O papel da gota citoplasmática na funcionalidade de espermatozoides em mamíferos: uma revisão atualizada / The role of cytoplasmic droplet over sperm functionality in mammals: an updated review

A gota citoplasmática é uma protuberância de citoplasma geralmente posicionada na peça intermediária dos espermatozoides. É considerada uma organela transitória, uma vez que migra pelo espermatozoide durante o trânsito epididimário, quando é removida dessas células na maioria dos mamíferos. Dúvidas sobre se a presença desta gota está relacionada de forma positiva ou negativa com a função e fertilidade espermática são frequentes, já que sua presença no ejaculado pode afetar a fertilidade espermática e o uso do sêmen em biotécnicas da reprodução. Porém, mesmo não sendo totalmente compreendida a nível molecular e funcional, sabe-se que a gota citoplasmática é necessária ao espermatozoide durante seu processo de maturação no epidídimo. Por isso, o objetivo desta revisão foi abordar pontos sobre a fisiologia e funções das gotas citoplasmáticas, bem como relacionar sua presença com a maturação e fertilidade dos espermatozoides.(AU)

The cytoplasmic droplet is a protuberance of cytoplasm usually positioned in the sperm midpiece. It is considered a transient organelle that migrates through the sperm cell during its epididymal transit when it is finally removed from the cell in most mammals. Doubts over whether the presence of cytoplasmic droplets is positively or negatively related to sperm functions and fertility are common, as its presence in the ejaculate may affect sperm fertility and the use of semen in assisted reproductive technology. Although the understanding of cytoplasmic droplets function is not fully clarified at molecular and functional levels, it is known that cytoplasmic droplet is necessary for spermatozoa, especially during their maturation in the epididymal duct. Therefore, the aim of this review was to discuss aspects of the physiology and function of cytoplasmic droplets, as well as to relate their presence to sperm maturation and their consequent fertility.(AU)

O papel da gota citoplasmática na funcionalidade de espermatozoides em mamíferos: uma revisão atualizada / The role of cytoplasmic droplet over sperm functionality in mammals: an updated review

A gota citoplasmática é uma protuberância de citoplasma geralmente posicionada na peça intermediária dos espermatozoides. É considerada uma organela transitória, uma vez que migra pelo espermatozoide durante o trânsito epididimário, quando é removida dessas células na maioria dos mamíferos. Dúvidas sobre se a presença desta gota está relacionada de forma positiva ou negativa com a função e fertilidade espermática são frequentes, já que sua presença no ejaculado pode afetar a fertilidade espermática e o uso do sêmen em biotécnicas da reprodução. Porém, mesmo não sendo totalmente compreendida a nível molecular e funcional, sabe-se que a gota citoplasmática é necessária ao espermatozoide durante seu processo de maturação no epidídimo. Por isso, o objetivo desta revisão foi abordar pontos sobre a fisiologia e funções das gotas citoplasmáticas, bem como relacionar sua presença com a maturação e fertilidade dos espermatozoides.

The cytoplasmic droplet is a protuberance of cytoplasm usually positioned in the sperm midpiece. It is considered a transient organelle that migrates through the sperm cell during its epididymal transit when it is finally removed from the cell in most mammals. Doubts over whether the presence of cytoplasmic droplets is positively or negatively related to sperm functions and fertility are common, as its presence in the ejaculate may affect sperm fertility and the use of semen in assisted reproductive technology. Although the understanding of cytoplasmic droplets function is not fully clarified at molecular and functional levels, it is known that cytoplasmic droplet is necessary for spermatozoa, especially during their maturation in the epididymal duct. Therefore, the aim of this review was to discuss aspects of the physiology and function of cytoplasmic droplets, as well as to relate their presence to sperm maturation and their consequent fertility.

The epididymis and its role on sperm quality and male fertility

The epididymis is a complex organ where spermatozoa acquire motility and ability to fertilize theegg. Epididymal maturation lasts 1 or 2 weeks and exposes the immature spermatozoa to a sequentially modified milieu, promoting intense interactions with secretions by the epididymal epithelium. Sperm surface modifications in response to interactions with epididymal secretions are key steps to achieve fertility ability. However, the precise molecular mechanisms that convert an immotile and infertile gamete into a highly motile cellcapable of fusion with an oocyte are still unknown. Recent data on proteomics and transcriptomics of epididymal fluid and epididymosomes brought new ideas of the physiological roles of proteins and miRNAs in epididymal maturation in spermatozoa. This review focuses on the recent discoveries on epididymal fluid composition and its role on sperm maturation and preservation, linking to their survival and fertility potential.

The epididymis and its role on sperm quality and male fertility

The epididymis is a complex organ where spermatozoa acquire motility and ability to fertilize theegg. Epididymal maturation lasts 1 or 2 weeks and exposes the immature spermatozoa to a sequentially modified milieu, promoting intense interactions with secretions by the epididymal epithelium. Sperm surface modifications in response to interactions with epididymal secretions are key steps to achieve fertility ability. However, the precise molecular mechanisms that convert an immotile and infertile gamete into a highly motile cellcapable of fusion with an oocyte are still unknown. Recent data on proteomics and transcriptomics of epididymal fluid and epididymosomes brought new ideas of the physiological roles of proteins and miRNAs in epididymal maturation in spermatozoa. This review focuses on the recent discoveries on epididymal fluid composition and its role on sperm maturation and preservation, linking to their survival and fertility potential.(AU)

The sperm journey in the excurrent duct: functions of microvesicles on sperm maturation and gene expression along the epididymis

Mammalian spermatozoa are differentiated, but unable to fertilize as they leave the testis. In order to acquire fertilizing ability and forward motility properties, the male gamete has to transit the epididymis. This process is collectively known as sperm maturation. The epididymis is a single convoluted tubule located between the vas efferens and the vas deferens; sperm epididymal transit takes 3 to 15 days depending on the species. Protein synthesis in the epididymis is highly active in response to androgen stimulation, and the underlying gene expression pattern shows great variability along this organ. For decades it has been recognized that interactions between the transiting spermatozoa and the intraluminal compartment of the epididymis govern complex modifications of sperm macromolecular composition that are necessary for sperm maturation. There is increasing interest in extracellular microvesicles that modulate cell-cell interactions in many physiological systems: such vesicles are found in the intraluminal compartment of the epididymis are called epididymosomes. We have shown that the epididymosome protein composition varies along the epididymis, and that a subset of these proteins isselectively transferred to the male gamete. These proteins are targeted to different sperm sub-compartments and are proposed to be involved in both the acquisition of fertilizing ability and forward motility properties. More recently, we used a bovine model to show that different subpopulations of epididymosomes are present in the fluid of a given epididymal segment. One of these subpopulations is proposed to be involved in the transfer of specific proteins by a membrane fusion process mediated by tetraspanin complexes, whereas another population of epididymosomes is involved in a mechanism that protects epididymal sperm against degenerating ones.

The sperm journey in the excurrent duct: functions of microvesicles on sperm maturation and gene expression along the epididymis

Mammalian spermatozoa are differentiated, but unable to fertilize as they leave the testis. In order to acquire fertilizing ability and forward motility properties, the male gamete has to transit the epididymis. This process is collectively known as sperm maturation. The epididymis is a single convoluted tubule located between the vas efferens and the vas deferens; sperm epididymal transit takes 3 to 15 days depending on the species. Protein synthesis in the epididymis is highly active in response to androgen stimulation, and the underlying gene expression pattern shows great variability along this organ. For decades it has been recognized that interactions between the transiting spermatozoa and the intraluminal compartment of the epididymis govern complex modifications of sperm macromolecular composition that are necessary for sperm maturation. There is increasing interest in extracellular microvesicles that modulate cell-cell interactions in many physiological systems: such vesicles are found in the intraluminal compartment of the epididymis are called epididymosomes. We have shown that the epididymosome protein composition varies along the epididymis, and that a subset of these proteins isselectively transferred to the male gamete. These proteins are targeted to different sperm sub-compartments and are proposed to be involved in both the acquisition of fertilizing ability and forward motility properties. More recently, we used a bovine model to show that different subpopulations of epididymosomes are present in the fluid of a given epididymal segment. One of these subpopulations is proposed to be involved in the transfer of specific proteins by a membrane fusion process mediated by tetraspanin complexes, whereas another population of epididymosomes is involved in a mechanism that protects epididymal sperm against degenerating ones.(AU)

Produção de espécies reativas de oxigênio no sêmen de touros Nelore com degeneração testicular

Resumo: Sabe-se que o estresse térmico causa uma queda da qualidade seminal em touros. Alterando o processo de espermatogêneses e maturação espermática. No entanto, a cronologia desses efeitos, o momento específico da espermatogênese e da maturação espermática, assim como o tempo de recuperação da espermatogêneses ainda não é totalmente compreendido, e é fundamental fornecer informações para intervir adequadamente. Neste sentido, este estudo teve como objetivo primeiro, estabelecer os efeitos sequenciais iniciais do estresse térmico na qualidade espermática de touros. E segundo, calcular a prevalência de defeitos maiores e menores, e todos os prejuízos relacionados à qualidade espermática em cada estágio específico da espermatogênese e maturação espermática. Bem como, confirmar em que momento começa a recuperação do ciclo espermático. Para isto, amostras de sêmen e sangue de bovinos da raça Nelore foram coletadas e distribuídas nos grupos controle e estresse térmico testicular (bolsas escrotais / 96 horas), para atingir o primeiro objetivo. Para o segundo objetivo, os mesmo dois grupos foram mantidos, desta vez distribuindo as amostras em 5 períodos. Todas as amostras de sêmen foram avaliadas quanto à motilidade dos espermatozóides, anormalidades, integridade das membranas plasmática e acrossômica e função da membrana mitocondrial, peroxidação lipídica dos espermatozoides e do plasma seminal e fragmentação do DNA. O plasma sanguíneo também foi avaliado para a peroxidação lipídica. Os primeiros 14 dias antes do estresse (período 1), mostraram a homogeneidade dos touros. Os efeitos cronológicos do estresse térmico testicular sobre a maturação espermática no epidídimo (período 2) começaram sete dias depois ao estresse com um aumento nas anormalidades espermáticas e, diminuição da integridade de membranas. Após 14, 21, 28, 35 e 42 dias (período 3), a peroxidação lipídica dos espermatozoides aumentou e a função da membrana mitocondrial, a motilidade espermática, a integridade da membrana plasmática e do DNA diminuíram. Durante os dias 49, 56 e 63 apos o estresse (período 4), os defeitos continuaram aumentando e o potencial mitocondrial diminuindo. Nos 70 e 77 dias seguintes (período 5), alguns defeitos continuaram aparecendo. Assim, os efeitos do estresse térmico começaram aumentando as anormalidades espermáticas e a peroxidação lipídica, sugerindo estresse oxidativo no sêmen e alterando em primer lugar a função das mitocôndrias, a motilidade dos espermatozóides, a integridade da membrana plasmática e, tardiamente, a fragmentação do DNA. Embora as anormalidades espermáticas persistissem e aumentassem ao longo do tempo, a peroxidação lipídica espermática, por sua vez, aumentou apenas 14 e 21 dias após o estresse térmico. Nesse sentido, o conhecimento da cronologia dos efeitos do estresse térmico testicular, assim como a prevalência de defeitos e afecções que ocorrem em cada fase da espermatogênese e maturação espermática, fornecerão informações valiosas sobre o status da espermatogênese e ajudarão na realização de diagnósticos precisos, proporcionando melhor prognóstico e intervenções terapêuticas.

Abstract: It is known that heat stress causes a decrease in sperm quality in bulls. Injuring the process of spermatogenesis and sperm maturation. However, the chronology of these impairments, the specific time of spermatogenesis and sperm maturation in which sperm cells are affected, and the recovery of spermatogenesis and sperm maturation, is still not fully understood, and it is fundamental to provide information to intervene adequately. In this sense, first, this study aimed to establish the early sequential effects of heat stress in bull sperm quality. Second, calculate the prevalence of major and minor defects, and all losses related to sperm quality at each specific stage of spermatogenesis and sperm maturation. As well, confirm at what time begins the recovery of the sperm cycle. For this, semen and blood samples of Nellore breed bulls were collected and distributed into control and testicular heat stress (scrotal bags/96 hours) groups, in order to reach the first objective. For the second objective, the same two groups were maintained, this time distributing the samples in 5 periods. All semen samples were evaluated for sperm motility, abnormalities, plasma and acrosomal membrane integrity and mitochondrial membrane function, lipid peroxidation of spermatozoa and seminal plasma, and DNA fragmentation. Blood plasma was also evaluated for lipid peroxidation. The first 14 days before stress (period 1), showed the homogeneity of the groups. The chronological effects of testicular heat stress on sperm maturation in the epididymis (period 2) began seven days after the stress, with an increase in sperm abnormalities and decreased membranes integrities. After 14, 21, 28, 35 and 42 days (period 3), spermatozoa lipid peroxidation increased and, mitochondrial membrane function, sperm motility, plasma membrane and DNA integrity decreased. During days 49, 56 and 63 after stress (period 4), the morphological defects continued to increase and the mitochondrial potential decreased. In the next 70 and 77 days (period 5), some defects continued to appear. Thus, the effects of testicular heat stress began increasing sperm abnormalities and lipid peroxidation, suggesting oxidative stress in the semen and altering in the first place the function of mitochondria, sperm motility, plasma membrane integrity and, as a late effect, DNA fragmentation. Although sperm abnormalities persisted and increased over time, sperm lipid peroxidation, in turn, increased only 14 and 21 days after heat stress. In this sense, the knowledge of the chronology of the effects of testicular heat stress, as well as the prevalence of defects and impairments that occur in each phase of spermatogenesis and sperm maturation will provide valuable information on the status of spermatogenesis and will aid in the achievement of accurate diagnoses, better prognosis and therapeutic interventions.

Estudo do metabolismo energético durante a maturação espermática em bovinos.

A espermatogênese é um processo orquestrado e coordenado pelo qual os espermatozoides são produzidos. Ao final deste processo, o excesso de citoplasma presente nas espermátides é fagocitado, permanecendo um resíduo denominado de gota citoplasmática. Os espermatozoides em fase de maturação apresentam gota, que migra da região proximal para regiões mais distais da célula espermática. Estudos relacionam o remanescente citoplasmático à proteção antioxidante e à ativação metabólica de espermatozoides imaturos. Os mecanimos fisiológicos da maturação e os status oxidativo e metabólico em células epididimárias de bovinos são pobremente elucidados. Desta forma, foram realizados dois experimentos com o objetivo de caracterizar o status oxidativo e metabólico de espermatozoides bovinos durante a maturação espermática, e os possíveis papéis da gota citoplasmática envolvidas nesse processo. Para tal, amostras espermáticas foram recuperadas dos três segmentos epididimários (Cabeça, corpo e cauda) e submetidas às avaliações de cinética espermática (CASA) e testes morfofuncionais. Foram avaliadas as atividades das enzimas antioxidantes SOD e GPx e mensurados os níveis de ATP em cada amostra epididimária. Espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo apresentaram maior porcentagem de células móveis e progressivas e elevados níveis de ATP em comparação aos demais grupos. As células provenientes do corpo apresentaram maior susceptibilidade à peroxidação lipídica e membranas plasmática e acrossomal lesionadas. Foi nesse segmento que também observamos a migração da gota e o início da aquisição da motilidade, e correlação negativa entre gota distal e susceptibilidade à peroxidação. Em amostras da cabeça, houve correlação positiva entre produção de EROs e níveis de ATP, e alto PMM; e correlação negativa entre atividade da SOD e susceptibilidade à peroxidação lipídica em amostras da cabeça. Não foram observadas diferenças significativas em relação ao potencial de membrana mitocondrial (PMM) e a atividade da SOD e da GPx entre os diferentes segmentos. Por meio dos principais resultados, pudemos sugerir que as células presentes na cauda do epidídimo apresentam o aparato energético ativo, devido à alta porcentagem de células móveis e níveis de ATP. As amostras provenientes do corpo evidenciam que é neste segmento em que a motilidade se inicia e que ocorre os principais remodelamentos de membrana. As correlações observadas nos permitem inferir que as mitocôndrias de espermatozoides bovinos imaturos já estivessem ativas desde o início da maturação, produzindo energia e EROs. Além disso, a correlação nos mostra o papel protetor da SOD contra à peroxidação lipídica. Paralelamente, sugerimos que a gota participe firmemente da ativação da motilidade e desempenhe papel antioxidante contra as EROs. Assim, concluímos que as modificações celulares inerentes ao processo de maturação e a presença da gota citoplasmática sejam cruciais no status oxidativo e metabólico de espermatozoides bovinos imaturos, afim desenvolver a capacidade fecundante do espermatozoide.

Spermatogenesis is an orchestrated and coordinated process by which sperm are produced. In the end of this process, the excess cytoplasm present in the spermatids is phagocytosed, remaining a called cytoplasmic droplet. Spermatozoa in the stage of maturation present cytoplasmic droplet, which migrates from the proximal region to more distal regions in sperm cell. Studies relate the cytoplasmic remnant to the antioxidant protection and to metabolic activation of immature sperma. The physiological mechanisms of maturation and the oxidative and metabolic status of bovine epididymal cells are poorly elucidated. Thus, two experiments aimed to characterize the oxidative and metabolic status of bovine sperm during epididymal maturation, and the possible cytoplasmic droplet roles involved in this process. For this, sperm samples were recovered from the three epididymal segments (Caput, corpus and cauda) and submitted to spermatic kinetics analysis (CASA) and morphofunctional tests. The activities of the antioxidant enzymes SOD and GPx were evaluated and the levels of ATP in each epididymal sample. Sperm cells recovered from the cauda of the epididymis showed a higher percentage of motile and progressive cells and high levels of ATP compared to the other groups. Cells from the corpus showed elevated susceptibility to lipid peroxidation and lesioned plasma and acrosomal membranes. It was in this segment that we also observed the migration of cytoplasmic droplet and the beginning of the acquisition of motility, and negative correlation between distal droplet and susceptibility to peroxidation. In samples from the caput, there was a positive correlation between ROS production and ATP levels, and high PMM; and negative correlation between SOD activity and susceptibility to lipid peroxidation in caput samples. No significant differences were observed in relation to mitochondrial membrane potential (PMM) and SOD and GPx activity among the different segments.By means of the main results, we could suggest that cells present in the cauda of the epididymis present the active energy apparatus, due to the high percentage of mobile cells. Samples from the corpus show that is in this segment that the motility begins and the main membrane remodeling occurs. The observed correlations allow us to infer that mitochondria of immature bovine sperm are already active since the beginning of maturation, producing energy and ROS. In addition, the correlation shows us the protective role of SOD against lipid peroxidation. In parallel, we suggest that cytoplasmic droplet participates firmly in the activation of motility and plays an antioxidant role against ROS. Thus, we conclude that the cellular modifications inherent in the sperm maturation process and the presence of cytoplasmic droplet are crucial in the oxidative and metabolic status of immature bovine spermatozoa, in order to develop fecundant capacity.

Estudo da maturação epididimária em cães / Epididymal maturation in dogs

A hipótese desta pesquisa foi que a maturação epididimária dos espermatozoides caninos envolve modificações nas proteínas e ácidos graxos do fluido sintetizado pelos distintos segmentos epididimários, além de alterações no perfil de ácidos graxos da membrana plasmática, organização celular e morfológica dos espermatozoides. Para tanto, este projeto foi realizado com 20 cães em idade reprodutiva e negativos para Brucella canis. Após a orquiectomia bilateral, os testículos e epidídimos foram acondicionados a 5°C por no máximo 24 horas, em seguida, as amostras foram colhidas por incisões na cauda, corpo e cabeça do epidídimo. As amostras foram imediatamente processadas por avaliação subjetiva e automática da motilidade e vigor espermático, concentração, morfologia espermática, integridade da membrana plasmática, acrossomal e atividade mitocondrial. Foi possível observar determinar maior número de espermatozoides dentro da normalidade na cauda do epidídimo, especialmente, referindo-se à motilidade, integridade de membrana e atividade mitocondrial. A avaliação das modificações ultraestruturais dos espermatozoides permitiu observar a migração da gota citoplasmática e alterações acrossomais. No perfil de ácidos graxos observaram-se variações na quantidade e presença dos ácidos durante o traje epididimário, destacando o acréscimo do DHA na região da cauda epididimária. Ainda, no perfil protéico do plasma epididimário canino, foi possível identificar um padrão regional de secreção de proteínas, maior nas regiões da cabeça e corpo em relação à cauda do epidídimo. Apesar das importantes informações geradas a partir do presente trabalho, mais estudos são necessários para a compreensão da fisiologia reprodutiva, especialmente da maturação espermática epididimária na espécie canina.

The hypothesis of this research is that the canine maturation of epididymal spermatozoa involves progressive changes in the protein and fatty acid content of the fluid synthesized by the different epididymal segments, as well as changes in the fatty acid profile of the sperm plasma membrane, cell organization and morphology of the canine sperm. Therefore, this experiment was conducted with 20 dogs in reproductive age and free of Brucella canis. After bilateral orchiectomy, testes and epididymis were stored at 5°C for up to 24 hours and then the samples were harvested through incisions of the tail, corpus and caput of the epididymis. The samples were immediately processed for subjective and automatic motility and sperm vigor, sperm count, morphology, plasma membrane integrity, acrosomal and mitochondrial activity. It was possible to observe a greater number of mature sperm in the epididymal tail compared to the corpus and caput, especially referring to motility, membrane integrity and mitochondrial activity. The evaluation of ultrastructural changes of the spermatozoa allowed to observed the migration of the cytoplasmic droplets and acrosomal changes. In the fatty acid profile was observed variations in the amount and presence of acids during epididymal maturation, highlighting the addition of DHA in the epididymal tail region. Moreover, in the protein profile of the canine epididymal plasma, it was possible to identify a regional pattern of protein secretion, higher in the caput and corpus in relation to the tail epididymis. In spite of the important data generated from this study, further studies are needed for understand the reproductive physiology, especially the epididymal sperm maturation in dogs.

Estudo da maturação epididimária em cães / Epididymal maturation in dogs

A hipótese desta pesquisa foi que a maturação epididimária dos espermatozoides caninos envolve modificações nas proteínas e ácidos graxos do fluido sintetizado pelos distintos segmentos epididimários, além de alterações no perfil de ácidos graxos da membrana plasmática, organização celular e morfológica dos espermatozoides. Para tanto, este projeto foi realizado com 20 cães em idade reprodutiva e negativos para Brucella canis. Após a orquiectomia bilateral, os testículos e epidídimos foram acondicionados a 5°C por no máximo 24 horas, em seguida, as amostras foram colhidas por incisões na cauda, corpo e cabeça do epidídimo. As amostras foram imediatamente processadas por avaliação subjetiva e automática da motilidade e vigor espermático, concentração, morfologia espermática, integridade da membrana plasmática, acrossomal e atividade mitocondrial. Foi possível observar determinar maior número de espermatozoides dentro da normalidade na cauda do epidídimo, especialmente, referindo-se à motilidade, integridade de membrana e atividade mitocondrial. A avaliação das modificações ultraestruturais dos espermatozoides permitiu observar a migração da gota citoplasmática e alterações acrossomais. No perfil de ácidos graxos observaram-se variações na quantidade e presença dos ácidos durante o traje epididimário, destacando o acréscimo do DHA na região da cauda epididimária. Ainda, no perfil protéico do plasma epididimário canino, foi possível identificar um padrão regional de secreção de proteínas, maior nas regiões da cabeça e corpo em relação à cauda do epidídimo. Apesar das importantes informações geradas a partir do presente trabalho, mais estudos são necessários para a compreensão da fisiologia reprodutiva, especialmente da maturação espermática epididimária na espécie canina. (AU)

The hypothesis of this research is that the canine maturation of epididymal spermatozoa involves progressive changes in the protein and fatty acid content of the fluid synthesized by the different epididymal segments, as well as changes in the fatty acid profile of the sperm plasma membrane, cell organization and morphology of the canine sperm. Therefore, this experiment was conducted with 20 dogs in reproductive age and free of Brucella canis. After bilateral orchiectomy, testes and epididymis were stored at 5°C for up to 24 hours and then the samples were harvested through incisions of the tail, corpus and caput of the epididymis. The samples were immediately processed for subjective and automatic motility and sperm vigor, sperm count, morphology, plasma membrane integrity, acrosomal and mitochondrial activity. It was possible to observe a greater number of mature sperm in the epididymal tail compared to the corpus and caput, especially referring to motility, membrane integrity and mitochondrial activity. The evaluation of ultrastructural changes of the spermatozoa allowed to observed the migration of the cytoplasmic droplets and acrosomal changes. In the fatty acid profile was observed variations in the amount and presence of acids during epididymal maturation, highlighting the addition of DHA in the epididymal tail region. Moreover, in the protein profile of the canine epididymal plasma, it was possible to identify a regional pattern of protein secretion, higher in the caput and corpus in relation to the tail epididymis. In spite of the important data generated from this study, further studies are needed for understand the reproductive physiology, especially the epididymal sperm maturation in dogs. (AU)