Serological and molecular findings in diagnosis of leptospirosis serovar hardjo in a dairy bovine herd / Acompanhamento sorológico e molecular do sorovar hardjo no diagnóstico de leptospirose em um rebanho bovino leiteiro

The cattle are considered hosts of the Hardjo serovar, causing economic damages due to the reproductive failures like abortions and infertility. The serovar Hardjo usually remains in the reproductive tract and also in the renal tubules where it is eliminated intermittently in the urine for months. Placental remnants, the aborted fetus and contaminated urine promote the permanence of this bacterium within the herd for years. Thus, the objective of this study was to monitor for prolonged period, cows naturally infected with Leptospira ssp. through microbiological culture, serological examination and DNA detection of the pathogen in the urine. The dairy herd was composed of 50 breeding cows with a history of abortion and infertility, without leptospirosis vaccine and located in the northern region of Paraná. Blood and urine samples were collected and laboratorial diagnosis were performed five times at intervals of four months. Blood samples were collected from the all 50 animals and the serum was submitted to the microscopic agglutination test (MAT) for the detection of anti-leptospira antibodies. Of the total cows, 20 showed antibody titres ≥ 1: 100 in MAT and urine samples were collected from only those animals with higher titers to perform nested-PCR (n-PCR) and bacterial isolation per culture. In addition, two urine samples from five animals with antibody titers < 1: 100 were collected in MAT for n-PCR. Serovar Hardjo wasconsidered the most frequent during the serological monitoring of the animals evaluated. The n-PCRtechnique was able to detect leptospiral DNA in the urine of animals with MAT ≥ 1: 100 antibody titersand urine from animals whose titers were < 1: 100. Sequencing of the leptospiral amplicons shared100% nucleotide sequence identity with the Leptospira interrogans species. Positive n-PCR resultsfrom animals with titers of < 1: 100 suggest that the cut-off of MAT is could be not sufficient to detectrenal carriers, so it is also important to...(AU)

Os bovinos são considerados hospedeiros do sorovar Hardjo, causando prejuízos econômicos devido aos problemas reprodutivos como abortos e infertilidade. O sorovar Hardjo costuma permanecer no trato reprodutivo e também nos túbulos renais onde é eliminado de forma intermitente na urina por meses. Restos placentários, o feto abortado e a urina contaminada favorecem a permanência dessa bactéria dentro do rebanho por anos. Assim, o objetivo deste estudo foi monitorar por período prolongado, vacas naturalmente infectadas por Leptospira ssp. através de cultura microbiológica, exame sorológico e detecção de DNA do patógeno na urina. O rebanho leiteiro estudado era constituído por 50 vacas reprodutoras com histórico de abortos e infertilidade, sem uso de vacina contra a leptospirose e localizada na região Norte do Paraná. As amostras de sangue e urina foram coletadas e submetidas a análises laboratoriais em cinco vezes em intervalos espaçados de quatro meses. As amostras de sangue foram coletadas dos 50 animais e o soro foi submetido ao teste de soroaglutinação microscópica (SAM) para detecção de anticorpos anti-leptospira. Do total vacas, 20 demonstraram títulos de anticorpos ≥ 1: 100 na SAM e foram coletadas amostras de urina apenas destes animais com maiores título para realizar a nested-PCR (n-PCR) e isolamento bacteriano por cultura. Adicionalmente, foram coletadas duas amostras de urina de cinco animais com títulos de anticorpos < 1: 100 na SAM para n-PCR. OSorovar Hardjo foi considerado como sendo o mais frequente durante o monitoramento sorológico dosanimais avaliados. A técnica de n-PCR foi capaz de detectar DNA leptospiral na urina de animais comtítulos de anticorpos ≥ 1: 100 e na urina de animais cujos títulos eram < 1:100. O sequenciamento dosamplicons leptospíricos compartilhou 100% de identidade da sequência de nucleotídeos com a espécieLeptospira interrogans. Os resultados positivos da n-PCR dos animais com títulos < 1: 100 sugerem quea...(AU)

Serological and molecular findings in diagnosis of leptospirosis serovar hardjo in a dairy bovine herd / Acompanhamento sorológico e molecular do sorovar hardjo no diagnóstico de leptospirose em um rebanho bovino leiteiro

The cattle are considered hosts of the Hardjo serovar, causing economic damages due to the reproductive failures like abortions and infertility. The serovar Hardjo usually remains in the reproductive tract and also in the renal tubules where it is eliminated intermittently in the urine for months. Placental remnants, the aborted fetus and contaminated urine promote the permanence of this bacterium within the herd for years. Thus, the objective of this study was to monitor for prolonged period, cows naturally infected with Leptospira ssp. through microbiological culture, serological examination and DNA detection of the pathogen in the urine. The dairy herd was composed of 50 breeding cows with a history of abortion and infertility, without leptospirosis vaccine and located in the northern region of Paraná. Blood and urine samples were collected and laboratorial diagnosis were performed five times at intervals of four months. Blood samples were collected from the all 50 animals and the serum was submitted to the microscopic agglutination test (MAT) for the detection of anti-leptospira antibodies. Of the total cows, 20 showed antibody titres ≥ 1: 100 in MAT and urine samples were collected from only those animals with higher titers to perform nested-PCR (n-PCR) and bacterial isolation per culture. In addition, two urine samples from five animals with antibody titers < 1: 100 were collected in MAT for n-PCR. Serovar Hardjo wasconsidered the most frequent during the serological monitoring of the animals evaluated. The n-PCRtechnique was able to detect leptospiral DNA in the urine of animals with MAT ≥ 1: 100 antibody titersand urine from animals whose titers were < 1: 100. Sequencing of the leptospiral amplicons shared100% nucleotide sequence identity with the Leptospira interrogans species. Positive n-PCR resultsfrom animals with titers of < 1: 100 suggest that the cut-off of MAT is could be not sufficient to detectrenal carriers, so it is also important to...

Os bovinos são considerados hospedeiros do sorovar Hardjo, causando prejuízos econômicos devido aos problemas reprodutivos como abortos e infertilidade. O sorovar Hardjo costuma permanecer no trato reprodutivo e também nos túbulos renais onde é eliminado de forma intermitente na urina por meses. Restos placentários, o feto abortado e a urina contaminada favorecem a permanência dessa bactéria dentro do rebanho por anos. Assim, o objetivo deste estudo foi monitorar por período prolongado, vacas naturalmente infectadas por Leptospira ssp. através de cultura microbiológica, exame sorológico e detecção de DNA do patógeno na urina. O rebanho leiteiro estudado era constituído por 50 vacas reprodutoras com histórico de abortos e infertilidade, sem uso de vacina contra a leptospirose e localizada na região Norte do Paraná. As amostras de sangue e urina foram coletadas e submetidas a análises laboratoriais em cinco vezes em intervalos espaçados de quatro meses. As amostras de sangue foram coletadas dos 50 animais e o soro foi submetido ao teste de soroaglutinação microscópica (SAM) para detecção de anticorpos anti-leptospira. Do total vacas, 20 demonstraram títulos de anticorpos ≥ 1: 100 na SAM e foram coletadas amostras de urina apenas destes animais com maiores título para realizar a nested-PCR (n-PCR) e isolamento bacteriano por cultura. Adicionalmente, foram coletadas duas amostras de urina de cinco animais com títulos de anticorpos < 1: 100 na SAM para n-PCR. OSorovar Hardjo foi considerado como sendo o mais frequente durante o monitoramento sorológico dosanimais avaliados. A técnica de n-PCR foi capaz de detectar DNA leptospiral na urina de animais comtítulos de anticorpos ≥ 1: 100 e na urina de animais cujos títulos eram < 1:100. O sequenciamento dosamplicons leptospíricos compartilhou 100% de identidade da sequência de nucleotídeos com a espécieLeptospira interrogans. Os resultados positivos da n-PCR dos animais com títulos < 1: 100 sugerem quea...