 (M. bovis).

Detection of mycobacteria in coalho cheese sold in Northeastern Brazil / Detecção de micobactérias em queijo de coalho comercializado no Nordeste do Brasil

The aim of the present study was to detect and identify Mycobaterium spp. in 50 samples of coalho cheese sold in the Northeast region of Brazil. Of the 50 analyzed samples, 35 were produced by the artisanal process, using raw milk, and 15 originated from industrialized establishments that pasteurize milk. Conventional and real-time nested PCR for the rv2807 gene of the M. tuberculosis complex was performed directly from the 50 analyzed samples. Samples of coalho cheese were grown simultaneously in Stonebrink medium, and conventional PCR was performed from the bacterial isolates with primers that flank differentiation region 4 (DR4), specific to M. bovis, mb400F. Bacterial isolates negative by PCR for RD4 were subjected to PCR for hsp65 of Mycobacterium spp., with subsequent DNA sequencing. The cultures were negative for the M. tuberculosis complex, but two samples (4%) from the artisanal process (with raw milk) exhibited identity with hsp65 of Mycobacterium lehmanii (Sequence ID: KY933786.1, identities: 312/363 [86%]); and Mycobacterium rutilum (sequence ID: LT629971.1, identities: 331/371 [89%]), showing to be indicative environmental contamination. Non-tuberculous mycobacteria are emergent and ubiquitous microorganisms; therefore, they deserve greater attention in the cheese production chain, both in terms of Good Agricultural Practices (GAP)

O presente estudo teve como objetivo detectar e identificar Mycobaterium spp. em 50 amostras de queijo de coalho comercializados na região Nordeste do Brasil. Das 50 amostras analisadas, 35 foram produzidas pelo processo artesanal, com leite cru e 15 provenientes de estabelecimentos industrializados que realizam a pasteurização do leite. Nested-PCR convencional e em tempo real para o gene rv2807 do Complexo M. tuberculosis foi realizada diretamente das cinquenta amostras analisadas. Paralelamente, as amostras de queijo de coalho foram cultivadas em meio de Stonebrink e dos isolados bacterianos foi realizada PCR convencional com iniciadores que flanqueiam a região de diferenciação 4 (RD4), específica de M. bovis, mb400F. Os isolados bacterianos negativos na PCR para RD4 foram submetidos à PCR para hsp65 de Mycobacterium spp., com posterior sequenciamento do DNA. As culturas mostraram-se negativas para o Complexo M. tuberculosis, porém duas amostras oriundas do processo artesanal (com leite cru) (4%) apresentaram identidade com hsp65 de Mycobacterium lehmanii (ID da sequência: KY933786.1, identidades: 312/363 [86%]); e Mycobacterium rutilum (ID da sequência: LT629971.1, identidades: 331/371 [89%]), apontando-se como indicativos de contaminação ambiental. As micobactérias-não-tuberculosas (MNT) são microrganismos emergentes e de natureza ubíqua. Devido a essas características merecem maior atenção na cadeia produtiva de queijos, tanto nas boas práticas agropecuárias (BPAs) quanto nas boas práticas de fabricação de alimentos (BPFs).

Occurrence and molecular characterization of Giardia duodenalis from naturally infected dogs in the municipality of Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil

ABSTRACT: Giardiasis is an important and prevalent zoonosis in dogs and humans caused by Giardia spp. The close relationship between pets and humans has physical, emotional and social benefits. The dogs have an important role in Giardia duodenalis cycle and transmission. This study aimed to verify the occurrence of the parasite in dogs from Central Region, in Santa Maria, Rio Grande do Sul State, Brazil, from April to October 2018. Dog feces (230) were submitted to Faust coproparasitological and molecular analyses. The positive samples in the nested-PCR (-giardin gene) were sent for DNA sequencing and phylogenetic analyses (Neighbor-Joining). The occurrence of G. duodenalis, was 5.6% (13/230) and 4.3% (10/230) detected by coproparasitological technique and nested-PCR, respectively. There was no difference in the sensitivity of the tests used. From the faecal samples analyzed, there were no differences among the variables: diagnostic techniques, local, sex, and age of the animals (p>0.05). Only in the stool examination methodology a difference was observed between the ages (p 0.05). G. duodenalis assemblages were C and D, frequently reported in dogs. The close relationship between dogs and people may allow co-infections of circulating parasites in the population, including Giardia spp. and increasing the risk of transmission of zoonotic agents.

RESUMO: A giardíase é uma zoonose importante e prevalente em cães e humanos, sendo causada por Giardia spp. A estreita relação entre animais de estimação e seres humanos traz benefícios físicos, emocionais e sociais. Os cães têm um papel importante no ciclo e transmissão de Giardia duodenalis. Este estudo teve como objetivo verificar a ocorrência do parasita em cães da Região Central, em Santa Maria, RS, Brasil, de abril a outubro de 2018. As fezes de cães (230) foram submetidas a técnica coproparasitológica de Faust e análises moleculares. As amostras positivas no nested-PCR (gene -giardin) foram enviadas para sequenciamento de DNA e posterior análise filogenética (Neighbor-Joining). A ocorrência de G. duodenalis foi de 5,6% (13/230) e 4,3% (10/230) detectados pela técnica coproparasitológica e nested-PCR, respectivamente. Não houve diferença na sensibilidade dos testes utilizados. Das amostras fecais analisadas, não houve diferenças entre as variáveis: técnicas de diagnóstico, local, sexo e idade dos animais (p>0,05). Somente na metodologia de exame de fezes observou-se diferença entre as idades (p 0,05). As assemblages de G. duodenalis encontradas foram C e D, frequentemente relatadas em cães. A estreita relação entre cães e pessoas pode permitir co-infecções de parasitas circulantes na população, incluindo Giardia spp. e aumentando o risco de transmissão de agentes zoonóticos.

Occurrence and molecular characterization of Giardia duodenalis from naturally infected dogs in the municipality of Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil / Ocorrência e caracterização molecular de Giardia duodenalis em cães naturalmente infectados no município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil

Giardiasis is an important and prevalent zoonosis in dogs and humans caused by Giardia spp. The close relationship between pets and humans has physical, emotional and social benefits. The dogs have an important role in Giardia duodenalis cycle and transmission. This study aimed to verify the occurrence of the parasite in dogs from Central Region, in Santa Maria, Rio Grande do Sul State, Brazil, from April to October 2018. Dog feces (230) were submitted to Faust coproparasitological and molecular analyses. The positive samples in the nested-PCR (β-giardin gene) were sent for DNA sequencing and phylogenetic analyses (Neighbor-Joining). The occurrence of G. duodenalis, was 5.6% (13/230) and 4.3% (10/230) detected by coproparasitological technique and nested-PCR, respectively. There was no difference in the sensitivity of the tests used. From the faecal samples analyzed, there were no differences among the variables: diagnostic techniques, local, sex, and age of the animals (p>0.05). Only in the stool examination methodology a difference was observed between the ages (p<0.05). G. duodenalis assemblages were C and D, frequently reported in dogs. The close relationship between dogs and people may allow co-infections of circulating parasites in the population, including Giardia spp. and increasing the risk of transmission of zoonotic agents.(AU)

A giardíase é uma zoonose importante e prevalente em cães e humanos, sendo causada por Giardia spp. A estreita relação entre animais de estimação e seres humanos traz benefícios físicos, emocionais e sociais. Os cães têm um papel importante no ciclo e transmissão de Giardia duodenalis. Este estudo teve como objetivo verificar a ocorrência do parasita em cães da Região Central, em Santa Maria, RS, Brasil, de abril a outubro de 2018. As fezes de cães (230) foram submetidas a técnica coproparasitológica de Faust e análises moleculares. As amostras positivas no nested-PCR (gene β-giardin) foram enviadas para sequenciamento de DNA e posterior análise filogenética (Neighbor-Joining). A ocorrência de G. duodenalis foi de 5,6% (13/230) e 4,3% (10/230) detectados pela técnica coproparasitológica e nested-PCR, respectivamente. Não houve diferença na sensibilidade dos testes utilizados. Das amostras fecais analisadas, não houve diferenças entre as variáveis: técnicas de diagnóstico, local, sexo e idade dos animais (p>0,05). Somente na metodologia de exame de fezes observou-se diferença entre as idades (p<0,05). As assemblages de G. duodenalis encontradas foram C e D, frequentemente relatadas em cães. A estreita relação entre cães e pessoas pode permitir co-infecções de parasitas circulantes na população, incluindo Giardia spp. e aumentando o risco de transmissão de agentes zoonóticos.(AU)

Occurrence and molecular characterization of Giardia duodenalis from naturally infected dogs in the municipality of Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil / Ocorrência e caracterização molecular de Giardia duodenalis em cães naturalmente infectados no município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil

Giardiasis is an important and prevalent zoonosis in dogs and humans caused by Giardia spp. The close relationship between pets and humans has physical, emotional and social benefits. The dogs have an important role in Giardia duodenalis cycle and transmission. This study aimed to verify the occurrence of the parasite in dogs from Central Region, in Santa Maria, Rio Grande do Sul State, Brazil, from April to October 2018. Dog feces (230) were submitted to Faust coproparasitological and molecular analyses. The positive samples in the nested-PCR (β-giardin gene) were sent for DNA sequencing and phylogenetic analyses (Neighbor-Joining). The occurrence of G. duodenalis, was 5.6% (13/230) and 4.3% (10/230) detected by coproparasitological technique and nested-PCR, respectively. There was no difference in the sensitivity of the tests used. From the faecal samples analyzed, there were no differences among the variables: diagnostic techniques, local, sex, and age of the animals (p>0.05). Only in the stool examination methodology a difference was observed between the ages (p<0.05). G. duodenalis assemblages were C and D, frequently reported in dogs. The close relationship between dogs and people may allow co-infections of circulating parasites in the population, including Giardia spp. and increasing the risk of transmission of zoonotic agents.(AU)

A giardíase é uma zoonose importante e prevalente em cães e humanos, sendo causada por Giardia spp. A estreita relação entre animais de estimação e seres humanos traz benefícios físicos, emocionais e sociais. Os cães têm um papel importante no ciclo e transmissão de Giardia duodenalis. Este estudo teve como objetivo verificar a ocorrência do parasita em cães da Região Central, em Santa Maria, RS, Brasil, de abril a outubro de 2018. As fezes de cães (230) foram submetidas a técnica coproparasitológica de Faust e análises moleculares. As amostras positivas no nested-PCR (gene β-giardin) foram enviadas para sequenciamento de DNA e posterior análise filogenética (Neighbor-Joining). A ocorrência de G. duodenalis foi de 5,6% (13/230) e 4,3% (10/230) detectados pela técnica coproparasitológica e nested-PCR, respectivamente. Não houve diferença na sensibilidade dos testes utilizados. Das amostras fecais analisadas, não houve diferenças entre as variáveis: técnicas de diagnóstico, local, sexo e idade dos animais (p>0,05). Somente na metodologia de exame de fezes observou-se diferença entre as idades (p<0,05). As assemblages de G. duodenalis encontradas foram C e D, frequentemente relatadas em cães. A estreita relação entre cães e pessoas pode permitir co-infecções de parasitas circulantes na população, incluindo Giardia spp. e aumentando o risco de transmissão de agentes zoonóticos.(AU)

Detection of mycobacteria in coalho cheese sold in Northeastern Brazil / Detecção de micobactérias em queijo de coalho comercializado no Nordeste do Brasil

The aim of the present study was to detect and identify Mycobaterium spp. in 50 samples of coalho cheese sold in the Northeast region of Brazil. Of the 50 analyzed samples, 35 were produced by the artisanal process, using raw milk, and 15 originated from industrialized establishments that pasteurize milk. Conventional and real-time nested PCR for the rv2807 gene of the M. tuberculosis complex was performed directly from the 50 analyzed samples. Samples of coalho cheese were grown simultaneously in Stonebrink medium, and conventional PCR was performed from the bacterial isolates with primers that flank differentiation region 4 (DR4), specific to M. bovis, mb400F. Bacterial isolates negative by PCR for RD4 were subjected to PCR for hsp65 of Mycobacterium spp., with subsequent DNA sequencing. The cultures were negative for the M. tuberculosis complex, but two samples (4%) from the artisanal process (with raw milk) exhibited identity with hsp65 of Mycobacterium lehmanii (Sequence ID: KY933786.1, identities: 312/363 [86%]); and Mycobacterium rutilum (sequence ID: LT629971.1, identities: 331/371 [89%]), showing to be indicative environmental contamination. Non-tuberculous mycobacteria are emergent and ubiquitous microorganisms; therefore, they deserve greater attention in the cheese production chain, both in terms of Good Agricultural Practices (GAP)(AU)

O presente estudo teve como objetivo detectar e identificar Mycobaterium spp. em 50 amostras de queijo de coalho comercializados na região Nordeste do Brasil. Das 50 amostras analisadas, 35 foram produzidas pelo processo artesanal, com leite cru e 15 provenientes de estabelecimentos industrializados que realizam a pasteurização do leite. Nested-PCR convencional e em tempo real para o gene rv2807 do Complexo M. tuberculosis foi realizada diretamente das cinquenta amostras analisadas. Paralelamente, as amostras de queijo de coalho foram cultivadas em meio de Stonebrink e dos isolados bacterianos foi realizada PCR convencional com iniciadores que flanqueiam a região de diferenciação 4 (RD4), específica de M. bovis, mb400F. Os isolados bacterianos negativos na PCR para RD4 foram submetidos à PCR para hsp65 de Mycobacterium spp., com posterior sequenciamento do DNA. As culturas mostraram-se negativas para o Complexo M. tuberculosis, porém duas amostras oriundas do processo artesanal (com leite cru) (4%) apresentaram identidade com hsp65 de Mycobacterium lehmanii (ID da sequência: KY933786.1, identidades: 312/363 [86%]); e Mycobacterium rutilum (ID da sequência: LT629971.1, identidades: 331/371 [89%]), apontando-se como indicativos de contaminação ambiental. As micobactérias-não-tuberculosas (MNT) são microrganismos emergentes e de natureza ubíqua. Devido a essas características merecem maior atenção na cadeia produtiva de queijos, tanto nas boas práticas agropecuárias (BPAs) quanto nas boas práticas de fabricação de alimentos (BPFs).(AU)

Pathological, molecular and phylogenic study of fowlpox virus in domesticated chickens of Tikrit City, Iraq / Estudo patológico, molecular e filogenético do vírus da varíola aviária em frangos de corte domesticados da cidade de Tikrit, Iraque

Fowlpox virus (FPV) is one of the viruses affecting chickens worldwide, causing pathological and economic losses in the poultry industry. Viral lesions are easily recognizable by the eye and usually appear in the featherless areas, especially the head. Moreover, the virus could lead to blindness and mortality in some cases. This study diagnosed the suspected fowlpox cases, identified and classified the causative agent. We also analyzed the differences and similarities of closely related viruses at the neighboring and regional countries. Fifty samples were collected from three locations of Tikrit city from the domesticated chickens, which showed cutaneous lesions. Virus DNA was extracted directly from tissue samples before the nested PCR technique was performed. The virion core protein (P4b) gene is partially sequenced and analyzed with routine histological sectioning. Results showed that the virus causes pock lesions of dermal hyperplasia and hyperkeratosis. Hyperplasia and congestion of the chorioallantoic membrane were also recorded. The study also showed that the DNA of FPV could be extracted directly from animal tissue without further purification. The sequence analysis showed that the FPV was confirmed in all samples clustered in clade A identical with Iranian and Egyptian isolates. In conclusion, this study approved that the virus belongs to the classical dermal type of poxviruses and the short genetic distances between viruses related to closely neighboring countries. We also concluded that the conservative P4b gene included mutation sites that make this gene practical for diagnosing the virus and phylogenetic analysis.(AU)

O vírus da varíola aviária (VVA) é um dos vírus que acometem os frangos de corte em todo o mundo, causando perdas patológicas e econômicas na indústria aviária. As lesões causadas pelo vírus são facilmente reconhecidas pela observação visual e usualmente aparecem nas áreas do corpo das aves livres de penas, especialmente na cabeça. Além disso, em alguns casos a doença pode provocar a cegueira e a mortalidade de animais acometidos. O presente trabalho foi delineado para diagnosticar casos suspeitos de varíola aviária, identificar o agente causal e classificá-lo. Adicionalmente foram analisadas diferenças e similaridades com outros vírus estreitamente relacionados em localidades vizinhas e regionais. Cinquenta amostras foram colhidas em três localidades da cidade de Tikrit de frangos de corte, domesticados, que apresentavam lesões cutâneas. O DNA do vírus foi extraído diretamente das amostras de tecidos antes que a técnica de PCR fosse realizada. As proteínas do core do vírus, gene (P4b), foram parcialmente sequenciadas de analisadas em secções da rotina histológica. Os resultados obtidos revelaram que o vírus causa lesões variólicas com hiperplasia dermal e hiperqueratose. A hiperplasia e a congestão da membrana corioalantóica também foram registradas. O estudo também revelou que o DNA do VVA pode ser extraído diretamente de tecidos animais sem a realização de uma pré-purificação. A análise sequencial revelou que o VVA foi confirmado em todas as amostras agrupando-se em uma classe A, idêntica com isolados iranianos e egípcios. A conclusão obtida foi que o presente trabalho confirmou que o vírus pertence ao tipo dérmico clássico dos poxvirus e que as curtas distâncias genéticas entre os vírus relacionados são encontrados em países vizinhos. Também foi concluído que o gene conservador P4b inclui pontos de mutação que o tornam um gene prático para diagnosticar o vírus em análises filogenéticas.(AU)

Sarcocystidae in wild birds of southeastern Brazil / Sarcocystidae em aves silvestres do sudeste do Brasil

This study aimed to identify members of the Sarcocystidae family in naturally infected wild birds at a rescue center in the state of Minas Gerais, southeastern Brazil. The heart and brain of 44 wild birds were evaluated by bioassay in mice to detect T. gondii, and extracted DNA was used for nested PCR of the 18S ribosomal DNA gene to detect members of the Sarcocystidae family. The positive samples were sequenced, assembled, edited and compared with sequences deposited in GenBank. Toxoplasma gondii was isolated from six (13.6%) out of 44 birds. Toxoplasma gondii DNA was identified in 10/44 (22.7%) of the birds. The amplified sequences exhibited 100% similarity with the DNA of the ME49 strain of T. gondii. Sarcocystis DNA (99% similarity) was identified in 5/44 (11.4%) of the birds. T. gondii and Sarcocystis spp. are common in wild birds in Minas Gerais, Brazil.(AU)

O objetivo deste estudo foi identificar membros da família Sarcocystidae em aves silvestres de vida livre naturalmente infectadas e resgatadas no estado de Minas Gerais, Brasil. Coração e cérebro de 44 aves silvestres foram avaliados por bioensaio em camundongos para detecção de T. gondii e extração de DNA para Nested-PCR do gene 18S do DNA ribossomal de membros da família Sarcocystidae. As amostras positivas foram sequenciadas, analisadas, editadas e comparadas com sequências depositadas no GenBank. Toxoplasma gondii foi isolado de seis (13,6%) das 44 aves. DNA de T. gondii foi identificado em 10/44 (22,7%) das 44 aves. As sequências amplificadas exibiram 100% de similaridade com o DNA da cepa ME49 de T. gondii. DNA de Sarcocystis (99% de similaridade) foi identificado em 5/44 (11,4%) das 44 aves. T. gondii e Sarcocystis spp. são encontrados, comumente, em aves silvestres no estado de Minas Gerais, Brasil.(AU)

Pathological, molecular and phylogenic study of fowlpox virus in domesticated chickens of Tikrit City, Iraq / Estudo patológico, molecular e filogenético do vírus da varíola aviária em frangos de corte domesticados da cidade de Tikrit, Iraque

Fowlpox virus (FPV) is one of the viruses affecting chickens worldwide, causing pathological and economic losses in the poultry industry. Viral lesions are easily recognizable by the eye and usually appear in the featherless areas, especially the head. Moreover, the virus could lead to blindness and mortality in some cases. This study diagnosed the suspected fowlpox cases, identified and classified the causative agent. We also analyzed the differences and similarities of closely related viruses at the neighboring and regional countries. Fifty samples were collected from three locations of Tikrit city from the domesticated chickens, which showed cutaneous lesions. Virus DNA was extracted directly from tissue samples before the nested PCR technique was performed. The virion core protein (P4b) gene is partially sequenced and analyzed with routine histological sectioning. Results showed that the virus causes pock lesions of dermal hyperplasia and hyperkeratosis. Hyperplasia and congestion of the chorioallantoic membrane were also recorded. The study also showed that the DNA of FPV could be extracted directly from animal tissue without further purification. The sequence analysis showed that the FPV was confirmed in all samples clustered in clade A identical with Iranian and Egyptian isolates. In conclusion, this study approved that the virus belongs to the classical dermal type of poxviruses and the short genetic distances between viruses related to closely neighboring countries. We also concluded that the conservative P4b gene included mutation sites that make this gene practical for diagnosing the virus and phylogenetic analysis.(AU)

O vírus da varíola aviária (VVA) é um dos vírus que acometem os frangos de corte em todo o mundo, causando perdas patológicas e econômicas na indústria aviária. As lesões causadas pelo vírus são facilmente reconhecidas pela observação visual e usualmente aparecem nas áreas do corpo das aves livres de penas, especialmente na cabeça. Além disso, em alguns casos a doença pode provocar a cegueira e a mortalidade de animais acometidos. O presente trabalho foi delineado para diagnosticar casos suspeitos de varíola aviária, identificar o agente causal e classificá-lo. Adicionalmente foram analisadas diferenças e similaridades com outros vírus estreitamente relacionados em localidades vizinhas e regionais. Cinquenta amostras foram colhidas em três localidades da cidade de Tikrit de frangos de corte, domesticados, que apresentavam lesões cutâneas. O DNA do vírus foi extraído diretamente das amostras de tecidos antes que a técnica de PCR fosse realizada. As proteínas do core do vírus, gene (P4b), foram parcialmente sequenciadas de analisadas em secções da rotina histológica. Os resultados obtidos revelaram que o vírus causa lesões variólicas com hiperplasia dermal e hiperqueratose. A hiperplasia e a congestão da membrana corioalantóica também foram registradas. O estudo também revelou que o DNA do VVA pode ser extraído diretamente de tecidos animais sem a realização de uma pré-purificação. A análise sequencial revelou que o VVA foi confirmado em todas as amostras agrupando-se em uma classe A, idêntica com isolados iranianos e egípcios. A conclusão obtida foi que o presente trabalho confirmou que o vírus pertence ao tipo dérmico clássico dos poxvirus e que as curtas distâncias genéticas entre os vírus relacionados são encontrados em países vizinhos. Também foi concluído que o gene conservador P4b inclui pontos de mutação que o tornam um gene prático para diagnosticar o vírus em análises filogenéticas.(AU)

Molecular diagnosis and risk factors of canine ehrlichiosis in the municipality of Itabuna-Bahia, Brazil / Diagnóstico molecular e fatores de risco da erliquiose canina no município de Itabuna-Bahia

Ehrlichiosis is an emerging zoonosis worldwide and has had several adverse effects on public health. Canine monocytic ehrlichiosis (CME), caused by Ehrlichia canis, has the tick Rhipicephalus sanguineus as the vector. The main clinical signs in affected dogs are fever, apathy, anorexia, weight loss, and neurological signs. The diagnosis is made through the association of clinical signs with parasitological, serological, and molecular tests. The aim of this study was to evaluate the occurrence of E. canis infection in dogs from the city of Itabuna-Bahia, as well as to identify the risk factors related to infection. For this, 405 dogs from the Center for Zoonoses Control (CCZ), non-governmental organizations (NGOs), and dogs domiciled and semi-domiciled in the city of Itabuna, southern Bahia, were evaluated. After initial physical evaluation of the dogs, blood samples were collected by venipuncture for subsequent DNA extraction and E. canis testing using the nested Polymerase Chain Reaction (nested-PCR) technique. In addition, an epidemiological questionnaire that included questions related to the animals was administered to the dog owners to identify the risk factors for exposure to the etiological agent and to the vector. Approximately 17% of the dogs in the municipality of Itabuna-Bahia tested positive for E. canis by nested-PCR, a result higher than that found in other studies conducted in the same municipality. Among the factors associated with E. canis infection, contact with other dogs (p = 0.0226) was an important factor for the dissemination of CME, since dogs are reported to be reservoirs of E. canis. Male dogs (p = 0.0016) presented lower risk for E. canis infection. Other studies, however, describe no association between animal gender and infection by E. canis. Preventive measures to reduce exposure to the vector of ehrlichiosis are necessary.

A erliquiose é uma zoonose emergente em todo o mundo e tem acarretado diversos transtornos para a saúde pública. A erliquiose monocítica canina (EMC), causada pela Ehrlichia canis, tem como vetor o carrapato Rhipicephalus sanguineus. Os principais sinais clínicos nos cães afetados são febre, apatia, anorexia, perda de peso e sinais neurológicos. O diagnóstico é feito através da associação dos sinais clínicos, exames parasitológicos, sorológicos e moleculares. Objetivou-se através deste estudo avaliar a ocorrência de infecção por E. canis em cães do município de Itabuna-Bahia, bem como identificar os fatores de risco relacionados à infecção. Para tanto, foram avaliados 405 cães provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ), Organizações não governamentais (ONGs), cães domiciliados e semi-domiciliados da cidade de Itabuna-Bahia. Após avaliação física inicial dos cães, procedeu-se em seguida a coleta de amostras de sangue por punção venosa, para posterior extração de DNA e pesquisa de E. canis pela técnica de nested-Reação em Cadeia de Polimerase (nested-PCR). Adicionalmente, um questionário epidemiológico foi aplicado junto aos responsáveis, no qual constavam questões relacionadas aos animais, com a finalidade de identificar os fatores de risco de exposição destes ao agente etiológico e ao vetor. Em suma, este estudo mostrou que aproximadamente 17% dos cães do município de Itabuna-Bahia foram positivos para E. canis pela nested-PCR, resultado superior ao encontrado em outros estudos realizados no mesmo município. Dos fatores associados à infecção por E. canis, foi significativo o contato com outros cães (p=0,0226), um fator importante para a disseminação da EMC, pois os cães são relatados como reservatórios da E. canis. O gênero macho (p=0,0016) apresentou menor risco para a infecção por E. canis. Outros estudos, no entanto, descrevem que não há nenhuma associação entre o gênero do animal e a infecção por...

Molecular diagnosis and risk factors of canine ehrlichiosis in the municipality of Itabuna-Bahia, Brazil / Diagnóstico molecular e fatores de risco da erliquiose canina no município de Itabuna-Bahia

Ehrlichiosis is an emerging zoonosis worldwide and has had several adverse effects on public health. Canine monocytic ehrlichiosis (CME), caused by Ehrlichia canis, has the tick Rhipicephalus sanguineus as the vector. The main clinical signs in affected dogs are fever, apathy, anorexia, weight loss, and neurological signs. The diagnosis is made through the association of clinical signs with parasitological, serological, and molecular tests. The aim of this study was to evaluate the occurrence of E. canis infection in dogs from the city of Itabuna-Bahia, as well as to identify the risk factors related to infection. For this, 405 dogs from the Center for Zoonoses Control (CCZ), non-governmental organizations (NGOs), and dogs domiciled and semi-domiciled in the city of Itabuna, southern Bahia, were evaluated. After initial physical evaluation of the dogs, blood samples were collected by venipuncture for subsequent DNA extraction and E. canis testing using the nested Polymerase Chain Reaction (nested-PCR) technique. In addition, an epidemiological questionnaire that included questions related to the animals was administered to the dog owners to identify the risk factors for exposure to the etiological agent and to the vector. Approximately 17% of the dogs in the municipality of Itabuna-Bahia tested positive for E. canis by nested-PCR, a result higher than that found in other studies conducted in the same municipality. Among the factors associated with E. canis infection, contact with other dogs (p = 0.0226) was an important factor for the dissemination of CME, since dogs are reported to be reservoirs of E. canis. Male dogs (p = 0.0016) presented lower risk for E. canis infection. Other studies, however, describe no association between animal gender and infection by E. canis. Preventive measures to reduce exposure to the vector of ehrlichiosis are necessary.(AU)

A erliquiose é uma zoonose emergente em todo o mundo e tem acarretado diversos transtornos para a saúde pública. A erliquiose monocítica canina (EMC), causada pela Ehrlichia canis, tem como vetor o carrapato Rhipicephalus sanguineus. Os principais sinais clínicos nos cães afetados são febre, apatia, anorexia, perda de peso e sinais neurológicos. O diagnóstico é feito através da associação dos sinais clínicos, exames parasitológicos, sorológicos e moleculares. Objetivou-se através deste estudo avaliar a ocorrência de infecção por E. canis em cães do município de Itabuna-Bahia, bem como identificar os fatores de risco relacionados à infecção. Para tanto, foram avaliados 405 cães provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ), Organizações não governamentais (ONGs), cães domiciliados e semi-domiciliados da cidade de Itabuna-Bahia. Após avaliação física inicial dos cães, procedeu-se em seguida a coleta de amostras de sangue por punção venosa, para posterior extração de DNA e pesquisa de E. canis pela técnica de nested-Reação em Cadeia de Polimerase (nested-PCR). Adicionalmente, um questionário epidemiológico foi aplicado junto aos responsáveis, no qual constavam questões relacionadas aos animais, com a finalidade de identificar os fatores de risco de exposição destes ao agente etiológico e ao vetor. Em suma, este estudo mostrou que aproximadamente 17% dos cães do município de Itabuna-Bahia foram positivos para E. canis pela nested-PCR, resultado superior ao encontrado em outros estudos realizados no mesmo município. Dos fatores associados à infecção por E. canis, foi significativo o contato com outros cães (p=0,0226), um fator importante para a disseminação da EMC, pois os cães são relatados como reservatórios da E. canis. O gênero macho (p=0,0016) apresentou menor risco para a infecção por E. canis. Outros estudos, no entanto, descrevem que não há nenhuma associação entre o gênero do animal e a infecção por...(AU)