Binding patterns of seminal plasma plasma proteins on bovine epididymal and ejaculated sperm membrane / Topografia de ligação de proteínas do plasma seminal à membrana de espermatozoides bovinos epididimários e ejaculados

The present study was designed to investigate the topographical distribution of seminal plasma (SP) proteins on epididymal and ejaculated bovine sperm. Using immunocytochemistry and confocal microscopy the binding patterns of bovine SP proteins BSP-A3, albumin, transferrin, prostaglandin D-synthase (PGDS) and nucleobindin in ejaculated and cauda epididymal sperm from adult bulls were evaluated. Experiments were performed using sperm from 5 males. Data showed a positive signal, only detected for anti-PGDS, in the acrosomal cap of epididymal and ejaculated sperm. In ejaculated sperm, a very weak signal for nucleobindin 2 in the midpiece and equatorial regions was detected, using the anti-rat nucleobindin. BSP-A3 was detected on all sperm regions studied, with a more evidenced signal in acrosome and midpiece. However, no binding was detected for albumin or transferrin in neither epididymal nor ejaculated sperm. In conclusion, PGDS, BSP-A3 and nucleobindin interact directly with bovine sperm, with specific topographic distribution. These findings may add to the knowledge of how these proteins modulate sperm functions, thus providing fundamental support for studies designed to evaluate how they influence sperm functions.(AU)

Investigou-se a distribuição topográfica da ligação de proteínas seminais à membrana de espermatozoides bovinos epididimários e ejaculados. Utilizando imunocitoquímica e microscopia confocal, avaliaram-se a topografia de ligação das proteínas BSP-A3, albumina, transferrina, prostaglandina D sintetase (PGDS) e nucleobindina 2 (NUC2) à membrana espermática. Os experimentos foram realizados utilizando espermatozoides de cinco touros. Os resultados mostraram que, para espermatozoides epididimários, somente detectou-se a PGDS na crista do acrossomo. Nos espermatozoides ejaculados, a PGDS ligou-se de forma mais intensa à crista acrossômica, enquanto a NUC2 apresentou sinal bastante fraco na peça intermediária e região equatorial. A BSP-A3 ligou-se a todas as regiões estudadas, de forma mais intensa na peça intermediária e acrossomo. Nenhum sinal foi detectado para albumina ou transferrina, seja em espermatozoides epididimários ou ejaculados. Concluiu-se que PGDS, BSP-A3 e NUC2 interagem diretamente com espermatozoides bovinos, e mostrou distribuição topográfica específica. Estes achados permitem melhor compreensão sobre o papel desempenhado por essas proteínas na regulação da função espermática e da fertilidade.(AU)

Proteoma do plasma seminal de touros da raça Gir - Leiteiro (Bos taurus indicus) clinicamente normais e com hipoplasia testicular

A raça Gir Leiteiro é uma excelente opção para os rebanhos leiteiros no Brasil pelas características apresentadas por seus animais, como rusticidade, adaptabilidade e produção de leite expressiva. A hipoplasia testicular causa problemas reprodutivos nos touros podendo levar à subfertilidade ou, em casos mais graves, à infertilidade. No Brasil, a incidência dessa patologia varia de 5 a 15%. Devido à grande importância que animais da raça Gir Leiteiro têm na pecuária brasileira e aos impactos negativo, tanto em termos de fertilidade quanto economicamente, causados pela hipoplasia testicular, este trabalho objetivou traçar o perfil proteico diferencialmente expresso entre animais com esta patologia e clinicamente normais. Amostras de sêmen de 18 animais (9 hipoplásicos e 9 normais) foram coletadas e o plasma seminal foi centrifugado e submetido à eletroforese bidimensional (2-DE). Os géis foram corados com Coomassie Blue G-250, digitalizados e analisados pelo programa PDQuest 2-D Analysis Software para identificação dos spots. Foram identificados 33 spots diferencialmente expressos entre os dois grupos de animais, sendo 26 mais intensamente expressos em animais hipoplásicos. Os spots foram cortados dos géis e submetidos à espectrometria de massa sendo identificadas 38 proteínas e, dentre estas, o grupo de proteínas conhecidas como Binder of Sperm Proteins (BSP) e a platelet-activating fator acetylhydrolase (PAF AH) foram as mais presentes nos spots identificados nos animais hipoplásicos. Os animais também foram submetidos à avaliação clinico-andrológica e houve diferenças estatísticas quanto ao comprimento, largura e volume testicular, turbilhonamento e defeitos espermáticos (p<0,05).

The Gir - Dairy is an excellent option for dairy herds in Brazil because of the features presented by its animals, such as hardiness, adaptability and expressive milk production. Testicular hypoplasia causes reproductive problems in bulls and can lead to subfertility or, in more severe cases, infertility. In Brazil, the incidence of this disease varies from 5 to 15%. Due to the great importance that Gyr- Dairy animals have in the Brazilian cattle industry and because of the negative impact, not only in economically terms but also in fertility, caused by testicular hypoplasia, this study aimed to determine the differentially expressed protein profile between animals with this disease and clinically normal . Semen samples from 18 animals (9 hypoplastic and 9 normal) were collected and seminal plasma was centrifuged and subjected to two-dimensional electrophoresis (2-DE). Gels were stained with Coomassie Blue G-250, digitized and analyzed using PDQuest program 2-D Analysis Software to identify the "spots". Were identified 33 "spots" differentially expressed between the two groups of animals, 26 more intensely expressed in hypoplastic animals. The "spots" were cut from the gels and subjected to mass spectrometry and identified 38 proteins and, among these, the group of proteins known as Binder of Sperm Proteins (BSP) and platelet-activating factor acetylhydrolase (PAF - AH) were more present in spots identified in hypoplastic animals. The animals also underwent clinical and soundness evaluation and were statistical differences in the length, width and testicular volume, turbulence and sperm defects (p <0.05).

Caracterização do sêmen, do plasma seminal e concentração sérica de testosterona em cervo sambar (Cervus unicolor) em cativeiro na primavera / Characterization semen, of seminal plasma and concentration serum testosterone in sambar deer (Cervus unicolor) in captivity in the spring

O objetivo do trabalho foi avaliar o quadro espermático e protéico do plasma seminal e o perfil endócrino, em cervos criados em cativeiro. Quatro machos com idades entre 12 e 36 meses foram avaliados. Em quatro momentos com intervalos de sete dias, obteve-se o peso (60,5 a 89,0 kg) e o índice de massa corporal (93,07 kg/m2 a 126,56 kg/m2). Foram realizadas quatro colheitas de sêmen por animal, com intervalo de sete dias, por meio de eletroejaculador. Obteve-se os seguintes valores: volume do ejaculado (0,500,35 mL a 0,750,28 mL), motilidade espermática (87,754,78% a 90,007,07%), defeitos totais (17,255,81% a 47,7217,55%) e testosterona plasmática (6,434,33 ng/dL a 166,0064,48 ng/dL). A eletroforese em SDS-PAGE revelou bandas proteicas entre 7,6 kDa e 142 kDa. O plasma seminal apresentou uma grande gama de proteínas entre 7,6 kDa e 142 kDa. A idade influi na concentração de testosterona, sendo essa maior na faixa dos 36 meses

The objective of this study was to evaluate the framework sperm and protein seminal plasma and endocrine profile in deer bred in captivity. Four males aged between 12 and 36 months were evaluated. In four times at intervals of seven days, gave the weight (60.5 to 89.0 kg) and body mass index (93.07 kg/m2 to 126.56 kg/m2). There were four semen samples per animal, with an interval of seven days, by electroejaculation. Gave the fallowing values: ejaculate volume (0.50 0.35 ml to 0.75 0.28 ml), motility (87.75 4.78% to 90.00 7.07%) total defects (17.25 5.81% and 47.72 17.55%) and plasma testosterone (6.43 4.33 ng/dL at 166.00 64.48 ng/dL). Electrophoresis on SDS-PAGE revealed protein bands between 7.6 kDa and 142 kDa. Seminal plasma showed a wide range of proteins between 7.6 kDa and 142 kDa. Age influences the testosterone concentration, being higher in the range of 36 months

Influência da estação do ano sobre as prote?nas do plasma seminal de touros limousin

O objetivo deste trabalho foi estudar a influência da estação do ano sobre as proteínas do plasma seminal em touros Limousin. Coletou-se amostras de sêmen de 12 animais com dois anos de idade por eletroejaculação, durante o inverno, com sete dias de intervalo, em um total de 55 amostras. No verão, nove desses touros foram reavaliados pelo exame andrológico. Amostras do sêmen foram centrifugadas a 1500 g/15 min e acondicionadas em tubos eppendorf?, estocadas a -20ºC até o processamento. As proteínas foram extraídas de 200 L de cada amostra em 2mL de tampão de extração composto por 0,625M Tris-HCl; pH 6,8, 2% SDS, 5% -mercaptoetanol e 20% de glicerol. As proteínas foram quantificadas e as eletroforeses realizadas; e os géis fixados e corados na mesma solução com 2% de Coomassie Blue R250. Nos touros A, C, D, E, H e I a ausência de proteínas de alto peso molecular (APM 55KDa, 66KDa e 80KDa) foi verificada no inverno e uma que se supõe ser de baixa fertilidade (BF 40 KDa) ausente no touro D, no verão. Os touros F, G e J mostraram presença de proteínas de APM (55KDa) no inverno. Nos touros H, I e J, proteínas APM (55KDa, 66KDa ou 80KDa) estiveram presentes com uma condição satisfatória de sêmen. O touro I mostrou presença de proteínas APM (66KDa e 80KDa) no verão. Sugere-se que as diferentes estações do ano podem influenciar a presença ou ausência de proteínas no plasma seminal.

PERFIL EM SDS-PAGE DAS PROTE?NAS DO PLASMA SEMINAL E SUA RELAÇÃO COM A QUALIDADE DO SÊMEN DE TOUROS DA RAÇA NELORE (Bos taurus indicus)

A proposta desse estudo foi de investigar a presença e incidência de bandas proteicas específicas do plasma seminal em touros Nelore aptos e parcialmente aptos para a atividade reprodutiva. Foram utilizados 68 touros Nelore, sendo 20 da variedade padrão e 48 mochos, com idade média de 4 anos. Para o perímetro escrotal (35,05 ± 0,49 cm e 33,30 ± 0,39cm) e índice de massa corpórea (302,62 ± 5,87 e 284,19 ± 5,15 Kg,m2) houve diferença (p0,05) entre as duas variedades de touros. Para a morfologia espermática, não houve diferença entre as variedades padrão e mocho, respectivamente com 5,06 ± 8,20% e 5,32 ± 6,40% de defeitos maiores; 9,91 ± 6,74% e 8,36 ± 6,06% para os defeitos menores; e 14,76 ± 13,20% e 13,82 ± 12,61% para os defeitos totais. A eletroforese do plasma seminal revelou bandas proteicas com pesos entre 5 a 105KDa. Em 100% dos touros aptos para a reprodução, a proteína com peso de 13KDa esteve presente, o mesmo ocorrendo com as bandas de 18 e 20KDa. O restante das bandas proteicas revelaram presença com diferentes percentagens de incidência em touros aptos ou parcialmente aptos a atividade reprodutiva. As variedades padrão e mocho revelaram adaptação reprodutiva similares perante as condições de clima, mostrando muita eficiência.

PERFIL EM SDS-PAGE DAS PROTE?NAS DO PLASMA SEMINAL E SUA RELAÇÃO COM A QUALIDADE DO SÊMEN DE TOUROS DA RAÇA NELORE (Bos taurus indicus)

A proposta desse estudo foi de investigar a presença e incidência de bandas proteicas específicas do plasma seminal em touros Nelore aptos e parcialmente aptos para a atividade reprodutiva. Foram utilizados 68 touros Nelore, sendo 20 da variedade padrão e 48 mochos, com idade média de 4 anos. Para o perímetro escrotal (35,05 ± 0,49 cm e 33,30 ± 0,39cm) e índice de massa corpórea (302,62 ± 5,87 e 284,19 ± 5,15 Kg,m2) houve diferença (p0,05) entre as duas variedades de touros. Para a morfologia espermática, não houve diferença entre as variedades padrão e mocho, respectivamente com 5,06 ± 8,20% e 5,32 ± 6,40% de defeitos maiores; 9,91 ± 6,74% e 8,36 ± 6,06% para os defeitos menores; e 14,76 ± 13,20% e 13,82 ± 12,61% para os defeitos totais. A eletroforese do plasma seminal revelou bandas proteicas com pesos entre 5 a 105KDa. Em 100% dos touros aptos para a reprodução, a proteína com peso de 13KDa esteve presente, o mesmo ocorrendo com as bandas de 18 e 20KDa. O restante das bandas proteicas revelaram presença com diferentes percentagens de incidência em touros aptos ou parcialmente aptos a atividade reprodutiva. As variedades padrão e mocho revelaram adaptação reprodutiva similares perante as condições de clima, mostrando muita eficiência.

INFLUÊNCIA DA ESTAÇÃO DO ANO SOBRE AS PROTE?NAS DO PLASMA SEMINAL DE TOUROS LIMOUSIN

O objetivo deste trabalho foi estudar a influência da estação do ano sobre as proteínas do plasma seminal em touros Limousin. Coletou-se amostras de sêmen de 12 animais com dois anos de idade por eletroejaculação, durante o inverno, com sete dias de intervalo, em um total de 55 amostras. No verão, nove desses touros foram reavaliados pelo exame andrológico. Amostras do sêmen foram centrifugadas a 1500 g/15 min e acondicionadas em tubos eppendorf?, estocadas a -20ºC até o processamento. As proteínas foram extraídas de 200 L de cada amostra em 2mL de tampão de extração composto por 0,625M Tris-HCl; pH 6,8, 2% SDS, 5% -mercaptoetanol e 20% de glicerol. As proteínas foram quantificadas e as eletroforeses realizadas; e os géis fixados e corados na mesma solução com 2% de Coomassie Blue R250. Nos touros A, C, D, E, H e I a ausência de proteínas de alto peso molecular (APM 55KDa, 66KDa e 80KDa) foi verificada no inverno e uma que se supõe ser de baixa fertilidade (BF 40 KDa) ausente no touro D, no verão. Os touros F, G e J mostraram presença de proteínas de APM (55KDa) no inverno. Nos touros H, I e J, proteínas APM (55KDa, 66KDa ou 80KDa) estiveram presentes com uma condição satisfatória de sêmen. O touro I mostrou presença de proteínas APM (66KDa e 80KDa) no verão. Sugere-se que as diferentes estações do ano podem influenciar a presença ou ausência de proteínas no plasma seminal.