Could dysregulation of RASSF1 expression be a mechanism of tumorigenesis in CTVT? / A desregulação da expressão de RASSF1 pode ser um mecanismo da tumorigênese em TVTC?

Canine transmissible venereal tumor (CTVT) is the oldest known somatic cell lineage. It is a transmissible cancer that propagates naturally in dogs and reportedly contains gene mutations. RASSF1 participates in DNA damage repair, and its downregulation, results in tumor progression. Hence, RASSF1 is a tumor suppressor gene. Its expression was quantified in tumors from seventeen animals and three cell cultures derived from tumors. In general, RASSF1 was underexpressed in 65%, and absent in 35% of tumor samples. Cells from tumor tissue cultures showed decreased expression of RASSF1 in 67% and elevated expression in 33% of samples tested. The tumor tissues showed significantly lower levels of RASSF1 expression compared to cultured cells. Previously we reported that both the tumor microenvironment and the host immune system appear to influence the tumorigenesis and stage of CTVT. This is the first article to demonstrate the expression of RASSF1 in CTVT. Decreased RASSF1 possibly helps tumor progression.

O tumor venéreo transmissível canino (TVTC) é a linhagem de células somáticas mais antiga conhecida. É um câncer transmissível que se propaga naturalmente em cães e mutações genéticas já foram relatadas. O gene RASSF1 atua no reparo de danos ao DNA e presume-se que, quando suprimido ou com expressão gênica reduzida, o TVTC tende a progredir. A expressão do gene supressor de tumor, como RASSF1, foi quantificada em tecidos de dezessete animais e três culturas de células de tecidos tumorais. Em geral, o gene RASSF1 apresentou prevalência de subexpressão (65%) e ausência em 35% dos demais tecidos analisados. Células isoladas de culturas de tecidos tumorais também demonstraram 67% com expressão diminuída e 33% com expressão elevada, com diferença significativa entre os níveis de expressão gênica em amostras de tecido quando comparadas às culturas de células, com tecidos apresentando níveis mais baixos de expressão gênica em comparação com células. Anteriormente, relatamos que tanto o microambiente tumoral quanto o sistema imunológico do hospedeiro parecem influenciar a tumorigênese e o estágio do TVTC. Este é o primeiro artigo a demonstrar a expressão de RASSF1 no TVTC, possivelmente alterando sua tumorigênese e auxiliando no aumento da progressão tumoral.

Immunohistochemical, lectin histochemical and ultrastructural studies of canine transmissible venereal tumor in Brazil / Estudos imuno-histoquímico, lectino-histoquímico e ultraestrutural do Tumor Venéreo Transmissível Canino no Brasil

Canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a naturally occurring contagious round-cell neoplasia, with poorly understood origin and transmission. This study aims to further investigate the tumor nature through immunohistochemistry, lectin histochemistry and transmission electron microscopy (TEM) analysis, and to provide support for diagnostic and differential diagnoses of CTVT. Immunohistochemistry was performed in 10 genital and six exclusively extragenital tumors, which were previously diagnosed by citology and histopathology. CTVT samples were incubated with biotinylated antibodies to specific membrane and cytoplasmic antigens (anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-vimentin, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3, polyclonal anti-CD117, polyclonal CD3 and anti-CD79a), followed by the avidin-biotin-peroxidase complex technique. The lectins Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, JSA, PSA, PHA-L, PHA-E and RCA were additionally tested in four genital CTVTs and TEM was performed in eight genital tumors. The anti-vimentin antibody revealed strong immunoreactivity to neoplastic cells in all the assessed samples (16/16). The polyclonal anti-CD3 antibodies showed moderate to strong immunoreactivity in fourteen (14/16) and the polyclonal anti-CD117 in fifteen cases (15/16). There was no immunoreactivity to anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3 and anti-CD79a antibodies. At lectin histochemistry, it was observed strong staining of tumor cells to Con-A, PHA-L and RCA. There was no histopathological and immunoreactivity differences between genital and extragenital CTVTs. These findings do not support the hypothesis of histiocytic origin of CTVT. In contrast, the lectin histochemical results were similar to cells from lymphoid/myeloid origin.(AU)

O Tumor Venéreo Transmissível Canino (CTVT) é uma neoplasia de células células redondas, contagiosa, com origem e transmissão ainda mal compreendidas. Com a finalidade de aprofundar a investigação sobre a natureza (origem) do TVTC, bem como fornecer subsídios para o estabelecimento do diagnóstico e diagnóstico diferencial, realizaram-se avaliações imuno-histoquímica, lectino-histoquímica e ultraestrutural de TVTC(s). A avaliação imuno-histoquímica foi feita em 10 TVTCs genitais e em 6 exclusivamente extragenitais previamente diagnosticados através de citologia e da histopatologia. Os TVTCs foram testados para reagentes específicos de antígenos de membrana e citoplasmáticos (anti-lisozima, anti-macrófago, anti-vimentina, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79, anti-CD117) com utilização da técnica complexo avidina-biotina-peroxidase. Adicionalmente, foram utilizadas as lectinas Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, SJA, PSA, PHA-L, PHA-E e RCA em quatro TVTCs genitais. Microscopia eletrônica foi realizada em oito TVTC genitais. Em 100% dos tumores testados (16/16) com anticorpo anti-vimentina (mono e policlonal) houve forte imuno-reatividade. Não houve reatividade para os anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79a e anti-CD117 quando empregamos anticorpos monoclonais, entretanto, com a utilização de anticorpos policlonais verificou-se marcação dos tumores com os anticorpos anti-CD3 e anti-CD117. Na avaliação lectino-histoquímica foi verificada forte marcação das células tumorais com Con-A, PHA-L e RCA. Não houve diferença histopatológica e de imuno-reatividade entre os TVTCs genitais e extragenitais. Estes achados não corroboram com a hipótese da origem histiocítica do CTVT (ausência de reatividade dos anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago e anti-CD18), entretanto, os resultados da avaliação lectino-histoquímica foram em parte similares aos obtidos quando células de origem linfóide/mielóide (ConA, PHA-L e RCA) foram analisadas (Gimeno et al. 1995).(AU)

Immunohistochemical, lectin histochemical and ultrastructural studies of canine transmissible venereal tumor in Brazil / Estudos imuno-histoquímico, lectino-histoquímico e ultraestrutural do Tumor Venéreo Transmissível Canino no Brasil

Canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a naturally occurring contagious round-cell neoplasia, with poorly understood origin and transmission. This study aims to further investigate the tumor nature through immunohistochemistry, lectin histochemistry and transmission electron microscopy (TEM) analysis, and to provide support for diagnostic and differential diagnoses of CTVT. Immunohistochemistry was performed in 10 genital and six exclusively extragenital tumors, which were previously diagnosed by citology and histopathology. CTVT samples were incubated with biotinylated antibodies to specific membrane and cytoplasmic antigens (anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-vimentin, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3, polyclonal anti-CD117, polyclonal CD3 and anti-CD79a), followed by the avidin-biotin-peroxidase complex technique. The lectins Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, JSA, PSA, PHA-L, PHA-E and RCA were additionally tested in four genital CTVTs and TEM was performed in eight genital tumors. The anti-vimentin antibody revealed strong immunoreactivity to neoplastic cells in all the assessed samples (16/16). The polyclonal anti-CD3 antibodies showed moderate to strong immunoreactivity in fourteen (14/16) and the polyclonal anti-CD117 in fifteen cases (15/16). There was no immunoreactivity to anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3 and anti-CD79a antibodies. At lectin histochemistry, it was observed strong staining of tumor cells to Con-A, PHA-L and RCA. There was no histopathological and immunoreactivity differences between genital and extragenital CTVTs. These findings do not support the hypothesis of histiocytic origin of CTVT. In contrast, the lectin histochemical results were similar to cells from lymphoid/myeloid origin.(AU)

O Tumor Venéreo Transmissível Canino (CTVT) é uma neoplasia de células células redondas, contagiosa, com origem e transmissão ainda mal compreendidas. Com a finalidade de aprofundar a investigação sobre a natureza (origem) do TVTC, bem como fornecer subsídios para o estabelecimento do diagnóstico e diagnóstico diferencial, realizaram-se avaliações imuno-histoquímica, lectino-histoquímica e ultraestrutural de TVTC(s). A avaliação imuno-histoquímica foi feita em 10 TVTCs genitais e em 6 exclusivamente extragenitais previamente diagnosticados através de citologia e da histopatologia. Os TVTCs foram testados para reagentes específicos de antígenos de membrana e citoplasmáticos (anti-lisozima, anti-macrófago, anti-vimentina, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79, anti-CD117) com utilização da técnica complexo avidina-biotina-peroxidase. Adicionalmente, foram utilizadas as lectinas Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, SJA, PSA, PHA-L, PHA-E e RCA em quatro TVTCs genitais. Microscopia eletrônica foi realizada em oito TVTC genitais. Em 100% dos tumores testados (16/16) com anticorpo anti-vimentina (mono e policlonal) houve forte imuno-reatividade. Não houve reatividade para os anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79a e anti-CD117 quando empregamos anticorpos monoclonais, entretanto, com a utilização de anticorpos policlonais verificou-se marcação dos tumores com os anticorpos anti-CD3 e anti-CD117. Na avaliação lectino-histoquímica foi verificada forte marcação das células tumorais com Con-A, PHA-L e RCA. Não houve diferença histopatológica e de imuno-reatividade entre os TVTCs genitais e extragenitais. Estes achados não corroboram com a hipótese da origem histiocítica do CTVT (ausência de reatividade dos anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago e anti-CD18), entretanto, os resultados da avaliação lectino-histoquímica foram em parte similares aos obtidos quando células de origem linfóide/mielóide (ConA, PHA-L e RCA) foram analisadas (Gimeno et al. 1995).(AU)

Immunohistochemical, lectin histochemical and ultrastructural studies of canine transmissible venereal tumor in Brazil

ABSTRACT: Canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a naturally occurring contagious round-cell neoplasia, with poorly understood origin and transmission. This study aims to further investigate the tumor nature through immunohistochemistry, lectin histochemistry and transmission electron microscopy (TEM) analysis, and to provide support for diagnostic and differential diagnoses of CTVT. Immunohistochemistry was performed in 10 genital and six exclusively extragenital tumors, which were previously diagnosed by citology and histopathology. CTVT samples were incubated with biotinylated antibodies to specific membrane and cytoplasmic antigens (anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-vimentin, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3, polyclonal anti-CD117, polyclonal CD3 and anti-CD79a), followed by the avidin-biotin-peroxidase complex technique. The lectins Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, JSA, PSA, PHA-L, PHA-E and RCA were additionally tested in four genital CTVTs and TEM was performed in eight genital tumors. The anti-vimentin antibody revealed strong immunoreactivity to neoplastic cells in all the assessed samples (16/16). The polyclonal anti-CD3 antibodies showed moderate to strong immunoreactivity in fourteen (14/16) and the polyclonal anti-CD117 in fifteen cases (15/16). There was no immunoreactivity to anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3 and anti-CD79a antibodies. At lectin histochemistry, it was observed strong staining of tumor cells to Con-A, PHA-L and RCA. There was no histopathological and immunoreactivity differences between genital and extragenital CTVTs. These findings do not support the hypothesis of histiocytic origin of CTVT. In contrast, the lectin histochemical results were similar to cells from lymphoid/myeloid origin.

RESUMO: O Tumor Venéreo Transmissível Canino (CTVT) é uma neoplasia de células células redondas, contagiosa, com origem e transmissão ainda mal compreendidas. Com a finalidade de aprofundar a investigação sobre a natureza (origem) do TVTC, bem como fornecer subsídios para o estabelecimento do diagnóstico e diagnóstico diferencial, realizaram-se avaliações imuno-histoquímica, lectino-histoquímica e ultraestrutural de TVTC(s). A avaliação imuno-histoquímica foi feita em 10 TVTCs genitais e em 6 exclusivamente extragenitais previamente diagnosticados através de citologia e da histopatologia. Os TVTCs foram testados para reagentes específicos de antígenos de membrana e citoplasmáticos (anti-lisozima, anti-macrófago, anti-vimentina, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79, anti-CD117) com utilização da técnica complexo avidina-biotina-peroxidase. Adicionalmente, foram utilizadas as lectinas Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, SJA, PSA, PHA-L, PHA-E e RCA em quatro TVTCs genitais. Microscopia eletrônica foi realizada em oito TVTC genitais. Em 100% dos tumores testados (16/16) com anticorpo anti-vimentina (mono e policlonal) houve forte imuno-reatividade. Não houve reatividade para os anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79a e anti-CD117 quando empregamos anticorpos monoclonais, entretanto, com a utilização de anticorpos policlonais verificou-se marcação dos tumores com os anticorpos anti-CD3 e anti-CD117. Na avaliação lectino-histoquímica foi verificada forte marcação das células tumorais com Con-A, PHA-L e RCA. Não houve diferença histopatológica e de imuno-reatividade entre os TVTCs genitais e extragenitais. Estes achados não corroboram com a hipótese da origem histiocítica do CTVT (ausência de reatividade dos anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago e anti-CD18), entretanto, os resultados da avaliação lectino-histoquímica foram em parte similares aos obtidos quando células de origem linfóide/mielóide (ConA, PHA-L e RCA) foram analisadas (Gimeno et al. 1995).

ASPECTOS CLÍNICOS E EPIDEMIOLÓGICOS DO CARCINOMA MAMÁRIO E TUMOR VENÉREO TRANSMISSÍVEL EM CANINOS E DO HEMANGIOSSARCOMA EM UM FELINO

Objetivou-se com a tese demonstrar os aspectos clínicos e epidemiológicos relacionados ao câncer de mama e tumor venéreo transmissível em cães, e relatar um caso de otohematoma secundário a hemangiossarcoma em um gato. No primeiro capítulo foram analisadas informações referentes à identificação, escore nutricional, epidemiologia, exame físico das cadeias mamárias e diagnóstico de 80 cadelas com (n=40) e sem (n=40) neoplasia mamária. Prevaleceram aquelas sem raça definida, idosas, com escore nutricional normal, não castradas, não submetidas à contraceptivos, apresentando cio irregular e submetidas ao controle químico à base de piretroides. Observou-se maior frequência de cadelas com cadeias mamárias assimétricas e de numeração ímpar, sendo observado estatisticamente que estas possuíam 11,94 vezes mais chance de portar neoplasia mamária, concluindo que a amastia é um fator indicador ao câncer de mama em cadelas. No segundo capítulo, reportou-se um caso de otohematoma secundário a hemangiossarcoma em um gato. Na avaliação dermatológica observou-se, na face convexa da aurícula direita, uma formação compatível com otohematoma. Na margem cutânea da mesma orelha visualizou-se pequena nodulação, que à citologia revelou tratar-se de hemangiossarcoma. O diagnóstico foi sugerido no exame citológico e confirmado mediante os exames histopatológico e imunohistoquímico. Como tratamento, realizou-se conchectomia em ampla margem. A paciente foi estadiada durante três anos, não sendo, neste período, constatado recidiva local ou metástase. Concluiu-se que o hemangiossarcoma deve ser considerado na etiologia do otohematoma de gatos de pelagem branca. No terceiro capítulo, avaliou-se os aspectos clínicos e epidemiológicos de 64 cães com Tumor Venéreo Transmissível (TVTc), correlacionando-os aos subtipos (linfocitoide, misto e plasmocitoide) desta neoplasia. Prevaleceram cães oriundos da zona urbana, SRD, machos, inteiros, adultos, porte médio, com acesso à rua estando sanitariamente mais comprometidos. Em sítio genital prevaleceu o subtipo misto, já no sítio extragenital, o linfocitoide. O plasmocitoide foi encontrado em ambos os sítios, sendo, no geral, o mais prevalente para os cães do Semiárido Paraibano. Verificou-se importante associação neoplásica entre as genitálias e as cavidades oral e nasal. Houve diferença estatística entre o tempo de evolução e volume dos subtipos de TVTc, verificando-se que o subtipo plasmocitoide era maior e resultou em mais tempo para evoluir quando comparado aos demais. Inferiu-se a possibilidade dos subtipos de TVTc serem evoluções, onde o linfoide evolui em misto e o misto em plasmocitoide.

The objective of this thesis was to demonstrate the clinical and epidemiological aspects related to breast cancer and transmissible venereal tumor in dogs, and to report a case of otohematoma secondary to hemangiosarcoma in a cat. In the first chapter we analyzed information regarding the identification, nutritional score, epidemiology, physical examination of the breast chains and diagnosis of 80 female dogs with (n = 40) and without (n = 40) breast cancer. Prevailed those without race, elderly, with normal nutritional score, not castrated, not subjected to contraceptives, presenting irregular heat and submitted to chemical control based on pyrethroids. Female dogs with asymmetric and unevenly numbered breast chains were more frequent, and it was statistically observed that they were 11.94 times more likely to have breast cancer, concluding that amastia is an indicator factor for breast cancer in female dogs. In the second chapter, a case of otohematoma secondary to hemangiosarcoma in a cat was reported. In the dermatological evaluation, the convex face of the right auricle showed a formation compatible with otohematoma. In the cutaneous margin of the same ear, a small nodulation was seen, which on cytology revealed hemangiosarcoma. The diagnosis was suggested by cytological examination and confirmed by histopathological and immunohistochemical examination. As treatment, a wide margin conchectomy was performed. The patient was staged for three years without local recurrence or metastasis. It was concluded that hemaniosarcoma should be considered in the etiology of otohematoma of white-haired cats. In the third chapter, we evaluated the clinical and epidemiological aspects of 64 dogs with Transmissible Venereal Tumor (TVTc), correlating them to the subtypes (lymphocytoid, mixed and plasmocytoid) of this neoplasm. Prevailed dogs from the urban area, SRD, males, whole, adults, medium size, with access to the street being more sanitary compromised. In the genital region, the mixed subtype prevailed, while in the extragenital region, the lymphocytoid. Plasmacytoid was found in both regions and was generally the most prevalent for dogs in the Paraiban Semiarid. There was an important neoplastic association between the genitals and the oral and nasal cavities. There was a statistical difference between the time of evolution and volume of cTVT subtypes, and the plasmacytoid subtype was larger and resulted in more time to evolve when compared to the others. The possibility of CTV subtypes being evolutions was inferred, where the lymphoid evolves in mixed and the mixed in plasmacytoid.

Descrição Citomorfológica do Tumor Venério Transmissível Canino (TVTC) e Resposta Clínica à Quimioterapia.

O tumor venéreo transmissível canino (TVTC) apesar de estar praticamente erradicado nos países desenvolvidos, ainda é uma doença endêmica nos países em desenvolvimento. Alguns trabalhos recentes indicam que diferentes padrões morfológicos do TVTC se correlacionam com a eficiência do tratamento clínico. O objetivo deste trabalho foi avaliar a prevalência dos tipos plasmocitóide, linfocitóide e misto na região de Belo Horizonte/MG, assim como as suas possíveis correlações com o tratamento quimioterápico com Sulfato de Vincristina. Para tal foram classificadas 61 amostras com diagnóstico citológico de TVTC nos tipos plasmocitóide, linfocitóide e misto utilizando-se dois diferentes métodos de avaliação celular. Não foi observada diferença estatística entre os dois métodos nas leituras de lâmina. O TVTC do tipo linfocitóide foi o mais comumente observado (27/44%), seguido pelo tipo plasmocitóide (18/30%) e o tipo misto (16/26%). O número de sessões quimioterápicas para a regressão completa do TVTC variou de duas a sete, com média de 4,11 sessões. A análise de correlação dos três tipos celulares de TVTC com o número de sessões quimioterápicas necessárias para a regressão completa do tumor não resultou em diferença estatística. Entretanto foi observada correlação moderada positiva entre o infiltrado de plasmócitos e o número de sessões de quimioterapia

The canine transmissible venereal tumor (CTVT), despite being practically eradicated in developed countries, is still an endemic disease in developing countries. Some recent studies indicate that different morphological patterns of CTVT correlate with the efficiency of clinical treatment. The objective of this study was to evaluate the prevalence of plasmacytoid, lymphocytoid and mixed types in the Belo Horizonte / MG region, as well as their possible correlations with the chemotherapy treatment with Vincristine Sulfate. For this, 61 samples with cytological diagnosis of CTVT were classified in the plasmacytoid, lymphocytoid and mixed types using two different methods of cellular evaluation. No statistical difference was observed between the two methods in the slides reading. Lymphocyte-type CTVT was the most commonly observed (27/44%), followed by plasmacytoid type (18/30%) and mixed type (16/26%). The number of chemotherapy sessions for complete CTVT regression ranged from two to seven, with an average of 4,11 sessions. The correlation analysis of the three CTVT cell types with the number of chemotherapy sessions required for complete tumor regression did not result in statistical difference. However, a moderate positive correlation was observed between the plasma cell infiltrate and the number of chemotherapy sessions.

EFEITO DO USO TÓPICO DE PRÓPOLIS VERDE EM CASOS DE TUMOR VENÉREO TRANSMISSÍVEL CANINO TVTc

A própolis é um produto natural oriundo de substâncias resinosas gomosas e balsâmicas, cujas propriedades biológicas variam a depender de sua origem, e os tipos de extratos têm influencia sobre a sua composição química. Objetivou-se avaliar o potencial antineoplásico de uma formulação tópica de própolis, em cadelas com tumor venéreo transmissível canino (TVTc), sendo esta avaliação realizada de forma isolada e em associação ao quimioterápico sulfato de vincristina. Também procedeu-se com a avaliação dos efeitos tóxicos decorrentes da quimioterapia nestes animais, e da influência da própolis sobre esta toxicidade. A amostragem foi composta por catorze cadelas, atendidas na rotina clínica do Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC), e distribuídas ao acaso em dois grupos experimentais (própolis e veículo), sendo monitoradas em três fases de tratamento (pré-experimental; própolis / veículo; vincristina + própolis / vincristina + veículo). Durante os tratamentos, os parâmetros de exame clínico, exame citológico, exame hematológico, exames bioquímicos (ALT, AST, uréia e creatinina) e exame ultrassonográfico foram realizados semanalmente. Verificou-se que o modelo do TVTc mostrou-se viável para a avaliação de terapias antineoplásicas in vivo. A formulação tópica da própolis apresentou efeito antineoplásico, de forma isolada e em associação ao quimioterápico sulfato de vincristina, acarretando em diminuição da celularidade de TVTc em exames citológicos (p<0,1). O sulfato de vincristina apresentou eficácia em 100% dos casos, porém foram evidenciados sinais de toxicidade como diminuição na quantidade de leucócitos totais, plaquetas e hematócrito. A associação do tratamento própolis+vincristina foi eficiente em minimizar a toxicidade sobre os leucócitos. Foram constatadas alterações nas enzimas AST, ALT e ureia, e alterações ultrassonográficas compatíveis com hepatotoxicidade após a administração do sulfato de vincristina. A associação com a própolis não influenciou nestes parâmetros