Detection of enteric viruses in pancreas and spleen of broilers with runting-stunting syndrome (RSS) / Detecção de vírus entéricos em pâncreas e baço de frangos com a síndrome de nanismo e raquitismo (RSS)

Enteric disease is a multifactorial problem in chickens, which causes gastrointestinal alterations, elevated feed conversions and impairment. In the last years, several enteric viruses were implicated in enteric disease; case reports have shown their presence alone or in concomitant infections during outbreaks and have suggested that they might be determining factors in the aetiology of enteric disease. This study shows high detection rates of enteric viruses in the pancreas and spleen in samples from an outbreak of enteritis and malabsorption in 16 chicken flocks (n=80 broilers). Avian nephritis virus (ANV) was the most ubiquitous virus, present in 75% of the flocks followed by avian rotavirus group A (ART-A) with 68.75%, and by chicken astrovirus (CAstV) and chicken parvovirus (ChPV) in 43.75% of samples. Viruses were present in the pancreas of positive flocks at extremely high rates: 100% for ART-A, 91.7% for ANV, 100% for CAstV and 57.14% for ChPV. By contrast, only 16.7% and 57.14% of intestine samples were positive for ANV and CAstV, respectively. Avian reovirus (AReo) and avian adenovirus group 1 (FAdV-1) were not detected. These results suggest that high viral detection rates in pancreas samples may be a result of viremia during enteric disease, with subsequent damage of the exocrine pancreas, leading to runting-stunting syndrome (RSS).(AU)

A doença entérica é um problema multifatorial em galinhas que causa alterações gastrointestinais, conversão alimentar elevada e deficiência de crescimento. Nos últimos anos, os vírus entéricos foram associados à doença entérica; casos reportados mostraram a infecção de um único vírus e também infecções concomitantes durante os surtos sugerindo a presença de múltiplos fatores etiológicos nas doenças entéricas. Este estudo mostra uma alta taxa de detecção dos vírus entéricos em amostras de pâncreas e baço de um surto de enterite e má-absorção em 16 lotes de frangos (n=80 frangos). O vírus de nefrite aviária (ANV) foi o vírus mais detectado, estando presente em 75% dos lotes seguido pelo rotavírus aviário grupo A (ART-A) em 68,75% dos casos, e pelo astrovirus (CAstV) e parvovírus aviários (ChPV), ambos em 43,75% das amostras. Os vírus estavam presentes no pâncreas dos lotes positivos em percentuais elevados: 100% para ART-A e CAstV; 91,7% para ANV, e em 57,14% para ChPV. Em contraste, somente 16,7% e 57,14%, em amostras de intestino, foram positivos para ANV e CAstV, respectivamente. Reovírus aviário (AReo) e o adenovírus do grupo 1 (FAdV-1) não foram detectados. Estes resultados sugerem que os elevados percentuais de vírus detectados em amostras de pâncreas podem estar associados à viremia durante a doença entérica, com subsequente lesão no pâncreas exócrino das aves levando ao desenvolvimento da síndrome de nanismo e raquitismo.(AU)

Detection of enteric viruses in pancreas and spleen of broilers with runting-stunting syndrome (RSS) / Detecção de vírus entéricos em pâncreas e baço de frangos com a síndrome de nanismo e raquitismo (RSS)

Enteric disease is a multifactorial problem in chickens, which causes gastrointestinal alterations, elevated feed conversions and impairment. In the last years, several enteric viruses were implicated in enteric disease; case reports have shown their presence alone or in concomitant infections during outbreaks and have suggested that they might be determining factors in the aetiology of enteric disease. This study shows high detection rates of enteric viruses in the pancreas and spleen in samples from an outbreak of enteritis and malabsorption in 16 chicken flocks (n=80 broilers). Avian nephritis virus (ANV) was the most ubiquitous virus, present in 75% of the flocks followed by avian rotavirus group A (ART-A) with 68.75%, and by chicken astrovirus (CAstV) and chicken parvovirus (ChPV) in 43.75% of samples. Viruses were present in the pancreas of positive flocks at extremely high rates: 100% for ART-A, 91.7% for ANV, 100% for CAstV and 57.14% for ChPV. By contrast, only 16.7% and 57.14% of intestine samples were positive for ANV and CAstV, respectively. Avian reovirus (AReo) and avian adenovirus group 1 (FAdV-1) were not detected. These results suggest that high viral detection rates in pancreas samples may be a result of viremia during enteric disease, with subsequent damage of the exocrine pancreas, leading to runting-stunting syndrome (RSS).(AU)

A doença entérica é um problema multifatorial em galinhas que causa alterações gastrointestinais, conversão alimentar elevada e deficiência de crescimento. Nos últimos anos, os vírus entéricos foram associados à doença entérica; casos reportados mostraram a infecção de um único vírus e também infecções concomitantes durante os surtos sugerindo a presença de múltiplos fatores etiológicos nas doenças entéricas. Este estudo mostra uma alta taxa de detecção dos vírus entéricos em amostras de pâncreas e baço de um surto de enterite e má-absorção em 16 lotes de frangos (n=80 frangos). O vírus de nefrite aviária (ANV) foi o vírus mais detectado, estando presente em 75% dos lotes seguido pelo rotavírus aviário grupo A (ART-A) em 68,75% dos casos, e pelo astrovirus (CAstV) e parvovírus aviários (ChPV), ambos em 43,75% das amostras. Os vírus estavam presentes no pâncreas dos lotes positivos em percentuais elevados: 100% para ART-A e CAstV; 91,7% para ANV, e em 57,14% para ChPV. Em contraste, somente 16,7% e 57,14%, em amostras de intestino, foram positivos para ANV e CAstV, respectivamente. Reovírus aviário (AReo) e o adenovírus do grupo 1 (FAdV-1) não foram detectados. Estes resultados sugerem que os elevados percentuais de vírus detectados em amostras de pâncreas podem estar associados à viremia durante a doença entérica, com subsequente lesão no pâncreas exócrino das aves levando ao desenvolvimento da síndrome de nanismo e raquitismo.(AU)

DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DO GENOMA DE PARVOVIRUS DE GALINHA (ChPV) EM FRANGOS DE CORTE SAUDÁVEIS E COM SÍNDROME DA MÁ ABSORÇÃO

A síndrome da má absorção (SMA), caracterizada pelo mau desenvolvimento e desuniformidade do lote de aves, causa importantes prejuízos econômicos à avicultura comercial. No entanto, por se tratar de uma doença multifatorial e possivelmente polimicrobiana, o envolvimento do parvovírus de galinha (ChPV) na ocorrência da SMA ainda é pouco conhecido. Com o propósito de elucidar a possível associação entre a presença do ChPV e a ocorrência da SMA, foram desenvolvidas e aplicadas ferramentas moleculares para a detecção e quantificação do ChPV em amostras de frangos comerciais no Estado do Rio Grande do Sul. Uma PCR quantitativa foi desenvolvida para detectar e quantificar cópias do genoma (CG) do ChPV em amostras de suabes de cloaca de 59 frangos saudáveis e 68 frangos com sinais clínicos sugestivos de SMA. Os resultados revelaram que todas as amostras dos dois grupos investigados, continham o genoma do ChPV. No entanto, a carga viral em frangos com SMA foi significativamente (p0,0001) maior (1x105 CG/100 ng DNA) do que em frangos saudáveis (1,3x103 CG/100 ng DNA). Adicionalmente às amostras de cloaca, o ChPV também foi investigado em amostras de tecidos (fígado, timo, baço, bursa de Fabricius - BF e intestino) e soros provenientes de nove frangos saudáveis e 50 frangos com sinais indicativos da SMA. O ChPV foi encontrado tanto em aves saudáveis como nas aves com SMA, no entanto, observou-se uma diferença na distribuição deste agente nos tecidos analisados. O genoma do vírus foi mais frequentemente detectado na BF, baço e intestino das aves com SMA, sendo que o intestino foi o tecido que apresentou maior carga viral. Os resultados encontrados nestes estudos demonstraram que o genoma viral estava altamente disseminado nas aves investigadas. Além disso, observou-se uma maior carga viral em frangos de corte com SMA quando comparado com aves sadias. Com base nos resultados encontrados, sugere-se que a maior carga viral de ChPV existente em aves com SMA, em relação a aves saudáveis, seja um dos fatores que favoreça a ocorrência da síndrome.

The malabsorption syndrome (MAS), characterized by the poor development and lack of uniformity of chicken flocks, causes significant economic losses to commercial poultry. However, because it is a multifactorial and possibly polymicrobial disease, the involvement of Chicken parvovirus (ChPV) in the MAS occurrence is still not clear. In order to elucidate the possible association between the presence of ChPV and the occurrence of MAS, molecular tools were developed and applied for the detection and quantification of ChPV DNA in commercial poultry samples in the state of Rio Grande do Sul. A quantitative PCR was developed to detect and quantify the ChPV genome copies (GC) in cloacal swab samples of 59 healthy broilers and 68 broilers with clinical signs suggestive of MAS. The results showed that all investigated samples of the two groups contained the genome ChPV. However, viral loads in MAS-affected animals were significantly (p0.0001) higher (1x105 GC/100 ng DNA) than in healthy broilers (1.3x103 GC/100 ng DNA). In addition to the cloacal samples, the presence of ChPV DNA was also investigated in tissue samples (liver, thymus, spleen, bursa of Fabricius - BF and intestine) and sera from nine healthy broilers and 50 broilers with signals indicative of MAS. The ChPV was found in healthy avian as well MAS-affected, however, there was a difference in the distribution of this agent in those tissues. The virus genome was more frequently detected in the BF, spleen and intestines of the MAS-affected broilers, and the intestines contained the highest viral loads, in comparison with other tissues. Our results demonstrated that the viral genome can be found in both healthy and MAS-affected broilers. In addition, higher viral loads were detected in broilers with signs suggestive of MAS compared to healthy birds. Based on these results, it is suggested that the greatest viral load of ChPV existing in MAS-affected broilers when compared to healthy birds, is one of the factors that favor the occurrence of the syndrome.

Caracterização molecular e determinação da patogenicidade de Astrovírus de Galinha, Vírus da Nefrite Aviária e Parvovírus de Galinha isolados de aves comerciais com problemas entéricos no Brasil"

As doenças entéricas apresentam uma grande importância na saúde das aves. Astrovírus de galinha (CAstV), vírus da nefrite aviária (ANV) e parvovírus de galinha (ChPV) são vírus que foram relacionados com problemas entéricos em lotes comerciais de galinhas, sendo identificados em galinhas com sintomas de doença entérica. Existem poucas informações relacionadas a estes três vírus que estão sendo investigados como causadores de problemas entéricos, especialmente de diarreia, sintoma relacionado com a síndrome do nanismo e perda de ganho de peso nas granjas avícolas. Os objetivos do presente trabalho foram: a) realizar a caracterização molecular destes vírus; b) determinar a patogenicidade do ChPV, CAstV e ANV isolados de galinhas com doença entérica. As técnicas moleculares para a caracterização molecular dos vírus, para a detecção e quantificação das partículas virais foram utilizadas, e a análise histopatológica foi utilizada para a avaliação das lesões. Pintinhos SPF de um dia de idade foram divididos em quatro (04) grupos, cada grupo recebeu um dos três vírus isolados e o grupo restante foi usado como controle negativo. Os animais foram mantidos por 42 dias com água e ração ad libitum em isoladores individuais para cada grupo, a cada sete (07) diasforam obtidas amostras de intestino. Os três grupos infectados apresentaram após 12 horas da infecção, sinais de doença entérica, como: depressão, sonolência, penas eriçadas e principalmente diarreia. Após 10 dias da inoculação era evidente a desuniformidade no tamanho dos animais, com a presença de animais com nanismo. A avaliação macroscópica das aves mostrou a presença de intestinos distendidos, cheios de gás e liquido. O exame microscópico diferenciou o grupo infectado com ChPV dos demais, ocorrendo microabscessos de cripta, células em necrose com distribuição multifocal, e enterite linfoplasmocítica discreta. Os dois grupos restantes mostraram uma discreta hiperplasia de cripta e enterite linfoplasmocítica. Para cada um dos grupos de aves infectados foram estabelecidos ensaios de PCR em tempo real (qPCR), que detectaram que os três grupos de aves experimentais eram positivos (100%) para seu correspondente vírus com a maior carga viral aos sete dia de idade, diminuindo drasticamente após 21 dias de idade, no entanto, continuando presente até o 42º dia de idade. O grupo controle negativo não apresentou a presença de vírus, nenhum dos sintomas ou lesões. O peso dos animais em cada grupo infectado diminuiu levemente em comparação ao grupo controle negativo, mas sem diferença estatística significativa (p>0,05). A caracterização molecular e a análise filogenética dos vírus estudados determinou que a cepa de CAstV pertencia ao grupo I dos CAstV e se relaciona com as cepas que estão circulando nos USA. A cepa de ANV pertence ao grupo ANV-1 e apresentou maior porcentagem de similaridade com a cepa do Japão. A cepa do ChPV foi classificada no grupo do isolado da Hungria. Os resultados do presente trabalho caracterizaram o CAstV como parte do Grupo I, o ANV como um ANV-1 e o ChPV como parte do grupo do isolado da Hungria e mostraram que as cepas de ChPV, ANV e CAstV estudadas produzem doença entérica

Enteric diseases are of great importance in the health of birds. Chicken astrovirus (CAstV), avian nephritis virus (ANV) and chicken parvovirus (ChPV) are viruses that have been associated with enteric problems in chickens commercial flocks, being identified in chickens with symptoms of enteric disease. There is little information regarding these three viruses that are being investigated as the cause of enteric problems, especially diarrhea, symptoms related to runting stunting syndrome in poultry. This work aims to perform molecular characterization and determine the pathogenicity of ChPV, CAstV and ANV isolated from chickens with enteric disease. A multidisciplinary approach was used as molecular techniques for the molecular characterization of the viruses for the detection and quantification of the viral particles, histopathological analysis was used for evaluation of the lesions. Chicks SPF one day of age were divided into four (04) groups and each group received one of the three virus isolates and the remaining group was used as negative control, the animals were maintained for 42 days with water and food ad libitum in individual isolators for each group, every seven (07) days intestine samples were obtained. The three infected groups showed after 12 hours of infection, signs of enteric diseases, such as depression, drowsiness, ruffled feathers and mainly diarrhea. After 10 days of inoculation was evident non-uniformity in size of the animals, and the presence of animals with dwarfism. Macroscopic evaluation of the animals showed the presence of distended intestines filled with gas and liquid. Microscopic examination differentiated the group infected with ChPV the other two groups, showing abscess crypt cells in necrosis with multifocal distribution, and discreet linfoplasmocitic enteritis. The remaining two groups showed slight crypt hyperplasia and a discrete linfoplasmocít enteritis. For each of the infected groups real time PCR (qPCR) assays were established, showing the three experimental groups positive (100%) to its corresponding virus and most viral load to seven day old decreasing sharply after 21 days age, however this continuing until 42 days of age. The negative control group showed no viruses, no symptoms or injuries. The weight of the animals in each infected group dropped slightly compared to the negative control group, but without significant difference (p> 0.05). Molecular characterization and phylogenetic analysis of the studied viruses determined that the CAstV strain studied belong to group I of CAstV and is related to the strains that are circulating in the USA. The ANV strain belongs to ANV-1 group and showed a higher percentage of similarity with the Japanese strain. The ChPV strain belongs to group of isolated of Hungary. The results of this study characterized the CAstV as part of Group I, ANV as a ANV-1 and ChPV as a part of group of isolated of Hungary, showed that the strains of ChPV, ANV and CAstV studied produce enteric disease