In vitro acaricidal activity of different ectoparasiticide classes against Amblyomma sculptum larvae / Atividade acaricida in vitro de diferentes classes de ectoparasiticidas frente a larvas de Amblyomma sculptum

Zoonoses are major causes of morbidity and mortality worldwide. Among them, Brazilian Spotted Fever (BSF) is an important one that occurs in some regions of South America and can be transmitted by the “star tick” Amblyomma sculptum. Application of acaricides against the larval stage is important as strategy of population control. However, there is still a deficiency of studies on chemical control of A. sculptum and the present work aims to evaluate the in vitro acaricidal activity of cypermethrin, flumethrin, deltamethrin, fipronil, coumaphos and chlorpyrifos against A. sculptum larvae. Bioassays were performed using the larval immersion test method. A discriminatory analysis between the antiparasitic classes most used for tick control was carried out, which made it possible to determine the classes with higher potential for controlling A. sculptum larvae. Our results showed that A. sculptum larvae present highest sensitivity to the synthetic pyrethroid group, followed by the phenylpyrazole, organophosphate and macrocyclic lactone groups. These findings may support studies on improvement of tick control as in animals as in the environment.(AU)

As zoonoses são a maior causa de morbidade de mortalidade no mundo. A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma importante zoonose que ocorre em algumas regiões da América do Sul e pode ser transmitida pelo “carrapato-estrela” Amblyomma sculptum. A aplicação de acaricidas, frente ao estágio larval, é importante como estratégia no controle da população. No entanto, ainda há uma deficiência de estudos para o controle químico de A. sculptum. Devido à necessidade de mais informações sobre o controle de A. sculptum, o presente trabalho tem como objetivo avaliar a atividade acaricida in vitro de cipermetrina, flumetrina, deltametrina, fipronil, coumafós e clorpirifós frente a larvas de A. sculptum. Os bioensaios foram realizados pelo método Teste de Imersão de Larva. Foi realizada uma análise discriminatória entre as classes antiparasitárias mais utilizadas para controle de carrapatos, possibilitando determinar classes com maior potencial para o controle de larvas de A. sculptum. Os resultados deste trabalho mostraram que as larvas de A. sculptum apresentam maior sensibilidade ao grupo dos piretroides sintéticos, seguido pelos grupos fenilpirazóis, organofosforados e lactonas macrocíclicas. Esses achados poderiam apoiar estudos visando ao controle do carrapato tanto em animais quanto no meio ambiente.(AU)~ipt

ATIVIDADE REPELENTE E CARRAPATICIDA DE COMPOSTOS DERIVADOS DO ÓLEO DE COCO CONTRA Amblyomma sculptum

Amblyomma sculptum pode parasitar diversos mamíferos, incluindo humanos, e é o principal vetor da bactéria Rickettsia rickettsii no Brasil, agente etiológico da febre maculosa brasileira. Diversos estudos vêm sendo realizados com produtos de origem vegetal para controle de carrapatos. Além disso, o uso de repelentes é uma importante ferramenta para evitar infestações. O presente estudo teve como objetivo avaliar a repelência de ninfas não alimentadas de A. sculptum frente a substâncias derivadas de óleo de coco (éster metílico de ácido dodecanóico- C12; éster metílico de ácido decanóico- C10; óleo de catnip- Nepeta cataria; e ácido graxo livre de coco em formulação de óleo de lavanda) por meio de bioensaios de placa de Petri modificado e, avaliar a atividade carrapaticida dessas substâncias por meio do teste de pacote de larvas. Para o teste de placa de Petri, um semicírculo de papel filtro contendo a substância a ser testada na concentração de 10% diluída em etanol e outro semicírculo contendo o solvente (etanol), foram posicionadas dentro da placa; seis ninfas não alimentadas foram colocadas no centro de cada placa e sua localização foi avaliada aos 1, 3, 5, 10, 15 e 30 minutos e às 24, 48, 72, 96 e 168 horas após o início do teste. Para o teste de pacote de larvas as substâncias foram utilizadas em cinco concentrações (2,5; 5; 10; 15 e 20 mg/mL) sobre larvas não alimentadas de A. sculptum para avaliação de mortalidade após 24 horas do tratamento. Como resultado, todas as substâncias apresentaram repelência, sendo que o ácido graxo livre de óleo de coco conferiu repelência por 7 dias, enquanto o óleo de catnip (Nepeta cataria) e o éster metílico de C10 apresentaram repelência por 4 e 3 dias, respectivamente. A concentração do éster metílico de C12, efetiva contra mais de 93% das larvas testadas, foi de 15 mg/mL e a concentração, dessa mesma substância, de 20mg/mL conferiu 100% de mortalidade. Assim, nossos resultados indicam que compostos derivados do óleo de coco possuem efeito repelente e carrapaticida sobre fases imaturas de A. sculptum e podem ser formulados para proteger humanos e outros animais de infestação, bem como contra patógenos transmitidos por essa espécie de carrapato.

Amblyomma sculptum can parasitize several mammals, including humans, and is the main vector of the Rickettsia rickettsii bacterium in Brazil, the etiological agent of Brazilian spotted fever. Several studies have been carried out with products of plant origin to control ticks. In addition, the use of repellents is an important tool to prevent infestations. The present study aimed to evaluate the repellency of non-fed nymphs of A. sculptum against substances derived from coconut oil (methyl ester of dodecanoic acid-C12; methyl ester of decanoic acid-C10; catnip oil- Nepeta cataria; and fatty acid free of coconut in lavender oil formulation) using modified Petri dish bioassays and, to evaluate the tick activity of these substances by means of the larval pack test. For the Petri dish test, a semicircle of filter paper containing the substance to be tested at a concentration of 10% diluted in ethanol and another semicircle containing the solvent (ethanol), were placed inside the dish; six non-fed nymphs were placed in the center of each plate and their location was assessed at 1, 3, 5, 10, 15 and 30 minutes and at 24, 48, 72, 96 and 168 hours after the start of the test. For the larval packet test the substances were used in five concentrations (2.5, 5, 10, 15 and 20 mg / mL) on non-fed larvae of A. sculptum to assess mortality after 24 hours of treatment. As a result, all substances showed repellency, with fatty acid free of coconut oil conferring repellency for 7 days, while catnip oil (Nepeta cataria) and C10 methyl ester showed repellency for 4 and 3 days, respectively. The concentration of C12 methyl ester, effective against more than 93% of the tested larvae, was 15 mg / mL and the concentration, of that same substance, of 20mg / mL conferred 100% mortality. Thus, our results indicate that compounds derived from coconut oil have a repellent and tick effect on immature stages of A. sculptum and can be formulated to protect humans and other animals from infestation, as well as against pathogens transmitted by this species of tick.

Estabelecimento e caracterização de linhagens celulares embrionárias de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (RBME-6) e Amblyomma sculptum (ASE-14) (Acari: Ixodida) do Brasil

Os carrapatos são artrópodes de grande importância médica e veterinária, sendo responsáveis pela transmissão de vírus, bactérias e protozoários aos seus hospedeiros. Alguns dos patógenos transmitidos por carrapatos são difíceis de crescer in vitro e não crescem em meios artificiais ou outros substratos. As linhagens de células de carrapatos representam uma ferramenta útil para estudar muitos aspectos da pesquisa de carrapatos e patógenos transmitidos por eles. Aqui, estabelecemos e caracterizamos duas linhagens celulares RBME-6 e ASE-14 derivadas de embriões de Rhipicephalus microplus e Amblyomma sculptum, respectivamente, ambos coletados no Brasil. Culturas primárias de células foram preparadas a partir de ovos embrionados das duas espécies de carrapatos, em meio L-15B, e mantidas à 30 °C. Quando as culturas atingiram uma densidade celular adequada, foram subcultivadas e criopreservadas em várias passagens. As análises citológicas foram feitas usando microscopia de contraste de fase, com células que foram submetidas à citocentrifugação e coradas com Giemsa, enquanto as técnicas de coloração com ácido periódico de Schiff e azul de bromofenol foram usadas para detectar polissacarídeos e proteinas, respectivamente. Não foi detectado o DNA de Anaplasma spp., Anaplasma marginale, Babesia/Theileria spp, Bartonella spp., Coxiella spp., Ehrlichia canis, Rickettsia spp. ou Mycoplasma spp. nas células através de ensaios de PCR. Além disso, realizamos a caracterização cromossômica das linhagens celulares de ambas espécies de carrapatos e confirmamos a origem dessas linhagens por meio de PCR convencional e sequenciamento de um fragmento do gene mitocondrial 16S rRNA. Em conclusão, duas novas linhagens celulares derivadas dos embriões de carrapatos foram geradas e caracterizadas neste estudo. Essas linhagens celulares poderão ser usadas em estudos futuros sobre diferentes aspectos, como as relações entre carrapatos e patógenos transmitidos por eles, expressão de proteínas em células infectadas e não infectadas e obtenção de antígenos. Além disso, é importante ter um painel maior de linhagens de células de carrapatos, pois elas podem servir como ferramentas eficientes para o avanço de pesquisas em várias áreas da virologia, bacteriologia, biologia e controle desses carrapatos.

Ticks are arthropods of great medical and veterinary importance, being responsible for the transmission of viruses, bacteria, and protozoa to their hosts. Some of the tick-borne pathogens are difficult to grow in vitro, and do not grow on artificial media or other substrates. Tick cell lines represent a useful tool for studying many aspects of tick and tick-borne pathogen research. Here, we established and characterized two cell lines RBME-6 and ASE-14 derived from embryos of Rhipicephalus microplus and Amblyomma sculptum, respectively, both from Brazil. Primary tick cell cultures were prepared in L-15B at 30°C.When they reached an adequate density, the cells were subcultured and cryopreserved in several passages. Cytological analysis were performed using phase contrast microscopy and cytocentrifuge smears stained with Giemsa, while periodic acid-Schiff and bromophenol blue staining techniques were used to detect total polysaccharides and the total protein, respectively. Anaplasma spp., Anaplasma marginale, Babesia/Theileria spp., Coxiella spp., Ehrichia canis, Mycoplasma spp. and Rickettsia sp. were not detected in the cells through PCR assays. In addition, we performed chromosomal characterization of the tick cell line and confirmed the origin of the cell line through conventional PCR and sequencing of the 16S rRNA gene mitochondrial fragment. In conclusion, two new cell lines derived from embryos of ticks were generated and characterized in this study. These cell lines can be used in future studies on different aspects, such as the relationship between ticks and pathogens transmitted by them, expression of proteins in infected and non-infected cells and obtaining antigens. In addition, it is important to have a larger panel of tick cell lines, as they can serve as efficient tools for advancing research in various areas of virology, bacteriology, biology and control of these ticks.