Estudo clínico e epidemiológico sobre Rickettsias do Grupo da Febre Maculosa em cães de Unidades de Conservação (Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade, ICMBio) no estado do Rio de Janeiro.

Doenças causadas por rickettsias tem ampla distribuição geográfica e estão associadas a artrópodes hematófagos. Rickettsia rickettsii é a mais patogênica das espécies do Grupo da Febre Maculosa (GFM) e responsável pela Febre Maculosa Brasileira. No sudeste do país, esta doença é endêmica e inquéritos sorológicos em cães tem demonstrado elevada frequência de anticorpos para antígenos do GFM, reforçando a participação do cão como sentinela. Os principais vetores da Febre Maculosa Brasileira são carrapatos do gênero Amblyomma, cujos hospedeiros primários são, muitas vezes, animais de vida silvestre. Considerando a importância da doença para a saúde humana, a evidência sorológica em cães e a possibilidade de compartilhamento de carrapatos entre os cães e seus responsáveis, objetivou-se avaliar a circulação de Rickettsias do GFM no entorno de Unidades de Conservação (UC) Federais geridas pelo Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio) no estado do Rio de Janeiro por meio da Imunofluorescência Indireta para R. rickettsii e R. parkeri em cães, além de conhecer a fauna de ixodídeos presente nos animais, detectar por ferramentas moleculares a presença de Rickettsia spp. nos cães e seus carrapatos e determinar fatores de risco para os cães. Amostras de sangue e carrapatos foram obtidas de 155 cães, sendo 16,1% dos animais sororreagentes pelo menos para um dos antígenos testados. A frequência de animais com reação sorológica foi significativamente maior (p<0,05) entre os cães com hábito de adentrar em áreas de mata, pastagem e coleções hídricas no interior das UC, bem como entre aqueles que não possuíam assistência veterinária, que não eram submetidos a medidas de controle de carrapatos e provenientes de famílias com renda de até dois salários mínimos. Cães com este perfil apresentaram maior risco de serem expostos aos agentes do GFM. A presença de DNA rickettsial foi detectada em amostra de sangue de dois cães. No momento da coleta das amostras sanguíneas, 132 carrapatos foram recolhidos dos cães, sendo Amblyomma sculptum o carrapato mais encontrado (45,5%). Rickettsia spp. foi detectada pela biologia molecular em A. aureolatum (12,5%), Rh. sanguineus (6,5%) e A. sculptum (3,3%). Concluiu-se que patógenos do GFM circulam no entorno das UC estudadas, sendo possível que R. rickettsii e R. parkeri infectem cães, uma vez que os animais demonstraram exposição aos dois agentes. Neste estudo, a assistência veterinária e a adoção de medidas de combate/prevenção a carrapatos foram ferramentas importantes contra a exposição dos cães à infecção rickettsial. Ressalta-se, finalmente, a participação do cão como bom sentinela da doença.

Diseases caused by Rickettsiae are widely distributed and are associated with arthropods. Rickettsia rickettsii is the most pathogenic species of the Spotted Fever Group (SFG) and the agent of Brazilian Spotted Fever. In the Southeast, this disease is endemic and serological surveys in dogs have shown high frequency of antibodies to SFG antigens, reinforcing the role of dogs as sentinels. The main vectors of the disease are Amblyomma ticks, which primary hosts are often wildlife animals. Considering the importance of the disease to human health, serologic evidence in dogs and the possibility of transmission of ticks between dogs and their owners, the aim of this study was to evaluate the presence of SFG Rickettsiae in the surroundings of Conservation Units (UC) managed by the Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio) in the state of Rio de Janeiro by Indirect Immunofluorescence Assay to R. rickettsii and R. parkeri in dogs, as well as know the species of ticks present in the dogs, detect by molecular tools the presence Rickettsia spp. in dogs and their ticks, and determine risk factors for dogs. Ticks and blood samples were obtained from 155 dogs, being 16.1% of them seropositive at least to one of the antigens tested. The frequency of animals with serological reaction was significantly higher (p<0.05) among dogs with routine habit of entering into rainforest areas, pasture and water sources within the UC, as well as among those which had no veterinary care assistence, which were not subjected to tick control measures and came from families with incomes up to two minimum wage. Dogs with this profile had a higher risk of being exposed to SFG agents. The presence of rickettsial DNA was detected in blood sample of two dogs. At the time of sampling, 132 ticks were collected from dogs, and Amblyomma sculptum was the most commonly found tick (45.5%). Rickettsia spp. was detected by molecular biology in A. aureolatum (12.5%), Rh. sanguineus (6.5%) and A. sculptum (3.3%). It was concluded that the SFG pathogens are present in the surroundings of all UC studied, and it is possible that both R. rickettsii and R. parkeri infect dogs, since the animals showed exposure to both agents. In this study, the participation of the veterinarians, and the adoption of tick control measures were important tools against exposure of dogs to rickettsial infection. Besides, we emphasize the participation of the dog as good sentinel of the disease.

Detection of Leptospira spp. from pure cultures and from experimentally contaminated bovine semen by polymerase chain reaction / Detecção de Leptospira spp. através da reação em cadeia pela polimerase (PCR) em sêmen bovino experimentalmente contaminado

Due to the high importance of the venereal transmission of bovine leptospirosis, this study aimed to test the ability of PCR to detect Leptospira interrogans serovar hardjo DNA in experimentally contaminated bovine semen. Employing primers directed to the 16S rRNA gene, 10 bacteria/ml of semen could be detected by PCR. Results achieved in this work show that PCR can have a great potential to detect Leptospira spp. in insemination centers. (AU)

Considerando a importância do sêmen na transmissão da leptospira bovina, foi realizado o presente estudo que teve como objetivo aplicar a reação em cadeia pela polimerase (PCR) para a detecção de leptospiras em sêmen bovino experimentalmente contaminado. A reação de PCR foi capaz de amplificar um fragmento de DNA específico de 330 pares de bases a partir de cultivos puros de 26 sorovares de Leptospira spp. A contaminação experimental de sêmen com Leptospira interrogans serovar hardjo revelou que a técnica de PCR conseguiu detectar 10 bactérias/ml, concentração sensivelmente mais baixa que as 1.000 bactérias/ml detectadas através do cultivo microbiológico. Os resultados observados revelam o grande potencial da reação de PCR para a detecção de Leptospira spp. em sêmen bovino, notadamente em centrais de inseminação artificial.(AU)

Isolamento e identificação pela imunofluorescência direta e reação em cadeia de polimerase do vírus da artrite-encefalite caprina

This paper describes the isolation of caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV) in Minas Gerais and Pernambuco States, Brazil, using goat synovial membrane (GSM) explants (isolates: BrMg 1-01, BrMg 2-01, BrMg 2-02, BrMg 2-03 and BrPe 1-01) or co-culture of blood mononuclear cells with GSM (BrMg 1-02). The isolates were identified by cytopathic effect (CPE), direct immunofluorescence (DIF) and an improved polimerase chain reaction (PRC) specific to CAEV (strain Cork) genome. It was found isolates of low (BrMg 1-01 and BrMg 1-02) and of high lytic (BrMg 2-01, BrMg 2-02, BrMg 2-03 and BrPe 1-01) phenotypes. The DIF revealed positive results in cells infected by all isolates tested and the reference strains of CAEV (Cork) and visna-maedi (K1514). The used PCR amplified a 286 pb fragment of DNA from cells infected with all isolates and CAEV Cork but not with visna-maedi K1514.

Amostras do vírus da artrite-encefalite caprina (CAEV) de animais dos estados de Minas Gerais e Pernambuco foram isoladas a partir de explantes de membrana sinovial (MS) (amostras BrMg 1-01, BrMg 2-01, BrMg 2-02, BrMg 2-03 e BrPe 1-01) ou de co-cultivo de leucócitos com MS (BrMg 1-02). As amostras foram identificadas pelo efeito citopático-ECP (formação de sincícios), imunofluorescência direta (IFD) e reação em cadeia de polimerase (PCR) aperfeiçoada para amplificação de parte do gene gag da amostra CAEV Cork. O estudo do ECP revelou a presença de amostras pouco (BrMg 1-01 e BrMg 1-02) ou fortemente indutoras de ECP (BrMg 2-01, BrMg 2-02, BrMg 2-03 e BrPe 1-01). A IFD mostrou resultado positivo em células de todas as monocamadas infectadas pelas amostras isoladas e em células de referência (CAEV Cork e visna/maedi K 1514). A PCR do DNA de células infectadas resultou na amplificação específica de um fragmento de DNA de 286pb da amostras testadas, exceto do visna/maedi K 1514.